UFR SCIENCES MEDICALES THESE S
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REPUBLIQUE DE COTE D'IVOIREUNION- DISCIPLINE -TRA YAIL
M1N1STERE DEL'ENSEIGNEMENT SUPERIEURET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UFR SCIENCES MEDICALES
THESE Année : 2006-2007
Pour l'obtention duN° .. ,(A .u .Ô. S
DOCTORAT EN MEDECINE (DIPLOME D'ETAT)
MISE AU POINT D'UNE TECHNIQUE DE PRODUCTIO.N D'ANTICORPS POLYCLONAUX
ANTI-ERYTHROCYTAIRES DANS LE SYSTEME ABO
Présentée et soutenue publiquement le 08 Février 2007
Par
YAPI YAPI AURELIEN Né le 03 Janvier 1974 à Fiassé s/p de Yakassé-Attobrou (RCI)
COMPOSITION DU JURY:
Président Monsieur le Professeur KODO MICHEL
Directeur de Thèse Monsieur le Professeur Agrégé SEKA SEKA JOSEPH
Co-Directeur Monsieur le Professeur SANOGO IBRAHIMA
Assesseur , Monsieur le Professeur Agrégé DJANHAN Y AO
UNIVERSITE DE COCODYU.F.R. DES SCIENCES MEDICALES
LISTE DU PERSONNEL ENSEIGNANT PAR DEPARTEMENT 2006-2007
DOYENS HONORAIRES
"Pierre HUARD - Pierre PENE - Edmond BERTRAND - ALLANGBA Koffi Théodore - Antoine YANGNI-ANGATE - *MANLAN Kassi Léopold Eloi -
DJEDJE André-Théodore - KADIO Auguste Dieudonné - N'DRI-YOMAN Aya Thérèse
PROFESSEURS HONORAIRES
*ASSALE N'Dri -ASSI Adou Jérôme - *ATTIA Yao Roger - *AYE Hypolite - BADOUAL Jean - BAMBA Méma - BEDA Yao Bernard - BOHOUSSOU Kouadio Marcellin - BONDURAND Alain - BONHOMME Jean - BONNET DE-PAILLERETS François - *Jacques BOUCHER - Auguste BOURGEADE - BOURY Georges - BOUTROS-TONY Ferdinand - Michel BOUVRY - BRETTES Jean- Philippe - BUREAU Jean-Paul -*CABANNES Raymond - CLERC Michel - *COFFI Dick Sylvain - CORNET Lucien -COULIBALY Ouezzin André -COULIBALY Nagbélé - COWPPLI-BONY Kwassy Kwadjo Philippe Alphonse - *DAGO Akribi Augustin - *DANON Gisèle - DJIBO William - DJARRA Samba - Pierre DELORMAS - DOUCET Jean - Marcel DUCHASSIN - EHOUMAN Armand Léon Guillaume - EKRA Frédéric François Alain - Paul ESSOR Nome/ - ETTE Ambrois: - ETTE Marcel - "Dougoutiki F AD/GA - GA LAIS Hervé - *GARANGO - GIORDANO Christian - GUESSENND Kouadio Georges - HAFFNER Georges - Max HAZERA - HEROIN Pierre - KANGAH Diékouadio - *KEBE Memel Jean-Baptiste - *KEITA Cheikh Amadou Tidiane - Pierre KERFELLEQUE - "Ferdinand Sié KETEKOU - *KOFFI N'Guessan Marcel - KONE Nouhou - *KOUASSI Manassé - LANCHO - LEBRAS Michel - *LEGUYADER Armand - LONSDORFER Jean - LOUBIERE Robert - METRAS Dominique - MICHOU Michel - MORLIER Georgette - N'DRI Koffi Dominique - ODI Assamoi Marc - *OUATTARA Kouamé - POTOK.J Bernard - RAIN Jean-Didier - RENAUD Robert - RITT ER Jean - ROUX Constant Antoine - SANGARE Souleymane SANGARET Malick Auguste - SANTIN! Jean-Jacques - SERRE Jean-Jacques SOUBEYRAND Jacques - VEDRENNE Claude - VILASCO Jacob - WAOTA Coulibaly Alexandre - WELFFENS-EKRA Jeanne Marie Christiane - *YAO-DJE Christophe.
*Décédé
DOYEN
ASSESSEURS :
! -ANATOMIE-ANATOMIE PATHOLOGIQUE - HISTO-EMBRYO-CYTOGENETIQUE
PROFESSEURS TITULAIRES
2.., .)
4 5
DIOMANDE Mohénou Isidore Jean-MarieHONDE MichelGNANAZAN BI N'Guessan GabrielKassanyou SALAMI KOKOUA Alexandre
Anatomie PathologiquAnatomie PathologiqueAnatomie-UrologieAnatomie-ChirurgieAnatomie-Chirurgie
CHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de Cocody et TvlleCHU de CocodyCHU de Treichville
MAITRES DE CONFEREJ\CES AGREGES
.., .)
..j.
)
D'HORPOCK Ahoua François de SaleGNAGNE Yadou MauriceKAKOU Konan MédardTRE-YAVO Mireille
Anatomie PathologiqueAnatomieAnatomie NeurochirurgieHisto-Embryo-Cyto-Génétique
MAITRES-ASSISTANTS
BOKA Boni Michel2 KOFFI Kouakou Emmanuel
Anatomie PathologiqueAnatomie Pathologique
ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIQUE
2.., .)
4 56789
BROALET Maman You EspéranceDOUKOURE BrahimaETTE-DIENG ElisabethKOUAKOU Koffi FulbertOUATTARA Djibril Charles GuillaumeSAKHO Sidi SambaTROH EmileY AO Gnangoran VictorZUNON-KIPRE Yvan Jacques-Olivier Toualy
Anatomie-NeurochirurgieAnatomie PathologiqueAnatomie PathologiqueAnatomie-NeurochirurgieAnatomieHisto-Embryo-Cyto-Génétiq ueAnatomie PathologiqueHisto-Em bryo-Cyto-GénétiqueAnatom i e-Neurochirurgi e
Il - ANESTHESIE-REANIMATION - OXYOLOGIE PROFESSEURS TITULAIRES
MIGNONSIN David2 YAPOBI Yves René
Anesthésie-RéanimationAnesthésie-Réanimation
AMONKOU Akpo Antoine
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
Anesthési e-Réani mati on
A VE Yikpé Denis2 SORO Lacina3 TETCHI Yavo Deni4 VILASCO Brigitte Emma5 YEO Ténéna Niona Louis-Philippe
MAITRES-ASSISTANTS
Anesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-Réanimation
IRF d. Adzopé
CHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de Cocody
CHU de CocodyCHU de Treichville
CHU de Y opougonCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de TreihvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Yopougon
CHU de TreichvilleInstitut
Cardio.Treichville
CHU de Y opougon
Cl-l U de YopougonCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Yopougon
Il - ANESTHESIE-REANIMATION - OXYOLOGIE (suite)
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
BINLIN-DADIE Renée Hélia Ayakan diteGnanminlin Wôhadjinan
:? DREESEN Alice Julienne3 EHOUNOUD Hyacinthe Jean Clotaire-l- ELOIFLIN Banga5 KOFFI Kouakou6 KONAN Konan Denis7 KONAN Kouassi Jean8 KOUAME Kouadio Joseph9 NIOBLE Ghislain
10 SlSSOKO Jacques Auguste Souleymane11 Y APO Yapo Paul
Ill - APPAREIL DIGESTIF ET CHIRURGIE GENERALE
PROFESSEURS TITULAIRES
Î
345
CAMARA Benoît MathieuEHUA Somian FrancisKANGA MiessanN'GUESSAN Henri Alexandre AntoineTURQUIN-TRAORE Henri
Anesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationOxyologie-Médecine dUrgenceOxyologie-Médecine dUrgenceAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-RéanimationAnesthésie-Réanimation
Hépato-Gastro-EntérologieChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChir. Gén .. Digest. et Proctologie
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
A TTJA Koffi Alain2 KELI Elie3 KOFFI Eric Martin Alain Sénou4 KOUADIO Koffi Germain5 KOUASSI Jean-Claude6 LOHOUES-KOUACOU Marie Jeanne d'Arc7 N'DRI-YOMAN Aya Thérèse
Hépato-Gastro-EntérologieChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveChirurgie Générale et DigestiveHépato-Gastro-EntérologieHépato-Gastro-Entérologie
CHU de CocodyCHU de TreichvilleInstitut Cardia. TvlleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Y opougonInstitut Cardio.TvlleCHU de CocodyCHU de CocodyInstitut Cardia. Tvlle
CHU de CocodyUrgences CHU Yop.CHU de YopougonCHU de TeichvilleCHU de Treichville
CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Yopougon
MAITRES-ASSISTANTS
ALLAH Kouadio Emile Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Cocody2 ASSI Constant Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Cocody" CASANELLI dIstria Ange Jean-Marie Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville.)
4 COULIBALY Adarna Chirurgie Générale et Digestive CHU de Yopougon5 KOUADIO N·Dri Laurent Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville6 KOUAME Yao Julien Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville7 MAHASSADJ Kouamé Alassan Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Yopougon8 Y AO Bathaix Mamert Fulgence Hépato-Gastro-Entérologie CHU de Yopougon9 Y APO Patrice Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville10 YENON Kacou Sébastien Chirurgie Générale et Digestive CHU de Cocody
Ill - APPAREIL DIGESTIF ET CHIRURGIE GENERALE (suite)
1 ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
l BLEGOLE Oblé Clément Chirurgie Générale et Digestive CHU de Treichville., KASSI Assamoi Brou Fulgence Chirurgie Générale et Digestive CHU de Cocody -, KISSI-ANZOllAN-1..:ACOtT Henriette Ya Hépato-Gast ro-E ntérologie CHU de Yopougon .)
4 MOUSSA Bakary Chirurgie Gé11er:1Je et Digestive CHl1 de Y opougon 5 N·oru Konan Jean Chirurgie Generale et Digestive (Hl1 de Treichville() SORO Kountélé Gona Bab1Y Chirurgie Générale et Digestive CHU de "{opougon 7 TR.\ORE Lassina Chirurgie Generale et Digestive CHU de Treichville
IV - BIOCHIMIE - PHARMACOLOGIE - PHYSIOLOGIE
PROFESSEURS TJTl1L.\IRES
BOGUI Pascal2 DAH Cyrille Serge3 SESS Essiagne DanieJ
CISSE-CAMARI\ Massara2 DIE-KACOU Henri Maxime3 D.JESSOU Sossé Prosper4 OUATTAR.\ Souhaliho5 YA VO Jean-Claude
Physio. et Explora" FonctionnellePhysio. et Explora" FonctionnelleBiochimie Médicale
l\l.\ITRES DE CONFERENCES AGREGES Biochimie MédicalePharmacologie CliniqueBiochimie MédicalePhysio. et Explora" FonctionnellePharmacologie Clinique
J\IA ITRES-ASSISTANTS
ADEOTI Mansour Franck2 BALA YSSAC Eric Wenceslas Joseph3 KAKOU Augustine4 MONDE Aké Absalorne
Biochimie MédicalePharmacologie CliniquePharmacologie CliniqueBiochimie Médicale
CHU de C ocody et Yop.CHU de Cocody(Hl' de Cocody
CHU de CocodyCHU de C ocodyCHl1 de Cocodv et TvlleCHU de C ocody CHU de Cocody
CHU de YopougonCHU de C ocodyCHU de C ccodvCHU de Cocody
:MAITRE-ASSISTANT :MONO-APPARTENANT
N'KOMarcel Biochimie CHU de C ocody
ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINJOlfE
DAUBREY-POTEY Thérèse Cotran Pharmacologie Clinique CHU de C ocody, DJOH.AN Youzan Ferdinand Biochimie Médicale (Hl! de C ocody-3 Ki\.l\.fAGATE Mamadou Pharmacologie Clinique CHl1 de C ocody4 KEITA Mustapha dit Moussa Physio et Explora" Fonction. CHU de Cocody
5 SIRANSY A.hou Edwige Physio. et Explora" Fonction. CHU de Cocodv6 TUO Nalourgo Physio. et Explora" Fonction. CH1] de Yopougon7 VAMY Gboignon l\fichel Pharmacologie Clinique ('H1__f de Cocody
V - BIOPHYSIQUE ET MEDECINE NUCLEAIRE - IMAGERIE MEDICALE
PROFESSEURS TITULAIRES
1 KEITA Abdoul Kader2 N'GBESSO Roger-Daniel3 OUATTARA Dilaï Noël
Radiologie et Imagerie MédicaleRadiologie et Imagerie MédicaleRadiologie et Imagerie Médicale
CHU de YopougonCHU de YopougonCHU de Treichville
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
1 ABBY Blaguet Clément2 ACHY Ossey Bertin3 GBAZI Gogoua Casimir4 KONAN Alexis Victorien5 SEKA Assi Rémi6 YAPI-YAPO Chia Paulette
Imagerie MédicaleBiophysique et Médecine NucléaireImagerie MédicaleImagerie MédicaleImagerie MédicaleImagerie Médicale
1 DIABATE Aboubakar Sidiki2 KOUTOUAN Annick Flora Youa3 N'GOAN-DOMOUA Anne-Marie4 N' ZI Kouassi Paul
MAITRES-ASSISTANTS
Imagerie MédicaleBiophysiqueImagerie MédicaleImagerie Médicale
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 ALLOGBAH Aké Cyrille Narcisse2 COULIBAL Y Ali
- 3 DEDE N'Dri Simon4 KONE Tahirou5 KOUAME N'Goran6 SALAMI Fatima Adenike7 TOURE Abdoulaye
Imagerie MédicaleRadiologie (Imagerie Médicale)Imagerie MédicaleRadiologie (Imagerie Médicale)Imagerie MédicaleImagerie MédicaleImagerie Médicale
CHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCardiologie TreichvilleCHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de Treichville
CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de YopougonCardiologie TreichvilleCHU de Yopougon
ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIQUE
1 KOUASSI N'Go Nathalie Biophysique2 ZUNON-KIPRE Eric Emile Gnogbo Biophysique
CHU de CocodyCHU de Cocody
ATTACHE DE RECHERCHE
1 KOFFI Kouadio Dominique Biophysique CHU de Cocody
VI - DERMATOLOGIE ET INFECTIOLOGIE
PROFESSEURS TITULAIRES
1 BISSAGNENE Emmanuel2 KADIO Auguste3 KANGA Jean-Marie4 ODEHOURI Koudou Paul
Maladies Infectieuses et TropicalesMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et Tropicales
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
1 AOUSSI Eba François Blaise Patrice2 DJEHA Djokouéhi3 EHOLIE Serge Paul4 GBERY Ildevert Patrice5 KAKOU Aka Rigobert6 YOBOUE-Y AO Pauline
Maladies Infectieuses et TropicalesDermato- Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-Allergologie
MAITRES-ASSISTANTS
1 ECRA-ELIDJE Joseph2 SANGARE Abdoulaye3 TANON Koffi Aristophane
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 ABA Yapo Thomas2 AHOGO Kouadio Célestin3 EHUI Eboï4 KALOGA Amadou5 KASSI Komenan6 KASSI N'Douba Alain Charles7 KOUAME Kanga8 OUATTARA Songda Ismaël
Dermato-Vénérologie-AllergologieDerrnato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et Tropicales
Maladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et TropicalesDermato-Vénérologie-AllergologieMaladies Infectieuses et Tropicales
VII - IMMUNOLOGIE - HEMATOLOGIE - CANCEROLOGIE
PROFESSEURS TITULAIRES
1 ECHIMANE Kouassi Antoine2 SANGARE Amadou3 SANOGO Ibrahima4 SOMBO Mambo François5 TEA Daignékpo Norbert
1 ABISSE Agba2 ADOUBI Innocent3 KOFFI Kouassi Gustave4 MEITE Mori
CancérologieHématologie CliniqueHématologie CliniqueImmunologie Générale et MédicaleHématologie Clinique
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES Immuno-Transfusion SanguineCancérologieHématologie CliniqueImmunologie Générale et Médicale
CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville
CNTS TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de Yopougon
VII - IMMUNOLOGIE-HEMATOLOGIE- CANCEROLOGIE (suite)
MAITRES-ASSISTANTS
1 DASSE Séry Romuald2 TOLO-DIEBKILE Aïssata3 Y AO Toutoukpo
Immuno. Générale et Médicale CHU de CocodyHématologie Clinique CHU de YopougonHématologie Clinique CHU de Treichville
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 COULIBALY-DIDI-KOUKO Oumou Judith Cancérologie CHU de Treichville
2 M'BRA Kouassi Cancérologie CHU de Treichville3 TOURE Moctar Cancérologie CHU de Treichville
ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIOUE
1 KOUAKOU Boidy Hématologie Clinique CHU de Yopougon2 N'DHATZ-COMOE Emeraude Eba Chantal Hématologie Clinique CHU de Yopougon3 NANHO Danho Clotaire Hématologie Clinique CHU de Yopougon4 SIRANSY-BOGUI Kouabla Liliane Immuno. Générale et Médicale CHU de Yopougon5 YAO Attirnéré Nicaise Hématologie Clinique CHU de Treichville
ATTACHES DE RECHERCHE
1 HIEN Sansan Immuno. Générale et Médicale CHU de Cocody2 TOURE Attiényo Honoré Hématologie Clinique CHU de Yopougon
VIII - MEDECINE INTERNE- ENDOCRINOLOGIE- MALADIES METABOLIQUES
PROFESSEURS TITULAIRES
1 LOKROU Lohourignon Adrien2 NIAMKEY Ezani Kodjo Emmanuel3 TOUTOU Toussaint
EndocrinologieMédecine InterneMédecine Interne
CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de Treichville
1 ADOM Ahoussi Hilaire2 OUATTARA Doignan
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
Médecine InterneMédecine Interne
MAITRES-ASSISTANTS
1 ADINGRA ACHO-GROGA BADA Raymonde Marie Nicole Happie
2 OUEDRAOGO-YANGNI YolandeMédecine InterneMédecine Interne
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 ABODO Jacko Rhedoor Fêtê2 BINAN Allah Omer Yves3 SANOGO Sindou
EndocrinologieMédecine InterneMédecine Interne
CHU de TreichvilleCHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de Treichville
CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de Treichville
IX- MERE ET ENFANT PROFESSEURS TITULAIRES
l AGUEHOUNDE Cosme2 ANDOH Joseph3 ANONGBA Danho Simplice Florentin Rodgers4 DA SILVA-ANOMA Sylvia Helena Luisa5 DICK Kobinan Rufin6 HOUENOU-AGBO Yveline Marie-Thérèse7 KONE Mamourou8 KOUAME Konan Joseph9 MOBIOT Mandou Léonardl O TIMITE-KONAN Adjoua Marguerite11 TOURE-COULIBAL Y Karidiata
Chirurgie Pédiatrique CHU de CocodyPédiatrie Médicale CHU de TreichvilleGynécologie-Obstétrique CHU de TreichvilleChirurgie Pédiatrique CHU de YopougonChirurgie Pédiatrique CHU de YopougonPédiatrie-Néo-Natalogie CHU de CocodyGynécologie-Obstétrique CHU de YopougonPédiatrie Médicale CHU de CocodyChirurgie Pédiatrique CHU de TreichvillePédiatrie Médicale CHU de YopougonGynécologie-Obstétrique CHU de Treichville
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
l ABAULETH Yao Raphaël2 ADONIS-KOFFY Laurence Ya3 AMON-TANOH-DICK Flore4 BONI Ehouman Serge Auguste5 BANKOLE-SANNI Roumanatou6 KOUAKOU Firmin7 KOUAME Dibi Bertin8 OUATTARA Ossénou9 OULAI Soumahoro
Gynécologie-ObstétriquePédiatrie MédicalePédiatrie MédicaleGynécologie-ObstétriqueChirurgie PédiatriqueGynécologie-ObstétriqueChirurgie PédiatriqueChirurgie PédiatriquePédiatrie Médicale
CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville .CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de Treichville
MAITRES-ASSISTANTS
l ADJOBI Ello Jean René Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville
2 AKAFFOU-ADJA Evelyne Pédiatrie-Néo-Natalogie CHU de Yopougon
3 AMORISSANI-FOLQUET Amah Madeleine Pédiatrie Néo-Natalogie CHU de Cocody
4 BOKOSSA-MAMBO Ernestine Sabine Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody
5 CISSE Lassina Pédiatrie Médicale CHU de Treichville
6 COUITCHERE GUEI Line Sylvie Pédiatrie Médicale CHU de Treichville
7 DIETH Atafy Gaudens Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon
8 GONDO Diomandé Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody
9 GUIE Yéret Privat Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville
10 HORO Gninlgninrin Apollinaire Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon
11 KOFFI Kouadio Achille Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody
12 KONAN Blé Rémy Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon
13 MOH Elloh Nicolas Félix Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon
14 N'GUESSAN Koffi Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody
15 NANDIOLO KONE-ANELONE AMOUY A Rose Chirurgie Pédiatrique CHU de Treichville
16 NIANGUE-BEUGRE N'Drin Martine Pédiatrie Médicale CHU de Treichville
17 PRINCE Agbodjan Adjété Pédiatrie Médicale CHU de Cocody
18 QUENUM Guillaume David Cyprien Gynéco 1 ogie-Obstétri que CHU de Yopougon
19 TANO-AIE Amenan Laure Gynécologie-Obstétrique CHU de Cocody
20 TOURE-ECRA Ana Fatoumata Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon
IX - MERE ET ENFANT (suite)
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQllE
AKE-ASSI-KONAN Marie Hélène Pédiatrie Médicale CHU de Yopougon2 BOHOUSSOll Kouacou Paul Eric Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville" DAINGUY Marie-Evelyne Marguerite Api Pédiatrie Médicale CI-IU de Cocody.)
