Zavod za kliniku mikrobiologiju

Zavod za kliniku mikrobiologiju - Odjel za bakteriologiju i bolnike infekcije

Uzimanje uzorakaUzorci iz primarno sterilnih materijala

Na uputnici obavezno navesti slijedee:

podatci o pacijentu (ime i prezime, godina roenja, odjel) dijagnoza

da li pacijent uzima antimikrobnu terapiju, ako da koju

vrsta uzorka (kod hemokultura oznaiti broj seta) vrsta pretrage datum i vrijeme uzimanja uzorka ime nadlenog lijenikaUZORAKPosudaUzimanje materijalaTransport

(odmah po uzimanju) Pohranjivanje

(samo ako transport nije mogu odmah)Oekivani patogeni

(kultivacija ne ukljuuje M. tuberculosis)

Krv- 2-3 seta u 24 sata Bujoni za hemokulture

(istovremeno uzeti set - boica za AE i AN uzgoj smatraju se jednim uzorkom) odrasli 10 ml po boici

djeca- 1-5 ml po boici

Kod sumnje na intracelularne patogene (bartonela) od laboratorija zatraiti Isolator boice i u njima dostaviti krvPrije venepunkcije kou dezinficirati 70% alkoholom i poslije to mjesto vie ne palpirati

Uzeti 2 do 3 uzorka u razmacima od 1/2h s razliitih mjesta, prije oekivanog maksimuma temperature

U akutnoj sepsi uzeti 2 seta s razliitih mjesta unutar 10 min (prije poetka antimikrobne terapije)

Kod sumnje na kateter sepsu uzeti uzorak krvi iz periferije i cvk svakako naznaiti vrijeme uzimanja uzorka ST+ 37 CBilo koja vrsta bakterija i gljiva

Pozitivni rezultati se javljaju telefonom (preliminarni i definitivni)

Nalaz se izdaje za 5 dana ukoliko prije nije bio pozitivan

Telefonski dogovoriti dulju inkubaciju kod sumnje na brucelozu, tularemiju i gljivinu infekciju (i naznaiti na uputnici)

Kateteri (NE urinarni kateter)Sterilna posuda s navojemDezinficirati kou prije vaenja

(70% alkohol)

vrh urinarnog katetera ne slati na analizu

vrh i.v. katetera ne slati u bujonu!ST +4 C (po mogunosti ne dulje od 2 sata)Bilo koja vrsta bakterija i gljiva

Pozitivni rezultati se javljaju telefonom (preliminarni i definitivni)

Mali broj bakterija u kvantitativnom i semikvantitativnom uzgoju ukazuje na vjerojatnu kontaminaciju, ali ne iskljuuje patogenu ulogu u sluaju klinikih znakova kateter sepse

Tjelesne tekuine

(zglobna, pleuralna, amnionska, ascites, u, itd)Sterilna epruveta s navojem

Iznimno, ako uzorka ima malo, moe se nasaditi u boicu za hemokulturu* Dezinficirati kou prije aspiriranja

(70% alkohol)

BRIS nije adekvatan uzorak, ve SAMO aspirat

Poslati to je mogue vie materijalaSTST / 24 sata

* nasaena boica za hemokulturu na + 37 CBilo koja vrsta bakterija i gljiva

Amnionska tekuina i tekuina dobivena kuldocentezom trebaju se slati u anaerobnom transportnom mediju

Pozitivni rezultati se javljaju telefonom (preliminarni i definitivni)

Telefonski dogovoriti dulju inkubaciju kod sumnje na gljive (i naznaiti na uputnici)

LikvorSterilna epruveta s navojem (min.1 ml, za acidorezistentne uzronike 5 ml)

Dezinficirati kou prije aspiriranja

(70% alkohol).

Uzeti po 1-2 ml u tri epruvete (za mikrobiologiju, citologiju i biokemiju epruvetu za mikrobiologiju nikad ne puniti prvu, ako samo 1 epruveta prvo ju odnjeti na mikrobiologiju)

Ako je mogue odmah pri uzimanju nekoliko kapi likvora direktno nasaditi i u epruvetu s kosim agarom te epruvetu s hranjivim bujonom koji se dobiju u laboratoriju* ST

Zbog hitnosti pretrage likvor se predaje iz ruke u ruku!

ST

*Nasaene hranjive podloge na +37 C

Za bakteriologiju ne stavljati u hladnjak !

