“Plataformas on-line de
sensibilidad a Botryticidas en
Arándanos: la base para el
diseño de programas de
Control”
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
Ing. Agr. M.Sc. Marcela Esterio G.Universidad de Chile
Condiciones medioCondiciones medio--ambientales favorables para ambientales favorables para el desarrollo del hongoel desarrollo del hongo
GRAN VARIABILIDAD GENGRAN VARIABILIDAD GENÉÉTICA TICA AL MENOS DOS ESPECIES Y 4 GENOTIPOSAL MENOS DOS ESPECIES Y 4 GENOTIPOS
DinDináámica poblacional / poblaciones reaccionan mica poblacional / poblaciones reaccionan frente a condiciones de manejofrente a condiciones de manejo
POR ELLO POBLACIONES DEL HONGO PRESENTAN distinta agresividad y REACCIONAN
DIFERENTEMENTE FRENTE A cambios en EL MANEJO (FUNGICIDAS),
afectando el Controlafectando el Control Químico
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0 CSJ
UF913UF929U51 U6 U26 U32U29U49U75U68U61U9U149U46A1K22U83U56U77U1U4U11U5U14U200U2U7U134A61T70T71K21A2A3A4A51A62A63A50U42U41U36K1T20T27TF4T5T6T10T24T43T16T57T18T23T32T50K10K20K18K16K11K12K31K32K8UF619T31K28K29U57U13UF632A64
tttttttttttttttttttttttttttttttttttttttttbbttttttttttttttttttbbvvvvbbbvvvb
A
B
C
Kiwi
Tomate
Arándano
Vid
Muñoz et al., 2002
(Thompson y Latorre, 1999; Giraud et al., 1999).
Diferenciación de aislados según hospederos en Chile√
Control químico
BotryticidasBotryticidas, 1970 , 1970 …… 2011 y 2011 y ……iprodione
EstrobilurinasEstrobilurinas
CyprodinilCyprodinilfenhexamid
Mezclas de activos
Fungicidas Orgánicos CÍTRICOSFungicidas biológicos
boscalid
fludioxonil
fluazinam
tebuconazole
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
PyrimethanilPyrimethanil
Otras herramientas … para el control
Control químico
Respiración β ‐tubulinaSíntesis de esteroles
Regul. osmótica
Síntesis de metionina
AnilinopyrimidinasBenzimidazolesCarboxamidas
Dicarboximidas Phenylpyrroles
Hydroxyanilidas
Fenhexamid(EC50< 0.1 ppm)
Fludioxonil(EC50< 0.1 ppm)
Iprodione(EC50< 1 ppm)
Boscalid(EC50< 0.5 ppm)
Pyrimethanil(EC50< 0.5 ppm)
Cyprodinil(EC50< 0.03 ppm)
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• (i) alteración del sitio de acción, lo cual reduce o anula la unión o contacto con el fungicida;
• (ii) síntesis de una enzima alternativa capaz de sustituir la enzima patogénica bloqueada;• (iii) sobre producción de un metabolito que bloqueé al fungicida, y • (iv) por degradación metabólica del fungicida a través de producción de enzimas
secretadas por el patógeno.
(Gisi et al., 2000; Gullino et al., 2000, Fluit et al., 2001; MgGrath, 2001)
La resistencia a un fungicidaLa resistencia a un fungicida: modificación genética de un patógeno que le otorga una menor sensibilidad ……. adaptación estable y heredable (Leroux et al., 1998) y puede ser causada por varios mecanismos:
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Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ [email protected]
Resistencias Específicas y MDRs:
• La Resistencia específica, es consecuencia de:
- Un uso reiterado de una determinada molécula,- Utilización de Dosis inadecuadas- falta de conocimiento de las caract. de laspoblaciones locales
• MDRs:- Uso de moléculas de distinto modo de acción (> presión de selección)- Uso de formulaciones en Mezclas (Dosis <)- Falta de conocimiento de las poblaciones locales
Genotipos: Respuesta diferencial a fungicidasGenotipos: Respuesta diferencial a fungicidas
‐ B. cinerea transposa y flipper resistencia a dicarboximidas (Giraud et al.,
1999, Esterio et al., 2003) y a Fenhexamid (Esterio et al., no publicado)
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FenhexamidFenhexamidNo presenta resistencia cruzada a: Benzimidazoles, Dicarboximidas y Anilinopyrimidinas.
Resistencia asociada a gen erg27. ‐ HydR1 (aislados vacuma alelo 1 gen Bc‐hch (Botrytis Grupo 1)), no presente en Chile / detoxifican importancia en el caso de fenotipos MDR.
‐ HydR2: sólo algunos aislados en Francia / detoxifican y de acuerdo a lo anterior posiblemente presente en Chile (0,4 ppm).