4 DIA Jean-Marc Hervé) .aminc Gynécologjc-Obstctriquc Cl IU de Treichvillc5 EBOUA Tano Kassi François Pédiatrie Médicale CHU de Yopougon
6 EFFOH N'Drin Denis Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon7 ENOH Slanziahuélie Jacob Euloge Pédiatrie Médicale CHU de Treichvillc 8 FANNY Mohamed Adam Karim Ben Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon9 GOULI Jean Christian Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon
10 KOUYATE Salifou Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichville11 LASME-GUI LLAO Berthe 1::vel\'nc Pcdiatric Mcdicnlc ( î 11' de Yc1p,1,1"l'i'12 N'GUESSAN Konan Edouard Gynécologie-Obstétrique CHU de Treichvilk13 ODEHOURI-KOUDOU Thierry Hervé Chirurgie Pédiatrique CHU de Yopougon14 SENI Konan Gynécologie-Obstétrique CHU de Yopougon15 TEGNAN Ebba Jacques Arsène Gynécologie-Obstétrique CHU de Trcichvillc 16 Y AO Attéby Jean-Jacques Pédiatrie Médicale Cl lU de Trcichville
X - MICROBIOLOGIE (BACTERIOLOGIE-VIROLOGIE - PARASITOLOGIE-MYCOLOGIE)
PROFESSEURS TITULAIRES
DOSSO-BRETIN Mireille Carmen Bactériologie.-Virologie PASTEUR Cocody CI IU Yop.
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
ASSOUMOU Aka2 EDOH Vincent3 FAYE-KETTE ACHI Yaobla Hortense4 KACOU-N'DOUBA Adèle5 OUHON Jean
Parasitologie-MycologieBactériologie-VirologieBactériologie-VirologieBactériologie-VirologieParasitologie-Mycologie
Cl I lJ de Cocodx CHU de TreichvilleCl IU de YopougonCHU de YopougonCHU de Cocody
MAITRES-ASSISTANTS
1 KOUASSI-M'BENGUE Aya Alphonsine Bactériologie-Virologie Institut PASTEUR Cocody
ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIQUE
1 BAKAYOKO Souleyrnane2 BONI-CISSE Cho N'Din Caihérine3 Y APO-KOUADIO Cha Gisèle
Bactériologie-VirologieBactériologie-VirologieParasitologie-Mycologie
ATTACHES DF: RECHERCHF:
ACHO Yapo Blaise2 GUESSENND-KOUADIO Aya Nathalie
KOUAME-KOUABENA Adja Henriette" .)
Bactério-Vi rologieBactériologie-VirologieBactériologie-Virologie
Institut PASTEUR Coccdy CHU de YopougonCHU de Cocody
Institut P/\STEUR-Cocuù)·CHU de YopougonCl lU de Yopougon
XI - NEPHROLOGIE - UROLOGIE
PROFESSEURS TITULAIRES
1 DIALLO Amadou Demba2 DJEDJE Mady Alphonse3 MANZAN Konan4 SANG ARE Ibrahima Séga
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
1 GNIONSAHE Dazé Appolinaire2 OUEGNIN Georges Armand Alexis
MAITRES-ASSISTANTS
1 ACKOUNDOU-N'GUESSAN Kan Clément2 KONAN Kouamé Paul Gérard3 YAO Blaise
1 COULIBALY Noël2 DEKOU Angoran Hyjin3 KOUAME Benjamin4 LAGOU Delphine Amélie5 TIA Weu Mélanie6 Y AO Kouamé Hubert
Néphro-Médecine InterneUrologieUrologieUrologie
NéphrologieUrologie
NéphrologieUrologieUrologie
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
UrologieUrologieUrologieNéphrologieNéphrologieNéphro-Médecine Interne
XII - OS ET ARTICULATIONS
CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Treichville
CHU de YopougonCHU de Cocody
CHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de YopougonCHU de YopougonCHU de Treichville
1 KOUAKOU N'Zué Marcel2 LAMBIN Yves3 V ARAN GO Guy Gaston
PROFESSEURS TITULAIRES
RhumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et Traumatologie
CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de Treichville
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
1 AGOH Serge Antoine Biansoit Yoboukoi2 BAMBA Insa3 BANA Abdoulaye4 ETI Edmond5 TOURE Stanislas André6 RICHARD Kadio Michel7 SIE Essoh Jean-Baptiste
1 ANOUMOU N'Guessan Michel2 COULIBAL Y Abou3 FAL Arame4 GOGOUA Dallo Raphaël5 GUEDEGBE Félix Séraphin6 KONE Brahima7 KOSSOKO Issa Hyppolyte
Orthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieRhumatologieOrthopédie et TraumatologieChir. Plast., Reconst. et Esthét.Orthopédie et Traumatologie
MAITRES-ASSISTANTS
Orthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieChir. Plast., Reconst. et Esthét.
CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de Yopougon
CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de Treichville
XII - OS ET ARTICULATIONS (suite)
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 ALLAH Konan Christophe2 BE Jeancis3 DJE BI DJE-ASSI Valérie Lou-Nahié4 KABA Lanciné5 KACOU A.ka Désiré6 KONE Samba7 KONE Seydou Gnombena N'Golo8 KOUAME Kouakou Maurice9 OUALI Boubacar10 OUATTARA Baly11 SICA Asso12 TRAORE Alidou13 YEO Sitiènèhin
XIII - PEDAGOGIE
1 EHUA Somian Francis
Chir. Plast., Reconst. et EsthétiqueOrthopédie et TraumatologieChir. Piast., Reconst, et EsthétiqueChirurgie Plastique ~t ReconstOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieOrthopédie et TraumatologieRhumatologieRhumatologieChirurgie PlastiqueOrthopédie et TraumatologieChir. Plast., Reconst. et Esthétique
Philomène2 AKA Mossouma Georgette3 KAHAN Koffi Pierre
PROFESSEURS TITULAIRES
Chirurgie Générale et Digest.
CHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleIRF AdzopéCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de CocodyIRF ADZOPECHU de YopougonCHU de Treichville
Urgences CHU Yop.
ENSEIGNEMENT SECONDAIRE
1 ABBY-BAILL Y Hortense Marie-ThérèseAnglaisAnglaisAnglais
UFR Sciences Méd. CocodyUFR Sciences Méd. CocodyUFR Sciences Méd. Cocody
XIV- SANTE AU TRAVAIL
1 BONNY Jean Sylvain
PROFESSEURS TITULAIRES
Médecine du Travail CHU de Yopougon
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
1 Y APO-ETTE Hélène Abouheu2 YEBOUE-KOUAME Brou Yves
1 KOUASSI Yao Mathias2 WOGNIN Sangah Barthélémy
1 BOTTI Koffi2 TCHICAYA Aimé François
Médecine LégaleMédecine du Travail
MAITRES-ASSISTANTS. Médecine du TravailMédecine du Travail
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE Médecine LégaleMédecine du Travail
CHU de TreichvilleCHU de Yopougon
CHU de YopougonCHU de Yopougon
CHU de TreichvilleCHU de Yopougon
XV - SANTE PUBLIQUE ET INFORMATIQUE
PROFESSELRS TlTLLAll{E~
KOFFI Kouamé Santé Pub. et Méd. Commun.2 TAGLIANTE-SARACINO CHAPMAN
Janine Adèle Félicienne Claire Santé Pub. et Méd. Commun.
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
AKA Joseph2 DAGNAN N'Cho Simplice
1 AKE-TANO Sassor Odile Purifine2 BENIE BI V roh Joseph3 EKRA Kouadio Daniel4 TIEMBRE Issaka
Biosiat. et Informatique Méd.Santé Pub. et Méd. Commun.
MAITRES-ASSISTANTS Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.
ASSISTANTS-CHEFS DE CLJNLOLJE
ATTOH -TOURE Harvey Nick SjencersYelame Fy
2 F ALL Aïssatou 3 TOURE Brahirna4 ZENGBE-ACRA Y Pétronille
BROU Ama N'Guetta Isabelle2 NIGUE Luc
Santé Pub. et Méd. Commun.anté Pub. et Méd. Commun.
Santé Pub. et Méd. Commun.Santé Pub. et Méd. Commun.
INSP d' Adjarné
INSP dAdjamé
CHU de CocodylNHP de Treichville
INSP dAdjarnéTNHP deTreichvilleINHP de TreichvilleINHP de Treichville
INHP de TreichvilleINHP de TreichvilleINHP de TreichvilleINHP de Treichvillc
ASSISTANTS-CHEFS DE BIOCLINIQLIE
Biostat. et Informatique Méd.Biostat. et Informatique Méd.
CHU de CocodyCHU de Cocody
XVI - SYSTEME NERVEUX ET READAPTATION
PROFESSEURS TITULAIRES
1 AMANI N 'Goran2 BA Zézé Vincent
DELAFOSSE Roger Charles Joseph3 KOUASSI Beugré4 SONAN AFFOUNDAH-
DOlJA YOUA Thérèse Adélaïde Armait
PsychiatrieNeurochirurgiePsychiatrieNeurologie
Hôp. Psychiat. BingervilleCHU de YopougonTNSP dAdjarnéCHU de Cocody
eurologie CHU de Yopougon
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
ASSI Amonchyépo Ablan Berthe2 BOA Yapo Félix3 KONE Drissa4 NANDJUI Mansé Béatrice5 VARLET Guy Gervais Aka
eurologieNeurologiePsychiatrieRééduca° Fonction. (Physiatrie)Neurochirurgie
CHU de CocodyCHU de YopougonHôp. Psychiat. BingervilleCHU de YopougonCHU de Yopougon
MAITRES-ASSISTANTS
N'DRl Oka Dominique curochirurgic Cl IU de Yopougon
XVI -SYSTEME NERVEUX ET READAPTATION (suite)
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 Aderehime_HAÏDARA 2 AKA ANGHUI-DIARRA Evelyne Marie-
Françoise Adjoua3 ALLOH Amonso Daniel Beugré4 COWPPLI-BONY Ahou Pascale5 DOUMBIA Mariam6 IPOU Yves Stéphane7 KOUAME-ASSOUAN Ange Eric8 MANOU Koffi Benjamin9 VE Diomandé10 YEO-TENENA Yessonguilana Jean-Marie
1 TE-BONLE-DIA WAR Marguerite2 COULIBAL Y Djénéba
XVII- TETE ET COU
Neurochirurgie
NeurologieRééduca° Fonction. (Physiatrie)NeurologieNeurologiePsychiatrieNeurologieRééduca° Fonction. (Physiatrie)PsychiatriePsychiatrie
ATTACHES DE RECHERCHE PédopsychiatriePsychiatrie
CHU de Yopougon
CHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de YopougonINSP d'AdjaméCHU de CocodyCHU de YopougonHôp. Psychiat. BingervilleINSP d'Adjamé
INSP d'AdjaméINSP d'Adjamé
1 ADJOUA Rith Pascal2 ASSA Allou3 FANNY Adama4 GADEGBEKU Anani Samuel5 KOUASSI Konan Bertin
PROFESSEURS TITULAIRES ORL et Chirurgie Cervico-FacialeStomato. et Chir. Maxille-FacialeOphtalmologieStomato. et Chir. Maxillo-FacialeORL et Chirurgie Cervico-Faciale
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
1 AKA Gblanh Kassy François-Philippe2 AKA-KOFFI Viviane Emilie Colette (Ama)3 Bakary OUA TT ARA 4 EHOUO Florent Stanislas Adolphe5 ETTE-AKRE Evelyne Elie6 KONAN Kouadio Emmanuel7 KONE Safédé8 TANON-ANOH Blah Marie José
1 BURAIMA Fataho2 GBE Kassieu3 HARDING-KABA Mouan Béatrice4 KOUASSI François Xavier5 KOUASSI Yao Mathurin6 N'GUESSAN-KOFFI Isabelle Léa Rosine7 YOTIO Ayékpa
Stomato. et Chir. Maxillo-FacialeORL et Chir. Cervico-FacialeStomato. et Chir. Maxille-FacialeORL et Chir. Cervico-FacialeORL et Chirurgie Cervico-FacialeStomato. et Chir. Maxillo-FacialeOphtalmologieORL et Chirurgie Cervico-Faciale
MAITRES-ASSISTANTS ORL et Chirurgie Cervico-FacialeOphtalmologieStomato. et Chir. Maxille-FacialeOphtalmologieORL et Chirurgie Cervico-FacialeORL et Chirurgie Cervico-FacialeORL et Chirurgie Cervico-Faciale
CHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de 'i opougon
CHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de TreichvilleCHU de YopougonCHU de Yopougon
CHU de YopougonCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de CocodyCHU de YopougonCHU de CocodyCHU de Treichville
XVII- TETE ET COU (suite)
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 ADJORLOLO-SANOGO Adjoua Christiane Ophtalmologie CHU de Treichville
2 ANZOUAN-KACOU Evelyne ReineMarguerite Anoumon Stomato. et Chir. Maxillo-Faciale CHU de Treichville
3 BERETERokia Ophtalmologie CHU de Treichville
4 BONI Séverin Ophtalmologie CHU de Treichville
5 COULIBAL Y Fahan Ophtalmologie CHU de Treichville
6 DIOMANDE Abdoulaye Stomato. et Chir. Maxillo-Faciale CHU de Treichville
7 KONAN-TOURE Akissi Marie-Louise Ophtalmologie CHU de Treichville
8 KOUASSI Aya Colette Ophtalmologie CHU de Treichville
9 MOBIO N'Kan Max Ange ORL et Chirurgie Cervico-Faciale CHU de Treichville10 N'GOUAN Jean-Michel ORL et Chir. Cervico-Faciale CHU de Cocody
11 N'GUESSAN N'Dia Dominique Stomato. et Chir. Maxillo-Faciale CHU de Treichville
12 OUATTARA Ouettéré Abdallah Sylvain Ophtalmologie CHU de Treichville
13 TEA Zékou Basilide ORL et Chirurgie Cervico-Faciale CHU de Cocody14 YODA Moussa ORL et Chirurgie Cervico-Faciale CHU de Yopougon15 YOFFOU Liliane Ophtalmologie CHU de Cocody
XVIII - THORAX ET VAISSEAUX PROFESSEURS TITULAIRES
1 DANGUY-AKA KOUASSI Wangah Elisabeth Pneumophtisiologie2 KO FFI N'Goran Bernard Pneumophtisiologie3 N'DOPI Abouo Raymond François Cardiologie
MAITRES DE CONFERENCES AGREGES
1 AKE-TRABOULSI Evelyne Léonore2 ANZOUAN-KACOU Jean-Baptiste3 EBOULE-ABOA Alloua Corinne4 KOUASSI Boko Alexandre5 KRAMOH Kouadio Euloge
MAITRES-ASSISTANTS Cardiologie PédiatriqueCardiologieCardiologiePneumophtisiologieCardiologie
CHU de CocodyCHU de CocodyCHU de Treichville
1 ADOHAdoh Cardiologie CHU de Treichville
2 COULIBAL Y Gaoussou Pneumophtisiologie CHU de Treichville
3 DOMOUA Kouao Médard Serge Pneumophtisiologie CHU de Treichville
4 KAKOU Guikahué Maurice Cardiologie CHU de Treichville
5 KENDJA Kouassi Flavien Hyppolyte Chirurgie Thoracique CHU de Treichville
6 KOUASSI Kanga Chirurgie Cardio-Vasculaire CHU de Treichville
7 N'GOM Abdoukarim Séverin Pneumophtisiologie CHU de Cocody8 T ANAUH Yves Raymond Chirurgie Thoracique CHU de Treichville
9 YAPI Achy Pneumophtisiologie CHU de Treichville
CHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de TreichvilleCHU de CocodyCHU de Treichville
XVIII -THORAX ET VAISSEAUX (suite)
ASSISTANTS-CHEFS DE CLINIQUE
1 AMANI Kwadjau Hyppolyte Chirurgie Thoracique CHU de Treichville2 BAKASSA Traoré Lamine Serge Alexis Chirurgie Cardiaque CHU de Treichville3 BAKA YOKO Alimata Sandia Pneumophtisiologie CHU de Treichville4 BASSA Kouadio Modeste Cardiologie CHU de Treichville5 Blaise Alexandre DEMINE Chirurgie Cardiaque CHU de Treichville
6 COULIBAL Y Iklo Cardiologie CHU de Treichville7 DAIX Ahou Thomas Joseph Pneumophtisiologie CHU de Treichville8 HARDING-TANON Ekoué Diana Cardiologie CHU de Treichville9 HORO Kigninlman ~t Dl C. Pneumophtisiologie CHU de Cocody10 KONIN Kouaho Christophe.~ Cardiologie CHU de Treichville11 N'GUETTA Aka Roland ~ IJ.P.I. 0\ Cardiologie CHU de Treichville12 SOUAGA Kouassi Antoni~:) dee 5der,œe ~ Chirurgie Cardio-Vasculaire CHU de Treichville
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
J.E. 1 Ell'E' C. 11. -1 tH· ES'E ~i· _; 1 • • i r ; , J - - - ~ : ;: j · - : ~ . . _JI __ -~ eJ • ~ • • r I J . , . ., · •••
IYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A L'ETERNEL DIEU TOUT' Pms:SANT Toi qui es source de vie,
Toi qui as fait de moi ce que je suis aujourd'hui, Toi qui as été ma lanterne jusqu'à cette étape de ma vie. Je te demande de recevoir cette thèse et de la bénir. Donne-moi la force nécessaire pour exercer cette profession. Remplis mon cœur d'amour pour mes patients afin que leurs souffrances, leurs peines et aussi leurs joies soient les miennes.
