UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

ESCUELA DE ldquoMEDICINA VETERINARIArdquo

ldquoUTILIZACIOacuteN DE AGUA DE COCO (Cocos nucifera)

COMO EXTENSOR DE SEMEN FRESCO DE VERRACOSrdquo

SARAH LETICIA MARCKWORDT PAREDES

Meacutedica Veterinaria

GUATEMALA AGOSTO DE 2012

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

ESCUELA DE ldquoMEDICINA VETERINARIArdquo

ldquoUTILIZACIOacuteN DE AGUA DE COCO (Cocos nucifera) COMO

EXTENSOR DE SEMEN FRESCO DE VERRACOSrdquo

TRABAJO DE GRADUACIOacuteN

PRESENTADO A LA HONORABLE JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD

POR

SARAH LETICIA MARCKWORDT PAREDES

Al Conferiacutersele el tiacutetulo profesional de

Meacutedica Veterinaria

En el grado de Licenciado

GUATEMALA AGOSTO DE 2012

HONORABLE TRIBUNAL EXAMINADOR

En cumplimiento con lo establecido por los reglamentos y normas de

la Universidad de San Carlos de Guatemala presento a su

consideracioacuten el trabajo de graduacioacuten titulado

ldquoUTILIZACIOacuteN DE AGUA DE COCO (Cocos nucifera) COMO

EXTENSOR DE SEMEN FRESCO DE VERRACOSrdquo

Que fuera aprobado por la Honorable Junta Directiva de la Facultad de

Medicina Veterinaria y Zootecnia

Como requisito previo a optar al tiacutetulo profesional de

MEacuteDICA VETERINARIA

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

JUNTA DIRECTIVA

DECANO MV Leoacutenidas Aacutevila Palma

SECRETARIO MV Marco Vinicio Garciacutea Urbina

VOCAL I Lic Sergio Amiacutelcar Daacutevila Hidalgo

VOCAL II MV MSc Dennis Sigfried Guerra Centeno

VOCAL III MV Carlos Alberto Saacutenchez Flamenco

VOCAL IV Br Mercedes de los Aacutengeles Marroquiacuten Godoy

VOCAL V Br Jean Paul Rivera Bustamante

ASESORES

MV MA Ligia Anaiteacute Gonzaacutelez Quintildeonez

MV MA Yeri Edgardo Veacuteliz Porras

M V Gustavo Enrique Taracena Gil

DEDICATORIAS

A DIOS por las bendiciones que me has dado y por darme fuerzas para seguir

adelante

A MIS PADRES Otto y Silvia por darme el ejemplo para llegar a este punto A MIS HIJOS Joseacute Andrea y Natalia para que no pierdan de vista las metas que

se propongan perseveren para cumplirlas y por haber creiacutedo en miacute

A MIS HERMANOS Marlene y Otto Vicky Ito Chiacuteo Paco y Erick los quiero

mucho

A MIS TIacuteOS especialmente a tiacutea Chita tiacutea Maide y tiacuteo Jaime por el apoyo que

me brindaron

A MIS AMIGOS especialmente a Marta Pancho Mynor Elliot Luis Ronald

Karina Miriam Roberto y Oswaldo

AGRADECIMIENTOS

A MIS ASESORES por su apoyo ensentildeanzas y paciencia en la realizacioacuten

de esta investigacioacuten

A LA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA por los conocimientos adquiri-

dos en esta casa de estudios

AL PERSONAL DE LA GRANJA PINARES especialmente a Gonzalo Elel que

colaboroacute con la realizacioacuten de la presente tesis

IacuteNDICE

No PAG

1

2

3

3

3

4

4

4

5

6

6

7

7

8

9

9

9

10

11

11

12

13

13

13

13

I

II

III

IV

INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

HIPOacuteTESIShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31 General

32 Especiacutefico

REVISIOacuteN DE LITERATURAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

41 El cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

411 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

412 Requerimientos edafoclimaacuteticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

42 El agua de cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

421 Contenido nutricionalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

43 Inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

431 Historiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphellip

434 Tipos de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

435 Material para inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

441 Entrenamiento del verracohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphellip

443 Lugar de extraccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

444 Potro o maniquiacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

445 Recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4451 Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4452 Fracciones del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 14

45 Evaluacioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

ESCUELA DE ldquoMEDICINA VETERINARIArdquo

ldquoUTILIZACIOacuteN DE AGUA DE COCO (Cocos nucifera) COMO

EXTENSOR DE SEMEN FRESCO DE VERRACOSrdquo

TRABAJO DE GRADUACIOacuteN

PRESENTADO A LA HONORABLE JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD

POR

SARAH LETICIA MARCKWORDT PAREDES

Al Conferiacutersele el tiacutetulo profesional de

Meacutedica Veterinaria

En el grado de Licenciado

GUATEMALA AGOSTO DE 2012

HONORABLE TRIBUNAL EXAMINADOR

En cumplimiento con lo establecido por los reglamentos y normas de

la Universidad de San Carlos de Guatemala presento a su

consideracioacuten el trabajo de graduacioacuten titulado

ldquoUTILIZACIOacuteN DE AGUA DE COCO (Cocos nucifera) COMO

EXTENSOR DE SEMEN FRESCO DE VERRACOSrdquo

Que fuera aprobado por la Honorable Junta Directiva de la Facultad de

Medicina Veterinaria y Zootecnia

Como requisito previo a optar al tiacutetulo profesional de

MEacuteDICA VETERINARIA

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

JUNTA DIRECTIVA

DECANO MV Leoacutenidas Aacutevila Palma

SECRETARIO MV Marco Vinicio Garciacutea Urbina

VOCAL I Lic Sergio Amiacutelcar Daacutevila Hidalgo

VOCAL II MV MSc Dennis Sigfried Guerra Centeno

VOCAL III MV Carlos Alberto Saacutenchez Flamenco

VOCAL IV Br Mercedes de los Aacutengeles Marroquiacuten Godoy

VOCAL V Br Jean Paul Rivera Bustamante

ASESORES

MV MA Ligia Anaiteacute Gonzaacutelez Quintildeonez

MV MA Yeri Edgardo Veacuteliz Porras

M V Gustavo Enrique Taracena Gil

DEDICATORIAS

A DIOS por las bendiciones que me has dado y por darme fuerzas para seguir

adelante

A MIS PADRES Otto y Silvia por darme el ejemplo para llegar a este punto A MIS HIJOS Joseacute Andrea y Natalia para que no pierdan de vista las metas que

se propongan perseveren para cumplirlas y por haber creiacutedo en miacute

A MIS HERMANOS Marlene y Otto Vicky Ito Chiacuteo Paco y Erick los quiero

mucho

A MIS TIacuteOS especialmente a tiacutea Chita tiacutea Maide y tiacuteo Jaime por el apoyo que

me brindaron

A MIS AMIGOS especialmente a Marta Pancho Mynor Elliot Luis Ronald

Karina Miriam Roberto y Oswaldo

AGRADECIMIENTOS

A MIS ASESORES por su apoyo ensentildeanzas y paciencia en la realizacioacuten

de esta investigacioacuten

A LA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA por los conocimientos adquiri-

dos en esta casa de estudios

AL PERSONAL DE LA GRANJA PINARES especialmente a Gonzalo Elel que

colaboroacute con la realizacioacuten de la presente tesis

IacuteNDICE

No PAG

1

2

3

3

3

4

4

4

5

6

6

7

7

8

9

9

9

10

11

11

12

13

13

13

13

I

II

III

IV

INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

HIPOacuteTESIShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31 General

32 Especiacutefico

REVISIOacuteN DE LITERATURAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

41 El cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

411 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

412 Requerimientos edafoclimaacuteticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

42 El agua de cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

421 Contenido nutricionalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

43 Inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

431 Historiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphellip

434 Tipos de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

435 Material para inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

441 Entrenamiento del verracohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphellip

443 Lugar de extraccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

444 Potro o maniquiacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

445 Recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4451 Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4452 Fracciones del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 14

45 Evaluacioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

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Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

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3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

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4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

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7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

HONORABLE TRIBUNAL EXAMINADOR

En cumplimiento con lo establecido por los reglamentos y normas de

la Universidad de San Carlos de Guatemala presento a su

consideracioacuten el trabajo de graduacioacuten titulado

ldquoUTILIZACIOacuteN DE AGUA DE COCO (Cocos nucifera) COMO

EXTENSOR DE SEMEN FRESCO DE VERRACOSrdquo

Que fuera aprobado por la Honorable Junta Directiva de la Facultad de

Medicina Veterinaria y Zootecnia

Como requisito previo a optar al tiacutetulo profesional de

MEacuteDICA VETERINARIA

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

JUNTA DIRECTIVA

DECANO MV Leoacutenidas Aacutevila Palma

SECRETARIO MV Marco Vinicio Garciacutea Urbina

VOCAL I Lic Sergio Amiacutelcar Daacutevila Hidalgo

VOCAL II MV MSc Dennis Sigfried Guerra Centeno

VOCAL III MV Carlos Alberto Saacutenchez Flamenco

VOCAL IV Br Mercedes de los Aacutengeles Marroquiacuten Godoy

VOCAL V Br Jean Paul Rivera Bustamante

ASESORES

MV MA Ligia Anaiteacute Gonzaacutelez Quintildeonez

MV MA Yeri Edgardo Veacuteliz Porras

M V Gustavo Enrique Taracena Gil

DEDICATORIAS

A DIOS por las bendiciones que me has dado y por darme fuerzas para seguir

adelante

A MIS PADRES Otto y Silvia por darme el ejemplo para llegar a este punto A MIS HIJOS Joseacute Andrea y Natalia para que no pierdan de vista las metas que

se propongan perseveren para cumplirlas y por haber creiacutedo en miacute

A MIS HERMANOS Marlene y Otto Vicky Ito Chiacuteo Paco y Erick los quiero

mucho

A MIS TIacuteOS especialmente a tiacutea Chita tiacutea Maide y tiacuteo Jaime por el apoyo que

me brindaron

A MIS AMIGOS especialmente a Marta Pancho Mynor Elliot Luis Ronald

Karina Miriam Roberto y Oswaldo

AGRADECIMIENTOS

A MIS ASESORES por su apoyo ensentildeanzas y paciencia en la realizacioacuten

de esta investigacioacuten

A LA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA por los conocimientos adquiri-

dos en esta casa de estudios

AL PERSONAL DE LA GRANJA PINARES especialmente a Gonzalo Elel que

colaboroacute con la realizacioacuten de la presente tesis

IacuteNDICE

No PAG

1

2

3

3

3

4

4

4

5

6

6

7

7

8

9

9

9

10

11

11

12

13

13

13

13

I

II

III

IV

INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

HIPOacuteTESIShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31 General

32 Especiacutefico

REVISIOacuteN DE LITERATURAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

41 El cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

411 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

412 Requerimientos edafoclimaacuteticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

42 El agua de cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

421 Contenido nutricionalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

43 Inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

431 Historiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphellip

434 Tipos de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

435 Material para inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

441 Entrenamiento del verracohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphellip

443 Lugar de extraccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

444 Potro o maniquiacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

445 Recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4451 Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4452 Fracciones del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 14

