Biotecnología aplicada al desarrollo de ensayos rápidos y fiables para detectar
alérgenos en alimentos
Cristina Romero Gonzalo
Investigación de productos biotecnológicos orientados hacia
la salud humana, animal y de plantas
Desarrollo, producción y comercialización de ensayos
para sanidad animal y seguridad alimentaria
ACTIVIDADES
Los productos comerciales están basados en nuestros proyectos de I+D
Participación de todos los Departamentos de la empresa: Investigación, Desarrollo, Producción, Ventas, QC…
EMPRESA
LÍNEAS COMERCIALES
SANIDAD ANIMAL
SEGURIDAD ALIMENTARIA
GRAN ANIMAL PEQUEÑO ANIMAL
ENSAYOS PROPIOS
KITS DE DISTRIBUCIÓN
ALÉRGENOS
ALÉRGENOS
GLUTEN CASEÍNA BLG OVOALBÚMINA
FORMATOS
ELISAS INMUNOCROMATOGRAFÍAS
INMUNOENSAYOS
Especificidad
Sensibilidad
Multi-matriz
Ensayos basados en reacciones antígeno-anticuerpo
ELISA (Sándwich)PLACAS TAPIZADAS CON
EL AcM
AÑADIR CONTROLES Y MUESTRAS
INCUBAR
LAVAR LA PLACA
AÑADIR EL CONJUGADO
LAVAR LA PLACA
AÑADIR SUBS Y SOLUCIÓN DE FRENADO
POSITIVONEGATIVO
INCUBAR
GLUTEN
ORIGEN• Colaboración con el Centro Nacional de
Biotecnología
PRODUCTOS• INGEZIM GLUTEN• INGEZIM GLUTEN QUICK• INGEZIM GLUTEN SEMIQ• INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO
INGEZIM GLUTEN (Cuantificación)
CURVA CON 5 PUNTOS (ng/mL)
1,56
25y = 15,154x2 - 6,4417x + 2,4497R2 = 0,9974
05
1015202530
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0
Abs 450nm
ng/ml
LÍMITE DE DETECCIÓN
Gráfico4
1.4445
1.0795
0.729
0.4695
0.3185
Abs 450nm
ng/ml
25
12.5
6.25
3.12
1.56
Recta 0302
Curva patrón
Abs 450nmng/ml
1.5425
0.9112.5
0.436.25
0.313.12
0.271.56
Placa 0302
CONJ 0302PAN 1PAN 2PAN 5PAN 6PAN 7
Dilución2001001002525Dilución
Abs1.180.901.131.251.43Abs
ng/ml18.3413.3517.3619.5222.78ng/ml
ppm293.43106.81138.8639.0345.56ppm
Dilución4002002005050Dilución
Abs0.750.770.770.980.97Abs
ng/ml10.6510.9511.1214.7714.53ng/ml
ppm340.92175.27177.9659.0758.11ppm
Media317.18141.04158.41100100Dilución
Teoricos2901311600.660.71Abs
9.1610.04ng/ml
73.2780.35ppm
57.1261.34Media
5369Teoricos
Recta 0302
1.5395
0.9085
0.4335
0.3115
0.2735
Abs 450 nm
ng/ml
25
12.5
6.25
3.12
1.56
Poli 0302
PRELAVADO
LOTE 0302CURVA RING TEST
Puntos ng/mlNORMALNORMALNORMALPan 1Pan 5Pan 7
1002.4812.4312.1991.4131.3081.592
502.1881.9811.9061.3841.3721.569
251.7341.5621.5450.9940.9521.115
12.51.2391.1021.0760.960.9451.13
6.250.8230.7451.2031.6060.323
3.120.5230.4920.4721.211.6560.33
1.560.3720.3230.3120.8791.1710.246
Sur Select0.1370.1280.1310.881.2090.266
Pan 2Pan 6Pan 4817
Curva patrón
Abs 450nmng/ml
1.5525
1.0912.5
0.756.25
0.483.12
0.321.56
Placa 0302
CONJ 0302PAN 1PAN 2PAN 5PAN 6PAN 7PAN 4817
Dilución200100100252525Dilución
Abs1.401.211.341.631.580.33Abs
ng/ml20.3515.3118.7427.4625.821.72ng/ml
ppm325.66122.47149.9054.9251.653.44ppm
Dilución400200200505050Dilución
Abs0.980.880.951.191.120.26Abs
ng/ml10.268.439.7014.9113.341.31ng/ml