Amen
II Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclouaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
ATOUS LES SUJETS .. CIBLES1 IDE NCOJlrRœ' ETUDE Vous avez été mon premier soutien et les véritables artisans
de ce travail. Trouvez en ces mots, toute la reconnaissance d'un frère. Que le Seigneur dans sa miséricorde et son amour daigne exaucer vos souhaits les plus utiles.
III Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
IN MEM.OJ~IJUM. A mon père : fe,w1 'tfAl!ll!AIB;OU~:JACQUES Très tôt tu as compris la nécessité de la chose scolaire et très tôt tu nous as indiqué le chemin de l'école. Mais hélas tu nous as quitté trop prématurément. Aujourd'hui l'arbre que tu as planté a donné son fruit. Saches que tu demeures présent dans mon cœur à jamais. A ta mémoire je dédie cette thèse.
IVYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
IN MEM101Rl!lJJM A MES CHERS DIS, \ 1 )IDS
-DOCTEUR YAPI SEKA DESIRE -ACHANGO YAPI LAZARO -SEKA JEAN MAXIME ALEX -YAPO JULIETTE -YAPI AKOUN SIMON -AKAYE PHILBERT ET MADAME -KAKOU MASSA -YAPI JEAN PRINCE -SOBA AYE JEAN BAPTISTE -N'CHO ABE -AFFO N'CHO MICHEL -ATSE ATSE AUGUSTIN -SOTCHI KOUASSI BRUNO (8KB) -YAPI GUISSEU ETIENNE ...
J'aurais tant voulu que vous soyez à mes côtés pour voir le couronnement de tant d'effort. Mais le seigneur en a décidé autrement. De la haut où vous êtes, vous pouvez être fiers car, ce travail est aussi le vôtre. Que Dieu vous garde à ses côtés.
Reposez en paix.
VYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A MES PARENTS ET AMIS
VIYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A MA MERE V~P() CJH:0) TH:~~E-S;E Ah! Que c'est agréable de t'avoir comme mère.
Toi qui très tôt as compris que la graine mise en terre a besoin d'eau et de soins. Que le SIEGNEUR Dieu te permette de vivre longtemps afin que tu puisses goûter au fruit de cet arbre et trouver un peu de consolation auprès de ton fils.
A MES FRERES, El SŒlJJRS -ABOUA YAPI ANDRIEN -YAPI ATSE FAUSTIN -ABOUA KOTTIA REMI -ABOUA API HELENE -YAPI CHO LAURENCE -YAPO ABOUA JACQUELINE -YAPI APO CHARLOTTE,
Vous qui avez les premiers cru en ma valeur, votre soutien, votre réconfort et votre affection ont été pour moi les armes mêmes de la victoire. Trouvez en ces mots l'attachement sincère et affectueux que ce frère vous témoigne ainsi que l'expression de mon amour et de mon infinie reconnaissance.
A MES NEUVEW* ET· ~IECES· en ~alitieulier à toi ASSI JEAN NOEL -
Que ce travail vous serve de stimulant et vous pousse à aller au delà de vos rêves pour les réaliser. Vous êtes bien jeunes mais vos cœurs aussi grands pour porter toute l'affection que j'ai pour chacun de vous.
VIIYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A îOUS MES COUS~NS lEî COUS~NlES -ADOUBY N'CHO MARUS -AKOMOU BENOIT -AKOMOU FRANCOIS SALES -APPIA GNANDOH MICHEL dit Jagger -APPIA VINCENT -BROU ATSE THOMAS -DIAHOU KOUASSI ATHANASE -KOKOBO YAPI EMMANUEL -KOUASSIYAPIALEXANDRE -MAMBO ATSE L'ABBE -MAMBO FIRMIN dit Wambé -MAMBO BASILE -N'CHO ATSE DANIEL -N'CHO BENIE -N'CHO ASSI dit Johnny Walker -NIANGORAN JOACHIN -YAPI KOUASSI EMMANUEL -YAPO GERMAIN -APPIA APO -APPIA CHO -APPIA LUICIE -APPIA SOPIE -AKOMOU CHIA ANGELLE -DIAHOU APO CECILE -DIAHOU APO YVETTE -DIAHOU CHO YVONNE -KOUASSI ACHTÔH -KOUASSI GEORGETTE -KOUASSI GERMAINE dit Chakô -MAMBO KOUSSO -NIANGORAN CHENIN -NIANGORAN N'GUESSAN -N'CHO AMAN VALANTINE -N'CHO N'DIN JEANNETTE -N'CHO KOUSSO BEATRICE -N'CHO CLOTILDE -N'CHO M'BHO -YAPO GERMAIN dit Ayépiwo -YAPO APIE RONIE
J'ai trouvé auprès de vous tendresse et réconfort, affection et amour. Que cette même chaleur familiale qui nous entoure demeure toujours ; n'oublions donc pas que la vraie richesse d'une famille réside non dans la fortune qu'elle a amassée mais dans l'union entre ses membres.
VIIIYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A MES ONCLES ET TANTES -ASSI SEKA SIMPLICE -ABBE AFFO JEAN -AKOMOU N'CHO RAYMOND -YAPI YAPI FRANCOIS -YAPI N'CHO LUICIEN dit Baba Kotchio -YAPI AGNIN AGNES - YAPI YABA HELENE -YAPI BOKOZE Ce travail est aussi le vôtre recevez le comme le témoignage de mon tendre affection.
Que Dieu vous bénisse.
A MA CHER~E MON NEY YOLANDE (Etudiante en Sciences Economique et de Gestion)
Ta constante présence auprès de moi. Tes conseils et tes encouragements m'ont été d'un soutien précieux au cours de la confection de ce travail. Je t'en suis infiniment reconnaissant.
A MONS~EUR. PAlEU DJ~[BR.~l Je vous dédie ce travail pour votre soutien et votre affection.
Que Dieu vous bénisse.
IXYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A MONS~EUR AHU~ ATSE THOMAS d~i D0UG8Al L'homme qui m'a vu naître L'homme qui a supporté mes caprices L'homme qui m'a vu grandir Le moment que tu as tant attendu est arrivé Cette thèse je te la dédie en témoignage de mon affection et de ma profonde gratitude.
A M[ES HOMONYM[ES -SEKA GREGOIRE PACIFIQUE ADA -YAPI ROLAND EUNICE ADA
Je vous dédie cette thèse.
A lA FAM!llE YAP! YAP! MARCElVous m'avez toujours considéré comme votre fils et vous
m'avez apporté votre soutien sur tous les plans lorsque cela s'avérait nécessaire. Recevez cette dédicace comme manifestation de tout mon amour et de toute ma considération pour vous.
Que Dieu vous bénisse.
A lA fAM~llE D~AHOU AîSE JUlES è Ab~dj©J~ Sincères remerciements pour vos conseil, encouragements et soutien financier. Que Dieu accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces de santé de bonheur et de paix.
XYapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A LA FAM~llE ADOU~Y AKE MATH~AS à Ab~dj~~ Je vous dédie ce travail pour votre soutien et votre affection. Que Dieu vous accorde ses grâces.
A lA FAM!llE YAP~ EDY AlA~N à Ab!djamVous m'avez beaucoup appris, beaucoup donné ; vous m'avez
forgé. Cette thèse est la vôtre, le fruit de votre labeur. Que le Seigneur vous rende au centuple ce que vous avez fait pour moi.
A lA FAM!llE SEKA BATîHE PlACmE à D~~ou Merci pour votre soutien et conseils.
A lA FAM!llE YAPO AMAN PIERRE Sincères remerciements pour vos conseils et encouragements. Que le seigneur achève en vous ce qu'il a commencé et vous accorde sa grâce en abondance.
AUX SIECRIETAIRIES DU SERVICE D'IMMUNOLOGIE ET HIEMATOLOG~E -MADAME N'GUESSAN BLAH ELISABETH -MADAME KOUAKOU EPOUSE KOFFI MADELEINE
Je vous dédie cette thèse.
A lA FAM~llE KONANDR~ @J A~kdj©1nSincères remerciements pour vos conseils et encouragements.
A MADEMO~SEllE MONSEKElANY ANNE Je te dédie cette thèse.
Que Dieu te bénisse.
XI---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A lA FAM~ll[E ASSO ~ Agb(Q)V~~~~ Je vous dédie ce travail pour votre soutien et votre affection. Que Dieu vous accorde ses grâces.
A lA [FAM~llE ASS~ lBOKOZE A~ME Sincères remerciements pour vos conseils et encouragements. Que Dieu accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces de santé de bonheur et de paix.
A lA FAM~llE AMOUGOUAASS~ PH~lHPE Je n'oublierai jamais votre simplicité, votre courtoisie, votre générosité et tout ce que vous faites pour moi.
Merci pour tout.
A lA FAM~llE KAKAYE ~GNACEToute ma gratitude et ma reconnaissance pour vos sages conseils et votre aide. Que Dieu accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces de santé de bonheur et de paix.
A lA FAM~llE AHU~ N~CHO MAUR~CEMerci pour votre soutien.
Que Dieu vous bénisse.
A lA f AM~ll[E N~ANGORAN YA~O ~OMON ClAUD[E Merci pour m'avoir appris que fraternité, union, solidarité et entraide sont les seules valeurs qui conduisent à une vie paisible. Que le Seigneur vous accorde toutes ses grâces de santé, de paix, de prospérité et de bonheur à vous et à votre famille.
A FAM~llE N~ANGORAN N~ANGORAN f)~ERRE Merci pour votre soutien et conseils Que le tout puissant fortifie notre amitié.
XII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A lA [FAM~llE AGBO YAOJe vous dédie cette thèse.
A lA FAM~ll[E AMON [ED~H G[EORG[ES Merci pour votre soutien ; ce travail est aussi le vôtre.
Que Dieu vous bénisse.
A TOUT LES RESORTISSANTS DU VILlAGE FIASSE A ABIDJAN Toute ma reconnaissance à vous.
A TOUS lES MEMlBRES DE : -La MUDEFIA (mutuelle pour le développement de Fiassé) -La MUTEF (mutuelle des étudiants de Fiassé)
Merci pour votre soutien et que Dieu tout puissant vous bénisse.
AîOUTE lA COMMUNAUTE V~llAGEO!SE DE F~ASSE (Commune de Yakassé Attobrou)
Je n'oublierai jamais votre générosité. Je vous remercie pour votre soutien moral, matériel, financier.
Merci pour votre mobilisation.
XIII----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
-ESCALIER A LA MODE -BOGNAN BOGNAN -REMUER LA TETE -LES SIX -LES ABEILLES ...
Merci pour votre soutien sans faille.
A îOUî[E lA COMMUNAUî[E D'ABONGOUA, D'AHU~IKO~, DE YAKASS[E.,ATîOlBROUi DiAlBRAD~N[E DE D~ANG,OlBO ...
Merci pour votre soutien et présence massive.
AMESA~NES -ASSI MATHIAS -ASSI N'CHO LEON -BLE KOHOU ERNESTE -DIAHOU ROGER -DIAHOU JEAN PAUL -N'DA FIRMIN -N'CHO YAPI (NDIA N'CHO ROGER) -SEKA ASSI GERMAIN
Je vous dédie ce travail.
A îOUS lES POl~C~ERS GENDARMES Eî M~l~îA~RES
RESORî~SSANîS DE F~ASSE Toute ma reconnaissance à vous.
XIV----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
l[ES DOCî[EURS: -N'CHOH HUGUES EDY GUILLAUME -SEKA WILLIAMS ROCH -AGUIE AYE MARIUS ...
A vous je dédie ce travail.
A MES AM~S DE PROMOî~ON lES DOCîEURS : -ASSEMIAN LUDOVICK AKA -ASSI YAPO PAULIN -ASSI LOUIS ROBERT -ASSI BERNARD -YAPI N'CHO ALAIN -VANGA KOFFI MARIUS -TOKPA SOMPOHI JACQUES -TUO MAMADOU MELAIHE -TRA BI IRIE MICHEL ...
Recevez cette dédicace en signe de mon attachement fraternel et comme manifestation de mon amitié sincère.
Merci pour cette bonne collaboration.
XV ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A îOUS M[ES AM~S D~[ENFANC[E : -N'CHO EHOUEU JULES -YAPO YAPO ALFRED -ATSE YAPI COM -ASSIASSIATHANASE -NIANGORAN YAPI LAURENT -ADJE NAZAIRE ABOEN GUI JOSEPH -AKE KOHi THOMAS -ASSAMOI ASSAMOI -ASSI KAKOU VINCENT -N'DIA SEKA ABEL -YAPI YAPI ROLAND -AKOMOU YAPI SEVERIN
Je vous dédie cette thèse.
Yap~~~~01r~~~~=--:~=-::i~~---------XYI Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
v:-:~;-::-:;-------;~~--;::-:---:-:-------:-------:;:--;-;-;:----:-----;=:-:-:-:-=------:-----------~XVII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A MA MARA!~E, Ma~ame AKA él)OUOO SEKA MARIE JEANNE Malgré vos lourdes responsabilités, vous avez spontanément accepté de parrainer cette cérémonie. Cela ne m'étonne pas car, j'ai été toujours marqué par votre simplicité, votre amabilité et par votre amour pour le prochain. Je suis tout aussi heureux d'être votre fils, raison pour laquelle je vous appelle « maman ». Que le Seigneur achève en vous ce qu'il a commencé et vous accorde grâce en abondance. A vous et à monsieur votre époux recevez mes sentiments de profonde admiration.
L'honneur que vous nous faites en acceptant de venir présider cette soutenance de thèse malgré vos nombreuses occupations nous fait sincèrement chaud au cœur. Je ne sais comment vous remercier pour tout ce que vous avez fait pour nous. Cette thèse est avant tout la vôtre et vous m'avez honoré en acceptant cette présidence. Que le Seigneur vous accorde toutes ses grâces de santé de paix et de prospérité.