45 Evaluacioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

JUNTA DIRECTIVA

DECANO MV Leoacutenidas Aacutevila Palma

SECRETARIO MV Marco Vinicio Garciacutea Urbina

VOCAL I Lic Sergio Amiacutelcar Daacutevila Hidalgo

VOCAL II MV MSc Dennis Sigfried Guerra Centeno

VOCAL III MV Carlos Alberto Saacutenchez Flamenco

VOCAL IV Br Mercedes de los Aacutengeles Marroquiacuten Godoy

VOCAL V Br Jean Paul Rivera Bustamante

ASESORES

MV MA Ligia Anaiteacute Gonzaacutelez Quintildeonez

MV MA Yeri Edgardo Veacuteliz Porras

M V Gustavo Enrique Taracena Gil

DEDICATORIAS

A DIOS por las bendiciones que me has dado y por darme fuerzas para seguir

adelante

A MIS PADRES Otto y Silvia por darme el ejemplo para llegar a este punto A MIS HIJOS Joseacute Andrea y Natalia para que no pierdan de vista las metas que

se propongan perseveren para cumplirlas y por haber creiacutedo en miacute

A MIS HERMANOS Marlene y Otto Vicky Ito Chiacuteo Paco y Erick los quiero

mucho

A MIS TIacuteOS especialmente a tiacutea Chita tiacutea Maide y tiacuteo Jaime por el apoyo que

me brindaron

A MIS AMIGOS especialmente a Marta Pancho Mynor Elliot Luis Ronald

Karina Miriam Roberto y Oswaldo

AGRADECIMIENTOS

A MIS ASESORES por su apoyo ensentildeanzas y paciencia en la realizacioacuten

de esta investigacioacuten

A LA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA por los conocimientos adquiri-

dos en esta casa de estudios

AL PERSONAL DE LA GRANJA PINARES especialmente a Gonzalo Elel que

colaboroacute con la realizacioacuten de la presente tesis

IacuteNDICE

No PAG

1

2

3

3

3

4

4

4

5

6

6

7

7

8

9

9

9

10

11

11

12

13

13

13

13

I

II

III

IV

INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

HIPOacuteTESIShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31 General

32 Especiacutefico

REVISIOacuteN DE LITERATURAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

41 El cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

411 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

412 Requerimientos edafoclimaacuteticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

42 El agua de cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

421 Contenido nutricionalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

43 Inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

431 Historiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphellip

434 Tipos de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

435 Material para inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

441 Entrenamiento del verracohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphellip

443 Lugar de extraccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

444 Potro o maniquiacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

445 Recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4451 Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4452 Fracciones del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 14

45 Evaluacioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

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3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

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5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

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7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

DEDICATORIAS

A DIOS por las bendiciones que me has dado y por darme fuerzas para seguir

adelante

A MIS PADRES Otto y Silvia por darme el ejemplo para llegar a este punto A MIS HIJOS Joseacute Andrea y Natalia para que no pierdan de vista las metas que

se propongan perseveren para cumplirlas y por haber creiacutedo en miacute

A MIS HERMANOS Marlene y Otto Vicky Ito Chiacuteo Paco y Erick los quiero

mucho

A MIS TIacuteOS especialmente a tiacutea Chita tiacutea Maide y tiacuteo Jaime por el apoyo que

me brindaron

A MIS AMIGOS especialmente a Marta Pancho Mynor Elliot Luis Ronald

Karina Miriam Roberto y Oswaldo

AGRADECIMIENTOS

A MIS ASESORES por su apoyo ensentildeanzas y paciencia en la realizacioacuten

de esta investigacioacuten

A LA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA por los conocimientos adquiri-

dos en esta casa de estudios

AL PERSONAL DE LA GRANJA PINARES especialmente a Gonzalo Elel que

colaboroacute con la realizacioacuten de la presente tesis

IacuteNDICE

No PAG

1

2

3

3

3

4

4

4

5

6

6

7

7

8

9

9

9

10

11

11

12

13

13

13

13

I

II

III

IV

INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

HIPOacuteTESIShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31 General

32 Especiacutefico

REVISIOacuteN DE LITERATURAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

41 El cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

411 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

412 Requerimientos edafoclimaacuteticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

42 El agua de cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

421 Contenido nutricionalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

43 Inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

431 Historiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphellip

434 Tipos de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

435 Material para inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

441 Entrenamiento del verracohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphellip

443 Lugar de extraccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

444 Potro o maniquiacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

445 Recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4451 Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4452 Fracciones del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 14

45 Evaluacioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

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Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

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3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

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2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

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7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

AGRADECIMIENTOS

A MIS ASESORES por su apoyo ensentildeanzas y paciencia en la realizacioacuten

de esta investigacioacuten

A LA ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA por los conocimientos adquiri-

dos en esta casa de estudios

AL PERSONAL DE LA GRANJA PINARES especialmente a Gonzalo Elel que

colaboroacute con la realizacioacuten de la presente tesis

IacuteNDICE

No PAG

1

2

3

3

3

4

4

4

5

6

6

7

7

8

9

9

9

10

11

11

12

13

13

13

13

I

II

III

IV

INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

HIPOacuteTESIShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31 General

32 Especiacutefico

REVISIOacuteN DE LITERATURAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

41 El cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

411 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

412 Requerimientos edafoclimaacuteticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

42 El agua de cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

421 Contenido nutricionalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

43 Inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

431 Historiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphellip

434 Tipos de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

435 Material para inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

441 Entrenamiento del verracohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphellip

443 Lugar de extraccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

444 Potro o maniquiacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

445 Recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4451 Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4452 Fracciones del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 14

45 Evaluacioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

IacuteNDICE

No PAG

1

2

3

3

3

4

4

4

5

6

6

7

7

8

9

9

9

10

11

11

12

13

13

13

13

I

II

III

IV

INTRODUCCIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

HIPOacuteTESIShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

OBJETIVOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31 General

32 Especiacutefico

REVISIOacuteN DE LITERATURAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

41 El cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

411 Taxonomiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

412 Requerimientos edafoclimaacuteticoshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

42 El agua de cocohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

421 Contenido nutricionalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

43 Inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

431 Historiahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphellip

434 Tipos de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

435 Material para inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphellip

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificialhelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

441 Entrenamiento del verracohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphellip

443 Lugar de extraccioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

444 Potro o maniquiacutehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

445 Recoleccioacuten de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4451 Materialeshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

4452 Fracciones del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 14

45 Evaluacioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

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451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 16

4521 Aglutinacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

4522 Movilidadhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 17

46 Morfologiacutea del espermatozoidehelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

461 Coloracioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 18

462 Anormalidades morfoloacutegicashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 20

463 Evaluacioacuten del acrosomahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

464 Concentracioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

465 Caacutemara de Neubauerhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 21

466 Espermiodensiacutemetro de Karrashelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 22

47 Diluyentes seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

471 Funciones del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

472 Clasificacioacuten de los diluyenteshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

24

25

26

474 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

475 Dilucioacuten del semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 29

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semenhellip 29

V MATERIALES Y MEacuteTODOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

51 Localizacioacutenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

52 Material bioloacutegicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

53 Materiales de campohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

31

31

54 Materiales de laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 31

55 Metodologiacuteahelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

551 Colecta de semenhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

552 Transporte al laboratoriohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 32

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen frescohelliphelliphelliphellip 33

5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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5531 Anaacutelisis macroscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

5532 Anaacutelisis microscoacutepicohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 33

554 Dilucioacuten del eyaculadohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip 35

VI

VII

VIII

IX

X

XI

555 Preparacioacuten del diluyentehelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

556 Preparacioacuten de las dosis seminaleshelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

557 Conservacioacuten de las dilucioneshelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

558 Unidad experimentalhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

56 Anaacutelisis estadiacutesticohelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESULTADOS Y DISCUSIOacuteNhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

CONCLUSIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RECOMENDACIONEShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

RESUMENhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

BIBLIOGRAFIacuteAhelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

ANEXOShelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphelliphellip

35

35

36

37

37

38

41

42

43

45

49

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

IacuteNDICE DE CUADROS TABLAS Y GRAacuteFICAS

CUADROS

No PAG

1 Contenido nutricional del agua de coco para 100 ml 7

2 Composicioacuten del semen de verraco 15

3

Tipo de componente funcioacuten y sustancias maacutes frecuentemente

empleadas en la formulacioacuten de diluyentes para semen porcino

porcino

26

4

Composicioacuten en gl de los diluyentes de inseminacioacuten artificial

porcina maacutes utilizados

28

5

Evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen nativo

39

TABLAS

1

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la primera prueba a

diferentes hora post-dilucioacuten

50

2

Evaluacioacuten de espermatozoides durante la segunda prueba a

diferentes horas post-dilucioacuten

51

3

4

Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

52

53

5

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

54

6

Nuacutemero de aglutinaciones de espermatozoides a diferentes

horas de evaluacioacuten post-dilucioacuten

55

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

No PAG

7 Anormalidades de espermatozoides a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

56

GRAacuteFICAS

1 Porcentaje de motilidad de espermatozoides a diferentes horas

de evaluacioacuten post-dilucioacuten

57

2

3

Porcentaje de espermatozoides vivos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

Porcentaje de espermatozoides muertos a diferentes horas de

evaluacioacuten post-dilucioacuten

58

59

4 Nuacutemero de aglutinaciones a diferentes horas de evaluacioacuten

post-dilucioacuten

60

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

1

I INTRODUCCIOacuteN

Entre las estrategias utilizadas para aumentar la productividad de los

animales se incluye la creacioacuten de liacuteneas de animales geneacuteticamente

superiores con un gran potencial productivo y reproductivo

El plasma seminal por siacute solo no permite el mantenimiento de una

conservacioacuten duradera del semen debido a esto se debe antildeadir un medio

adecuado (diluyente) el cual debe conservar la vida media y el poder

fecundante de los espermatozoides mantener la integridad de las estructuras

celulares y proveer la energiacutea necesaria para el metabolismo de las

mismas

La eleccioacuten del diluyente debe ir asociada al tipo de uso que se vaya a

hacer del mismo

Cuando el tiempo de conservacioacuten es inferior a tres diacuteas la eleccioacuten es

un diluyente de corta duracioacuten y con resultados equivalentes a los diluyentes

de larga duracioacuten Cuando lo que se pretende es conservar dosis seminales

por maacutes de cuatro diacuteas se utilizan diluyentes de larga duracioacuten y se aumenta

la concentracioacuten de la dosis para compensar las peacuterdidas por envejecimiento

de los espermatozoides

En cualquier caso la eleccioacuten del diluyente debe realizarse para

optimizar los resultados de la fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que es crucial su repercusioacuten en

el rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten

En este estudio se evaluoacute la capacidad del agua de coco para

preservar el semen fresco de cerdos ya que es un producto natural que

conjuga azuacutecares y antioxidantes en una misma solucioacuten

2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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2

