UHPLCAmador Robles Arlette

UHPLCTcnicaSepararIdentificar CuantificarUHPLCColumnas de relleno con partculas porosas sub-2m utilizados en condiciones de presin muy altasCromatografa de lquidos de ultra alta eficaciaEfecto del tamao de la partcula.Cromatografa lquidaTamao de partcula pequeaNmero de placas mayoresSeparaciones ms rpidasLa eficiencia cromatogrfica, es directamente proporcional a la relacin de la longitud de la columna y de partculas de dimetro.La fase mvil lineal, velocidad, es inversamente proporcional al dimetro de partcula.

La reduccin del tamao de partcula tambin genera una contrapresin alta (> 400 bar) no compatible con instrumentacin convencional.

UHPLC, con una presin mxima de 1.000 bar es una estrategia que genera el tiempo de anlisis ms bajo para una eficiencia dada.

EL instrumento debe ser capaz de soportar las altas presiones generadas por las partculas pequeas

El sistema cromatogrfico se adapta para funcionar en modo rpido y con volmenes de columna reducidos.

InstrumentacinColumna de 50x2.1 mm

Tiempo de ciclo de inyeccin es rpida

Tuberas: Acero inoxidable

El volumen de la tubera debe reducirse tanto como sea posible. Por esta razn, la longitud del tubo debe ser lo ms corto como sea posible y su dimetro 0.02 mm

Detector de tiempo constante tiene que ser lo suficientemente rpido ( 100 ms) debido a anchuras de los picos son muy pequeas en UHPLC.

La velocidad de muestreo del detector debe ser lo suficientemente alta

Fase mvil (disolventes)Baja viscosidad Baja reactividadAlto grado de purezaVentajas Resolucin ms alta. Ms alta sensibilidad Anlisis ms rpido Mayor produccin.BibliografaDr. Davy Guillarme, Prof. Jean-Luc Veuthey ,Guidelines for the use of UHPLC, Instruments Requirements for UHPLC instruments, method development in UHPLC and method transfer from regular HPLC to UHPLC, Laboratory of Analytical Pharmaceutical Chemistry, School of Pharmaceutical Sciences, University of Geneva, University of Lausanne, Available from : www.unige.ch/.../Guidelines%20for%20the%20use.