XVIII---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A MONSIEUR lE PROFESSEUR SEl{A SEKA JOSEPH Pour tout ce temps passé à vos côtés durant mon parcours
universitaire ; pour m'avoir ouvert vos bras, écouté, consolé et conseillé dans mes moments difficiles ; pour m'avoir considéré comme votre fils je ne sais comment vous remercier. Mon admiration tant pour vos qualités morales que spirituelles ne cesse de grandir d'année en année. Vous êtes un modèle pour moi. Que l'Eternel accorde à vous et à votre famille toutes ses grâces.
AU DOCî[EUR AKR[E DAGRA rAUl Vous m'avez beaucoup appris, beaucoup donné ; vous m'avez
forgé. Cette thèse est la vôtre, le fruit de votre labeur. Que le Seigneur vous rende au centuple ce que vous avez fait pour moi.
AUX MEDEC~NS (Interne du service d'immunologie)
-DOCTEUR BRAVO -DOCTEUR N'GUESSAN ...
Pour avoir veillé à mes cotés et aidé dans mon travail ; cette thèse est aussi la vôtre.
Merci pour tout.
Je n'oublierai jamais votre courtoisie, votre générosité et tout ce que vous faites pour les jeunes. Votre présence à mes cotés m'honore.
Merci pour tout XIX ----------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
Recevez toute ma reconnaissance.
A MONS~EUR LE MA~RE YAPO YAP~ DAUDEî Pour tout le soutien, tous les sages conseils à mon égard et en reconnaissance de l'affection que vous m'avez toujours portée, que ce travail vous témoigne toute ma profonde gratitude et toute ma reconnaissance. Que Dieu vous accorde un avenir radieux et vous garde longtemps. Merci une fois encore.
AU PROFESSEUR SOMBO MAMBO FRANCO~S : S~NCERES REMERC~EMENTS
Je ne sais comment vous remercier pour tout ce que vous avez fait pour moi, en m'acceptant dans votre laboratoire pour mener cette étude. J'ai été marqué durant ces jours passés à vos côtés par votre simplicité, votre amour effréné du travail, votre grande compassion pour votre prochain, votre humilité, votre foi. Que le Seigneur Dieu vous accorde toutes ses grâces de santé, de paix, de prospérité et de bonheur à vous et à votre famille.
XX ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A Î(Q)~~ (C~~i q~~ (Q)W]Î (C(Q)W]Îf~~~é à ~©1 ré©1~~~©1Î~(Q)W] d~ œ tr~v~~~ : ~~~œr~~ r~m~r~~~m~~m
-DOCTEUR ANON ADIKO -DOCTEUR PADJA BERNARD -DOCTEUR ASSI -DOCTEUR DASSE -DOCTEUR KABORE -DOCTEUR YAPO - MONSIEUR HIEN -MONSIEUR ASSI DIAHOU ACHILLE -MESSIEURS LES TECHNICIENS ET INGENIEURS :
.BAÏ GUSTAVE
.N'GUESSAN EMMANUEL
.KRAMO DENIS
.ASSIENIN CESARO
.BILE JONAS
.TOA JULES
.VAN JULES
.ASSOA AUGUSTIN
.VICTORIEN Toute ma gratitude et ma reconnaissance pour vos sages conseil
-A MESDAMES : .KOUASSI VIRGINIE .KOUADIO CATHERINE .GNAGNE MELESS PATRICIA
-A toute l'équipe du service d'entretien et de sécurité du laboratoire d'lmmunologie et d'Hématologie du CHU de Cocody.
Merci pour votre collaboration.
XXI---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A îOUS CEUX q~~ (Q)Wï)t étté (Q)~lb~~é Parce que je ne les ai pas cités ; je ne vous ai pas oublié, je vous ai tous porté dans mon cœur pendant ces longues heures de rédaction. Mais ces quelques pages auraient été insuffisantes pour vous citer tous. Je prie pour vous et vous savez chacun ce que je suis pour vous et ce que vous représentez pour moi. Nous nous comprenons du regard.
XXII ----------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
XXIII ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A NOTRE MA~îRE Eî PRE§~DENî DU JURY MONS~EUR lE ~ROFESSEUR KODO M~CHEl
-Professeur titulaire de Chirurgie Orthopédique et Traumatologique - Vice-doyen chargé de la recherche scientifique de l'UFR des Sciences Médicales de Bouaké - Membre de la société Ivoirienne de Chirurgie - Membre de l'association des orthopédistes de langue Française (AOLF) - Membre de la société internationale de chirurgie orthopédique et traumatologique (SICOT)
Cher maître, Votre simplicité, votre humilité, votre disponibilité sont pour nous un exemple de vie à suivre. Nous vous dédions ce travail en témoignage de notre reconnaissance. Veuillez trouver ici l'expression de notre profonde gratitude et de notre fidèle attachement.
XXIV Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A NOTRE MA~TRE MONS~EUR lE PROFESSEUR SANOGO ~BRAH~MA -Professeur titulaire d'hématologie -Chef de service adjoint du service d'hématologie clinique du CHU de Yopougon -Enseignant de l'UFR des sciences médicales d'Abidjan - Enseignant d'hématologie à l'école nationale des techniciens de laboratoires -Membre fondateur de la société ivoirienne d'hématologie (SIHI) -Membre fondateur de la société d'hématologie (S.AF.HEMA)
-Membre associé de la société ivoirienne de gynécologie obstétrique (S.I.G.O)
Au cours de nos études nous avons pu apprécier votre enseignement, votre compréhension du malade et votre grande générosité. En acceptant de codiriger ce travail et d'être notre juge, vous nous faites beaucoup d'honneur. Permettez que nous vous exprimions nos sentiments de profond respect.
XXV Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A NOîRE MA~îRE MONS~EUR LE PROFESSEUR SEKA SEKA JOSEPH -Professeur agrégé d'immunologie clinique et d'immunobiologie -Chef du département d'immunologie et de parasitologie de l'UFR des sciences médicales de Bouaké - Diplômé d'immunologie générale de l'institut Pasteur de Paris - Diplômé d'Etude Approfondie de Biologie Cellulaire et Moléculaire et Sciences de la Santé de l'Université de Rennes I en France -Membre fondateur de la société ouest africaine d'immunologie -Membre de l'association des anciens élèves de l'institut Pasteur de Paris -Membre de la société française d'immunologie -Ancien directeur du centre régional des œuvres universitaires (CROU) d'Abidjan -Directeur du cadre de vie au Ministère de l'Environnement et des Eaux et Forêts -PCA des écoles méthodistes de Côte d'Ivoire.
Cher maître, Plus qu'un Directeur de notre travail, vous êtes resté pour nous un père. Vous avez été le véritable artisan de ce travail. Adepte du travail bien fait, votre esprit de recherche et de perfection, votre rigueur et la clarté au travail, votre courtoisie, votre disponibilité et surtout votre humilité forcent l'admiration de tous ceux qui vous ont connu. Nous vous devons d'aimer l'lmmunologie et !'Hématologie. Trouvez en cette page, la haute estime et la profonde gratitude que nous vous portons. Que Dieu vous accorde toutes sortes de bénédictions.
XXVI---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A NOîRE MA~îRE MONS~EUR lE PROFESSEUR DJANHAN YAO -Professeur agrégé de gynécologie obstétrique et andrologie -Doyen de l'UFR des sciences médicales de Bouaké -Chef du service de gynécologie obstétrique et andrologie du CHU de Bouaké -Chevalier du mérite sportif -officier du mérite de l'enseignement supérieur
Cher maître, L'enthousiasme avec lequel vous avez accepté de juger notre travail n'a fait qu'accroître notre admiration pour vous. Mais nous n'avons pas eu cette chance d'apprendre suffisamment à vos cotés. Nous avons su apprécier votre simplicité votre humilité, votre courtoisie. Nous sommes convaincu de votre dynamisme et de votre rigueur au travail, de vos connaissances, car homme de science vous l'êtes, mais homme de grande culture vous l'êtes aussi. Vous nous faites l'honneur de juger notre travail, soyez en vivement remercié.
XXVII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A TOUS NOS MA~îR[ES a qui nous OOvons connnallœ, simp~cite, humilite et amour pourb prof~filon mooir.ale.
L'intérêt que vous portez à vos étudiants et votre savoir-faire font de vous une source intarissable à laquelle tous, nous venons nous abreuver. Trouver en cette page, l'expression de toute notre reconnaissance, de notre admiration et de notre profond respect. Recevez l'hommage d'un disciple qui promet de rester fidèle à l'image de ses maîtres.
:-:------:-::--:----:-----:--:-:----=----------------------~xx~vIII Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
ABREVIATIONSC~܊° : degrés CelsiusµL : microlitreCacl, : chlorure de calciumCHU : centre hospitalier et universitaireCNTS : centre national de transfusion sanguineColl. : collaborateurCROU : centre régional des œuvres universitairesDSAI : dépistage simple des agglutinines irrégulièresDu: Rhésus standard faibleD+: Rhésus D positifEDTA : Acide Ethylène Diamine Tétra-acétiqueF/: Duffy (a)Fyb: Duffy (b)g: grammeGR: Globule RougeH: HeavyIg: immunoglobulineJka: Kidd (a)Jkb: Kidd (b)Kpa: Kell (a)Kpb: Kell (b)L: light1: litreLea: Lewis (a)Leb: Lewis (b)Lu": Lutheran (a)Lub: Lutheran (b)Lw : Landsteiner et WinerMHNN: maladie hémolytique du nouveau néMin: minuteml: millilitreNaN3 : azide de sodiumP,oo: micropipette N°100P,ooo: micropipette N°1000P200 : micropipette N°200Psoo : micropipette N°500Pu: purRh: Rhésuss: secondeTr: toursUJ : unité internationale
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
INTRODUCTION 1
PREMIERE PARTIE: LES DONNES DE LA LITTERATURE 6
1-DEFFINITION 7 li-HISTORIQUE ? Ill-BASES GENETIQUES 13 IV-BASES BIOCHIMIQUES 14
V-LES DIFFERENTS SYSTEMES DE GROUPES SANGUINS ERYTHROCYTAIRES 16
A/SYSTEME ABO ET ASSOCIES 16 A 1) Système ABO 16
A1.1) les antigènes du système AB0 16 A 1.1.1) Les antigènes courants 16 A 1.1.2) Les variantes de A 1 et A2 17
A 1.1.3) La notion de phénotype et de génotype 17
A 1.1.4 )Les variantes faibles de A et de B 20 A 1.2) Les anticorps du système ABO 20
A 1.2.1) Structure générale des immunoglobulines 20
A 1.2.2) Les anticorps réguliers ou naturels 22 A 1.2.3) Les anticorps irréguliers ou immuns 22
A1.3) Techniques de phénotypage érythrocytaire ABO 23
A 1.3.1) Détermination de l'antigène globulaire par l'épreuve de BERTH-VINCENT 24
A 1.3.1.1) Principe 24 A 1.3.1.2) Mode opératoire 24
A 1.3.2) Détermination de l'antigène sérique par l'épreuve de SIMONIN 27
A 1.3.2.1) principe 27 A 1.3.2.2) Mode opératoire 27
A 1.3.3) Les difficultés de groupage ABO A2/ Les associés du système ABO 30
A2.1) Système Hh 30 A2.2) Système Lewis 30 A2.3) Les antigènes li 30 A2.4) système P 32
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Mise au-point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
B/ LES AUTRES SYSTEMES IMMUNOGENES DES GROUPES SANGUINS ERYTHROCYTAIRES 32
81/ Système Rhésus 32 B1.1) Les antigènes Rhésus 32
B1.1.1) L'antigènes O 33 B 1. 1. 2) Les autres antigènes du système
Rhésus 33 B1.2) les anticorps anti-Rhésus 34 B1.3) Détermination des antigènes Rhésus 35
B 1.3.1) Détermination de !'antigènes D ou Rhésus standard 35
B 1.3.2) Recherche de l'antigène 81 .3.3) Détermination des autres ou 36
Antigènes 37 82/ Système Kell. 38
B2.1/ Les antigènes du système Ke/1 38 B2. 2/ Les anticorps du système Ke/1 38
83/ système Duffy 38 84/ système Kidd 39 85 /Systeme MNSs 39 86/ Autres systeme 39
C/ DETERMINATION DES AUTRES SYSTEMES 39 VI- LES DIFFERENTES FREQUENCES OBSERVEES DANS LES
PHENOTYPES ABO EN COTE D'IVOIRE 40 VII- LES APPLICATIONS 42
A/ EN IMMUNOLOGIE MEDICALE 42 A1/ transfusions sanguine 45 A2/ Les greffes tissulaires et les transplantations 45
B/ EN PATHOLOGIE HUMAINE 45 81/ Association groupes sanguins et pathologies 45 82/ Transfusion sanguine 45
B2.1) Hémolyse intra vasculaire 46 82.2) Hémolyse extra vasculaire 46 B2.3) Sécurité transfusion ne/le 46
83/ Maladie hémolytique du nouveau né 47 C/ EN GENETIQUE HUMAINE 48
DEUXIEME PARTIE : NOTRE ETUDE 49 //-CADRE DEL 'ETUDE 50 Il- MA TER/EL ET METHODE 50
A/TYPE D'ETUDE 50
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
8/ POPULATION D'ETUDE 50 1-Critère d'inclusion 51 2- Critère de non inclusion 51 3-Recrutement des sujets 51 4-Taille de l'échantillon 51
Cl DETERMINATIONS 52 1-Phenotypage érythrocytaire ABO 52
1.1-Matériel et réactifs 52 1.2-Mode opératoire 52 1.2.1) Epreuve globulaire ou technique de BERTH-
VINCENT sur plaque d'opaline 53 1.2.2) Epreuve sérique ou technique de Simonin sur
plaque d'opaline 54 2-Recherche de la performance des anticorps anti-A,
anti-B et anti-AB dans les plasmas sélectionnés 54 2.1- Matériel et réactifs 54 2. 2- Méthode 55 2.3- Mode opératoire du test de performance 56
3- Recherche des anticorps immuns : (recherche d'agglutinines irrégulières) 60
3.1- Test en milieu salin 603.1.1- Matériel et reactifs 60
3.1.2- Mode opératoire 60 3.2- Le test de COOMBS indirect 61
3.2.1- Matériel et réactifs 61 3.2.2- Mode opératoire 60
D/CONSTITUTION DES POOLS DE PLASMAS ET LEUR TRAITEMENT 63
1-Stérilisation 64 1. 1- Matériel et réactifs 64 1.2- Mode opératoire 64
2- Recalcification 65 2. 1- Matériel et réactifs 65 2. 2- Mode opératoire 65
3- Filtration 65 4- Concentration 66 5- la coloration 66
E/ ETUDE COMPARATIVE DU GROUPAGE ABO PAR NOS REACTIFS ET LES REACTIFS DU COMMERCE 66
F/ TRAITEMENT DES DONNEES 66
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
Ill/RESULTATS 68 IV/ ANALYSE ET COMMENTAIRES DES RESULTATS 85 VI PERSPECTIVES 98 VII RECOMMANDATIONS 100
CONCLUSION 102 REFENCES BIBLIOGRAPHIQUE 104 SERMENT D'HYPPOCRATE 107
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans Le système ABO
Les groupes sanguins érythrocytaires sont des allo-antigènes
de la membrane des globules rouges. Ce sont des marqueurs
allogéniques, génétiquement induits et génétiquement
indépendants les uns des autres. Ces groupes érythrocytaires, sont
groupés en systèmes. De nos jours, plus d'une vingtaine de systèmes de groupes
sanguins érythrocytaires ont été identifiés. Leur découverte a
révolutionné l'univers de la thérapeutique transfusionnelle,
permettant ainsi d'éviter les nombreux accidents enregistrés
pendant la période de leur méconnaissance.
Certains systèmes, notamment les systèmes ABO, Rhésus, Kell et
Duffy présentent un intérêt capital en immunologie médicale. Les
antigènes des systèmes ABO et Rhésus demeurent les plus
importants en thérapeutique transfusionnelle car, une transfusion
incompatible dans ces systèmes entraîne inéluctablement des
accidents plus ou moins graves. Le système ABO qui fait l'objet de notre étude est caractérisé par
l'existence dans le plasma de l'individu, des anticorps spécifiques
des antigènes absents de la membrane du globule rouge. Ces anticorps sont dits naturels car il est difficile de prouver
l'existence d'une immunisation préalable à leur développement.
Ils sont dits aussi réguliers parce qu'ils sont toujours présents chez
les individus et sont aussi spontanément agglutinants ; c'est cette
propriété qui a été utilisée pour leur mise en évidence. Ainsi un
individu du groupe B possède-t-il de façon naturelle des anticorps 2
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans Le système ABO
anti-A, les sujets du groupe A possèdent quant à eux des anticorps
anti-B et les sujets du groupe O ont à la fois les anticorps anti-A et
anti-8, quand les sujets du groupe AB n'en possèdent aucun.
Le phénotypage érythrocytaire ou groupage sanguin dans le
système ABO se fait par la mise en évidence, simultanément, des
antigènes sur la membrane érythrocytaire et des anticorps naturels
correspondant dans le plasma ou le sérum, selon deux techniques :
une technique sérique ou technique de SIMONIN MICHON et un
test globulaire ou technique BETH-VINCENT-TZANK. Les anti
sérums utilisés peuvent être de type monoclonal, produits par la
technique des hybridomes de KÔHLER et MILSTEIN [8] ou de type
polyclonal à partir du plasma humain [2, 13]. L'utilisation de plasma humain comme réactif, nécessite un
traitement préalable tenant compte de certains critères de
performance tels l'avidité et l'intensité de l'agglutination.
La plupart des pays africains dont la Côte d'Ivoire importent chaque
année des quantités importantes de réactifs de groupages sanguins
produits par des multinationales. Les difficultés
d'approvisionnement et le coût élevé de ces produits sanguins à
caractère diagnostic constituent l'une des entraves majeures à un
fonctionnement correct et régulier des laboratoires d'immunologie
et hématologie en Côte d'Ivoire.