ppm328.17134.89155.2359.6453.345.23ppm
Media326.91128.68152.5757.2852.504.33Media
Teoricos2901311605369
INGEZIM GLUTEN QUICK
• Reducción en los tiempos de extracción y del ELISA
Validado vs INGEZIM GLUTENDILUTION Theoretical ppm Gluten Quick Gluten
Spike 0 ppm 50 0
INGEZIM GLUTEN SEMIQ
Detección SEMI cuantitativa Tiempos de incubación cortos Realización sencilla (sin curva estándar) Posibilidad de interpretación visual
LÍMITE DE DETECCIÓN
INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO
EL ELISA SANDWICH NO FUNCIONA CON GLUTEN HIDROLIZADO
ELISA SANDWICH R5
INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO
ELISA R5 DIRECTO
INGEZIM GLUTEN HIDROLIZADO (Matrices)
CERVEZAS SIROPESPAPILLAS
INFANTILES
ALÉRGENOS
LECHE• Ingezim Caseína• Ingezim Beta-lactoglobulina
HUEVO• Ingezim Ovoalbúmina
Ingezim BLG
ALÉRGENOS
ELISA tipo sándwich Estándares directamente en ppm Cuantificación con ajuste lineal Posibilidad de interpretación visual
Ingezim Caseína
Ingezim BLG
IngezimOvoalbúmina
Límites de Detección
ALÉRGENOS: Int. de resultados
β-Lac
Abs 450 ppm
1,196 0.8
0,789 0.4
0,549 0.2
0,406 0.1
0,233 CN
y = 0,8946x - 0,2825R2 = 0,9961
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
0,0 0,5 1,0 1,5Abs.
ppm
Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3
Abs. 3,335 0,950 0,200
ppm 2,70 0,567
INMUNOCROMATOGRAFÍA Técnica in situ
Ensayo en una sola etapa. Adición directa de la muestra
T C
Soporte: nitrocelulosa
AcM anti-Alérgeno
Pt controlAcM anti-pt control
T CFLOW
T C
T C
Resultado CUALITATIVO:POS: 2 bandas coloreadasNEG: 1 banda coloreada
INMUNOCROMATOGRAFÍA Técnica in situ
Interpretación de Resultados
POSITIVO NEGATIVO NO VÁLIDO
ENSAYOS INGEZIM CROM DISPONIBLES
NOMBRE DEL KIT LÍMITE DE DETECCIÓN (ppm)
INGEZIM CROM CASEÍNA 2.5
INGEZIM CROM BLG 2.5
INGEZIM CROM OVOALBÚMINA 1.25
OBJETIVOS LÍNEA ALIMENTARIAExperiencia en el desarrollo de ensayos INMUNOLÓGICOS
Ampliación de la gama de productos propios
Menor dependencia productos
distribución
Mayor control de los productos
Mayor flexibilidad en los formatos
Mayor rapidez de respuesta en el soporte técnico
Posibilidad de comercialización en el extranjero
GRACIAS POR SU ATENCIÓN
Biotecnología aplicada al desarrollo de ensayos rápidos y fiables para detectar alérgenos en alimentosNúmero de diapositiva 2Número de diapositiva 3Número de diapositiva 4Número de diapositiva 5Número de diapositiva 6Número de diapositiva 7Número de diapositiva 8Número de diapositiva 9Número de diapositiva 10Número de diapositiva 11Número de diapositiva 12Número de diapositiva 13Número de diapositiva 14Número de diapositiva 15Número de diapositiva 16Número de diapositiva 17Número de diapositiva 18Número de diapositiva 19Número de diapositiva 20Número de diapositiva 21Número de diapositiva 22Número de diapositiva 23
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