Percorso formativo BC04
STUDENTI: Matteo Petrungaro (Liceo G. DeSanctis, Roma)
Sara Todisco (Liceo Nomentano, Roma)
TUTORS: Deborah Pajalunga
Serena Camerini
Marialuisa Casella
DALLA PROLIFERAZIONE AL DIFFERENZIAMENTO CELLULARE: LA RICERCA NELLA DISTROFIA MUSCOLARE
Attività svolte
Premessa:
La funzione cellulare dipende dai livelli e dalla struttura delle proteine sintetizzate.
Scopo: Individuare le differenze morfologiche e biochimiche tra
fibra muscolare sana (WT) e distrofica (MDX) che spieghino la
diversa funzione tra i due sistemi modello.
Metodi utilizzati: • Immunofluorescenza
• Spettrometria di massa
• Western blot
Western blot e spettrometria di massa
Miosina
Ciclina A
P TD P TD
MDX WT
165
115
80
62
52
42
32
24
17 13
1
2
3
4
5
Si scelgono le bande da tagliare per l’analisi proteomica mediante spettrometria di massa
P TD P TD P TD P TD MDX WT WT MDX
La Miosina è correttamente assente nelle cellule proliferanti sia sane, che malate. Al contrario è espressa ad alti livelli nelle cellule differenziate sia sane, che malate. Il WB per la Ciclina A mostra che questa proteina è specifica delle cellule proliferanti WT ed MDX, essendo assente da entrambi i modelli differenziati.
Analisi delle proteine estratte
mediante la Spettrometria di massa
0
10
20
30
40
50
60
WT P WT TD mdx P mdx TD
myosin 3 myosin 4 myosin 6 myosin7 myosin 8
La troponina C è una proteina responsabile della contrazione muscolare. Come
visibile dal grafico nelle MDX è notevolmente minore. I livelli di Miosina
risultano quasi invariati, come già evidenziato dal WB.
Immunofluorescenza
L’immunofluorescenza è un metodo che ci ha permesso di marcare la Miosina (una proteina tipica delle cellule differenziate) con un anticorpo specifico. Come si può vedere nel muscolo MDX la Miosina non è correttamente strutturata e la fibra muscolare non ha una morfologia normale. Questo dimostra che diversità strutturale compromette la funzione cellulare.
WT
MDX
TD P
Mio
sina (M
HC
)
Vorremmo ringraziare le nostre tutor Deborah, Serena e
Marialuisa che ci hanno seguito e guidato in questo percorso.
Un ringraziamento particolare al dottor Crescenzi che ci ha
accolti con grande gentilezza e competenza.
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