A titre d'exemple : au CHU de Cocody, les dépenses
d'approvisionnement en réactifs de phénotypage érythrocytaire
dans le système ABO se chiffrent chaque année à 1.386.000F. 3
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Dans un souci économique pour nos pays Africains en général et
pour la Côte d'Ivoire en particulier, qui va entrer dans une période
post-crise, la possibilité d'utilisation d'anticorps polyclonaux comme
réactifs serait très avantageux.
Il nous est apparu donc nécessaire de mettre au point et affiner la
technique de production de tels anticorps polyclonaux à partir des
plasmas humains, pour le phénotypage érythrocytaire, dans le
système ABO.
• Objectif général Nous nous sommes ainsi fixés comme objectif général, la maîtrise
de la technique de production des anticorps polyclonaux anti-A,
anti-B et anti-AB ; la finalité étant de mettre à la disposition des
laboratoires de nos formations sanitaires, des réactifs de
phénotypage d'antigènes érythrocytaires dans le système ABO.
• Objectifs spécifiques
Les objectifs spécifiques sont:
1- établir les critères de performance que sont l'avidité,
l'intensité, le titre et le score des plasmas sélectionnés.
2- contrôler la spécificité des plasmas sélectionnés.
3- rapprocher les caractéristiques de nos anticorps de
celles des réactifs vendus dans le commerce.
4 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Pour atteindre ces objectifs, notre travail s'articulera autour du plan
suivant, après cette introduction: I-LES DONNEES DE LA LITTERATURE
II-NOTRE TRAVAIL
III-RESULTATS
IV-ANALYSE ET COMMENTAIRES
V-PERSPECTIVES
VI-RECOMMANDATIONS
CONCLUSION
5Yapi Yapi Aurélien Doctorat e11 Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
JPJPŒMXJEJPŒ JPAR1rXJE:
DONNEE§ DE LA LiîîERATIJRJE
6 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
1- DEFINITION DES GROUPES SANGUINS ERYTHROCYTAIRES
[4, 5]
La notion de groupes sanguins érythrocytaires est fondée, sur
le fait qu'il existe, sur les hématies humaines et sur les cellules de
divers tissus de l'organisme, des substances antigéniques
appelées, facteurs de groupes ou antigènes érythrocytaires ou
agglutinogènes. Ces substances sont de conditionnements
génétiques, c'est pourquoi elles sont transmises héréditairement.
Ces molécules sont immunogènes, ce qui explique leur désignation
sous le vocable d'antigènes de groupes sanguins.
11- HISTORIQUE
L'histoire des groupes sanguins remonte un peu plus loin dans
le temps, quand déjà, HARVEY a découvert le principe de la
circulation sanguine et qu'il a semblé logique de chercher a
introduire du sang dans les veines des malades, afin de les guérir
de leur maladie [7,10,15]. En 1900, LANDSTEINER observa que les hématies humaines
étaient agglutinées par le sérum de certaines personnes et non par
celui de d'autres. [10, 15] C'est la base de la découverte du
système ABO. Ceci impliquait l'existence d'Anticorps sériques
définissant au moins deux variétés d'antigènes érythrocytaires
majeurs, A et B. En 1902, ses élèves, DECASTELLO et STURLI ont décrit le
phénotype AB d'étendue plus réduite. En répétant l'expérience de
7 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
LANDSTEINER par le choix d'un échantillon de sang par groupe, la
réaction du sérum de chacun avec chaque échantillon de globules
rouges, a donné les résultats au tableau(!), où le signe ( +) signifie
qu'il s'est produit une agglutination et le signe (-) l'absence
d'agglutination.
8Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Tableau 1 : EXPERIENCE DE LANDSTEINER DANS LA
DECOUVERTE DES GROUPES SANGUINS [10,15]
GLOBULES ROUGES
SERUM 0 A B AB
0 - + + +
A - - + +
B - + - +
AB - - - -
9 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
Ces réactions s'expliquent par le fait que, les globules rouges
portent des substances agglutinables ou agglutinogènes (ou encore
facteurs de groupes), tandis que le sérum contient des substances
agglutinantes ou agglutinines.
Les agglutinogènes sont appelés substances A et B et les
agglutinines sont appelées substances anti-A et anti-B. La
présence de l'un des facteurs de groupes sur le globule rouge
implique l'absence dans le sérum de l'agglutinine correspondante.
Mais, quand les globules rouges ne portent pas le facteur,
l'agglutinine correspondante se trouve toujours dans le sérum. Le
sérum de l'individu n'agglutine pas ses propres globules rouges.
C'est en 1910 que VON DUNGERN et HIRSZFERD démontrèrent
que le groupe A comprenait en réalité deux variétés [5].
-Une variété « A forte » appelé A1, qui agglutine avec la
même intensité avec tous les sérums anti-A, pourvu qu'ils soient
d'un titre élevé.
-Une variété « A faible » appelé A2, qui agglutine avec les
sérums anti-A mais n'agglutine pas avec I'anti-Ar.
10Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU Il: VARIANTES DE A [5]
Hématie A1 Hématie A2
Anti-A1 + -
Anti-A + +
11 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Le système ABO ainsi établi est le premier système génétique
connu. Ce système se caractérise par sa transmission héréditaire. Il
a permis la classification des individus dans l'espèce humaine ;
d'où la notion d'allo-antigènes et d'allo-anticorps.
En dehors du système ABO d'autres systèmes ont été décrits.
En 1927, LANDSTEINER et LEVINE immunisent des animaux avec
des hématies humaines. Ils découvrent alors le système MNSs et P
se transmettant également sur le mode héréditaire [10, 15].
En 1940, LANDSTEINER et WIENER, par immunisation de lapins
par le sang de singe Macacus Rhésus découvrent l'antigène Lw [9,
10, 15]. Mais c'est en 1939 que LEVIN E accomplit des progrès
décisifs pour l'immuno-hématologie naissante, en montrant la
possibilité d'immunisation à l'intérieur d'une même espèce, et ce
par l'apport d'hématies d'un autre individu ; c'est l'allo
immunisation.
En effet, LEVINE met en évidence dans le sérum d'une femme
venant d'accoucher d'un enfant atteint d'érythroblastose fœtale, un
anticorps reconnaissant des antigènes de membrane des hématies
du père ainsi que ceux de l'enfant ictérique.
L'antigène ainsi reconnu au niveau des hématies humaines est au
début confondu avec l'antigène Lw (antigène LANDSTEINER et
WIENER) découvert après hetero-immunisation de lapin ou de
cobaye par les hématies de Macacus Rhésus ; d'où le nom de
Rhésus qui lui a été donné à tort [10, 15].L'érythroblastose fœtale
apparaît liée à !'allo-immunisation de la mère Rhésus négatif contre 12
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
l'antigène Rhésus dont le fœtus a hérité de son père. Il ne s'agit
plus de la formation spontanée d'anticorps naturels comme dans le
système ABO de LANDSTEINER, mais de la réaction classique
d'un organisme dépourvu d'un marqueur génétique, à l'introduction
de ce marqueur. Très rapidement, les techniques de recherche des anticorps
anti-Rhésus ont été mises au point, en particulier la réaction
imaginée par COOMBS, MOURANT et RACE en 1945 [10,15]
Ces techniques sont alors appliquées de façon systématique à
l'étude des sérums des malades polytransfusés ou des multipares,
dans le but de rechercher la présence d'anticorps permettant de
définir d'éventuels allo-antigènes nouveaux. Ainsi sont découverts, sous l'impulsion de RACE et SANGER,
de très nombreux antigènes identifiant de nouveaux systèmes de
groupes sanguins, notamment les systèmes Kell, Duffy et Kidd
[10,11,12,15].
Ces découvertes se sont poursuivies jusqu'aujourd'hui où, vingt-six
systèmes de groupes sanguins érythrocytaires indépendants sont
identifiés [1 O]. Ill -BASES GENETIQUES
Les groupes sanguins érythrocytaires se répartissent en systèmes
dont chacun constitue un ensemble indépendant d'antigènes
génétiquement contrôlés.
C'est-à-dire :
13 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
- que dans la transmission des caractères des parents aux
enfants, les groupes sanguins s'ignorent totalement les uns les
autres. Ils résultent d'une ségrégation indépendante. Aussi chez un
sujet ABMN, le caractère A est transmis avec la même probabilité
soit avec le caractère M, soit avec le caractère N. Les systèmes
ABO et MN sont donc deux ensembles indépendants.
- que ces caractères sont d'ordre immunologique ; ils peuvent
induire la formation d'Anticorps chez le sujet qui ne les possède
pas. Ils sont identifiés grâce à ces anticorps.
- que ces substances sont le résultat du fonctionnement des gènes
de la membrane du globule rouge. Les gènes qui les commandent
sont situés sur des chromosomes connus : Les gènes du système
ABO sont situés sur le chromosome N° 9, quand ceux du système
Rhésus se trouvent sur le chromosome N° 1 et ceux des systèmes
Duffy et P respectivement sur les chromosomes N° 1 et N° 6. Les
systèmes Rhésus et Duffy dont les gènes sont situés sur le même
chromosome sont dits syngéniques [10, 15]. La synthèse de certains de ces antigènes s'effectue au sein de
l'érythroblaste. La substance Lewis est un Antigène soluble venu du
plasma, de la salive et des autres sécrétions et qui, secondairement
est absorbée sur la membrane du globule rouge. [10, 15] IV- BASES BIOCHIMIQUES
Les antigènes de groupes sanguins érythrocytaires sont des
produits des gènes. Leur structure biochimique est connue. Il s'agit
de protéines pour la plupart. Il en existe qui sont des glycolipides 14
Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érytlirocytaires dans le système AB 0
comme la substance H, des sphingolipides comme l'antigène Lewis
plasmatique.
D'autres sont des glycoprotéines [10, 15].C'est la fraction
glucidique qui porte la spécificité des groupes sanguins.
Ces antigènes ne sont pas des produits primaires des gènes ABO,
H ou Lewis. [10, 15]. Les produits primaires sont des enzymes. En
effet, ces antigènes sont le résultat de l'activité spécifique
d'enzymes spécialisés, appelés glycosyltransferases [10, 15]. Pour la plupart des gènes, on connaît l'enzyme spécifique
Ainsi:
• La 3-Alpha-galactose transférase pour l'antigène B
• La 3-0-N-acetyl-galactosyl transférase pour l'antigène A
• La 2-Alpha fucosyltransferase pour l'antigène H
• La 4-2-Alpha fucosyltransferase pour Leb
• La 4-Alpha fucosyltransferase pour Lea
Lorsque l'antigène est une glycoprotéine on a environ 80% de
polysaccharide sur lesquels se greffe un faible pourcentage de
protéine.
Pour chacun de ces antigènes de groupe, il existe un sucre immuno
dominant connu. Ce sucre est
o Le N-acetyl-galactosamine pour la substance A
o Le Galactose pour la substance B
o Le Fucose en 4 pour la substance Lewis
o Le Fucose en 2 pour la substance H.
15 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
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Les études biochimiques ont permis d'élucider de façon définitive,
les relations existant entre les systèmes Lewis, Hh, li (la substance
1 est présente sur les substances précurseurs ABH) qui
fonctionnent donc en association avec le système ABO.
V- LES DIFFERENTS SYSTEMES DE GROUPES SANGUINS
ERYTHROCYTAIRES
A/ LE SYSTEME ABO ET ASSOCIES
A1) LE SYSTEME ABO
A1.1) Les antigènes du système ABO
A1.1-1) les antigènes courants [6]
Les phénotypes ABO ou groupes sanguins ABO sont définis
par l'existence concomitante d'antigènes membranaires et
d'anticorps naturels plasmatiques. Il s'agit d'un système pouvant se
définir d'une part, par des antigènes, d'autre part, par des
anticorps.
Deux antigènes peuvent être reconnus à la surface des hématies :
les antigènes A et B qui définissent quatre groupes sanguins :
~ Le Groupe A, si l'antigène A est seul présent sur les
hématies du sujet. ~ Le Groupe B, si l'antigène B est seul présent.
~ Le Groupe AB, si les antigènes A et B sont tous les deux
présents ~ Le Groupe 0, si aucun des antigènes A ou B n'est présent.
16 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A1.1-2) les variantes A1 et A2 Cette subdivision en phénotype A1 et A2 conduit à l'identification de
six (6) phénotypes courants A1 ; A2 ; B ; A1 B ; A2B ; 0, dans le
système ABOA1.1-J) Notion de phénotype et de génotype
Le phénotype se définit comme l'expression visible du groupe
sanguin ; c'est-à-dire, le caractère visualisable par les techniques
de détermination.
Le génotype est l'expression non visualisable par les techniques de
détermination et correspond à la somme du patrimoine génétique
transmis par les deux parents (Tableau IV)
17Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
TABLEAU 111 : EXPERIENCE DE LANDSTEINER [10, 15]
GROUPES Antigène Anticorps
globulaire plasmatique
A A Anti-B
B B Anti-A
AB AB Aucun
0 Aucun Anti-A Anti-B
18 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU IV : GENOTYPES ET PHENOTYPES DU SYSTEME ABO [6]
PHENOTYPES GENOTYPES POSSIBLES CORRESPONDANTS
A1 A1 A1 A1 A2 A10
A2 A2A2 A20
B B B BO
A1B A1B
A2B A2B
0 00
19Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A1.1-4) les variants faibles de A et de B Les phénotypes faibles, sont des sujets dont les hématies ont, dans
les conditions habituelles de groupage, une réactivité inférieure à
celle de l'hématie A2. Ce sont A3, Ax, Am, Ael, B3, Bx, Bm, Bel [5].
A1.2) les anticorps du système ABO Les anticorps anti-érythrocytaires sont comme tout type d'anticorps
des immunoglobulines dont la structure est bâtie sur un modèle de
base commun qui est celui des lgG
A1.2-1) structure générale des immunoglobulines
Les molécules d'immunoglobuline définissant cinq classes (lgG,
lgA, lgM, lgD, lgE) comportent toutes 4 chaînes polypeptidiques
groupées en 2 paires de tailles inégales :
- D'une part, deux chaînes lourdes dites H (Heavy)
identiques, 2 gammas, 2 alphas, 2 mus, 2 deltas, 2 epsilons
respectivement pour les lgG, les lgA, les lgM, les lgD et les
lgE.
- D'autre part, deux chaînes légères dites L (Light) identiques,
soit 2 kappa soit 2 lambda.
Les chaînes lourdes sont unies entre elles par un ou
plusieurs ponts dissulfures intercartenaires. Les chaînes
légères sont unies aux chaînes lourdes par un pont
dissulfures intercartenaires très proche de l'extrémité
carboxyle terminale.
20 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
ITES Ac Régionvariable
l .xtrcmité 112
/onecharnicre
Rcsion e, constante
xtrémité NH2
Fab
Fe
Extrémité - H
Figure 1 : Structure de base des immunoglobulines [3]
21 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Les anticorps se divisent en anticorps réguliers ou naturels et en
anticorps irréguliers ou immuns.
A1-2-2) les anticorps réguliers ou naturels Ils existent dans le sérum humain de façon constante sans
stimulation antigénique connue. Ils sont toujours présents dans le
sérum du sujet, dès que l'antigène correspondant est absent sur la
membrane du globule rouge. Ces anticorps ne sont pas présents à
la naissance, mais apparaissent progressivement chez l'enfant
entre O et 6 mois. Les anticorps naturels appartiennent à la classe
des lgM et sont capables d'agglutination spontanée in vitro.
A1.2.3) Les anticorps immuns ou irréguliers A côté des anticorps naturels, peuvent exister des anticorps
immuns anti-A ou anti-8, fortement hémolysants, constitués à la
fois d'lgG et lgM mais à prédominance lgG. Ces anticorps immuns
peuvent apparaître :
;;.,, par hétéro-immunisation due à des substances d'origine
animale ou bactérienne, riches en substance A (la substance B
n'est pratiquement jamais en cause).
Les vaccinations anti-diphtérique et anti-tétanique peuvent induire
une telle immunisation, du fait de la présence, dans leur milieu de
culture, de bacilles, d'extraits d'estomac de porc riche en substance
A.
;;.,, par allo-immunisation lors de la grossesse, si le sang du fœtus
est incompatible avec celui de la mère dans le système ABO, ou lors
d'une transfusion d'hématies incompatibles. Ces anticorps 22
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
apparaissent entre le 5e et 1 O" jour après la stimulation antigénique,
et persistent quelques semaines voire quelques mois après
l'immunisation. La détection de ces anticorps est d'un grand intérêt
pratique chez les donneurs de sang, car ils sont susceptibles
d'entraîner des accidents hémolytiques sévères.
A1-3) techniques de phénotypage érythrocytaire ABO [1 O] Le groupage sanguin repose sur la mise en évidence des antigènes
globulaires (Réaction de BETH VINCENT) et des anticorps
plasmatiques (réaction de SIMONIN), par une réaction
d'agglutination.
Au laboratoire des règles impératives sont à respecter. Il faut:
- réaliser en parallèle les épreuves globulaires et sériques,
- conduire les manipulations par deux techniciens différents
avec des réactifs provenant de lots différents.
Utiliser des réactifs témoins :
-Térnoin dit auto : sérum du malade plus globules rouges du
malade.
•Témoin dit allo: sérum du malade plus globules rouges de
phénotype O (mise en évidence éventuelle d'un allo anticorps)
• Témoin AB: sérum AB plus globules rouges du malade.
Les différentes épreuves s'effectuent à la température du
laboratoire.
Ces deux épreuves peuvent être réalisées sur plaque d'opaline, sur
plaque de verre, en tube ou sur gel. Nous décrivons dans la
23Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
deuxième partie notre étude, les deux épreuves sur plaque
d'opaline
A1.J-1) détermination de l'antigène globulaire par l'épreuve de BETH VINCENT
A1.3.1 -1) Le principe C'est une épreuve globulaire qui consiste à mettre en
évidence, des antigènes présents sur les hématies à partir
d'anticorps (antisérums) spécifiques anti-A et anti-B
A1.3.1 -2) Mode opératoire Épreuve globulaire en tube
Cette épreuve s'effectue en deux temps.