II HIPOacuteTESIS

El agua de coco como extensor de semen no afecta sus propiedades

respecto al porcentaje de espermatozoides vivos y muertos presencia de

aglutinaciones anormalidades y movimiento individual

3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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3

III OBJETIVOS

31 General

Contribuir al estudio de extensores de semen en porcinos

32 Especiacutefico

Evaluar el efecto del agua de coco sobre la viabilidad espermaacutetica

(tiempo de duracioacuten porcentaje de vivos y muertos aglutinaciones

motilidad y formas anormales)

4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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4

IV REVISIOacuteN DE LITERATURA

41 El coco

411 Taxonomiacutea

Perteneciente a la familia Arecaceae

Nombre cientiacutefico Cocos nucifera

Nombre comuacuten Palma de coco

Probablemente sea nativo de las islas del Paciacutefico y hoy en diacutea

cultivado en todos los troacutepicos Es una palmera monoica de tronco uacutenico con

frecuencia inclinado de 10-20 metros de altura y de 50 centiacutemetros de grosor

en la base y estrechaacutendose hacia la parte superior En el aacutepice presenta un

grupo de hojas que protegen el uacutenico punto de crecimiento o yema terminal

que posee la planta

El crecimiento en altura depende de las condiciones ecoloacutegicas de la

edad de la planta y del tipo de cocotero

Las hojas son pinnadas de 15 a 4 metros de longitud con foliolos

coriaacuteceos de 50 a 70 centiacutemetros de longitud de color verde amarillento La

copa no es muy amplia y se compone de hasta 30 hojas arqueadas

Posee inflorescencias paniculadas que nacen en las axilas de las

hojas inferiores protegidas por una braacutectea llamada ldquoespatardquo de hasta 70

centiacutemetros de longitud y se desarrolla en 3 oacute 4 meses La eacutepoca de floracioacuten

es de noviembre a marzo y los frutos tardan en madurar hasta 13 meses

Puede ser anemoacutefila o entomoacutefila En los cocoteros gigantes las flores

masculinas se abren antes de que las femeninas esteacuten receptivas lo cual

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

5

contribuye a la polinizacioacuten cruzada En el caso de los cocoteros enanos es

simultaacutenea por lo tanto hay un porcentaje alto de auto-fecundacioacuten

El fruto es una drupa cubierta de fibras de 20 a 30 centiacutemetros de

longitud con forma ovoide pudiendo llegar a pesar hasta 25 kilogramos

Estaacute formado por una caacutescara externa amarillenta correosa y fibrosa

(exocarpo) de 4 oacute 5 centiacutemetros de espesor con forma de pelos fuertemente

adheridos a la nuez una capa intermedia fina (mesocarpo) y otra maacutes dura

(endocarpo) que dispone de tres orificios proacuteximos en disposicioacuten triangular

situado en el aacutepice dos cerrados y el otro frente a la raicilla del embrioacuten

La pulpa blanca es comestible conteniendo en su cavidad central un

liacutequido azucarado conocido como ldquoagua de cocordquo y que en cantidad

aproximada de 300 mililitros se encuentra encerrada en el interior del fruto

El sistema radicular es fasciculado Los cocos frescos de la planta se

entierran hasta la mitad con las caacutescaras en un suelo huacutemedo Si se

mantiene una humedad constante eacutestos comienzan a brotar en dos o tres

meses siendo su crecimiento bastante lento al principio y hasta despueacutes de la

maduracioacuten de la palma

Debido a sus fuertes espinas desde la germinacioacuten los animales no se

alimentan de las plaacutentulas (8)

412 Requerimientos edafoclimaacuteticos

La temperatura media diaria debe estar en torno a los 270 C con

variaciones de 70 C a 50 C Los climas caacutelidos y huacutemedos son los maacutes

favorables para el cultivo de la palma de coco Una humedad relativa menor

del 60 es perjudicial para el cocotero

El reacutegimen de precipitacioacuten anual media es de 1500 mm con una

precipitacioacuten mensual mayor de 130 mm Por tratarse de una planta helioacutefita

no admite sombra Para su cultivo se considera ideal una insolacioacuten de

2000 horas anuales con un miacutenimo de 120 horas mensuales

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

6

Los suelos aptos para el cultivo del cocotero son suelos con texturas

livianas (de francos a arenosos) aluviales profundos (maacutes de un metro) con

una capa freaacutetica superficial de 1 a 2 metros de profundidad Los suelos de

la planicie costera son los que presentan estas caracteriacutesticas

Debido a su gran demanda de cloro la existencia de agua salina es

hasta beneficiosa por eso es uno de los pocos cultivos que puede verse en

las playas o en sus cercaniacuteas Es muy sensible a las heladas por tratarse de

una planta tropical El rango oacuteptimo de elevacioacuten en que se desarrolla el

cocotero estaacute entre los 0 a 400 metros (8)

42 El agua de coco

Es el liacutequido que se encuentra en el interior de la pulpa cuanto menos

maduro esteacute el fruto seraacute maacutes abundante y tambieacuten maacutes rico en nutrientes Se

considera un liacutequido isotoacutenico natural y se encuentra en una cantidad

aproximada de 300 ml no contiene grasa y con bajo contenido de energiacutea

alimentaria (167 caloriacuteas o 70 kilojulios por cada 100 ml)

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

7

CUADRO 1

CONTENIDO NUTRICIONAL DEL AGUA DE COCO PARA 100 ML

43 Inseminacioacuten artificial

431 Historia

Los primeros trabajos de inseminacioacuten artificial en cerdos fueron

realizados en la Unioacuten Sovieacutetica a partir de las experiencias llevadas a cabo

por Ivanow en los primeros antildeos del siglo XX (Ivanow 1907 y 1922)

posteriormente se desarrolloacute su uso en la deacutecada de los antildeos 30 en las

COMPONENTE NUTRICIONAL CONTENIDO

Agua () 955

Nitroacutegeno () 005

Energiacutea (kcal) 20

Proteiacutenas (g) 01

Carbohidratos (g) 55

Liacutepidos (gr) 005

Sodio (mg) 25

Potasio (mg) 160

Cloro (mg) 20

Calcio (g) 5

Foacutesforo (mg) 04

Magnesio (mg) 045

Mg100 g

Hierro 05

Total de soacutelidos 471

Azuacutecares Reductores 080

Total azuacutecares 208

Ceniza 062

(78)

8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8

granjas estatales rusas (Rodin y Lipatov 1935 Milovanow 1938) y en los

antildeos siguientes se fue extendiendo a otros paiacuteses como USA por Mckenzie

en 1931 y en Japoacuten por Ito etal en 1948 (18)

Luego Lipatov Rodin y Camisarov realizaron una serie de trabajos que

llevaron a la introduccioacuten del maniquiacute para la recoleccioacuten de semen

descubrieacutendose posteriormente la vagina artificial esta uacuteltima fue establecida

como meacutetodo de recoleccioacuten del semen por Bonadonna en 1938

Cuando se resolvioacute el problema de la recoleccioacuten de semen quedaba

por descubrir teacutecnicas de dilucioacuten y conservacioacuten del mismo las que se

desarrollaron a partir de 1950 implementaacutendose equipos teacutecnicos y diluyentes

en paiacuteses como Japoacuten Inglaterra Francia y Noruega(23)

Esta teacutecnica fue introducida en el sector porcino en el Reino Unido

gracias a los trabajos desarrollados por Chris Poge (1956) ya que la gran

ventaja que aportaba esta tecnologiacutea era el aprovechamiento del potencial

geneacutetico de los mejores verracos en un amplio nuacutemero de reproductoras

facilitando la mejora geneacutetica

El verdadero desarrollo y la amplia aplicacioacuten a nivel comercial de la

inseminacioacuten artificial porcina se produce a partir de la deacutecada de 1980

cuando se estandarizan los protocolos de inseminacioacuten

Durante la evolucioacuten de la inseminacioacuten artificial desde su inicio hasta

la actualidad se han desarrollado sistemas de obtencioacuten y preparacioacuten de

dosis asiacute como se han mejorado todos los protocolos de inseminacioacuten en

condiciones comerciales (1823)

432 Ventajas de la inseminacioacuten artificial

Reduce las peacuterdidas de tiempo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

9

Mejora el material geneacutetico

Reduce el nuacutemero de verracos en las instalaciones (ahorro en espacio

comida y operarios)

Permite realizar programas de cruzamientos

Reduce la diseminacioacuten de enfermedades reproductivas

Permite la realizacioacuten de pruebas de progenie en los verracos

Evita la consanguinidad (23)

433 Desventajas de la inseminacioacuten artificial

Requiere de un nivel de manejo maacutes alto que en monta natural

Errores humanos frecuentes

El semen recolectado estaacute maacutes expuesto a cambios ambientales

Fallas en la deteccioacuten del celo

Contaminacioacuten del equipo a usar (21)

434 Tipos de inseminacioacuten artificial

Durante el servicio natural el verraco eyacula cuando el glande en

forma de espiral se encuentra encerrado dentro del ceacutervix de la cerda la

presioacuten de este encierro estimula la eyaculacioacuten

El meacutetodo preferido para recolectar el semen del verraco es el de

fijacioacuten el cual consiste en sostener el glande con la mano a medida que sale

del prepucio Se aplica una presioacuten continua para estimular la eyaculacioacuten lo

cual puede durar de 10 a 20 minutos La eyaculacioacuten se interrumpe si no se

mantiene la presioacuten (2)

435 Material para inseminacioacuten artificial

Cateacuteter de inseminacioacuten doblado en un aacutengulo de 300 dos centiacutemetros

antes del final y una espiroqueta lo cual simula el pene del verraco

10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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10

Toalla de papel para limpiar la vulva

Botella plaacutestica flexible que se utiliza para introducir el semen a traveacutes del

cateacuteter hacia la ceacutervix de la cerda (2)

