Hromatografija

Klasifikacija Hromatografije

Hromatografija na tankom sloju(TLC)

• distance of spot from origin

• distance of solvent front from origin

Rf =d1

d2

d1 = put hromatografiranog spoja u cm

d2 = put eluenta u cm

Upotreba TLC u industriji hrane

• TLC se koristi za separaciju malih kolicinasmjese.

• Ako zelimo razdvojiti vece kolicine komponenti usmjesi-vise cvrste faze i vise rastvaraca. To sepostize hromatografijom na koloni.

• Cvrsta faza se pakuje u kolonu• Rastvarac prolazi kroz kolonu• Aplicira se uzorak (smjesa) na vrh kolone• Zavisno od vrste mobilne faze, komponete smjese

se krecu prema izlazu kolone.

Hromatografija na koloni

• Svaka komponenta smjese izlazi u razlicio vrijeme• Sakupljanjem mobilne faze u porcijama zvanih

frakcije, mozemo razdvojiti svaku komponentusmjese.

• Promjenom polarnosti mobilne faze koji se krecekroz kolonu, mozemo povecati polarnost mobilnefaze, i tako mogu zaostati na koloni manje polarnekomponente iz smjese.

• Mnogo sofisticiraniji metod hromatografije jehromatografija poznata kao HPLC.

• Koriste se veoma fine cvrste cestice, pakovane ukoloni.

• Ovo poveceva povrsinu dostupnu za adsorpciju, patako povecava efikasnost separacije.

• Kako su cvrste cestice pakovane cvrsto jedna uzdrugu, neophodna je pumpa da bi da bi pomoglamobilnoj fazi da se krece kroz kolonu.

High-performance liquidchromatography, HPLC

Komponente uređaja za HPLC

• Rezervoar mobilne faze• Pumpa• Injektor• Kolona• Detektor

Tipovi HPLC-a

• Hromatografija na normalnim fazama

• Hromatografija na obrnutim fazama

Hromatografija na normalnimfazama

Ova metoda koristi:• polarnu stacionarnu fazu• nepolarnu mobilnu fazuKoristi se kada je supstanca koja se analizira

polarna

• Polarna supstanca se adsorbira i zadržava načesticama stacionarne faze. Jačinaadsorpcije je veća što je veća polarnostsupstance, a samim time je duze i vrijemezaržavanja. Korištenje polarnijih rastvaračau mobilnoj fazi smanjuje retencionovrijeme.

• Najčešća stacionarna faza je silikatna, tretirana saRMe2SiCl, gdje je R alkilna grupa ravnog lanca kao C18H37ili C8H17.

• Vrijeme zadržavanja je duže za manje polarne supstance.Vrijeme zadržavanja se povećava dodatkom polarnihrastvarača u mobilnu fazu a smanjuje se dodatkomhidrofobnih rastvarača.

• RP-HPLC funkcioniše na principu hidrofobnih interakcija,koje su rezultat odbijajućih sila između polarnog rastvaračai relativno nepolarne supstance koja se analizira inepolarne stacionarne faze.

Hromatografija na obrnutimfazama

• HPLC na obrnutim fazama (RP-HPLC)• koristi nepolarnu stacionarnu fazu i• polarnu mobilnu fazu.

Detektori za HPLC

• Detektor ima važnu ulogu da detektujekomponente koje izlaze iz kolone nakon eluiranja.Detektor generiše električni signal koji jeproporcionalan intenzitetu neke osobine mobilnefaze ili supstance koja se eluira. Primjeri tipovadetektora u HPLC-u su:

• UV-VIS detektor• Fluorescentni detektor• Elektrohemijski detektor• Detektor indeksa loma

GC/MS

•Kompleksne smjese se mogu veoma lako razdvojitigasnom hromatografijom, a MS se koristi za identifikacijuindividualnih komponenata, jer maseni spektar dajeinformacije o njihovoj strukturi.

•obje tehnike koriste približno istu količinu uzorka ugasovitom stanju (manje od 1 ng)