-Dans un premier temps, laver les hématies à tester trois fois à
l'aide de sérum physiologique à 9° / 00 et les mettre en suspension
globulaire à 5% ou à 2%.
-Le deuxième temps consiste à mettre respectivement dans trois
tubes à hémolyse bien identifiés, une goutte d'anti-sérum anti-A,
une goutte d'anti-sérum anti-B et une goutte d'anti-sérum anti-A+B.
-Une goutte d'hématies à tester en suspension 5% est ajoutée
dans chaque tube contenant l'anti-sérum.
-Mélanger par agitation puis une centrifugation pendant 30
secondes en 2000tr/min.
-Faire la lecture (recherche d'agglutination ou non)
24Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Interprétation
Lors des réactions en tube, la réaction est lue macroscopiquement
en agitant doucement les tubes de façon à détacher le culot
globulaire. Si les hématies se détachent en amas (agglutination),
avec un liquide de fond clair, la réaction est dite positive. Si
l'agitation redonne une suspension homogène, la réaction est
négative.
Epreuve globulaire en gel
Dans des micro-tubes contenant un gel, sont ajoutées une goutte
d'anti-sérum anti-A, une goutte d'anti-sérum anti-B, ou une goutte
d'anti-sérum anti-AB par tube et une goutte de la suspension
globulaire à 2%. La lecture se fait après 30min d'incubation suivie
d'une centrifugation à 3000 tr/min pendant 1 Omin.
Interprétation
La réaction est dite positive quand les hématies se trouvent au
dessus du gel. Elle est dite négative quand les hématies se
trouvent dans le fond des micros tubes.
25Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
î--A-~] B 1 D r1011: 1 W,l f'' H '.) Ir '1JI
•.. q("J 0 - (')C'Jg '-"
1-AHG AHG AHG
Figure 2 : résultat du groupage sanguin ABO par technique sur gel.
26 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A1.3.2) épreuve de SIMONIN A1.J-2-1) Le principe
Il consiste à mettre en évidence les anticorps naturels présents
dans le sérum à l'aide d'hématies tests A1, A2 et B.
A1.J-2-2) Mode opératoire
Épreuve en tube
-Laver trois fois les trois hématies tests A1 A2 et B en eau
physiologique.
-les mettre en suspension à 5%
-identifier trois tubes à hémolyse numérotés.
-ajouter par tube une goutte des hématies test à 5% (A1, A2, B)
-ajouter ensuite dans chaque tube contenant des hématies tests
une goutte du sérum à étudier.
-agiter pour mélanger et faire une centrifugation à 3000 tr/min
pendant une min.
-la lecture se fait par agitation douce du tube à hémolyse.
Après un mélange par agitation et une centrifugation de 1 min à
2000 tr/min, noter les agglutinations.
Interprétation
Dans les réactions en tube, la réaction est lue
macroscopiquement en agitant doucement les tubes de façon à
détacher le culot globulaire. Si les hématies se détachent en amas
27Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
(agglutination), la réaction est dite positive. Si l'agitation redonne
une suspension homogène, la réaction est négative.
Ce résultat du groupage n'est considéré comme valable que
s'il y a une concordance entre les épreuves sériques et globulaires,
et entre les deux techniciens.
A1.3.3) Difficultés de groupage
Dans certaines conditions, l'identification des groupes dans le
système ABO n'est pas aisée. Ainsi on peut noter :
- des cas de double population ou les agglutinats apparaissent sur
un fond rosé constitué par les globules rouges non agglutinés :
Cas rencontrés au cours des leucémies ou après la transfusion de
sang O à un sujet A ou B.
-le phénomène de rouleau érythrocytaire où les hématies
sédimentent en piles d'assiettes.
-Le desséchement de la goutte qui se craquelle.
28 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
Tableau V: RESULTAT DU GROUPAGE SANGUIN ABO PAR LES EPREUVES DE BETH VINCENT ET SIMONIN.
EPREUVE DE EPREUVE DE BETH VINCENT SIMONIN GROUPE Serum Serum Serum Serum Serum Globule Globule Globule
test anti test anti test anti test anti test anti rouge rouge rouge
A B AB A1 H test A1 Test A2 Test B
A1 + - + + - - - +
A2 + - + - + - - +
B - + + - + + + -
A1B + + + + - - - -
A2 B + + + + - - -
0 - - - - + + + +
29 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
A2) Les associés du système ABO A2-1) Système Hh [4]
Le système Hh est constitué de deux allèles : L'allèle H de grande
fréquence et l'allèle exceptionnel h considéré comme amorphe.
L'allèle H est responsable de la synthèse de l'enzyme 2-a-L-fucosyl
transférase dont le rôle est de transporter un Fucose sur un
substrat initial, donnant ainsi naissance à la substance H, elle
même substrat de A et B.
L'antigène H est très vite apparu comme ubiquitaire, mais son
expression est variable chez les individus selon le groupe sanguin
auquel ils appartiennent. La quantité de H est très importante sur
les hématies 0, puis par ordre décroissant sur les hématies A2, B,
A2B, A1B, A1.
Les phénotypes déficitaires en H sont exceptionnels (il existe
seulement quelques dizaines de famille au monde) et ils sont liés à
l'existence en double dose du gène h : ce sont les phénotypes
Bombay qui se caractérisent également par l'existence d'un
anticorps naturel Anti-H dans le plasma. Du fait de ce déficit en
substance H la traduction des gènes du système ABO normalement
présents dans les érythroblastes est inhibée. Les individus Bombay
n'expriment pas d'antigènes A ni B mais leurs sérums contiennent
des anticorps naturels anti-A et ou anti-B.
A2-2) Système Lewis [6] Il existe dans la salive une substance appelée substance LEWIS
dont la présence est également contrôlée par un système
------------------------- 30Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
génétique particulier à deux allèles : Le le. Le gène Le induit la
production d'une enzyme la 1-4-a-L-fucosyl transférase, qui
détermine l'apparition de l'antigène soluble Lewis a (lea), chez les
sujets possédant le gène Se (sujet dit sécréteur) et H. L'enzyme
produite par les gènes Le, entre en compétition avec l'enzyme H
pour convertir le précédant substrat (Lewis a en substance Lewis
b ). L'antigène Lewis est un antigène soluble, qui s'absorbe
secondairement à la surface des hématies, définissant les
phénotypes érythrocytaires Le (a+) et Le (a-).
Les anticorps anti-Lewis les plus fréquents et les plus importants
sont les anticorps anti-Le" Le'', Ce sont des lgM d'origine naturelle
qui réagissent à basse température. Comme ces anticorps sont
normalement naturels, ils peuvent être dangereux à la première
transfusion. Il est possible que le système Lewis joue un rôle dans
le rejet des transplants rénaux. [1 O] A2.3) Antigènes li [6]
Ils représentent une exception parmi les antigènes de groupes
sanguins humains, car ils sont définis par des auto-anticorps. De
plus ils ne constituent pas un véritable système de groupe sanguin
car, la substance i apparaît comme le substrat de 1.
La plupart des anti-1 ou anti-i puissants sont des auto-anticorps
froids de classe lgM monoclonales trouvées dans les maladies
chroniques des agglutinines froides (hémopathies malignes). Ils
sont très largement présents dans les tissus et dans les liquides
biologiques (salive, liquide amniotique). 31 ----------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Les antigènes I et i présentent des relations avec les antigènes
ABH et P1.
A2-4) Système P [6]
Il a été découvert par LANDSTEINER et Levine en 1927 au
cours des travaux qui permirent la découverte du système MNSs. Il
est composé de trois phénotypes P, P1 et P2.
8) LES AUTRES SYSTEMES DE GROUPES SANGUINS
ERYTHROCYTAIRES.
Ce sont les systèmes Rhésus, Kell, Duffy, Kidd et MNSs dits
immunogènes dont certains antigènes peuvent être à l'origine de
conflits immunologiques transfusionnels ou foeto-maternels.
Suivant leur pouvoir immunogène, ces antigènes peuvent être
classés par ordre décroissant: l'antigène D, l'antigène Kell,
antigène C et E, antigène Fya, antigène Jk" et ensuite les
antigènes S et s.
81) Système Rhésus [6]
Ce système est d'un intérêt considérable en transfusion
sanguine et en obstétrique, de par l'immunogénicité remarquable
de ces antigènes notamment l'antigène D.
81-1) les antigènes Rhésus
A ce jour plus de 40 antigènes Rhésus ont été décrits. Ce qui
démontre sa complexité. Nous nous limiterons cependant aux cinq
principaux antigènes qu'il convient de connaître, c'est-à-dire les
antigènes D, C, c, E, e.
32 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
81.1-1) Antigène D
L'allo-anticorps de Levine discrimine à la surface des hématies un
antigène que l'on a dénommé D. L'on appelle par convention
Rhésus positif, les 85% de sujets dont les hématies sont
agglutinées par cet allo-anticorps et qui possèdent donc
l'antigène D, et Rhésus négatif les 15% d'individus dont les
hématies sont dépourvues de cet antigène.
Il existe deux variantes de l'antigène D [4] - Le D faible ou ou regroupe de manière générale les diminutions
d'expression antigénique D de nature quantitative, associées à un
phénotype Rhésus positif. Le sujet porteur de D faible, doit être
considéré comme un sujet Rhésus positif qu'il soit donneur ou
receveur de sang. - Le D partiel est réservé au rare individu o+ capable de développer un allo-anticorps anti-D à la suite d'une immunisation par
transfusion ou grossesse. Ces allo-anticorps anti-D réagissent avec
toutes les hématies D+ normales sauf celles de certains sujets D
partiels. 81-1-2) autres antigènes du système Rhésus [6]
Après la découverte de l'anticorps anti-Rhésus, ont été mis
en évidence d'autres anticorps qui n'agglutinent pas dans les
mêmes proportions que l'anti-D et qui reconnaissent de ce fait des
déterminants antigéniques autres que le D.
Ainsi ont été décrits les antigènes suivants :
L'antigène C présent chez 70% des individus 33
Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
L'antigène E présent chez 30% des individus
L'antigène c présent chez 80%des individus
L'antigène e présent chez 98% des individus.
On a observé, de plus, des associations préférentielles dans la
distribution de ces antigènes. Ainsi les antigènes C et E se
rencontrent plus fréquemment chez les sujets Rhésus positifs que
chez les sujets Rhésus négatif. Il convient de noter que les
antigènes c et e sont antithétiques respectivement de C et E, ce qui
signifie que tout individu C négatif est nécessairement c positif et
inversement ; il en est de même pour les antigènes E et e.
81.2) Les anticorps anti-Rhésus
Ces anticorps ont un optimum thermique élevé. Ils ne
réagissent qu'à la température de 37°C. Contrairement aux
anticorps anti-A ou anti-B dits naturels du système ABO, la grande
majorité des anticorps dans le système Rhésus, résulte d'une
réponse immunitaire induite par une grossesse ou une transfusion
sanguine incompatible. L'antigène D est le plus immunogène, suivit
des antigènes E et c. 11 est responsable de la majorité des
accidents immunologiques graves au cours de la maladie
hémolytique par immunisation fœto-maternelle du nouveau né et
des transfusions incompatibles. La forte immunogénicité de
l'antigène D commande le respect de la compatibilité Rhésus entre
le donneur et le receveur en pratique transfusionnelle.
Les autres antigènes du système Rhésus sont significativement
moins immunogènes et l'apparition d'anticorps est donc moins 34-------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
fréquente après une transfusion ou une grossesse incompatible.
Cependant la fréquence d'immunisation n'est pas négligeable et
leur présence contre-indique toute transfusion incompatible pour
chacun des antigènes C, E, e, c.
Il est donc important de respecter la compatibilité pour les cinq
antigènes du système Rhésus dans les transfusions de globules
rouges, spécialement chez les patients de sexe féminin, avant la
ménopause et dans les pathologies impliquant des transfusions
répétées comme dans la drépanocytose, les insuffisances rénales
chroniques.
81.3) Détermination des antigènes Rhésus 81.3.1) Détermination de l'antigène D ou Rhésus
standard Cette détermination peut s'effectuer sur plaque chauffante
(Rhesuscop) ou en tube.
MODE OPERATOIRE
• Méthode sur plaque - Le sang à tester est prélevé sur anticoagulant, de préférence
l'EDTA.
- Sur la plaque chauffante à 37°C , on dépose une goutte de sérum
test albumineux anti-D
- On ajoute une goutte de globule à tester
-On mélange les deux gouttes à l'aide du fond d'un tube à
hémolyse,
35 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
- On Balance lentement la boite chauffante autour de son grand
axe.
-on effectue la lecture au bout de trois minutes.
INTERPRETATION L'agglutination doit être nette et apparaître au bout d'une ou deux
minutes maximum.
• Méthode en tube
-On lave trois fois les hématies à l'aide de sérum physiologique et
on les remet en suspension à 5% dans un tube à hémolyse bien
propre -On dépose dans un autre tube à hémolyse, une goutte de sérum
test anti-0.
-On ajoute une goutte de la suspension globulaire à 5%
-On incube au bain marie à 37°C pendant 20min, puis on centrifuge
à 2000tr/min pendant une minute.
-On incube à nouveau pendant 3 min à 37°C. -On effectue la lecture par agitation douce du tube à hémolyse.
INTERPRETATION
L'agglutination est habituellement nette. Si la réaction est douteuse ou négative, il est alors nécessaire de
faire la recherche d'un antigène faible le ou par exemple.
81.3.2) Recherche de l'antigène Du La présence de l'antigène ou sur les hématies peut parfois être
suspectée sur la constatation d'agglutination très fine et d'apparition
36---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
tardive avec le sérum anti-0. La recherche de l'antigène ou est effectuée par la réaction de Coombs indirect.
MODE OPERATOIRE
-On Lave trois fois les hématies à l'aide de sérum physiologique, on
les remet ensuite en suspension à 5% dans un tube à hémolyse
bien propre.
-On dépose dans un autre tube à hémolyse une goutte de sérum
test anti-0.
-On y ajoute une goutte de la suspension globulaire à 5%,
-On homogénéise puis on incube au bain marie, à 37°C, pendant
45 min ou 1 heure.
- On procède à trois lavages après l'incubation et on rejette
totalement l'eau du troisième lavage.
- On y ajoute une goutte d'anti-globuline polyvalente, on remet le
tout en suspension puis on centrifuge à 2000 tr pendant 1 min.
-On effectue la lecture en agitant légèrement le tube à hémolyse.
INTERPRETATION
La présence de l'agglutination témoigne de la présence de
l'antigène ou 81.3.3) Détermination des autres antigènes
Cette détermination est effectuée avec des anti-sérums test
monospécifique anti-C, anti-E, anti-c, anti-e. Elle se fait par la
méthode sur plaque chauffante, en milieu albumineux, avec des
anticorps incomplets ou en tube, en milieu salin, avec des anticorps
complets. 37
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
82) Système Kell [4] Le système Kell est le plus immunogène après le système Rhésus.
82.1) les antigènes du système Kell Le système Kell comporte deux antigènes principaux Kp8 et Kp",
portés par une glycoprotéine membranaire dont l'expression est
restreinte à la lignée érythrocytaire. Le système Kell est très
important en pratique transfusionnelle, du fait de la forte
immunogénicité de l'antigène Kp8• Il vient après l'antigène D. Mais
contrairement à ce dernier, l'antigène Kp8 présente une faible
fréquence dans les populations noires. Il a été noté des fréquences
de 7,3%au Bénin et 1,96% en Cote d'Ivoire. [4] 82.2) Les anticorps du système Kell
Ces anticorps sont de nature immune. Les anticorps Anti-K sont
fréquents et dangereux. Ils peuvent être responsables d'accidents
hémolytiques post-transfusionnels et de maladies hémolytiques du
nouveau né.
83) Le système Duffy [4] Ce système est défini par l'existence de deux antigènes
antithétiques Fy8 et Fy. L'antigène Fy8 est fortement immunogène.
Il arrive après les antigènes D, K, C et E. L'allo-immunisation par
l'antigène Fy8 produit un anticorps de classe lgG actif à 37°C et
responsable d'accidents transfusionnels ainsi que de la maladie
hémolytique du nouveau né.
Le système Duffy est intéressant à un autre titre, en raison de la 38
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
résistance que présentent les sujets porteurs du phénotype Fy ( a·
b +), à l'infestation par le Plasmodium vivax, agent du paludisme.
Ceci est le cas de la majorité des sujets de race noire. [14] 84) Système kidd [4]
Il est composé de deux antigènes Jk" et Jkb. Seul l'antigène
Jk8 est incriminé dans l'allo-immunisation et semble être aussi
immunisant que l'antigène Fy8•
Bs) Système MNSs [4] Il est composé de quatre antigènes M, N, Sets. Les antigènes
M et N sont antithétiques, de même que S et s. Le système M, N,
S, s est particulièrement utile dans les études de ségrégation
raciale et en recherche de paternité.
Bs) Autres systèmes D'autres systèmes érythrocytaires sont identifiés. Ils ont pour
la plus part un intérêt dans la recherche médicale. Ce sont entre
autre : -Le système LUTHERAN [6, 10, 15] avec deux antigènes Lu8 et Lu''-Le système DIEGO [15] qui est limité aux populations
mongoloïdes. C) DETERMINATION DES AUTRES SYSTEMES
Il s'agit des systèmes : Kell avec recherche des antigènes K, Kp8, Kpb
Lewis avec recherche des antigènes Le8 l.e"Duffy avec recherche des antigènes Fya Fyb
39---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclouaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Lutheran avec recherche des antigènes l.u" Lu
Kidd avec la recherche des antigènes Jk" Jk''
Diego, Au berger etc ...