436 Teacutecnicas de inseminacioacuten artificial

Es conveniente evaluar la calidad del semen con un microscopio antes

de usarlo ya que el transporte dilucioacuten temperatura de almacenamiento

fluctuaciones de temperatura y tiempo transcurrido desde la colecta pueden

afectar su vida uacutetil motilidad y viabilidad

Se debe usar una toalla de papel para limpiar la vulva antes de

proceder a la inseminacioacuten

Se lubrica el extremo de la pipeta o del cateacuteter con alguacuten lubricante que

no sea espermicida debe cuidarse de no obstruir el orificio del instrumento

con el lubricante (16)

Luego se introduce el cateacuteter de inseminacioacuten en la vagina a traveacutes de

los labios de la vulva y se dirige hacia arriba y hacia adelante en la direccioacuten

de la configuracioacuten espiral del ceacutervix

Una vez en contacto con el ceacutervix el cateacuteter se gira en el sentido

contrario a las agujas del reloj para quedar fijado en el mismo si la punta estaacute

sujeta al ceacutervix se sentiraacute resistencia cuando se rota el cateacuteter

Se sujeta el recipiente de semen al cateacuteter y se presiona con suavidad

durante varios minutos (3 a 5 minutos) para que el semen llegue al uacutetero (12)

Se debe mantener cierta presioacuten en la regioacuten dorsal con la rodilla para

que la cerda se mantenga estimulada

11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

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11

Cuando la botella se ha vaciado se retira el cateacuteter dejando una

pequentildea cantidad de semen en su interior para evitar la penetracioacuten de aire

(23)

44 Seleccioacuten de verracos para inseminacioacuten artificial

Cuando se seleccionan a los verracos se consideran las siguientes

caracteriacutesticas

Tasa de crecimiento

Tasa de conversioacuten alimenticia

Medida del espesor de la grasa dorsal

Calidad de los aplomos

Que no sean portadores de caracteriacutesticas geneacuteticas indeseables

como atresia anal hernias inguinales y umbilicales o libido reducido

(23)

441 Entrenamiento del verraco

Los verracos seleccionados son entrenados para montar maniquiacutees

extraer el semen y estudiar su conducta sexual

Los machos se empiezan a entrenar a partir de los 8 oacute 9 meses de

edad con una frecuencia de dos veces por semana

Para asegurar un entrenamiento exitoso es muy importante mantener

una actitud tranquila con el animal y evitar siempre que el animal se asuste

por lo que se recomienda que el entrenamiento y la extraccioacuten sean

realizados por una persona con experiencia

Preferiblemente se traslada a los animales a la zona de extraccioacuten y se

les muestra el maniquiacute observando su actitud y nunca forzaacutendoles a subir

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

12

cuando suban lo que es habitual en animales joacutevenes y nerviosos se

realizaraacute una primera extraccioacuten Una vez iniciada la rutina de extraccioacuten

durante este periacuteodo de adaptacioacuten se realizaraacute una extraccioacuten semanal para

asegurar el desarrollo adecuado de los testiacuteculos (2)

Si despueacutes de 10-15 minutos el animal no muestra intereacutes en subir es

conveniente retirar el maniquiacute y volver a insistir al diacutea siguiente En estos

casos se puede intentar iniciar el entrenamiento en su corral y una vez

suban al maniquiacute realizar las extracciones en la sala empleada para tal fin

Para estimular a los animales joacutevenes y aumentar su libido se puede

utilizar el maniquiacute despueacutes de un macho adulto rociar el maniquiacute con una

dosis de semen o bien colocar a los verracos nuevos cerca de la sala de

extracciones (2)

En ocasiones algunos machos que muestran temor y estreacutes no suben

al maniquiacute por las siguientes causas

Presencia de verracos adultos en la misma zona para solucionar el

problema conviene separar a los joacutevenes de los adultos

Suelo resbaladizo

Patas deacutebiles o cojeras (2)

442 Extraccioacuten y recoleccioacuten de semen

El meacutetodo maacutes utilizado es el de fijacioacuten el cual consiste en mantener

presioacuten firme a nivel del glande usando un maniquiacute ya que eacuteste sugiere que

la inmovilidad en todas sus formas es el principal criterio por el que el

verraco reconoce a la hembra receptiva (4)

Antes de realizar la extraccioacuten de semen el verraco debe estar con un

buen grado de excitacioacuten el cual depende de la raza y de la edad

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

13

El contenido en el saco prepucial debe ser eliminado antes de

proceder a la extraccioacuten del semen ya que este liacutequido tiene un efecto dantildeino

en los espermatozoides (23)

443 Lugar de extraccioacuten

Debe ser limpio y amplio para que le permita al verraco la libre

circulacioacuten alrededor del potro o maniquiacute

Es recomendable que el suelo no sea liso para evitar que el verraco

resbale durante el proceso y que no sea muy aacutespero para evitar dantildeos en las

patas (21)

444 Potro o maniquiacute

Las medidas recomendadas para el potro o maniquiacute son 50 cm de

alto x 90 cm de largo x 30 cm de ancho el cual debe estar firme sobre el

suelo para que resista el peso del verraco y debe estar impregnado con

secreciones como orina de una hembra en celo saliva y semen de otro

verraco para estimularlo sexualmente (21)

445 Recoleccioacuten de semen

4451 Materiales

La higiene del equipo es muy importante en todo el proceso

de colecta en la actualidad se usan materiales desechables lo que evita

contaminaciones que puedan alterar la viabilidad de los espermatozoides

El material a usar es el siguiente

1 Guantes sin talcos ni productos quiacutemico que puedan tener efecto

espermicida

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

14

2 Recipiente para recoleccioacuten puede usarse un recipiente plaacutestico o de

vidrio graduado y esterilizado

3 Gasa o filtro de papel para filtrar el eyaculado durante la recoleccioacuten y

evitar la aglutinacioacuten de los espermatozoides (18)

4452 Fracciones del eyaculado

La duracioacuten de la eyaculacioacuten en el cerdo oscila entre 4 y 7 minutos y

se compone de tres fracciones las cuales se diferencian durante el proceso

estas son

1 Fraccioacuten prostaacutetica liacutequido transparente con pocos espermatozoides

2 Fraccioacuten espermaacutetica contiene de 500000 a 100000 de esperma-

tozoidesmm3

3 Fraccioacuten post-espermaacutetica liacutequido claro cuya concentracioacuten esper-

maacutetica disminuye hasta 100000 espermatozoides mm3 (23)

15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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15

CUADRO 2

COMPOSICIOacuteN DEL SEMEN DE VERRACO

CARACTERIacuteSTICAS CONCENTRACIOacuteN

Depresioacuten del punto de congelacioacuten ordmC 062 (59-063)

pH 75 (73-79)

Agua (g100ml) 95(94-98)

Bioacutexido de carbono (ml100ml) 50

Sodio (mg100ml) 660(290-850)

Potasio (mg100ml) 260 (90-410)

Calcio (mg100ml) 2-6

Magnesio (mg100ml) 11 (5-15)

Cloruros (mg100ml) 330(150-430)

Foacutesforo total (mg100ml) 66

Foacutesforo soluble en aacutecido (mg100ml) 24

Foacutesforo inorgaacutenico (mg100ml) 2

Fosfoliacutepidos (mg100ml) 6

Nitroacutegeno total (mg100ml) 615(335-765)

Nitroacutegeno no proteico (mg100ml) 22

Amoniacuteaco (mg100ml) 1

Urea (mg100ml) 5

Aacutecido uacuterico (mg100ml) 3

Ergotioneina 6-23

Glicerilfosforilcolina 110-240

Fructosa 12(2-5)

Aacutecido ciacutetrico 140 (30-330)

Aacutecido laacutectico 30

Inositol 600-750

Presioacuten osmoacutetica 290-300 mOsm

(1027)

16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

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16

45 Evaluacioacuten del semen

Se realiza la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepica del semen

considerando normal un eyaculado que presente las siguientes

caracteriacutesticas

451 Caracteriacutesticas macroscoacutepicas

(10 111729)

452 Caracteriacutesticas microscoacutepicas

Se observan las siguientes caracteriacutesticas

Caracteriacutesticas Paraacutemetros normales

Volumen 250 -500 cm3

Consistencia

Gelatinosa contiene numerosos copos de

aspecto grumoso parecidos a una ldquotapiocardquo y

que proceden de las glaacutendulas de Cooper

pH 75

Olor Sui generis

Color Blanco opaco

Motilidad en masa gt85

Motilidad espermaacutetica 50-90

Aglutinacioacuten 1+

Concentracioacuten de

espermatozoides 2 a 7 X 109 espermatozoides por eyaculado

Espermatozoides

morfoloacutegicamente normales 70-90

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

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en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

17

4521 Aglutinacioacuten

No es raro observar en el examen de esperma fresco de verraco

acuacutemulo de espermatozoides aglutinados esto puede suceder por distintas

causas tales como suciedad oxidacioacuten dilucioacuten que actuacutea sobre las anti-

aglutininas de origen prostaacutetico etc (5)

La aglutinacioacuten se clasifica de la siguiente manera

+ 1-5 paquetes ESCASA AGLUTINACIOacuteN

++ 6-10 paquetes REGULAR AGLUTINACIOacuteN

+++ 10-15 paquetes MEDIANA AGLUTINACIOacuteN

++++ 16-20 paquetes ABUNDANTE AGLUTINACIOacuteN

4522 Movilidad

El examen del esperma sin diluir debe ser practicado lo maacutes pronto

posible despueacutes de la colecta a una temperatura proacutexima a la corporal se

debe usar una platina precalentada a 370 C para evitar el choque teacutermico y se

extiende una gota de semen sobre un portaobjetos (2 5)

Se valora individualmente e indica la capacidad de movimiento de

los espermatozoides

La evaluacioacuten que se hace es cuantitativa la cual valora el porcentaje

de espermatozoides en movimiento (de 0 a 100) y la evaluacioacuten cualitativa

que evaluacutea la calidad o vigor en una escala de 0-5 seguacuten el tipo de

movimiento que puede ser

0 Inmoacutevil (muerto)

1 Girando entre siacute sin movimiento progresivo

2 Movimiento anormal en ocasiones progresivo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

18

3 Con movimiento progresivo lento y ondulatorio

4 Con movimiento progresivo raacutepido

5 Con movimiento progresivo rectiliacuteneo muy raacutepido

El semen de buena calidad posee el 70 de motilidad y el tipo de

movimiento debe ser no menor a la categoriacutea 4 (4)