Bilo koja vrsta bakterija i gljiva

Pozitivni rezultati se javljaju telefonom (preliminarni i definitivni)

Nalaz se izdaje za 5 dana ukoliko prije nije bio pozitivan

Telefonski dogovoriti dulju inkubaciju kod sumnje na gljive (i naznaiti na uputnici)

Rutinska obrada ne ukljuuje tu preparat i preparat po Ziehl-Neelsenu (po potrebi naznaiti na uputnici)

BioptatiSterilna posuda s navojem (dodati par kapi sterilne fizioloke otopine da tkivo bude vlano) Dezinficirati kou prije biopsije

(70% alkohol)

STST / 24 sata

dodatni materijal za mogue budue analize sauvati na -70 CBilo koja vrsta bakterija i gljiva

Pozitivni rezultati se javljaju telefonom (preliminarni i definitivni)

Telefonski dogovoriti dulju inkubaciju kod sumnje na gljive (i naznaiti na uputnici)

Aspirat (bris) duboke rane, apscesaa) Aspirat poslati u sterilnoj epruveti. Ako je uzorka malo ili se ne moe odmah otpremiti u laboratorij nasaditi u boicu za anaerobnu hemokulturu

b) Bris je lo uzorak, ali ako se uzima pohraniti ga u anaerobni transportni medijDezinficirati kou prije aspiriranja

(70% alkohol).

Aspirirati duboko u otvorenu ranu, najbolje s dna ili stijenke apscesa ili incidirati komad tkiva Tkivo ili tekuina bolji su uzorak od brisa

U sluaju male koliine aspiriranog materijala navui u pricu malu koliinu sterilne fizioloke otopine i protrcati u sterilnu epruvetu ili boicu za hemokulturu* STST / 24

*aspirat u boici za hemokulturu na +37 CBilo koja vrsta bakterija i gljiva

Pozitivni rezultati se javljaju telefonom (preliminarni i definitivni)

Telefonski dogovoriti dulju inkubaciju kod sumnje na gljive (i naznaiti na uputnici)

Kone promjene, povrinske rane (celulitis, opekline) Bris u sterilnoj epruveti

U sluaju duljeg transporta pohraniti u Amies transportni medij Prije uzimanja brisa podruje izaprati sterilnom fiziolokom otopinom

Obrisati rub prema zdravom tkivu, odstraniti krusteSTST / 24 sata S.aureus, BHS-A i gljive se izdaju ako su prisutni u bilo kojoj koliini (u tom sluaju preliminarni i definitivni nalaz se javljaju telefonom)

Ostale bakterije se izdaju samo ako predstavljaju dominantnu floru ili zbog rezistencije zahtjevaju kontaknu izolaciju pacijenta

Saprofitne bakterije koe se ne izdaju

Krv na Aspergillus antigen (galaktoman) Krv u epruveti bez antikoagulansaPrije venepunkcije kou dezinficirati 70% alkoholom i poslije to mjesto vie ne palpiratiSTTest se radi iz svjee krvi ukoliko uzorak nije mogue poslati odmah odvojiti serum i pohraniti na -200CAspergillus antigen (galaktoman)

ST = sobna temperatura

Uzorci iz dinog sustavaNa uputnici obavezno navesti slijedee:

podatci o pacijentu (ime i prezime, godina roenja, odjel) dijagnoza

da li pacijent uzima antimikrobnu terapiju, ako da koju

vrsta uzorka vrsta pretrage datum i vrijeme uzimanja uzorka ime nadlenog lijenikaUZORAKPosudaUzimanje materijalaTransport

(odmah po uzimanju) Pohranjivanje

(samo ako transport nije mogu odmah)Oekivani patogeni

(kultivacija ne ukljuuje M. tuberculosis)

Aspirat ili bris srednjeg uhaSterilna posuda s navojem ili bris u sterilnoj epruveti

Uzorak uzeti samo ako uho curi ili je uinjena timpanocentezaSTST / 24 sata

Ako uzorak nije mogue poslati odmah treba ga slati u Amies transportnom medijuBilo koja vrsta bakterija i gljiva

Telefonski dogovoriti dulju inkubaciju kod sumnje na gljive (naznaiti na uputnici)

Bris vanjskog uhaBris u sterilnoj epruvetiPrije uzimanja brisa odstraniti kruste fiziolokom otopinom; bris rotirati u vanjskom kanaluST24 sata na +4 C

Bilo koja vrsta bakterija i gljiva OSIM:Saprofitne bakterije koe se ne izdaju

Bris spojnice okaBris u sterilnoj epruvetiPrvim sterilnim tapiem odstraniti sluz, a drugim uzeti obrisak pazei da se ne dotakne koni dio vjeeSTST / 24 sata

Ako uzorak nije mogue poslati odmah treba ga slati u Amies transportnom medijuBilo koja vrsta bakterija i gljiva

OSIM:Saprofitne bakterije koe se ne izdaju

Pretraga ne ukljuuje Ch. trachomatis(vidi: Laboratorij za molekularnu i citoloku dijagnostiku)

