ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ...
Transcript of ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ...
![Page 1: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/1.jpg)
ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTAU GENETIČKOJ TOKSIKOLOGIJI IBIOMONITORINGU POPULACIJA
Goran Gajski, PhD
Institut za medicinska istraživanja i medicinu rada
Zagreb
![Page 2: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/2.jpg)
KOMET TEST - UVOD
mikrogel elektroforeza pojedinačnih stanica
tehnika za procjenu oštećenja i popravka DNA
Östling i Johanson 1984. godine (neutralni komet)
Singh 1988. godine (alkalni komet)
![Page 3: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/3.jpg)
KOMET TEST - PROTOKOL
uklapanje u troslojni agarozni gel
liza stanica (membrana i citoplazma)
denaturacija DNA
elektroforeza
neutralizacija
bojanje
analiza
![Page 4: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/4.jpg)
KOMET TEST - PROCJENA OŠTEĆENJA oštećenje se procjenjuje na osnovi udjela DNA u “repu” kometa i udjela
DNA u “glavi” kometa
mjerenja se vrše:
okometrijski
pomoću sustava za analizu slike u kojima je epifluorescencijski mikroskop povezan s računalom
pomoću računalnog programa za svaki pojedinačni komet istovremeno se mjeri višedeskriptora » statistička obrada podataka
deskriptori komet testa:
dužina repa (µm) = predstavlja udaljenost na koju su tijekom elektroforezeodputovali fragmenti DNA (proporcionalna je oštećenju DNA)
% DNA u repu = mjeri se pomoću sustava za analizu slike te ukazuje na količinuoštećene DNA
repni moment = izračunava se prema formuli: dužina repa x % DNA u repu/100
![Page 5: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/5.jpg)
KOMET TEST - TIPOVI OŠTEĆENJA
jednolančani lomovi
dvolančani lomovi
mjesta osjetljiva na lužine (AP mjesta)
ukriženo povezivanje DNA-DNA
ukriženo povezivanje DNA-proteini
nepotpuni ekscizijski popravak
popravak DNA
oksidacijska oštećenja (EndoIII, FPG, hOGG1)
epigenetske promjene (Epi-Comet, Methy-sens Comet)
![Page 6: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/6.jpg)
KOMET TEST
PREDNOSTI
osjetljivost
ponovljivost rezultata
jednostavan
niski troškovi
brzina izvođenja
mali volumen uzorka (μL)
TIPOVI STANICA
biljnog podrijetla
životinjskog podrijetla
ljudskog podrijetla
stanice (primarne, kultura, tkiva)
![Page 7: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/7.jpg)
USPOSTAVA KOMET TESTA NA KVASCIMA
![Page 8: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/8.jpg)
KOMET TEST - PRIMJENA
genetička toksikologija
ekotoksikologija
kemijski i fizikalni agensi
biomonitoring (ljudi, biljke, životinje)
dijagnostika (her-2, p53)
smrznuti uzorci (biobanke, EPIC)
![Page 9: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/10.jpg)
![Page 11: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/11.jpg)
MIKRONUKLEUS TEST - UVOD
Fenech i Morley 1985. godine
HUman MicroNucleus project 1997. godine
![Page 12: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/12.jpg)
MIKRONUKLEUS TEST - PROTOKOL
72 h kultura limfocita
phytohaemagglutinin
cytochalasin-B
bojanje 5% Giemsom
parametri:
mikronukleus
nukleoplazmatski most
jezgrin pup
proliferacijski indeks
![Page 13: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/13.jpg)
MIKRONUKLEUS TEST - TIPOVI OŠTEĆENJA
mikronukleusi = potječu od acentričnih kromosomskihfragmenata ili čitavih kromosoma zaostalih u anafazi, a njihova prisutnost pokazatelj je postojanja aberacijanastalih u prethodnoj diobi stanice te se koriste kao mjerastrukturnih i numeričkih aberacija kromosoma
nukleoplazmatski mostovi = nastaju kao posljedicanastanka dicentričnih kromosoma, u kojima su centromere povučene na suprotne polove stanice
jezgrini pupovi = nastaju kao posljedica amplifikacijegena, koja rezultira izbacivanjem amplificirane regije u jezgreni pup
proliferacijski indeks (CPBI, NDI)
![Page 14: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/14.jpg)
MIKRONUKLEUS TEST - PROCJENA OŠTEĆENJA
mjerenja se vrše:
okometrijski
pomoću sustava za analizu slike u kojima je epifluorescencijski mikroskop povezan s računalom
![Page 15: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/15.jpg)
MIKRONUKLEUS TEST
PREDNOSTI
osjetljivost
ponovljivost rezultata
jednostavan
niski troškovi
TIPOVI STANICA
životinjskog podrijetla
ljudskog podrijetla
stanice
primarne
kultura
![Page 16: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/16.jpg)
MIKRONUKLEUS TEST - PRIMJENA
genetička toksikologija
ekotoksikologija
kemijski i fizikalni agensi
biomonitoring (ljudi, životinje)
dijagnostika
![Page 17: ULOGA KOMET I MIKRONUKLEUS TESTA U GENETIČKOJ ...info.hazu.hr/upload/File/2019/04_Gajski_Uloga_komet_i_mikronukleus... · genetička toksikologija ekotoksikologija kemijski i fizikalni](https://reader033.fdocument.pub/reader033/viewer/2022060609/6060c3202f4ebf18ba36520b/html5/thumbnails/17.jpg)
HVALA NA POZORNOSTI!