‐ HydR3: dos tipos de aislados según polimorfismo en erg27 (presentes en Chile): HydR3+:mutación en posición 412; (5 y + ppm)
HydR3‐: una a varias mutaciones (0,2 – 3,5 ppm)
Aislados chilenos
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S/A
Aislados franceses
S/C
Fuente: Fillinger et al., 2008
Objetivo General: …. Generar > Conocimiento … dinámica poblacional y nivel de sensibilidad de las poblaciones del patógeno en arándano a algunos fungicidas (fenhexamid, iprodione, cyprodinil & fludioxonil y fludioxonil)…
Objetivos específicos:
Caract. Genotípica y comportamiento fenotípico de poblaciones de B. cinerea en:
2 Variedades: Legacy y Brighitta
3 Épocas: Floración / Precosecha temprana (Fruto pintón) y Precosecha Tardía /
3 Regiones Productoras: Zona Centro‐Sur (Del Maule, Bío‐Bío) y Sur (de los Ríos)
N= 63 var., época y predio‐zona
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Genotípica: Correspondencia genotípica(Transposa, vacuma, boty, flipper)
mediante PCR‐duplex y uso de partidores específicos.
Fenotípica: sensibilidad fungicida: fenhexamid, iprodione, cyprodinil&fludioxonil y fludioxonil
Determinación de valores EC50 (crecimiento miceliar) en medio Sisler o APD).
Primeros resultados de sensibilidad de poblaciones de Botrytis cinerea recuperados desde Arándanos:
Incubación: 20ºC, oscuridad continua, 7 y 14 ds.
Cultivos monospóricos, 5 – 7 ds.
Obtención de aislados
Metodología
Determ. Valores EC50 (µg/mL) mediosSisler / APD ( Crecim. Miceliar) / Test de Probit
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Diagnóstico de Resistencia a Fungicidas
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Técnicas tradicionales (EC50):
Crecimiento miceliar, Germinación conidial, Elongación tubo germinativos Técnicas Moleculares: PCR; PCR‐
RFLP y Q‐PCR (SONDAS Y PARTIDORES ESPECÍFICOS)
2ºWorksho
p internaciona
lde Re
sisten
ciaa fungicidas
de acciónBo
tryticida
Categorías de sensibilidad
1 < LR < 2,99 ppm 3 < MR < 4,99 ppm AR > 5 ppm
Fenhexamid
Switch
Fludioxonil
Iprodione
Boscalid
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0,1 < LR < 0,299 ppm 0,3 < MR < 2,99 ppm 3 < R < 9,99 ppm AR > 10 ppm
0,1 < LR < 0,299 ppm 0,3 < MR < 2,99 ppm 3 < R < 9,99 ppm AR > 10 ppm
0,1 < LR < 0,299 ppm 0,3 < MR < 2,99 ppm 3 < R < 9,99 ppm AR > 10 ppm
0,5 < LR < 1,35 ppm 1,36 < MR < 7,79 ppm 7,8 < R < 49,99 ppm AR > 50 ppm
Resultados valores EC50 fungicidas: promedios totales, por variedad y predios‐zonas / Temp. 2011‐2012
‐ Fenhexamid: poblaciones leve a moderadamente resistentes (EC50=0,485 μg/mL)
‐ Iprodione: poblaciones levemente resistentes (EC50=1,198 μg/mL)
‐ Cyprodinil & fludioxonil: poblaciones altamente sensibles (EC50=0,045 μg/mL)
‐ Fludioxonil: todos los aislados fueron altamente sensibles, sin detección de resistencia (EC50=0,021 μg/mL)
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
0,12
0,13
0,73
0,25
0,67
0,18
1,39
0,96
1,09
0,95
1,14
0,66
0,03
0,02
0,03
0,04
0,03
0,05
0,03
0,02
0,02 0,03
0,02
0,02
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
Talca Los Ángeles Río Bueno Talca Los Ángeles Río Bueno
Var. Legacy Var. Brigitta
EC50 Arándanos / Estadio: Floración
EC50 fenhex EC50 iprodione EC50 Switch EC50 fludioxonil
‐Fenhexamid: leve resistencia (EC50=0,35 μg/mL) (ambas variedades)
‐Switch y fludioxonil: todos los aislados sensibles (EC50=0,03; 0,02 μg/mL, respectivamente) (ambas variedades)
‐Iprodione: leve resistencia (EC50=1,15 μg/mL) en Legacy; sensibilidad (EC50=0,92 μg/mL) en Brigitta.
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
0,74
0,34
0,48
0,23
1,37
1,06
1,04 1,06
0,05
0,02
0,04
0,04
0,01
0,030,02
0,02
0,02
0,02
0,02
0,02
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
Talca Los Ángeles Río Bueno Talca Los Ángeles Río Bueno
Var. Legacy Var. Brigitta
EC50 Arándanos / Estadio: Precosecha Temprana
EC50 fenhex EC50 iprodione EC50 Switch EC50 fludioxonil
1,52
1,56
1,78
‐ Fenhexamid: moderada resistencia (EC50=1,27 μg/mL) en Legacy; leve resistencia (EC50=0,35 μg/mL) en Brigitta.