46 Morfologiacutea del espermatozoide

Para observar la morfologiacutea de los elementos figurados del

espermatozoide se necesita el recurso de preparaciones coloreadas Los

frotis deben ser delgados y se realizan de la siguiente manera En el extremo

de un porta-objetos se deposita una gota de esperma se extiende sobre eacuteste

en una capa lo maacutes delgada posible usando para esto un cubre-objetos e

inclinado el porta-objetos en un aacutengulo de 45ordm Luego se deja secar al aire

libre y se fija despueacutes por inmersioacuten en una solucioacuten de alcohol metiacutelico o de

alcohol rectificado de 90ordm o en una solucioacuten de formalina al 5

Es conveniente para descartar cualquier alteracioacuten espermaacutetica evitar

todo choque teacutermico durante el secado de estas extensiones los eyaculados

demasiado concentrados son manejados mucho mejor si se diluyen al 110

con lo cual se puede obtener un examen microscoacutepico maacutes raacutepido (25)

461 Coloraciones

Se han utilizado distintos medios de coloracioacuten de los cuales

dependiendo el tipo de colorantes se han dividido en dos grupos

coloraciones totales y coloraciones vitales

Coloraciones totales

1 Coloraciones simples

19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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19

Azul de Metileno Azul de Toluidina Violeta de Genciana

y Fuchsina Eacutestas proporcionan una coloracioacuten uniforme del esper-

matozoide

2 Coloraciones dobles

William Giemsa y Karras Eacutestas hacen aparecer las diferencias

estructurales en las distintas partes del zoospermio como modifica -

ciones en la cabeza en el acrosoma o en la pieza intermedia

(5)

Un examen raacutepido puede hacerse empleando la solucioacuten de Rojo de

Bengala con eacutesta no existe sobre-coloracioacuten

Coloracioacuten con tinta china Es un meacutetodo de tincioacuten simple raacutepido y

recomendable para un trabajo corriente Es muy faacutecil y consiste en

realizar una extensioacuten lo maacutes fina posible con una gota de esperma

mezclada con otra de tinta china luego se deja secar al aire libre Es una

coloracioacuten negativa donde los espermatozoides aparecen en tono claro o

sin tentildeir sobre un fondo gris negruzco

Esta coloracioacuten pone de manifiesto perfectamente la forma de la

cabeza y la existencia de la gota protoplaacutesmica asiacute como los distintos

elementos del zoospermio (5)

Coloraciones Vitales

Estas coloraciones sirven para diferenciar los espermatozoides vivos

de los muertos

1 Solucioacuten de Eosina y de Opal-Azul en un medio tamponado de Fosfato

isotoacutenico los espermatozoides muertos aparecen coloreados y los

20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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20

vivos no se tintildeen

2 Coloracioacuten de Eosina-Nigrosina los espermatozoides muertos toman

intensamente el colorante y aparecen tentildeidos en rojo o en rosa mientras

que los espermatozoides vivos permanecen incoloros

3 Coloracioacuten con Eosina-Nigrosina y Azul de Bromofenol ponen de mani-

fiesto la gota citoplaacutesmica

Las teacutecnicas de tincioacuten maacutes utilizadas son las de Violeta de Metilo y Eosina-

Nigrosina y la de Fluorescencia (5)

462 Anormalidades morfoloacutegicas

Cabeza puede presentar anormalidades de forma dimensioacuten duplicacioacuten

posicioacuten o de estructura del acrosoma y afinidades tintoriales

Cuello estas anormalidades afectan la implantacioacuten de la cabeza las cabe-

zas sin cola la persistencia de la gota protoplaacutesmica Los esper-

matozoides inmaduros se expulsan llevando la gota protoplaacutesmica

la presencia de 2 a 3 de espermatozoides inmaduros significa la

existencia de trastornos en la espermatogeacutenesis

Pieza intermedia puede ser maacutes ancha maacutes o menos ovalada acortada

doble o mal insertada sobre la cabeza La presencia

de la gota protoplaacutesmica en la extremidad de la pieza

ntermedia es la causa de un trastorno testicular o epidi-

epididima rio reciente

Tambieacuten se encuentra en eyaculados frecuentes durante

un tiempo corto

21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

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21

Pieza principal puede presentar anomaliacuteas de longitud de estructura de

calibre estar enroscada sobre siacute misma o alrededor de la

cabeza e incluso presentar una duplicacioacuten o triplicacioacuten

(521)

463 Evaluacioacuten del acrosoma

Para determinar el estado del acrosoma se fija la muestra en una

solucioacuten de Glutaraldehiacutedo (2) y se observa en un microscopio con

contraste de fases

Se distingue un borde apical niacutetido que corresponde con el acrosoma o

bien alteraciones del mismo

El estado del acrosoma tambieacuten puede ser evaluado mediante el

empleo de lectinas como la PNA que junto con el Ioduro de Propidio permite

estudiar el proceso de reaccioacuten acrosoacutemica (31)

464 Concentracioacuten

La concentracioacuten consiste en el nuacutemero total de espermatozoides por

ml de eyaculado

La concentracioacuten de espermatozoides variacutea entre 2 a 7 X 109 oacute un

promedio de 45 X 109 Este valor tiene gran importancia y es necesario

conocerlo para juzgar la calidad de un eyaculado (10 29)

Hay disponibles varios instrumentos para estimar el nuacutemero de ceacutelulas

espermaacuteticas como el hemocitoacutemetro densiacutemetro para semen seguacuten karras

espectrofotoacutemetro y SpermaQue (13)

465 Caacutemara de Neubauer

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

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en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

22

La caacutemara de Neubauer es una caacutemara de contaje adaptada al

microscopio de campo claro o al de contraste de fases Se trata de un

portaobjetos con una depresioacuten en el centro en el fondo de la cual se ha

marcado con la ayuda de un diamante una cuadriacutecula Es un cuadrado de 3

x 3 mm con una separacioacuten entre dos liacuteneas consecutivas de 025 mm El

aacuterea sombreada y marcada L corresponde a 1 miliacutemetro cuadrado

La depresioacuten central del cubreobjetos estaacute hundida 01 mm respecto a

la superficie de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos eacuteste dista de

la superficie marcada 01 miliacutemetro y el volumen comprendido entre la

superficie L y el cubreobjetos es de 01 miliacutemetro cuacutebico es decir 01 micro

litro (28 30)

466 Espermiodensiacutemetro de Karras

23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

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23

El espermiodensiacutemetro se usa para determinar la densidad del

eyaculado de verracos y toros

La medida se basa en la turbiedad de la suspensioacuten espermaacutetica que

se mide en la escala del espermiodensiacutemetro a diferentes concentraciones

1 Produccioacuten de la suspensioacuten

Colocar 90 ml de una solucioacuten de NaCl al 085 dentro del

densiacutemetro Agregar 1 ml de semen a la solucioacuten de NaCl

Cerrar el instrumento con el dedo pulgar y mover cuidadosamente 2

oacute 3 veces para suspender parejamente los espermatozoides en la solucioacuten

de NaCl

Si el eyaculado es muy denso y la escala no se puede leer es

necesario diluir el eyaculado 11 con diluyente y empezar la lectura de nuevo

Es necesario registrar el factor de dilucioacuten (Ej 0210 0310)

porque se necesita para poder interpretar la tabla de densidades (25)

2 Leyendo el espermiodensiacutemetro

Coloque una tira de papel blanco detraacutes de la escala para facilitar

la lectura sostenga el espermiodensiacutemetro con sus dedos pulgar e iacutendice

para que la escala quede en la parte de adentro de su mano es

recomendable hacer la lectura con buena luz

Para hacer la lectura mantenga el densiacutemetro a distancia de un

brazo y a nivel de los ojos Primero se determinan las marcas enteras (60

70 80 etc) que todaviacutea se reconocen como un nuacutemero si la lectura se hace

correctamente la marca anterior debe verse borrosa y las marcas mas

bajas deben leerse claramente

24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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24

Determinar si la marca anterior del nuacutemero medio (657585 etc) es

legible si se lee esa marca va a representar la lectura si no se lee la marca

correcta seriacutea la del nuacutemero entero (25)

3 Leyendo la densidad del eyaculado de la tabla de interpretacioacuten

Basado en la informacioacuten obtenida del densiacutemetro la densidad del

eyaculado va a ser determinada por la tabla de densidades La densidad

debe recalcularse cuando se usa semen diluido La densidad del eyaculado

corresponde al nuacutemero que se encuentra en la columna del factor de dilucioacuten

aplicado leiacutedo en el densiacutemetro

El nuacutemero indica la densidad espermaacutetica del eyaculado examinado

en millones de espermatozoidesml

El densiacutemetro debe ser limpiado y secado despueacutes de cada medicioacuten

(25)

47 Diluyentes seminales

El diluyente es la solucioacuten acuosa que permite aumentar el volumen

del eyaculado hasta conseguir las dosis necesarias con el objeto de

preservar las caracteriacutesticas funcionales de las ceacutelulas espermaacuteticas y

mantener el nivel de fertilidad adecuado

Para conservar los espermatozoides durante periacuteodos prolongados

es necesario que reduzca la actividad metaboacutelica de los mismos mediante la

dilucioacuten en un medio adecuado y la reduccioacuten de la temperatura pero con un

buen poder tamponador para mantener las condiciones de pH y que

proporcione los azuacutecares necesarios para la supervivencia de las ceacutelulas asiacute

como otros elementos maacutes complejos que permitan asegurar una duracioacuten

maacutes o menos larga

25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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25

La eleccioacuten del diluyente es muy importante pero lo principal

es obtener un semen de buena calidad y debe realizarse con el objeto de

optimizar los resultados de fertilidad y prolificidad en las condiciones

particulares de cada explotacioacuten porcina ya que su repercusioacuten en el

rendimiento econoacutemico de la explotacioacuten es de mucha importancia (18)

471 Funciones del diluyente

Para que el diluyente cumpla su funcioacuten debe aportar los

nutrientes necesarios para el mantenimiento metaboacutelico de la ceacutelula

espermaacutetica Glucosa

Protege contra el shock teacutermico por friacuteo BSA

Controla el pH del medio Bicarbonato de sodio TRIS HEPES

Mantiene la presioacuten osmoacutetica Sales NaCl KCl

Inhibe del desarrollo microbiano Antibioacuteticos

(10)

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

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CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

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en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

26

CUADRO 3

TIPO DE COMPONENTE FUNCIOacuteN Y SUSTANCIAS MAacuteS

FRECUENTEMENTE EMPLEADAS EN LA FORMULACIOacuteN DE

DILUYENTES PARA SEMEN PORCINO

COMPONENTE FUNCIOacuteN SUSTANCIAS MAacuteS

EMPLEADAS

Nutrientes Fuente de energiacutea Glucosa Galactosa Ribosa

Agentes tamponadores

Control de pH Bicarbonato Citrato Soacutedico TES TRIS MOPS

Sales Control de presioacuten osmoacutetica

Cloruro de Sodio Cloruro de Potasio

Quelantes de calcio

Captura de calcio EDTA

Antibioacuteticos Inhibicioacuten microbiana Penicilina Estreptomicina Aminoglicoacutesidos