Ces antigènes peuvent être déterminés par méthode d'agglutination
classique directe ou par test de Coombs indirect.
VI- LES DIFFERENTES FREQUENCES OBSERVEES DANS LES
PHENOTYPES ABO EN COTE D'IVOIRE
SEKA et coll. en 1987 [16] et SOMBO et coll. [17] en 1988 dans
deux études réalisées au CHU de Cocody à Abidjan sur les
groupes sanguins érythrocytaires dans les grands groupes
ethniques de Côte d'Ivoire rapportent:
- Une prédominance du groupe O avec une fréquence de
49,43%, suivi en seconde position du groupe B avec une fréquence
de 23, 11 %, le groupe A vient en troisième position avec 22,54%, le
groupe AB en quatrième position avec 4.9%.
- Dans les sous groupes de A, le phénotype A1 est beaucoup
plus rencontré avec une fréquence de 61,25% ; A2 apparaît dans
38, 75% des cas.
40 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU VI: POURCENTAGES GLOBAUX DANS LE
SYSTEME ABO [16]
Groupe Pourcentage des
phénotypes
,, A 1 ,, 13,8
A 22,54
, A2 8,73
B 23, 11
AB 4,10
0 49,43
41Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
VII-LES APPLICATIONS MEDICALES
Les applications des groupes sanguins érythrocytaires sont
nombreuses et diverses. Nous allons énoncer quelques unes,
notamment:
- en immunologie médicale
- en pathologie humaine
- en génétique humaine
A) EN IMMUNOLOGIE MEDICALE
A1) la transfusion sanguine
Le polymorphisme immunogénétique est le fondement de
l'application classique des groupes sanguins à l'immunologie
médicale. C 'est l'obstacle essentiel de toute tentative d'échange de
cellule d'un individu à l'autre. Les anticorps spécifiques naturels
constituent le premier obstacle. Ils rendent dangereuses les
transfusions non compatibles. Cette règle fondamentale de la
compatibilité est la base même de la transfusion sanguine qui est la
principale application des groupes sanguins et des greffes. Le
problème primordial de la transfusion sanguine est de garantir la
sécurité en empêchant l'incompatibilité, c'est à dire, la rencontre
entre un antigène donné et son anticorps spécifique.
Deux situations sont possibles : la plus sérieuse survient quand les
globules rouges du donneur introduisent l'antigène contre lequel le
receveur possède l'anticorps correspondant. Peuvent être
42Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
impliqués soit les anticorps naturels des systèmes ABO et parfois
Lewis, soit les anticorps immuns des systèmes Rhésus, Kell, Duffy,
Kidd et Ss. Ces systèmes sont à l'origine de la grande majorité des
réactions cliniques ou biologiques. Les globules rouges des
donneurs ne doivent introduire aucun antigène correspondant à
l'anticorps ou aux anticorps du receveur. Ce qui nous amène à
rappeler les règles fondamentales pour les transfusions
sanguines :(figure 3)
Le groupe O est aussi appelé donneur universel, le groupe AB,
receveur universel.
43---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une tee/inique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A ti A
/~ AB_. AB ~
~
it B
Figure 3 : règles fondamentales de la transfusion sanguine [6].
44 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
A2) Les greffes tissulaires et les transplantations [1 O]. Les antigènes A et B sont exprimés sur de nombreuses cellules de
l'organisme et en particulier, sur les structures vasculaires. Les
transplantations nécessitent un respect de compatibilité dans le
système ABO. DAUSSET et RAPPAPORT, grâce à la réalisation de séries de
greffes de peau, chez des volontaires sains, ont pu démontrer un
rejet accéléré dans les situations d'incompatibilité ABO. Ce rejet est
directement lié au titre d'anticorps anti-A et ou ariti-B.
8) EN PATHOLOGIE HUMAINE
81) Association groupe sanguin A80 et pathologies [11] Des associations significatives entre les groupes sanguins en
particulier ABO, et certaines maladies restent évidentes. C'est ainsi
qu'on note:
- Selon AIRD (1955), la relation entre les antigènes du système
ABO et le cancer de l'estomac s'établit par le rapport A/0, dans une
population donnée. Ce rapport est 12 fois plus élevé dans les
populations à risque que dans les autres, ce qui traduit une
prédisposition des sujets du groupe A au cancer de l'estomac.
-La relation entre ulcères duodénaux et sujets de groupe O non
sécréteurs. -L'anémie de Biemer prédominant chez les sujets de groupe A.
82) Transfusion sanguine
Quand, par suite d'une erreur humaine, la transfusion sanguine ne
respecte pas le schéma des compatibilités, les anticorps du ------------------------- 45Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
receveur vont détruire les globules rouges du donneur. Il s'ensuit
soit une hémolyse intravasculaire soit une hémolyse
extravascu lai re.
82.1) Hémolyse intravasculaire L'hémolyse intravasculaire intervient en présence d'anticorps
hémolysants tels ceux du système ABO et les anticorps anti-H,
l'anti-Jk" et parfois l'anti-Le" peuvent causer les mêmes dommages.
82.2) hémolyse extravasculaire
L'hémolyse extravasculaire, la plus fréquente, survient dans la rate
et le foie. La phagocytose dans la rate implique des anticorps à
prédominance lgG tels que les anti-Rhésus, alors que celle dans le
foie concerne les anticorps de la classe lgM tels que les anti-1. Ces
anticorps fixent le complément. Ainsi, sept systèmes de groupes sanguins sont très importants en
immunologie de la transfusion sanguine ; d'abord le système ABO
et à un moindre degré, le système Lewis dont les anticorps naturels
peuvent induire une réaction à la première transfusion. Ensuite, les
systèmes Rhésus, Duffy, Kidd et MNSs (pour les antigènes S et s)
peuvent induire une allo-immunisation et donc, des réactions
hémolytiques.
B2_3) La sécurité transfusionnelle Il faut autant que possible prévenir la formation d'allo-anticorps pour
garantir l'avenir du patient, surtout s'il s'agit d'une femme ou d'un
polytransfusé potentiel. La procédure de sécurité inclut :
46 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
-les règles obligatoires du groupage sanguin c'est-à-dire effectuer
le groupage des donneurs et des receveurs.
-La recherche d'anticorps irréguliers (RAI) avant toute première transfusion ou entre le 5ème et le 15ème jour après une série de
transfusions.
-Les tests de compatibilité entre le sérum du donneur et les
globules rouges du receveur.
-Le dépistage simple des anticorps irréguliers (OSAI).
-Le contrôle ultime au lit du patient ; cette étape finale est
obligatoire et relève de la responsabilité du médecin qui pratique la
transfusion.
-La carte transfusionnelle qui est une carte spéciale sur laquelle
l'historique transfusionnel du sujet est noté.
83) Maladie hémolytique du nouveau-né (MHNN)
Il a fallu attendre l'observation princeps de Levine pour comprendre
le mécanisme de la MHNN.
Il s'agit d'une immunisation de la mère contre un antigène du fœtus
que ce dernier a hérité de son père. Si l'anticorps maternel ainsi
formé est capable de traverser le placenta, il se fixe sur les
hématies fœtales vouées dès lors, à une destruction rapide.
La mère est du groupe Rhésus négatif, le père est groupe Rhésus
positif comme son enfant. L'antigène le plus souvent en cause est
l'antigène Rhésus standard D. De nombreux antigènes de groupe,
différent du Rhésus standard ont été reconnus comme à l'origine de
tel cas d'allo-immunisation fœto-maternelle. Ces antigènes 47 -------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
appartiennent soit au système Rhésus comme c ou E, soit à
d'autres systèmes comme Kell, Kidd, Duffy, Ss. Par ailleurs,
l'allo-immunisation ABO est connue.
La prévention de la maladie hémolytique par allo-immunisation par
l'antigène Rhésus (RhD) peut être réalisée grâce à l'injection à la
mère, dans les 24 à 72 heures suivant l'accouchement,
d'immunoglobuline anti-D. Ainsi la prévention progressive de la
maladie peut être raisonnablement escomptée.
C) EN GENETIQUE HUMAINE [1 O]
En génétique humaine l'on peut citer le recours aux antigènes de
groupes sanguins érythrocytaires dans l'exclusion de paternité ;
c'est le cas des systèmes MNSs et Rhésus.
En anthropologie le cas du système Diego attestant l'origine
mongoloïde d'un individu
48---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclouaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
49 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
1 - CADRE DE L'ETUDE
Ce travail s'est effectué au laboratoire d'lmmunologie et
d'Hématologie du CHU de Cocody de Mars à Septembre. Il s'inscrit
dans le cadre général des divers travaux d'immuno-hématologie
initiés par l'équipe du professeur SEKA SEKA Joseph du
Département d'lmmunologie clinique et d'lmmunobiologie de l'UFR
des sciences médicales de Bouaké.
Les difficultés d'approvisionnement et le coût élevé des réactifs de
groupage sanguin ABO produits par les multinationales et importés
par la Côte d'Ivoire chaque année demeurent un obstacle majeur
au fonctionnement correct des laboratoires de biologie médicale
ayant le phénotypage dans le système ABO dans leurs attributions.
Dans un souci d'économie, la possibilité d'utilisation de réactifs de
groupage sanguin ABO produits à partir de sérum humain, dans
les différents laboratoires d'immunologie et hématologie, voire les
centres de transfusion sanguine du pays, serait d'un apport
i ncom mensu rab le.
11- MATERIEL ET METHODE
A/ TYPE D'ETUDE
Il s'agit d'une étude expérimentale et comparative.
8/ POPULATION D'ETUDE
1) Critère d'inclusion
50Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Sont inclus dans notre étude, les sujets des deux sexes en
bonne santé apparente âgés de 18 à 30 ans, avec une sérologie
infectieuse négative.
2) Critère de non inclusion Sont exclus de l'étude, les sujets ayant été déjà transfusés au
moins une fois, les femmes multipares, les sujets de groupe AB.
3) Recrutement des sujets Il s'agit de sujets adressés au laboratoire d'lmmunologie et
d'Hématologie du CHU de Cocody pour tout bilan biologique,
incluant le groupage sanguin ABO. Ces sujets sont composés
essentiellement d'étudiants et de patients externes ou hospitalisés
qui satisfont à nos critères d'inclusion.
4) Taille de l'échantillon L'étude s'est déroulée en trois étapes. La première étape a
consisté à faire le groupage sanguin dans les système ABO et
Rhésus de 203 sujets recrutés. Dans une seconde étape, 90 sujets parmi les 203 ont été sélectionnés sur la base de la qualité de leur
plasma (absence d'hémolyse, séro-négativité au VIH, à l'hépatite et
au tréponema pallidum). Ces plasmas sélectionnés ont servi à la
recherche d'anticorps naturels anti-érythrocytaires.
Il s'agit de : - 30 sujets de groupe A rhésus positif
- 30 sujets de groupe B rhésus positif
- 30 sujets de groupe O rhésus positif
51Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
La troisième étape a permis de retenir sur les 90, 60 plasmas ayant
les meilleurs critères de performance.
C) LES DETERMINATIONS 1) Phénotypage érythrocytaire ABO
Cet examen a été réalisé dans un premier temps pour sélectionner
notre population d'étude.
1.1) Matériel et réactifs - Le matériel comprend :
.€5 une plaque d'opaline
.€5 une centrifugeuse de table
.€5 des tubes à hémolyse bien propres
.€5 des pipettes pasteurs
.€5 des compresses
.€5 des tubes de Nunc
- Les réactifs sont composés de : .€5 le sang à grouper prélevé sur anti-coagulant (EDTA)
.€5 les antisérums tests anti-A, anti-B et anti-AB produits par le
laboratoire Bio-rad F 92430.
.€5 Le sérum physiologique à 9°/00
.€5 Les globules rouge test A 1, A2, B du CNTS d' Abidjan.
1.2) Mode Opératoire Les sujets sélectionnés ont bénéficié d'un prélèvement de 5 à 10cc
de sang par ponction veineuse sur EDTA. Le sang recueilli est
conservé à la température du laboratoire pendant 30 minutes puis
52Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
centrifugé à 3000 tr/min pendant 10 minutes, permettant ainsi de
séparer le plasma du culot globulaire.
Nous avons effectué le groupage sanguin ABO sur plaque
d'opaline par les deux épreuves complémentaires classiques .
.ŒS L'épreuve globulaire ou technique de Beth-Vincent
Tzanck
.ŒS L'épreuve sérique ou technique de Simonin-Michon .
1.2.1) Epreuve globulaire ou technique de BETH Vincent -Tzanck sur plaque d'opaline
.ŒS On prépare une suspension de globules rouges des
sujets selectionnés à 10% à l'aide de sérum
physiologique à 9°foo..ŒS Sur une plaque d'opaline, à l'aide d'une pipette pasteur,
on dépose séparément trois gouttes de la suspension
globulaire à 10% de la gauche vers la droite.
.ŒS On ajoute successivement à chaque goutte globulaire,
une goutte d'anti-sérum anti-A, anti-sérum anti-B et
d'anti-sérum anti-AB,
.ŒS On mélange à l'aide du fond d'un tube à hémolyse,
.ŒS On homogénéise en imprimant à la plaque des
mouvements de rotation pendant 3 min.
.ŒS On effectue enfin la lecture.
• L'apparition d'agglutination témoigne de la présence sur les
globules rouges de l'antigène correspondant à l'anti-sérum utilisé ;
la réaction est dite positive . 53
Yapi Yapi Aurélien Doctorat e11 Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
• En l'absence d'agglutination, la réaction est dite négative.
1.2.2) Epreuve sérique ou technique de Simonin sur plaque d'opaline
~ On prépare une suspension à 10% des hématies tests
connues A1, A2 et B.
~ On dépose sur une plaque d'opaline, à l'aide d'une
pipette pasteur, dans l'ordre : une goutte d'hématies tests
A 1, A2 et B de gauche vers la droite.
~ On Ajoute à chaque goutte d'hématies tests à 10% une
goutte du plasma à tester.
~ On mélange à l'aide du fond d'un tube à hémolyse.
~ On homogénéise en imprimant à la plaque d'opaline des
mouvements de rotation pendant 3 minutes,
~ On effectue la lecture.
• La présence d'agglutination signifie que la réaction est positive
donc présence dans le plasma du sujet d'anticorps naturels.
• La réaction est dite négative en absence d'agglutination.
2) Recherche de la performance des anticorps anti-A, anti-B et anti-AB dans les plasmas sélectionnés.
2.1) Le Matériel et les réactifs Le matériel Il se compose de :
~ une centrifugeuse de table;
~ un bain marie ; 54
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
~ un congélateur à - 40°C (SANYO Médical Freezer) ;
~ un réfrigérateur (SANYO Medicool) ;
~ des plaques d'opaline ;
~ un chronomètre ;
~ des gants propres ;
~ des compresses ;
~ des tubes de Nunc de 1,8 cc ;
~ des tubes à hémolyse bien propres ;
~ des portoirs pour tubes à hémolyse ;
~ des micropipettes (P100; P200 Psoo µI)
Les réactifs sont composés de : ~ globules rouge test A 1 ; A2 ; B ; AB provenant du CNTS
d'Abidjan;
~ l'héparine CHOAY 5 ml / 25.000 UI (SANOFI Winthrop
1 ndustrie Parie) ;
~ l'azide de sodium lyophilisé (Na N3) ;
~ chlorure de calcium en granulé (Caclz) ;
~ sérum physiologique à 9 °/00;
~ antiglobuline polyvalente (Biotec Labotorie ).
2.2) Méthode Après le groupage sanguin ABO classique et la conformité des
résultats des tests globulaire et sérique, les plasmas séparés du
culot globulaire après centrifugation sont mis en aliquote (3
aliquotes) par plasma dans des tubes de Nunc et conservés à -40°
C. 55 ----------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
Ainsi, les plasmas des sujets A contiennent des anticorps anti-B
,ceux des sujets de groupe B, des anti-A et les sujets O des anti-A
et anti-B. Ce sont ces plasmas qui seront sélectionnés comme
source d'anticorps polyclonaux pour le groupage sanguin ABO, s'ils
satisfont aux critères de performance universels. Pour chaque
plasma congelé, un des aliquotes a été décongelé pour la suite des
manipulations.
Nous avons ensuite testé la performance du plasma par la
détermination de l'avidité, de l'intensité de l'agglutination, du score
et du titre des anticorps naturels qu'il contient.
Nous avons alors réalisé une série de tests par la technique de
Simonin en tenant compte des caractéristiques des agglutinations
obtenues.
2.3) Mode Opératoire du test de performance
Le plasma est décomplémenté après décongélation au bain marie à
56°C pendant 30 minutes.
On réalise des dilutions dans chaque échantillon de plasmas selon
une progression géométrique de raison 2 dans des tubes à
hémolyse bien identifiés allant de ½ au 1 /256e.
On dépose sur une plaque d'opaline, à l'aide d'une micropipette
une goutte des hématies tests A 1, A2, B, AB à 10% ;
A côté de chaque goutte d'hématies tests, on dépose une goutte du
plasma dilué en allant de la plus faible concentration c'est à dire du
1 /256e au pur selon les modalités suivantes
56---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
• Le plasma de groupe A contenant les anticorps anti-B, sont mis
en contact avec une goutte d'hématies tests B dilué à 10%.
• Les plasmas de groupe B contenant les anticorps anti-A sont mis
en contact avec d'une part une goutte d'hématies tests A 1 à
10% et d'autre part une goutte d'hématies tests A2à 10%.
• Les plasmas de groupe O contenant les anticorps anti-A et anti-B
sont mis en contact avec une goutte d'hématies tests AB.
•A l'aide du fond d'un tube à hémolyse, on mélange les deux
gouttes ;
• On homogénéise en imprimant à la plaque des mouvements de
rotation ;
• On effectue la lecture, pour l'appréciation de :
• L'AVIDITE qui correspond au temps en seconde au bout
duquel apparaissent des agglutinats.
