Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs
Transcript of Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs
![Page 1: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/1.jpg)
Univerzitet u Beogradu
Fakultet veterinarske medicine
Katedra za fiziologiju i biohemiju
Vežba II
Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pepsina
Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje tripsina
Ispitivanje uslova za aktivaciju i delovanje pankreasne amilaze
![Page 2: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/2.jpg)
Ključna pitanja i zadaci
Fermenti želudačnog soka Fermenti pankreasa
Tripsin – aktivacija?Pepsin - aktivacija?
Pepsin – način delovanja?
Pepsin – optimalni uslovi za
delovanje, otpornost?
Tripsin – optimalni uslovi za
delovanje?
Pankreasna amilaza?
![Page 3: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/3.jpg)
Ključna pitanja i zadaci
Fermenti želudačnog soka Fermenti pankreasa
Tripsin – aktivacija?Pepsin - aktivacija?
Pepsin – način delovanja?
Pepsin – optimalni uslovi za
delovanje, otpornost?
Tripsin – optimalni uslovi za
delovanje?
Pankreasna amilaza?
Zadaci
1. Ispitivanje delovanja pepsina
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)
Obavezan rezultat u svesci!
2. Ispitivanje delovanja tripsina
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)
Obavezan rezultat u svesci!
3. Ispitivanje delovanja pankreasne amilaze
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)
Obavezan rezultat u svesci!
![Page 4: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/4.jpg)
Fermenti želudačnog soka
Pepsin Lab ferment Želudačna lipaza
Lab ferment (himozin)
Stvara se u sirištu preživara kod mladih jedinki
Optimalan pH je 5 – 6
Kazein mlekaLab ferment
Parakazein Ca-parakazeinat (sir)
Ca++
Želudačna lipaza
Razlaže emulgovane masti mleka kod mladih životinja
Manje značajna od pankreasne lipaze
![Page 5: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/5.jpg)
Pepsin
Neaktivan oblik (proferment) pepsina je pepsinogen
Pepsinogen PepsinH⁺(HCl)
Spada u grupu hidrolaza
Endopeptidaza (prema mestu delovanja na peptide)
Razlaže potporne belančevine vezivno-tkivnih opni (kolagene i elastine)
Pepsinogen
Peptid
Pepsin
Peptid
Cepa peptidni
lanac po sredini
![Page 6: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/6.jpg)
Pepsin
0
1
2
3
4
5
6
7
8
10
11
9
12
13
14
Kiselo
Bazno
Neutralno
Optimalan pH je 1,5 – 2 (2,5)
Pepsin se denaturiše u baznoj sredini
![Page 7: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/7.jpg)
Kiseli ekstrakt
• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru HClP
Neutralisani ekstrakt
• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ do pH - 7 P
Alkalizovani ekstrakt
• kiselom ekstraktu se dodaje Na₂CO₃ u višku dok pH ne postane bazan P
Bazni ekstrakt
• isitnjena sluzokoža želuca svinje se homogenizuje u rastvoru Na₂CO₃ PG
Priprema ekstrakta
![Page 8: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/8.jpg)
Supstrat
• koagulisano belance
proteini su nerastvorljivi nema peptida u rastvoru
delovanjem enzima peptidi u rastvoru
![Page 9: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/9.jpg)
5ml HCl
KE 3, 4 kapi
2- 3 kockicekoag.belance
5ml
NE
HCl
3, 4 kapi
2- 3 kockicekoag.belance
2- 3 kockicekoag.belance
2- 3 kockicekoag.belance
BEAE
5ml5ml
3, 4 kapi3, 4 kapi
HClHCl
• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru
Biuret
5ml
2ml
parkapi
rastvora
1,25 M NaOH
0,01 M CuSO₄
(+) (+) (+)(-)
P P P PG
P
![Page 10: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/10.jpg)
Pankreasni sok
Glavni proteolitički enzimi pankreasa su tripsin i himotripsin
Proizvod lučenja egzokrinog dela pankreasa
Neorganski sastojci (voda, NaHCO3)
Organski sastojci (fermenti)
Bezbojna, prozirna, sluzava tečnost alkalne elektrohemijske reakcije (pH 8)
![Page 11: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/11.jpg)
Tripsin
Pankreas
Duodenum
Tripsinogen
Tripsin
Crevni enzim
enterokinaza aktivira
neaktivni tripsinogen
u tripsin!
Razlaže belančevine do nižih peptida
Optimalan pH od 7,5 – 9,0
![Page 12: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/12.jpg)
5ml Na₂CO₃
4 kapi PE i CE
belance
5ml5ml 5ml 5mlNa₂CO₃ Na₂CO₃ Na₂CO₃ HCl
4 kapi 4 kapi 4 kapi 4 kapiCE p.PE i CE PE i CEPE
belance belance belance belance
• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Biuretskom reakcijom dokazati prisustvo slobodnih peptida u rastvoru
PE – ekstrakt pankreasa CE – ekstrakt crevne sluzokožep.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa
(+) (-) (-) (-) (-)
![Page 13: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/13.jpg)
Spada u grupu enzima hidrolaza, razlaže skrob i glikogen do disaharida maltoze
Optimalan pH je 5,5 – 6,7
Pankreasna amilaza
![Page 14: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/14.jpg)
skrob4ml 4ml skrob
4kapi 4kapiPE p.PE
PE – ekstrakt pankreasa p.PE – prokuvani ekstrakt pankreasa
• Vodeno kupatilo na 37 stepeni C, 20 min• Felingova proba
(+) (-)
Pankreasna amilaza
![Page 15: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/15.jpg)
Klinički značaj
Sindrom maldigestije i malapsorpcije
![Page 16: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/16.jpg)
Ključna pitanja i zadaci
Fermenti želudačnog soka Fermenti pankreasa
Tripsin – aktivacija?Pepsin - aktivacija?
Pepsin – način delovanja?
Pepsin – optimalni uslovi za
delovanje, otpornost?
Tripsin – optimalni uslovi za
delovanje?
Pankreasna amilaza?
Zadaci
1. Ispitivanje delovanja pepsina
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)
Obavezan rezultat u svesci!
2. Ispitivanje delovanja tripsina
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)
Obavezan rezultat u svesci!
3. Ispitivanje delovanja pankreasne amilaze
Zaključak (objašnjenje reakcija u epruvetama)
Obavezan rezultat u svesci!
![Page 17: Vežba II - kfiziolbiohem.vet.bg.ac.rs](https://reader030.fdocument.pub/reader030/viewer/2022012508/6184629d25f40c6ae561da21/html5/thumbnails/17.jpg)
Hvala na pažnjiHvala na pažnji!