(30)

472 Clasificacioacuten de los diluyentes

Los diluyentes se clasifican seguacuten su capacidad de preservar

la calidad del semen en el tiempo

Corta duracioacuten 1-3 diacuteas

Beltsville Liquid (BL-1)

Beltsville Thawing Solution (BTS)

Illinois Variable Temperatura (IVT)

Kiev

Mediana duracioacuten Conservan el semen de 3-5 diacuteas

Kiev

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

27

M IIIreg

Euro Cocktail (diluyente sin antibioacutetico y antibioacutetico por separado) (22)

Larga duracioacuten Conservan el semen hasta 7 diacuteas

Acromaxreg

AndrohepregEnduraGuardtrade

Androhepregplus

Androstarreg plus

Modena

MULBERRY IIIreg

Reading

X-Cellreg

Zorlesco

ZORPVA

(18 2530)

Extra-larga duracioacuten Constituyen una nueva generacioacuten de diluyentes

que pretenden conservar el semen aproximadamente 12-diacuteas Duragen

(20)

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

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pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

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2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

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5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

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Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

28

CUADRO 4

COMPOSICIOacuteN EN GRAMOSLITROS DE LOS DILUYENTES DE

INSEMINACIOacuteN ARTIFICIAL PORCINA MAacuteS UTILIZADOS

Composicioacuten IVT Kiev BTS Zorlesco MRA ZORPVA Reading Modena

Androhep

Sustrato Energeacutetico

Glucosa 3 60 37 115 + 115 115 25a 26

Sistema Tampoacuten

Citrato Soacutedico 243 37 6 117 + 1165 1165 69 8

Bicarbonato Soacutedico 24 12 125 125 + 175 175 1 12

EDTA - 37 125 23 + 235 235 225 24

Cloruro de Potasio 04 - 075 - - - - - -

Aacutecido Ciacutetrico - - - 41 - 41 41 2 -

TRIS buffer (base) - - - 65 - 55 55 565 -

HEPES - - - - - - - - 9

Estabilizacioacuten de la Membrana

Trehalosa - - - - - - 1 - -

Cisteiacutena - - - 01 + 07 07 005 -

BSA (fraccioacuten V) - - - 5 + - - 3 25

Antibioacuteticos

Neomicina sulfato - - - 1 - - - - -

Penicilina G (Na) - 06 06 - - - - 06 06

Dihidrostreptomicina - 1 1 - - - - 1 1

Ph - 72 72 - 69 - - 69 68

mOsm 290 380 330 240 290 275 300 282 309

MOPS - - - - + - - - -

ordfGlucosa MonohidratoIVT (du Mesnil du Buisson y Dauzier 1959) Kiev (Plisko 1965) BTS (Pursel Johson 1975) Zorlesco (Gottardi et al 1980) MR-A (Martiacuten Rillo 1984) ZORPVA (Cheng 1985) Reading (Revell y Gossop 1989)Modena(Moretti 1981) Androhep (Weitze 1990) (1820)

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

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3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

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J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

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abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

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7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

29

474 Preparacioacuten del diluyente

Se colocan los recipientes con agua destilada o purificada al bantildeo

Mariacutea a 37ordm C durante 25 minutos luego se vierte el diluyente en esta agua

se homogeniza y se espera como miacutenimo 15 minutos para una buena

disolucioacuten y estabilizacioacuten fiacutesico-quiacutemica Se debe tener cuidado en verificar

la temperatura durante todo el proceso

El momento de la mezcla entre el semen y el diluyente es de especial

sensibilidad por lo que se debe tener el cuidado de verter lentamente el

semen dentro del diluyente

Es aconsejable que la cantidad de eyaculado a obtenerse para tener

una buena concentracioacuten de espermatozoides sea de 200 a 250 ml (19)

475 Dilucioacuten del Semen

Las foacutermulas de los diluyentes uacutenicamente funcionan respetando una

tasa de dilucioacuten miacutenima ya que el efecto tampoacuten y el poder protector de la

membrana soacutelo pueden ejercerse dentro de un cierto rango de dilucioacuten el

cual por lo general es de 110 y 125 este rango depende del tipo de

diluyente a utilizar y de la concentracioacuten seminal Generalmente este rango

depende de los diluyentes y es muy importante respetar la dilucioacuten

principalmente cuando el periacuteodo de conservacioacuten que deseamos es largo

(19)

48 Almacenamiento y conservacioacuten del semen

El semen fresco despueacutes de diluido y evaluado (evaluacioacuten macro y

microscoacutepica) se conserva en refrigeracioacuten a una temperatura estable entre

15 y 17ordm C porque disminuye el metabolismo de la ceacutelula espermaacutetica lo que

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

30

favorece por maacutes tiempo la conservacioacuten de la viabilidad No debe haber

oscilaciones de temperatura durante la conservacioacuten ni durante el transporte

Se debe dejar un tiempo de adaptacioacuten del semen diluido a la

temperatura ambiente durante 2 a 3 horas antes de refrigerarlo Las dosis

deben girarse 1 a 2 veces al diacutea para evitar la sedimentacioacuten (17)

Es muy importante que todas las superficies que entren en

contacto con el semen se encuentren entre 35OC a 38OC evitar la exposicioacuten

directa a los rayos del sol y la contaminacioacuten de los materiales utilizados (17)

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

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3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

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5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

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Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

31

V MATERIALES Y MEacuteTODOS

51 Localizacioacuten

El presente estudio se realizoacute en la granja PinaresINAGRO

SA ubicada en el departamento de Sacatepeacutequez municipio de Sumpango

El municipio tiene una altitud de 1900 msnm y su extensioacuten superficial es de

55 km2 es bosque huacutemedo subtropical La latitud norte es de 140 38rsquo 42rsquorsquo la

longitud este es de 900 40rsquo 00rsquorsquo topografiacutea quebrada algunas pendientes

alcanzan maacutes del 30 de inclinacioacuten temperatura media normal es de 1820

C La precipitacioacuten pluvial media anual es de 1265 mm Humedad relativa

del 79

52 Material bioloacutegico

Verraco semental de raza Dallan color blanco de 3 antildeos de

edad peso de 700 libras

53 Materiales de campo

Potro o maniquiacute

Alfombra de hule

Guantes de hule

Beaker de 500 ml

Gasa

Hielera

Tape

Tijeras

54 Materiales de laboratorio

Bantildeo Mariacutea a 37O C

Caacutemara de conservacioacuten a 15O C

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

32

Agua destilada

Pipeta de 01 ml

Botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml de capacidad

Microscopio de contraste de fases

Portaobjetos y cubreobjetos

Espermiodensiacutemetro de Karras

Papel indicador de pH

Probeta de 1000 ml

Solucioacuten de Cloruro de Sodio al 10

Colorante eosina

Sulfato de Gentamicina

Agua de coco

55 Metodologiacutea

551 Colecta de semen

La colecta del semen se realizoacute por el meacutetodo manual recogiendo

uacutenicamente la fraccioacuten rica del eyaculado en un termo debidamente

atemperado a 37ordm C y cubierto con una gasa esteacuteril para filtrar las partiacuteculas

contaminantes y las secreciones de la glaacutendula de Cowper Se realizoacute una

sola colecta la cual se utilizoacute para la evaluacioacuten del eyaculado nativo y

posteriormente efectuar la dilucioacuten con el agua del coco

552 Transporte al laboratorio

Luego de colectada la muestra se llevoacute inmediatamente al laboratorio

para su evaluacioacuten

553 Evaluacioacuten de la calidad del semen fresco

Inmediatamente despueacutes de la colecta se realizaron las evaluaciones

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

33

para determinar la calidad del semen nativo y su poder de fecundacioacuten Los

anaacutelisis que se realizaron fueron los siguientes

5531 Anaacutelisis macroscoacutepico

1 Volumen Se determinoacute directamente por medio de la graduacioacuten del

beaker en cc

2 Color Se valoroacute visualmente

3 pH Se utilizoacute papel indicador universal

4 Olor Se determinoacute de acuerdo a una apreciacioacuten individual Olor

caracteriacutestico de la especie

5532 Anaacutelisis microscoacutepico

55321 Motilidad individual ()

Para observar la motilidad se colocoacute una gota del eyaculado

fresco en un porta objetos atemperado a 37deg C luego se colocoacute el cubre

objetos y se procedioacute a la evaluacioacuten en el microscopio con los objetivos 25x

y 40x previamente se calentoacute la platina a 37deg C para evitar el choque

teacutermico

La valoracioacuten miacutenima de motilidad permitida para el semen fresco

es de 60 a 70 con un tipo de movimiento moderado

55322 Aglutinaciones (+)

En la misma preparacioacuten utilizada para evaluar el movimiento

individual (inciso 1) se evaluoacute el nuacutemero de aglutinaciones por campo

utilizando los objetivos 25x y 40x

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

34

La aglutinacioacuten se clasificoacute de la siguiente manera + 1-5 paquetes

++ 6-10 paquetes

+++ 11-15 paquetes

++++ 16-20 paquetes

55323 Vivos y muertos ()

Luego de homogenizar la muestra en un extremo de una laacutemina

portaobjetos se colocoacute una gota de semen nativo y una gota del colorante

eosina se mezcloacute se hizo un frotis y se dejoacute secar Posteriormente se

observoacute al microscopio utilizando los objetivos 25x y 40x

Los espermatozoides vivos permanecen incoloros (refringentes) mien-

tras que los muertos aparecen tentildeidos de rosado

El resultado se expresa en el porcentaje de espermatozoides vivos del

total de 200 espermatozoides

55324 Anormalidades ()

En un portaobjetos se puso una gota de semen nativo luego una gota

del colorante eosina se mezcloacute se hizo un frotis se dejoacute secar y luego se

observoacute al microscopio en objetivo 40x

El resultado se expresa en el porcentaje de anormalidades en un

conteo de 100 espermatozoides

55325 Concentracioacuten

La concentracioacuten se obtuvo utilizando el espermiodensiacutemetro de

Karras el cual se basa en la turbidez de una suspensioacuten de diferentes

concentraciones de espermatozoides vistas en la escala del densiacutemetro

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

35

(Ver anexo 476)

