ELISA
Enzyme Linked Immunosorbent
Assay
المرتبطة المناعية التحاليل
عامة تعريفات
المضادة األجسام هي Antibodyما
المناعي الجهاز ضمن موجودة مركبات هيالجسم تعرض عند خاص بشكل وتصنع للجسم
غريبة ألجسام
عامة- تعريفات تابع
Antigen
للجسم المناعي الجهاز إثارة عن مسؤول جسم هوالمضادة . األجسام إثارة وبالتحديد
المناعية Immunoassayالتحاليل
معينة مادة مستوى لقياس بيوكيميائية اختبارات هي ) , , , ( دموع لعاب بول سيرم الحيوي السائل في
ارتباط المخصص Antibodyمع Antigenبواسطةله.
عامة- تعريفات تابع
Analyte
وفي قياسها يتم التي الحيوكيميائية المادة هييكون المناعية Antibodyإما Analyteالتحاليل
antigenأو
Antigenحاالت
:إما Antigenيكون . الهرمونات مثل طبيعي بشكل الجسم في موجود
: مثال مرضية حاالت في الجسم في تصنيعه يتمالمشيمة HCGهرمون خاليا من يفرز الذي
, في إفرازه يمكن كما الحمل أثناء طبيعي بشكل. الرجال عند حتى السرطانات أنواع بعض
. المخدرات مثل العادية األحوال في موجود غير
مقدمة
المضادة األجسام تصنيع حال Antibodiesيتم فيغريبة ألجسام هذه Antigens التعرض وتكون
والفة تخصصية ذات المضادة SpecificاألجسامAffinity. تصنيعها أثارت التي الغريبة لألجسام
الجزء على المضادة األجسام antigenicتتعرفdeterminant .
Shortcut to image004.lnk
األجسام تصنيع طرقالخاصة المضادة
المناعية بالتحاليل
و المضادة األجسام لتصنيع طريقة من أكثر هناكلتصنيع شيوعا الطرق هذه أكثر Antibodyأحد
ما لجسم هذا (Antigen)مخصص حقن هواستخالص يتم ذلك وبعد لحيوان الجسم
Antibody . الحيوان هذا سيرم من المطلوب
هذا ناتج polyclonal يسمى Antibodyولكن ألنه. خاليا عدة تصنيع
تصنيع- طرق تابعالخاصة المضادة األجسام
المناعية بالتحاليل
لتصنيع طريقة تخصصا Antibodyهناك أكثرmonoclonal Antibody تصنيع ناتج وهو
تماما متماثلة خاليا ونحصل cell lineمجموعةللجسم مصنعة خلية بدمج الخاليا هذه علىعلى القدرة لها سرطانية خلية مع المضاد
. نهاية ماال إلى االنقسام
تقنية هي ELISA ما
جزيئية مادة تركيز لقياس تستخدم التقنية هذهالحيوي السائل في والعقاقير الهرمونات مثل
عن . تقاس الجزيئية المادة هذه كالسيرمالمضادة األجسام كمية معرفة Antibodyطريق
ب ارتبطت .Antigenالتي
ELISA تقنية
إلى :تنقسم
تنافسية- 1 مناعية Competitive ELISA قياسات
تنافسية- 2 غير مناعية Sandwich ELISAقياسات
مباشرة مناعية قياسات أيضا Direct ELISAوتسمى
مباشرة- 3 غير مناعية Indirect ELISAقياسات
Competitive ELISA
يتنافس الحالة هذه المطلوب Antigenفيمع العينة في لالرتباط Labeled Antigenقياسه
العالقة تكون الحالة هذه وفي المضاد بالجسمكمية بين مع Antigenعكسية قياسه المطلوبlabeled Antigen.
Sandwich ELISA
عن الكشف المطلوب وقياس Antigenيكونمغطى االليزا طبق فيكون العينة في تركيزه
المضاد .Antibodyبالجسم
Sandwich ELISA- Cont
المضاد .Antigenيرتبط - 1 الجسم مع العينة في
غير- 2 المضادة األجسام إلزالة الطبق غسل يتمالمرتبطة .