Bris drijelaBris u sterilnoj epruveti

za N.gonorrhoae u Amies ugljeni transportni medij*Sterilnim tapiem treba obrisati tonzile (lukove drijela) te stranju stijenku farinksa, pazei pritom da se ne dotakne jezik ili bukalna sluznicaSTST / 24 sata

za N.gonorhoae unutar 12 sati

Ako uzorak nije mogue poslati odmah treba ga slati u Amies transportnom medijuBHS-A

Ako se trai neki drugi uzronik treba naznaiti na uputnici

Bris / aspirat nazofarinksaBris u sterilnoj epruvetiTankim sterilnim tapiem lagano ui u nazofarinks pratei smjer nosnog hodnika, lagano rotirati tapi

STST / 24 sata

Ako uzorak nije mogue poslati odmah treba ga slati u Amies transportnom medijuS.pneumoniae, H.influenzae, M.catarrhalis, BHS-A

Ako se trae neki drugi uzronici (N.meningitidis) treba naznaiti na uputnici

Bris nazofarinksa nije kvalitetan uzorak (nedovoljno specifian i nedovoljno osjetljiv) za otkrivanje uzronika upale srednjeg uha ili sinusa

Bris / aspirat nazofarinksa na Bordetella pertusisBris u sterilnoj epruvetiTankim sterilnim tapiem lagano ui u nazofarinks pratei smjer nosnog hodnika, lagano rotirati tapi

ST

to hitnije dostaviti u laboratorijST / 24 sata

Ako uzorak nije mogue poslati odmah treba ga slati u transportnom medijuBordetella pertusis

Pozitivni rezultati se javljaju telefonom

Nalaz se izdaje za 7 dana ukoliko prije nije bio pozitivan

Bris nosa na Staphylococcus aureus ili MRSABris u sterilnoj epruvetiSterilni tapi navlaiti u sterilnoj fiziolokoj otopini, 5 puta vrsto rotirati tapi briui unutarnji koni nabor prvo jedne, a potom istim tapiem i druge nosnice (do 1-2 cm dubine)STST / 24 sataStaphylococcus aureus

MRSANa uputnici naznaiti da li se trai detekcija stafilokoknog kliconotva ili se radi o rani unutar nosnog hodnika

Sputum: a)ekspektorirani b)induciraniSterilna posuda s navojem a) Prije davanja sputuma pacijent treba izaprati (grgljati) usta vodom te pokuati proizvesti duboki iskaljaj

b) iskaljavanje se inducira inhalacijom 3-10% sterilne fizioloke otopineSTa) +40C / 24 sata ekspektorirani

b) ST / 24 sata induciraniS.pneumoniae, H.influenzae, M.catarrhalis, BHS-A, S.aureus

Telefonski dogovoriti dulju inkubaciju kod sumnje na gljive osim Candida spp. (naznaiti na uputnici)

Ako se trae neki drugi uzronici (P.aeruginosa kod cistine fibroze) treba naznaiti na uputnici

Rutinska obrada ne ukljuuje tu preparat i preparat po Ziehl-Neelsenu (po potrebi naznaiti na uputnici)

Kvalitetnim uzorkom se smatra onaj iskaljaj u kojem ima puno (>25 u vidnom polju) polimorfonukleara i malo (5 mlDovoljno je liicom epa zagrabiti oko 1-2 g proljevaste stolice ili grumen veliine ljenjaka u sluaju formirane stolice. Testiranje formirane ili tvrde stolice nije preporuljivo (pacijent bi trebao imati 5 tekuih ili mekih stolica na dan). 1-2 uzorka mogu biti potreba za detekciju niskih razina toksina1h ST

1-24 +40C

>24 -200C (oprez- brz gubitak aktivnosti citotoksinaToksikogeni soj C. difficile

U djejoj dobi esta je kolonizacija toksikogenim sojevima

ST = sobna temperaturaUzorci iz urogenitalnog sustavaNa uputnici obavezno navesti slijedee:

podatci o pacijentu (ime i prezime, godina roenja, odjel) dijagnoza

da li pacijent uzima antimikrobnu terapiju, ako da koju

vrsta uzorka vrsta pretrage datum i vrijeme uzimanja uzorka ime nadlenog lijenikaUZORAKPosudaUzimanje materijalaTransport

(odmah po uzimanju) Pohranjivanje

(samo ako transport nije mogu odmah)Oekivani patogeni

(kultivacija ne ukljuuje M. tuberculosis)

UrinSterilna posuda s navojem Spolovilo oprati sapunom i vodom ili u ambulantnim uvjetima sterilnom fiziolokom otopinom (jednim potezom tupfera u smjeru od naprijed prema otraga). Prvi mlaz ispustiti, a srednji uhvatiti u sterilnu posudu. ST

+4 C ako se oekuje da e od uzimanja do nasaivanja uzorka proi > 2h +40C / 24 sataE.coli i S.saprophyticus (u mlaih ena) izdaju se ako su prisutni u istoj kulturi u koliini 10 cfu/ml.Ostale bakterije se izdaju ako su prisutne u istoj kulturi u koliini 104 cfu/ml

U interpretaciji nalaza potrebno je uzeti u obzir biokemijski nalaz urina i kliniku sliku.