554 Dilucioacuten del eyaculado

En el espermiograma se obtuvo la concentracioacuten espermaacutetica

(esper- matozoidesmm3) por medio del espermiodensiacutemetro de Karras se

elaboroacute la dilucioacuten con el agua de coco y el antibioacutetico Gentamicina a una

concentra- cioacuten de 5x109 espermatozoidesmm3

555 Preparacioacuten del diluyente

Se procedioacute a extraer el agua del coco (diluyente) se coloacute

con gasa esteacuteril para evitar que se contaminara con restos de la caacutescara se

agregaron 3 cc de Gentamicina se mezcloacute y se reservoacute dentro del bantildeo

Mariacutea a 37ordm C

556 Preparacioacuten de las dosis seminales

Foacutermula para la determinacioacuten del nuacutemero de dosis seminales

utilizando el espermiodensiacutemetro de Karras

Concentracioacuten (millones de espermatozoides x ml) x volumen (ml) x de motilidad=Nuacutemero

Nuacutemero de espermatozoides x dosis

de dosis

Utilizando esta foacutermula en la primera prueba (primera semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 550 ml

555 x 550 x 090= 55 dosis 5000 55 dosis x 100 ml = 5500 ml - 550 volumen de eyaculado 4950 ml de agua de coco

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

36

Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 550 ml de eyaculado

con 4950 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

En la segunda prueba (segunda semana) se obtuvo lo siguiente

Volumen de eyaculado obtenido 350 ml

555 x 350 x 090= 35 dosis 5000 35 dosis x 100 ml = 3500 ml ndash 350 volumen de eyaculado 3150 ml de agua de coco Para obtener la dilucioacuten se procedioacute a mezclar 350 ml de eyaculado con 3150 ml de agua de coco + 3 cc de Gentamicina

De la cantidad total de la dilucioacuten obtenida se utilizaron uacutenicamente

1000 ml para ser repartida en 10 botellas plaacutesticas para dilucioacuten de 100 ml

cu (el resto de la dilucioacuten preparada fue desechada por no ser necesaria

para los fines del estudio)

Las botellas conteniendo la dilucioacuten se dejaron en reposo durante 2

horas tiempo en el cual los espermatozoides se adaptan a su nuevo medio

ambiente Al finalizar el periacuteodo de adaptacioacuten se efectuoacute la primera

evaluacioacuten (hora 0) de la primera botella Cada 4 horas se sacoacute una botella

de la caacutemara temporizadora se llevo a 37ordm C en el bantildeo Mariacutea y se procedioacute a

la evaluacioacuten Este proceso se llevoacute a cabo hasta que se observoacute actividad

espermaacutetica no apta para realizar una inseminacioacuten artificial A la semana

siguiente se efectuoacute el mismo procedimiento

557 Conservacioacuten de las diluciones

El semen diluido fue almacenado a una temperatura de 17ordm C

en la caacutemara temporizadora

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

37

558 Unidad experimental

La unidad experimental fue una botella plaacutestica para dilucioacuten de 100

ml de capacidad la cual conteniacutea el eyaculado de verraco maacutes el diluyente

(agua de coco) sobre la cual se realizaron las mediciones

56 Anaacutelisis estadiacutestico

Se analizaron los datos con la prueba de t de student para dos muestras

dependientes con una significancia del 005

Para determinar el efecto del agua de coco sobre los espermatozoides se

tabularon los datos de las variables presencia de aglutinaciones presen-

cia de anormalidades movimiento individual porcentaje de vivos y muer-

tos Posteriormente se compararon con los paraacutemetros de referencia para

su anaacutelisis se realizoacute estadiacutestica descriptiva y diferencia de proporciones

(ver tabla de referencia 461)

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

38

VI RESULTADOS Y DISCUSIOacuteN

61 Anaacutelisis de la evaluacioacuten del semen nativo previo a la

dilucioacuten

Los resultados obtenidos de la evaluacioacuten macroscoacutepica y microscoacutepi-

ca del semen nativo son los siguientes

CUADRO 5

EVALUACIOacuteN MACROSCOacutePICA Y MICROSCOacutePICA DEL SEMEN NATIVO

(111718)

MACROSCOacutePICO ESTAacuteNDAR PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

Volumen 250 -500 ml 550 ml 350 ml

Consistencia Lechoso Lechoso Lechoso

pH 75 8 8

Olor Sui generis Sui generis Sui generis

Color Blanco opaco Blanquecino Blanquecino

Impurezas Libre Libre Libre

Temperatura 36-37ordm C 37ordm C 37ordm C

MICROSCOgravePICO

Vivosmuertos 928 9010 95 10

Motilidad espermaacutetica

50-90 90 90

Aglutinacioacuten + - -

Concentracioacuten de espermatozoides

2 a 7 x 109 espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

5 X 109

espermatozoidescm3

Espermatozoides morfoloacutegicamente normales

70-90 95 95

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

39

Los resultados obtenidos en la calificacioacuten del semen nativo se consi-

deran aptos para ser utilizados con el agua de coco como diluyente y su pos-

terior conservacioacuten

62 Anaacutelisis de espermatozoides post-dilucioacuten

621 Movimiento individual ()

El porcentaje de la motilidad en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555

En el muestreo de la 1ordf semana el porcentaje de movilidad se encuentra

dentro del rango estaacutendar entre las 24 y 28 horas

En la segunda semana a las 24 horas ya habiacutea llegado al liacutemite inferior

del rango estaacutendar esto se pudo dar debido a la madurez del agua del coco

(Ver tabla 3 graacutefica 1)

Estos resultados se consideran normales ya que la literatura menciona

que el rango aceptable en la motilidad es de 60 a 70 consideraacutendose un

eyaculado apto para la fertilizacioacuten

622 Vivos y muertos ()

Con respecto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la

evaluacioacuten de los espermatozoides vivos en la primera semana se obtuvo

una media de 7855 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1452 en la segunda

semana se obtuvo una media de 79 con una desviacioacuten estaacutendar de +

1821 Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-

student para dos muestras dependientes (P=0819)

En cuanto a los anaacutelisis de los datos obtenidos luego de la evaluacioacuten

de los espermatozoides muertos en la primera semana se obtuvo una media

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

40

de 2111 y una desviacioacuten estaacutendar de + 1240 en la segunda semana se

obtuvo una media de 2488 con una desviacioacuten estaacutendar de + 1657 Se

determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica en la prueba de t-student para

dos muestras dependientes (P=0187) (Ver tablas 4 y 5 graacuteficas 2 y 3)

Al utilizar el agua de coco como extensor los valores del

eyaculado se mantienen dentro de los paraacutemetros normales en las primeras

24 horas (Ver cuadro 6)

623 Aglutinaciones (+)

En este anaacutelisis se obtuvo un promedio de dos cruces (++)

en la primera semana y en la segunda semana una cruz (+) por lo que se

mantuvo en un rango normal Un semen que presenta dos cruces (++) se

considera bueno y es aceptable para ser usado en inseminacioacuten artificial

(523) (ver tabla 6 graacutefica 4)

624 Anormalidades ()

Las anormalidades observadas fueron en la primera semana

con presencia de espermatozoides de doble cola a las 8 horas

A las 28 horas se observaron colas quebradas estas

anormalidades pueden ser debido a caracteriacutesticas geneacuteticas del verraco

(Ver tabla 7)

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

1 Aalbers JG 1983 Diluyente base (o diluyente de referencia) foacutermula BTS

(en liacutenea) Consultado 3 feb 2010 Disponible en www3tres3

cominseminacioacutenindex phpid37

2 Adaptacioacuten y manejo reproductivo de los sementales 2009 (en liacutenea)

Consultado 9 feb2010 Disponible en wwweumediaesuserartiacuteculophp

id=1212

3 Bearden J 1982 Reproduccioacuten animal aplicada Trad H Sumano Loacute-

pez Meacutexico El Manual Moderno 358 p

4 Control reproductivo del verraco 2010 (en liacutenea) Consultado 3 mayo

2010 Disponible en wwwcuencaruralcomporcinoscontrol-trproducti

vo-del-verraco

5 Derivaux J 1982 Reproduccioacuten de los animales domeacutesticos 2 ed Trad

J Goacutemez Espantildea Acribia 486 p

6 Diluyentes para semen porcino Duragen 2000 (en liacutenea) Consultado 10

abr 2010 Disponible en wwwacambiodecomproducto_845415256586

94559496809009011595html-

7 Diluyentes para semen porcino 2008 (en liacutenea) Consultado 3 abr 2010

Disponible en wwwminitubedeprodukteKatalog_Schwein_Verduen

ner_ espdf

8 El agua de coco sf (en liacutenea) Consultado 2 nov 2009 Disponible

en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

41

VII CONCLUSIONES

1 El agua de coco puede usarse como extensor ya que no afectoacute las

propiedades reproductivas del semen fresco porcino en cuanto a

porcentajes del movimiento individual vivos muertos y anormalidades asiacute

como la presencia de aglutinaciones

2 El agua de coco no altera las propiedades fiacutesicas del espermatozoide al

utilizarse como diluyente de semen fresco

3 Se determinoacute que al usar el agua de coco como extensor de semen

porcino se conservan las propiedades reproductivas del semen fresco

durante un periacuteodo de 24 horas ya que pasado este tiempo empieza a

perderse la capacidad de fertilizacioacuten de los espermatozoides por lo que

se considera al agua de coco como un extensor de semen porcino de

corta duracioacuten

4 El agua de coco tiene efectos positivos al proteger y nutrir a

los espermatozoides y garantiza el potencial de fertilidad de los mismos

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

X BIBLIOGRAFIacuteA

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en httpen wikipediaorgwikiCoconut_waterrdquo

42

VIII RECOMENDACIONES

1 Utilizar el agua de coco como extensor de semen fresco porcino por un

tiempo no mayor de 24 horas post dilucioacuten

2 Evaluar el agua de coco como extensor de semen en otras especies de

produccioacuten pecuaria

3 Medir el porcentaje de concepcioacuten en hembras inseminadas con semen

fresco diluido en agua de coco

4 Realizar un estudio para determinar si existen diferencias en las distintas

etapas de madurez del fruto del aacuterbol de coco y los cambios enzimaacuteticos

del agua contenida en eacutestos para determinar los efectos de eacutesta sobre los

espermatozoides

43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

45

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43

IX RESUMEN

El presente estudio se llevoacute a cabo con el objetivo de determinar el

efecto del agua de coco como extensor de semen fresco de porcino sobre los

espermatozoides en cuanto a la motilidad individual porcentaje de vivos y

muertos anormalidades y formacioacuten de aglutinaciones Previamente se

evaluoacute semen fresco de un verraco adulto

Se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica (pgt005) en la prueba

de t-student para dos muestras dependientes para la primera y segunda

semana post dilucioacuten con agua de coco de los espermatozoides vivos para

los espermatozoides muertos se determinoacute que no hay diferencia estadiacutestica