أخرى- 3 مضادة أجسام إضافة تتم ذلك وبعدبإنزيم . مرتبطة المضادة األجسام هذه وتكون
Sandwich ELISA- Cont
المضادة- 4 األجسام إلزالة أيضا الطبق غسل يتم. المرتبطة غير
حساب- 5 ويتم لإلنزيم األساس المادة تضاف ثمناتج Antigenكمية كمية قياس طريق عن
التفاعل.
Indirect ELISA
عن الكشف المطلوب يكون وقياس Antibodyعندما: الحالة هذه ففي العينة في تركيزه
ويترك Antigenيضاف- 1 االليزا لطبق المخصوص. يلتصق حتى فترة
من- 2 مختلفة أنواع على المحتوى السيرم يضافAntibody تسمىprimary Antibody.
Indirect ELISA- Cont
مع Antibodyيرتبط - 3 السيرم الموجود Antigenفيالطبق . في
إلزالة- 4 الطبق غسل . Antibodyيتم المرتبط غير
بإنزيم Antibodyيضاف- 5 مرتبط Secondary آخرAntibody ارتباط حال في فقط اإلرتباط يمكنه وهذا
Primary Antibody. الطبق في الموجودة بالعينة
Indirect ELISA- Cont
إلزالة- 6 الطبق غسل غير Antibodyيتمالمرتبط.
كمية- 7 حساب ويتم لإلنزيم األساس المادة تضافAntibody . التفاعل ناتج كمية قياس طريق عن
عمل طريقة على مثالELISA
قراءة يجب العمل في الشروع قبلخطأ أي ألن شديدة بدقة التعليماتوخسارة التجربة فساد الى يؤدي قد
جدا Kitقيمة مكلفة وهي
في ) Kitنستخدم المستخدمة المحاليل مجموعةمطلوب ( جسم لكل أن حيث المناعية التحاليل
عنه .Kit الكشف مخصوص
طريقة- على مثال تابع ELISA عمل
من -1 المكون الخاص الطبق ترقيم خانة 96يتم(wells ) الخانات وتستخدم األولى wellsبدقة
القياسي المنحنى .Standard curve لرسم
طريقة- على مثال تابع ELISA عمل
الطبق - 2 في فحصها المراد العينة وضع يتم ثممرات ثالث أو مرتين عينة كل تكرار ويفضل
Duplicate or Triplicate النتائج ظهور وبعد. المتوسط يؤخذ
ضابطة- 3 عينة Quality control sampleتستخدممع تأتي العينة المحاليل ) ( Kit وهذه مجموعة
الشركة قبل من محدد تركيز ذات وهي. المفحوصة العينة مثل تماما وتعامل المصنعة
النتائج
االليزا قارئ جهاز في اإلمتصاص نتائج قراءة بعدالرسم ورق على القياسي المنحنى برسم نقوم
السيني المحور نستخدم بحيث -x البيانيaxis للتركيزconcentration الصادي والمحور
y-axis لإلمتصاص Absorption .Absorption
nm
Concentration ng/ml
النتائج- تابع
القياسية المحاليل تركيزات بتحديد نقومstandards السيني المنحنى ثم x-axis على
المنحنى على قياسي محلول كل قراءة نحدد. y-axisالصادي القياسي المنحنى ونرسم
النتائج- تابع
بحيث عينة كل تركيز لقياس المنحنى هذا يستخدمالصادي المحور على اإلمتصاص قراءة عند نأتيوبعد المنحنى على لها المقابلة النقطة ونحدد
. السيني المنحنى على التركيز نحدد ذلك
Absorption nm
Concentration ng/ml
النتائج- تابع
وإذا المنحنى من الضابطة العينة تركيز نحسبالشركة من المحددة الطبيعية الحدود في كانويمكن ناجحة التجربة أن يعني فهذا المصنعة
. النتائج اعتماد
http://www.edumedia-sciences.com/en/a543-direct-enzyme-linked-immunosorbent-assay-elisa
ELISA http://www.sumanasinc.com/webcontent/ani
mations/content/ELISA.html http://www.biology.ualberta.ca/facilities/multi
media/uploads/procedures/elisa-sound.swf
Top Related