Kod trajnog urinarnog katetera uzorak ne uzimati bez klinikih simptoma upale - na uputnici naznaiti da se radi o kateter urinu

Bris cerviksa, vagineBris u sterilnoj epruveti

Bris cerviksa se uzima pri ginekolokom pregledu spekulima prvim brisom odstraniti sekret te drugim brisom uzeti uzorak iz endocervikalnog kanala

STST / 24 sataStaphlococcus aureus, BHS-A, BHS-B, Candida albicansDetekcija Gardnerella vaginalis se zasniva na preparatu po Gramu

Navedene bakterije se u genitalnom traktu nalaze i normalno kao dio fizioloke ili kolonizirajue flore, ali kad se nau kao dominantan izolat mogu biti povezani s odreenim klinikim simptomima

Kod djece su u brisu vagine / vulve mogui i respiratorni patogeniDetekciju Neisseria gonorrhoeae, Listeria monocytognes, Actinomyces spp. (anaerobi) treba posebno naznaiti na uputnici

Bris cerviksa, vagine na BHS/BBris u sterilnoj epruvetiSTST / 24 sataCiljana pretraga na BHS/B je indicirana u trudnica pred porod (35.tj. trudnoe)

Bris cerviksa, vagine, uretre na N.gonorrhoaeAmies ugljeni transportni medijSTST / 24hN.gonorrhoae

Za PCR dijagnostiku vidi: Laboratorij za molekularnu i citoloku dijagnostiku

Eksprimat prostate,

ejakulatSterilna posuda s navojemEksprimat prostete se dobiva masaom prostate kroz rektum. Ne preporua se u tijeku akutnog prostatitisa.STST / 24 hBilo koja vrsta bakterija i gljiva

Eksprimat prostate se izdaje kvantitativno. Za interpretaciju nalaza je uputno uspoerditi porast bakterija iz eksprimata s porastom bakterija iz prvog, drugog i treceg (nakon eksprimata) mlaza urina 10x vei broj bakterija u 1. i 2. mlazu urina negoli u eksprimatu prostate i 3. mlazu ukazuje da bakterije potjeu iz mjehura ili uretre, a ne prostate

Bris cerviksa, uretre, ejakulat, eksprimat prostate, urin na Mycoplasma hominis i Ureaplasma urealyticumSpecijalne transportne podloge koje se dobiju u laboratorijuBris uretre (tanki sterilni bris staviti 2-4 cm u lumen uretre, rotirati ga) ili bris cerviksa uroniti u transportnu podlogu i dobro protresti te potom bris odbaciti a podlogu dostaviti u laboratorij

STST / 24 hMycoplasma hominis i Ureaplasma urealyticum mogu predstavljati saprofitnu floru. Nalaz ovih bakterija u kolicini 104 cfu/ml govori u prilog infekciji te se izdaje s antibiogramom

ST = na sobnoj temperaturi

Uzorci za molekularnu dijagnostikuNa uputnici obavezno navesti slijedee:

podatci o pacijentu (ime i prezime, godina roenja, odjel) dijagnoza

da li pacijent uzima antimikrobnu terapiju, ako da koju

vrsta uzorka vrsta pretrage datum i vrijeme uzimanja uzorka ime nadlenog lijenikaUZORAKPosudaUzimanje materijalaTransport

Pohranjivanje

Metoda pretrage

Puna krv

Likvor

na

N.meningitidis

S.pneumoniae

L.monocytogenes

S.aureus

Staphylococcus spp / S.aureus

Meticilin rezistentni stafilokok (MRSA / MRSE)Epruveta s antikoagulansom (EDTA)Prije venepunkcije / lumbalne punkcije kou dezinficirati 70% alkoholom

Uzeti 1ml likvora

Uzeti 2ml krviST

Uzorak dostaviti u laboratorij to hitnije

U sluaju duljeg transporta uzorak zalediti i poslati zaleenPunu krv / likvor zalediti na -200CReal time PCR, LightCycler (Roche)

Soj za identifikaciju ista kultura bakterija u dubokom agaru STST

Dulje pohranjivanje na -200C

ST = na sobnoj temperaturiPAGE 12