(pgt005) en la prueba t-student para dos muestras dependientes para la

primera y segunda semana post dilucioacuten con agua de coco El porcentaje de

movimiento individual post-dilucioacuten en la 1ordf semana fue de 7222 y en la 2ordf

semana de 6555 mientras que en las aglutinaciones se obtuvo un

promedio de dos cruces (++) en la primera semana y en la segunda semana

una cruz (+) por lo que se mantuvieron en un rango normal y las

anormalidades observadas en la primera semana fueron presencia de

espermatozoides de doble cola a las 8 horas y colas quebradas a las 28

horas

Por lo tanto se considera el agua de coco como un extensor de corta

duracioacuten ya que los espermatozoides mantienen su capacidad fecundante

hasta las 24 horas post-dilucioacuten

44

SUMMARY

The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

tails sperms at 28 hours post-dilution with coconut water were observed

Therefore coconut water is considered as a short-term semen

extender as it preserves sperm fertilizing capacity as long as 24 hours

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The aim of the present study was to evaluate sperm motility live and

dead sperm morphologically abnormal sperm and agglutinations effect using

coconut water as semen extender Previously an adult boar ejaculate was

collected and evaluated

It was determined that there is no statistical difference (pgt005) in the

t-student test for two dependent samples on the first and second week post

dilution with coconut water of live sperms it was determined that there is no

statistical difference (pgt005) in the t-student test for two dependent samples

on the first and second week post dilution with coconut water of dead sperms

Individual motility post-dilution with coconut water percentage was 7222 on

the first week and 6555 on the second week while agglutinations had an

average of two crosses (++) on the first week and one cross (+) on the second

week and abnormalities such as double tail sperms at 8 hours and broken

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Therefore coconut water is considered as a short-term semen

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49

XI ANEXOS

50

TABLA 1

EVALUACIOacuteN DE ESPERMATOZOIDES DURANTE LA PRIMERA

PRUEBA (PRIMERA SEMANA) A DIFERENTES HORAS POST- DILUCIOacuteN

HORA

MOVILIDAD VIVOS

MUERTOS

ANORMALES AGLUTINACIONES

1 90 95 3 - -

4 90 95 15 - +

8 85 85 20 doble cola +

12 85 85 21 - ++

16 80 80 21 - ++

20 75 80 17 - ++

24 70 73 19 - +++

28 50 64 24 cola

quebrada +++

32 25 50 50 - +++

51

TABLA 2

EVALUACIOacuteN DE ESPERMATOZOIDES DURANTE LA SEGUNDA

PRUEBA (SEGUNDA SEMANA) A DIFERENTES HORAS POST-

DILUCIOacuteN

HORA

MOVILIDAD VIVOS

MUERTOS

ANORMALES AGLUTINACIONES

1 90 95 5 - -

4 85 92 18 - -

8 85 90 12 - -

12 80 90 18 - -

16 70 87 17 - -

20 70 80 25 - ++

24 50 78 29 - ++

28 40 59 40 - +++

32 20 40 60 - +++

52

TABLA 3 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MOTILIDAD MOTILIDAD

1 90 90

4 90 85

8 85 85

12 85 80

16 80 70

20 75 70

24 70 50

28 50 40

32 25 20

53

TABLA 4

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA (PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA (SEGUNDA SEMANA)

VIVOS VIVOS

1 95 95

4 95 92

8 85 90

12 85 90

16 80 87

20 80 80

24 73 78

28 64 59

32 50 40

54

TABLA 5

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MUERTOS MUERTOS

1 3 5

4 15 18

8 20 12

12 21 18

16 21 17

20 17 25

24 19 29

28 24 40

32 50 60

55

TABLA 6

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

AGLUTINACIONES AGLUTINACIONES

1 0 0

4 1 0

8 1 0

12 2 0

16 2 0

20 2 2

24 3 2

28 3 3

32 3 3

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

50

TABLA 1

EVALUACIOacuteN DE ESPERMATOZOIDES DURANTE LA PRIMERA

PRUEBA (PRIMERA SEMANA) A DIFERENTES HORAS POST- DILUCIOacuteN

HORA

MOVILIDAD VIVOS

MUERTOS

ANORMALES AGLUTINACIONES

1 90 95 3 - -

4 90 95 15 - +

8 85 85 20 doble cola +

12 85 85 21 - ++

16 80 80 21 - ++

20 75 80 17 - ++

24 70 73 19 - +++

28 50 64 24 cola

quebrada +++

32 25 50 50 - +++

51

TABLA 2

EVALUACIOacuteN DE ESPERMATOZOIDES DURANTE LA SEGUNDA

PRUEBA (SEGUNDA SEMANA) A DIFERENTES HORAS POST-

DILUCIOacuteN

HORA

MOVILIDAD VIVOS

MUERTOS

ANORMALES AGLUTINACIONES

1 90 95 5 - -

4 85 92 18 - -

8 85 90 12 - -

12 80 90 18 - -

16 70 87 17 - -

20 70 80 25 - ++

24 50 78 29 - ++

28 40 59 40 - +++

32 20 40 60 - +++

52

TABLA 3 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MOTILIDAD MOTILIDAD

1 90 90

4 90 85

8 85 85

12 85 80

16 80 70

20 75 70

24 70 50

28 50 40

32 25 20

53

TABLA 4

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA (PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA (SEGUNDA SEMANA)

VIVOS VIVOS

1 95 95

4 95 92

8 85 90

12 85 90

16 80 87

20 80 80

24 73 78

28 64 59

32 50 40

54

TABLA 5

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MUERTOS MUERTOS

1 3 5

4 15 18

8 20 12

12 21 18

16 21 17

20 17 25

24 19 29

28 24 40

32 50 60

55

TABLA 6

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

AGLUTINACIONES AGLUTINACIONES

1 0 0

4 1 0

8 1 0

12 2 0

16 2 0

20 2 2

24 3 2

28 3 3

32 3 3

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

51

TABLA 2

EVALUACIOacuteN DE ESPERMATOZOIDES DURANTE LA SEGUNDA

PRUEBA (SEGUNDA SEMANA) A DIFERENTES HORAS POST-

DILUCIOacuteN

HORA

MOVILIDAD VIVOS

MUERTOS

ANORMALES AGLUTINACIONES

1 90 95 5 - -

4 85 92 18 - -

8 85 90 12 - -

12 80 90 18 - -

16 70 87 17 - -

20 70 80 25 - ++

24 50 78 29 - ++

28 40 59 40 - +++

32 20 40 60 - +++

52

TABLA 3 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MOTILIDAD MOTILIDAD

1 90 90

4 90 85

8 85 85

12 85 80

16 80 70

20 75 70

24 70 50

28 50 40

32 25 20

53

TABLA 4

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA (PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA (SEGUNDA SEMANA)

VIVOS VIVOS

1 95 95

4 95 92

8 85 90

12 85 90

16 80 87

20 80 80

24 73 78

28 64 59

32 50 40

54

TABLA 5

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MUERTOS MUERTOS

1 3 5

4 15 18

8 20 12

12 21 18

16 21 17

20 17 25

24 19 29

28 24 40

32 50 60

55

TABLA 6

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

AGLUTINACIONES AGLUTINACIONES

1 0 0

4 1 0

8 1 0

12 2 0

16 2 0

20 2 2

24 3 2

28 3 3

32 3 3

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

52

TABLA 3 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MOTILIDAD MOTILIDAD

1 90 90

4 90 85

8 85 85

12 85 80

16 80 70

20 75 70

24 70 50

28 50 40

32 25 20

53

TABLA 4

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA (PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA (SEGUNDA SEMANA)

VIVOS VIVOS

1 95 95

4 95 92

8 85 90

12 85 90

16 80 87

20 80 80

24 73 78

28 64 59

32 50 40

54

TABLA 5

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MUERTOS MUERTOS

1 3 5

4 15 18

8 20 12

12 21 18

16 21 17

20 17 25

24 19 29

28 24 40

32 50 60

55

TABLA 6

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

AGLUTINACIONES AGLUTINACIONES

1 0 0

4 1 0

8 1 0

12 2 0

16 2 0

20 2 2

24 3 2

28 3 3

32 3 3

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

53

TABLA 4

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA (PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA (SEGUNDA SEMANA)

VIVOS VIVOS

1 95 95

4 95 92

8 85 90

12 85 90

16 80 87

20 80 80

24 73 78

28 64 59

32 50 40

54

TABLA 5

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MUERTOS MUERTOS

1 3 5

4 15 18

8 20 12

12 21 18

16 21 17

20 17 25

24 19 29

28 24 40

32 50 60

55

TABLA 6

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

AGLUTINACIONES AGLUTINACIONES

1 0 0

4 1 0

8 1 0

12 2 0

16 2 0

20 2 2

24 3 2

28 3 3

32 3 3

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

54

TABLA 5

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

MUERTOS MUERTOS

1 3 5

4 15 18

8 20 12

12 21 18

16 21 17

20 17 25

24 19 29

28 24 40

32 50 60

55

TABLA 6

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

AGLUTINACIONES AGLUTINACIONES

1 0 0

4 1 0

8 1 0

12 2 0

16 2 0

20 2 2

24 3 2

28 3 3

32 3 3

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

55

TABLA 6

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

AGLUTINACIONES AGLUTINACIONES

1 0 0

4 1 0

8 1 0

12 2 0

16 2 0

20 2 2

24 3 2

28 3 3

32 3 3

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

56

TABLA 7

ANORMALIDADES DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES HORAS DE

EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

HORA

PRIMERA PRUEBA

(PRIMERASEMANA)

SEGUNDA PRUEBA

(SEGUNDA SEMANA)

ANORMALIDADES ANORMALIDADES

1 - -

4 - -

8 doble cola -

12 - -

16 - -

20 - -

24 - -

28 cola quebrada -

32 - -

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

57

GRAacuteFICA 1 PORCENTAJE DE MOTILIDAD DE ESPERMATOZOIDES A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

1 4 8 12 16 20 24 28 32

INTERVALO DE TIEMPO EVALUADO EN HORAS

PO

RC

EN

TA

JE

DE

MO

TIL

IDA

D D

E

ES

PE

RM

AT

OZ

OID

ES

PRIMERA PRUEBA

SEGUNDA PRUEBA

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

58

GRAacuteFICA 2

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES VIVOS A DIFERENTES HORAS

DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

59

GRAacuteFICA 3

PORCENTAJE DE ESPERMATOZOIDES MUERTOS A DIFERENTES

HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN

60

GRAacuteFICA 4

NUMERO DE AGLUTINACIONES DE ESPERMATOZOIDES A

DIFERENTES HORAS DE EVALUACIOacuteN POST-DILUCIOacuteN