‐ Iprodione: leve resistencia (EC50=1,35 μg/mL) en ambas variedades
‐ Switch y fludioxonil: todos los aislados sensibles (EC50=0,03; 0,02 μg/mL, respectivamente)
1,77
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
1,77
Ambas variedades: Fenhexamid: leve resistencia (EC50=0,3 μg/mL); Iprodione: leve resistencia (EC50=1,21 μg/mL)
‐ Switch: Sensibilidad aceptable en Talca y Los Ángeles ( EC50=0,07) e inicio de pérdida de sensibilidad en Río Bueno;
‐ Fludioxonil: todos los aislados se comportaron como altamente sensibles (EC50= 0,02 μg/mL).
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Ing. Agr. Julia Pinto
Director Proyecto
“PLATAFORMA DE APOYO A LA TOMA DE DECISIONES PARA EL CONTROL DE BOTRYTIS MEJORANDO LA COMPETITIVIDAD DE LA
INDUSTRIA DEL ARÁNDANO” Código Innova:
Proyecto FDF – Comité de Arándanos / InnovaChile de CORFO
ÁREA PRE Y POS COSECHA ‐ GERENCIA FRUTICULTURA ‐ FDF
Universidad Nacion
al de
Bogotà, Grupo CHIA
/Bayer
CropScience, Colom
bia Y
Lab. de Fitopatolog
ía Frutal y
Molecular Universidad
de Chile
Comité de Arándano
s,
FDF – ASOEX A.
G. /
Lab. de Fitopato
logía
Frutal y Molecular
Universidad de
Chile
Universidad DE
Chile
Lab. de Fitopa
tología Frutal
y
Molecular
Universidad de C
hile
Lab. de Fitopato
logía Frutal y
Molecular
Sistema Botrytis
SIG BDDITERNET
Usuarios
INTERNET
Ingreso Plataforma on line
https://botrytis.uchile.clhttps://botrytis.uchile.cl
https://https://arandanosarandanos........fdf.clfdf.cl
Lab. Fitopatología Frutal y Molecular/ [email protected]
Sistema Botrytis
……Contraseña
…….Nombre Usuario
…….Razón Social
Evaluación de Sensibilidad a fungicidas …
Caracterización genotípica…
Niveles de Infección
Parámetros evaluados
Resultados de infecciónPrimera temporada
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Razón social Predio Comuna
Sociedad Agrícola del Alto Pelarco Ltda. Talca
Campo K; Sector Las Camelias Retiro
Sol del Maule San Javier
Agrícola El Ensueño Cauquenes
1
3
42
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Región del Maule
Región del Maule
TeldorBellis
Teldor / BC‐1000Comet / Bellis
Razón social Predio Comuna
Agrícola MyT Santa Bárbara
Agrícola Valle del Sol Quinchamalí
Agrícola Santa Carmen Ltda. Los Ángeles
Fundo Santa Ana; Agrícola Rinconada de Rihue Negrete
3
14
2
Región del Bío‐Bío
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Región del Bío‐BíoNiveles de infección / estadio floración / (5)
1,0
6,5 7,5
0
5
10
15
20
25
30
35
40
7 días 14 días Total evaluaciones
Porcen
taje(%
) de
flores con bo
trytis
Teldor Serenade
Rovral + streptoplus Bellis
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2
134
Razón social Predio Comuna
Agrícola Las Vertientes Ltda. Panguipulli
Fundo Vista Hermosa Río Bueno
Agrícola Patrón San José de la Mariquina
Río Negro Purranque
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Región de Los Ríos
Región de Los Ríos
Switch 0.8 L/ha Cantus
Captan Mastercop
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p+B T+bc B T T S R+Srep B S b C Mc
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
Conclusiones: • Niveles de infección varían según Predio y Zona,
• Respuesta fungicida puede ser consecuencia de niveles de sensibilidad de las poblaciones locales, como también de calidad de la aplicación (producto dosis y época adecuada; equipos y mojamiento)
• Resultado de eficacia a fungicidas (fenotipos), depende de población predominante (genotipos)..
• Diagnóstico certero debe considerar inicialmente al menos 2 temporadas(floración y precosecha), porque poblaciones son dinámicas y reaccionan frente al manejo;… y en tercera solo evaluar al momento de cosecha…
• Es importante que se evalué al término de cada temporada el nivel de pudrición final ….
• Resultados de predios Socio‐usuarios de Plataforma serán confidenciales, solo promedios regionales serán de libre disponibilidad en la web…. A mayor puntos de muestreos por Región mayor confiabilidad de resultados (mayor representatividad) …
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular U. de Chile
Equipo Técnico LFM U de Chile
Comité de Arándanos, FDF – ASOEX A.G.
“Plataformas on-line de
sensibilidad a Botryticidas en
Arándanos: la base para el
diseño de programas de
Control”
Lab. de Fitopatología Frutal y Molecular / [email protected]
Ing. Agr. M.Sc. Marcela Esterio G.Universidad de Chile
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