• L'INTENSITE qui correspond à l'aspect de l'agglutination, 3
minutes après la réaction.
Elle est notée par 1, 2 ou 3 croix selon l'aspect des agglutinats
obtenus.
• Le SCORE découle de l'intensité des agglutinations avant ou à 3 minutes .
.r6 Une intensité à 1 croix correspond au nombre 5
.r6 A 2 croix correspond au nombre 8
.r6 A 3 croix correspond au nombre 10
Au delà de 3 min, le score, en cas d'apparition d'agglutination est
coté à 3 sans notion de croix. 57-------------------------
Y api Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
Le score définitif sera la somme des différents nombres obtenus
par dilution pour chaque plasma.
• Le TITRE mesure la force des anticorps naturels contenus dans les plasmas. Il correspond, à l'inverse de la plus grande dilution du
plasma où sont observées des agglutinations.
58---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclouaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU VII: EXEMPLE D'INTERPRETATION DES DIFFERENTS CRITERES DE PERFORMANCE D'UN PLASMA DONNEE:
Dilution pu 1/2 1/4 1/8 1 /16 1/32 1/64 1/28 1/256
Avidité 1 " 1 " 2" 3" 1 '4" 1 '36" 2'30" 2'42" >3'
Intensité +++ +++ +++ ++ ++ ++ ++ + +/-
Score 10 10 10 8 8 8 8 5 3
Titre
Ici Le score correspond à : 10 + 10 + 10 + 8 + 8 + 8 + 8 + 5 + 3 = 70
Le titre est 256
59Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
3) La Recherche des anticorps Immuns : Recherche d'agglutinines irrégulières.
Cette technique nous a permis de rechercher la présence
d'éventuels anticorps Immuns dans le plasma.
Deux techniques ont été utilisées dans le cadre de notre étude. Il
s'agit:
RS du test en milieu salin
RS du test de Coombs indirect.
3.1) Le Test en milieu Salin Permet la recherche d'auto-anticorps contenus dans le plasma. Les
auto-anticorps agglutinent généralement à froid et sont de type lgM.
3.1-1) Matériel et Réactifs Le matériel comprend :
RS un réfrigérateur (SANYO Medicool) ;
RS des tubes à hémolyse propres ;
RS une centrifugeuse de table ;
Les réactifs sont composés de :
RS sérum physiologique à 9°/00
RS les plasmas sélectionnés RS un panel de deux lots d'hématies tests Ode OSAI (dépistage
simple des agglutinines irrégulières) provenant du CNTS
d'Abidjan
3.1. 2) Mode Opératoire RS On lave trois fois les hématies tests O en sérum
physiologique ; 60
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
16 On prépare ensuite une suspension de ces hématies tests O à
5% dans le sérum physiologique ;
16 On dépose une goutte de cette suspension d'hématies tests
respectivement dans deux tubes à hémolyse propres, bien
identifiés ;
16 On ajoute une goutte de plasma dans chaque tube à
hémolyse contenant la suspension d'hématies tests.
16 On incube à 4 °C au réfrigérateur de 45 minutes à 1 heure
de temps.
16 On homogénéise et on centrifuge à 3000 tr/min pendant 1
min.
16 On effectue alors la lecture en agitant doucement les tubes à
hémolyse.
• La réaction est dite positive lorsque le culot se détache en amas
(agglutination)
• La réaction est négative lorsque le culot part en fumée.
3.2) Test de COOMBS indirect Le test de COOMBS indirect est un test sérique permettant de
mettre en évidence des anticorps immuns, libres dans un plasma et
fixés in vitro sur des hématies tests (hématies test 0) par le
technicien.
3.2.1) Matériel et Réactifs Le matériel comprend :
RS des tubes à hémolyse propres ;
16 un bain marie ; 61 -----------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
~ une centrifugeuse de table ;
~ des pipettes Pasteur ;
~ des compresses propres.
Les réactifs sont composés de :
• Sérum physiologique à 9°/00 ;
• Antiglobuline polyvalente (Biotec labotorie) ;
• plasmas sélectionnés ;
• panel de OSAI du CNTS d'Abidjan ;
3.2.2) Mode Opératoire
~ on lave trois fois les hématies tests O à l'aide de sérum
physiologique.
~ on prépare une suspension à 5% de ces hématies tests dans le
sérum physiologique. ~ On dépose une goutte de cette suspension à 5% d'hématies
tests respectivement dans deux tubes à hémolyse propres bien
identifiés. RS On ajoute une goutte du plasma à tester dans chaque tube à
hémolyse. ~ On incube à 37°C au bain Marie pendant 45 min à 1 heure.
~ On effectue trois lavages des hématies dans le sérum
physiologique après l'incubation. RS Après le dernier lavage, on élimine toute l'eau physiologique et
on ajoute au culot, une goutte d'antiglobuline polyvalente, puis
on homogénéise et on centrifuge à 3.000 tr/min pendant 1 mn.
62 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
RS On procède à la lecture en agitant légèrement les tubes à
hémolyse.
• La présence d'agglutination traduit la positivité du test.
• L'absence d'agglutination correspond à un test négatif.
D) CONSTITUTION ET TRAITEMENT DES POOLS DE PLASMAS Nous avons constitué trois Pools de plasmas contenant
respectivement les anticorps anti-A, anti-B et anti-AB. Chaque Pool
est constitué de vingt plasmas différents.
Les plasmas ayant présentés les meilleurs critères de performance
dont un titre supérieur ou égal à 32 ainsi qu'une absence d'auto
anticorps et d'anticorps immuns ont été retenus.
Nous avons ainsi retenu : - un premier Pool de 20cc de plasma contenant les anticorps
naturels anti-A. - un deuxième Pool de 20cc de plasma contenant les anticorps
anti-B - un troisième Pool de 20cc de plasma contenant les anticorps
anti-A et anti-B. Chaque Pool de plasma a subi une série de tests, afin d'améliorer
la performance. Ainsi, avons-nous successivement réalisé : la
stérilisation, la recalcification, la filtration, la concentration et la
coloration des plasmas pour obtenir nos réactifs.
63---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
1) La stérilisation 1.1) Matériel et réactifs
- Le matériel comprend :
,ŒS Un ballon en pyrex ;
,ŒS Une tige aimantée ;
,ŒS Une balance (Electronic balance AND, Masse 40g)
,ŒS Une micropipette (P200, Psoo ; P1000 µI) ;
,ŒS Une plaque chauffante avec rotor;
,ŒS Un réfrigérateur (SANYO MEDICAL)
,ŒS Les trois pools de plasma ;
Les réactifs sont composés de :
,ŒS 1 g d'azide de sodium lyophilisé NaN3)
,ŒS Eau distillée ( 1 1)
1.2) Mode opératoire Préparation de la solution d'azide de sodium
,ŒS Dans un ballon en pyrex, on dépose un gramme d'azide de
sodium lyophilisé.
,ŒS On y ajoute un litre d'eau distillée
,ŒS On met le ballon sur une plaque chauffante à rotor ;
,ŒS on homogénéise la solution à l'aide d'une tige aimantée.
* La stérilisation proprement dite A l'aide de la micropipette P 1000 ajouter à chaque pool de plasma
1 ml, de solution d'azide de sodium.
64 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
2) La recalcification
2.1) Matériels et réactifs
- Le Matériel est identique à celui de la stérilisation ;
Les réactifs sont composés de :
16 chlorure de calcium en granulé (CaCb) ;
16 eau distillée ;
2.2) Mode opératoire
16 Préparation de la solution de chlorure de calcium.
16 Dans un ballon en pyrex, mettre 27, 75 grammes de chlorure
de calcium en granulé.
16 Ajouter 1 litre d'eau distillée.
16 Mettre le ballon sur une plaque chauffante à rotor ;
16 Homogénéiser la solution à l'aide d'une tige aimantée ;
* La recalcification proprement dite
Après la stérilisation, chaque pool de plasma a été recalcifié par
l'ajout d'une solution de chlorure de calcium dans une proportion de
2% à l'aide d'une micropipette P 200.
Les pools de plasmas sont ensuite incubés à 4 °C pendant 36
heures au réfrigérateur pour permettre une bonne formation de la
fibrine. Cette étape a permis la transformation du plasma en sérum.
3) La filtration
Les sérums obtenus après recalcification sont filtrés sous vide à
l'aide du filtre à papier.
65---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
4) La concentration
Le filtrat obtenu a été concentré par la méthode de congélation
décongélation suivante :
La congélation s'est faite à - 40°C pendant 22 heures suivie d'une
décongélation à 4 °C pendant 24 heures. On ajoute enfin à chaque
pool de sérums une solution d'héparine à 2% dans une proportion
de4%.
5) Coloration
Nous avons procédé à une coloration de nos réactifs pour faire la
distinction entre eux ; ainsi :
Le sérum test anti-A est coloré au vert de méthyl.
Le sérum test anti-B est coloré à l'éosine
Les sérums tests anti-A et anti-B sont non colorés
E) ETUDE COMPARATIVE DU GROUPAGE ABO PAR NOS
REACTIFS ET LES REACTIFS DU COMMERCE.
Nous avons comparé la performance des réactifs de notre série à
celle des produits vendus dans le commerce. Nous avons alors
avec les sérums obtenus, testés 150 prélèvements de sang dont :
36 sujets de groupe A
42 sujets de groupe B
9 sujets de groupe AB
63 sujets de groupe 0
F- TRAITEMENT DES DONNEES
Le traitement et l'analyse des données ont été effectués sur support
informatique au moyen de divers logiciels dont : 66
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
- WORLD pour le traitement de texte,
- EXCEL pour les graphiques
- EPI-DATA et SPSS pour l'analyse et l'interprétation
statistiques des données.
67 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
68 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU VIII: REPARTITION DES 203 SUJETS ETUDIES EN FONCTION DE L'AGE
Classe d'âge NOMBRE DE FREQUENCE SUJET (%)
r 18-221 55 27
[23-26] 91 45
[27-30] 57 28
Total 203 100
La tranche d'age comprise entre 23 et 26 ans est la plus représentée.
69 --------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
D [18-22] D [23-26] D [26-30]
Figure5: Répartition des 203 sujets en fonction de l'âge
70 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU IX: REPARTITION DES 203 SUJETS EN FONCTION DU GROUPE SANGUIN ABO
GROUPE GROUPE GROUPE GROUPE GROUPE TOTALA B AB 0
Nombre 57 48 12 86 203
Fréquence 28,08 23,65 5,91 42,36 100(%)
Les sujets du groupe O avec 42,36% de notre population d'étude constituent l'échantillon le plus important.
71Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclouaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
42,36%
23,65%
5,91%
28,08%D GROUPE A
D GROUPE B
D GROUPE AB
D GROUPE 0
Figure 6 : Répartition des 203 sujets en fonction du groupe sanguin ABO
72Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU X: REPARTITION DES 203 SUJETS EN FONCTION DU GROUPE SANGUIN ABO ET DU SEXE
Groupe Sexe féminin Sexe masculin
A 26(12,8%) 31 (15,27%)
B 22(10,9%) 26(12,8%)
AB 6(3%) 6(3%)
0 49(24, 13%) 37(18,22%)
Total 103(51%) 100(49%)
Il y a sensiblement autant de sujets de sexe masculin (49%) que de sujets de sexes féminin (51 %). Cependant la répartition des groupes sanguins dans le système ABO varie en fonction du sexe.
73Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
90 80 1of /
Nomb~~ ~__:;--
40J/30 20 10 0
D sexe masculin D sexe féminin
1/ A B AB 0
Goupe sanguin
Figure 7: Répartition des sujets en fonction du groupe sanguin ABO et dusexe.
~~;-::-::-:~----;;;:-------;:-----:------:--:-:--:-:----:-------=-=----=------=---:------------- 74 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XI: MOYENNES DES CRITERES DE PERFORMANCE DES 90 PLASMAS RETENUS SUR LA BASE DE LEUR QUALITE.
Plasmas GR tests Avidité Intensité Titre Scorecontenant (seconde)lesanticorpsnaturels
Al 11,64 +++ 26,67 36,40
Anti-A
A2 18,97 +++ 24,93 30,27
Anti-B B 14,40 +++ 33,60 41,80
Anti-AB AB 7,40 +++ 41,6 46,30
Les plasmas contenant les anticorps naturels anti-AB ont présenté les meilleures performances.
75---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XII: CRITERES DE PERFORMANCE DES POOLS DE PLASMAS A V ANT LE TRAITEMENT.
Pool de GR tests Avidité Intensité Titre Scoreplasmas (seconde)contenantlesanticorpsnaturelsAnti-A
Al 9 +++ 64 46
A2 12 +++ 32 41
Anti-B B 10 +++ 32 41
Anti-AB AB 8 +++ 64 46
Les plasmas contenant les anticorps naturels anti-AB présentent les meilleurs critères de performance. Les valeurs de l'avidité de l'intensité et du score sont proches des valeurs de référence [2] avant le traitement des plasmas
77 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XIII: ACTIVITES DES POOLS DE SERUMS TESTS CONSTITUES APRES TRAITEMENT.
Pool de GR tests Avidité Intensité Titre Score, (seconde)serum
Al 5 +++ 128 67Anti-A
A2 10 +++ 64 59
Anti-B B 9 +++ 64 61
Anti-AB AB 4 +++ 128 69
Le pool de sérum anti-AB a la meilleure activité suivi de l'anti-A (avec les hématies tests A 1) et de l'anti-B.
78 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XIV: TABLEAU COMPARATIF DES RESULTAS DE NOS REACTIFS DE CEUX DE A BIGOT (CNTS DE COTONOU) ET AUX NORMES MINIMALES.
Avidité (s) Intensité Titre Score GR
Réactifs test NM NR CNTS NM NR CNTS NM NR CNTS NM NR CNTS cot. cot. cot. cot.
Anti-A A1 8 5 7 +++ +++ +++ 64 128 256 50 67 74
A2 12 10 11 +++ +++ +++ 64 64 64 50 59 55
Anti-B B 8 9 9 +++ +++ +++ 64 64 64 50 61 60
A1 Anti-AB Identique 8 Identique +++ Identique 64 Identique 60
A2 à l'Anti-A 4 12 à l'Anti-A à l'Anti-A à l'Anti-A et à et à +++ +++ et à 128 32 et à 69 51
B l'anti-B 8 l'anti-B l'anti-B l'anti-B +++ 64 65
NM: Normes Minimales; NR: Nos Réactifs; CNTS cot. : Centre National de Transfusion Sanguine de Cotonou. La valeur de nos réactifs est au dessus de la valeur des réactifs des normes minimales. Nos
valeurs sont proches de ceux de A BIGOT [2]
79
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XV: REACTIVITE DES REACTIFS DU COMMERCE TESTES SUR LES GLOBULES ROUGES DANS LES MEMES CONDITIONS QUE LES POOLS DE SERUM DE NOTRE ETUDE.
Réactif GR tests Avidité Intensité Titre Score(seconde)
Anti-AAl 2 +++ 256 71
A2 2 +++ 128 67
Anti-B B 2 +++ 128 69
Anti-AB AB 1 +++ 256 76
L'avidité et le titre des réactifs du commerce sont plus élevés que ceux obtenus par les sérums de notre étude.
80 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XVI: RESULTATS COMPARATIFS (NOMBRE ET% DE REACTIONS POSITIVES) DU GROUPAGE SANGUIN ABO PAR LES REACTIFS DE NOTRE ETUDE ET LES REACTIFS DU COMMERCE
Groupe sanguin Réactifs de notre Réactifs du étude commerce
Sujet de groupe A 24%(36) 24%(36)
Sujet de groupe B 28%(42) 28%(42)
Sujet de groupe AB 6%(9) 6%(9)
Sujet de groupe 0 42%(63) 42%(63)
Total 100%(150) 100%(150)
Les réactifs de notre étude ont donné les mêmes résultats que les réactifs du commerce sur 150 sujets chez qui un phénotype ABO a été réalisé.
81Yapi Yapi Aurélien Doctorat e11 Médecine (Thèse d'Etat)
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TABLEAU XVII : COUT DE REVIENT DE LA PRODUCTION DE 60 ML DE SERUM TEST POUR LA DETECTION DE TOUS LES PHENOTYPES DU SYSTEME ABO
MATERIEL OU REACTIF Coût (FRANC CFA)
Recalcification (Chlorure de 740 calcium)
Antiseptique (Acide de 10 sodium)
Héparine 2% 220
Flacon (stérilin) 250
Colorants 70
Filtre à papier 200
Etiquettes 5
Personnel 745
Coût de revient total 2240
Le coût de production des réactifs de notre étude qui inclut le prix de revient du matériel des réactifs et du personnel est très bas.
82 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclouaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XVIII: COMPARAISON DU COUT DES REACTIFS DU COMMERCE ET DE CELUI DES REACTIFS DE NOTRE TRAVAIL POUR LA REALISATION DE 150 TESTS
ANTI-A ANTI-B ANTI-AB TOTAL REACTIFS Quantité Coût Quantité Coût Quantité Coût Quantité Coût
(ml) (f cfa) (ml) (f cfa) (ml) (f cfa) (ml) (f cfa)
COMMERCE 10 6000 10 6000 10 6000 30 18000
10 375 10 375 10 375 30 1125 NOTRE
TRAVAIL
Il faut 30 ml de sérum pour un phénotypage ABO complet de 150 sujets. Ce qui revient à 18.000 F CFA avec les réactifs du commerce et 1125 F CFA avec les réactifs de notre étude.
83 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
TABLEAU XIX: ESTIMATIONS COMPAREES DES QUANTITES ET DES COÛTS ANNUELS DES REACTIFS DE NOTRE ETUDE ET DE CEUX DU CHU DE COCODY (REACTIFS DU COMMERCE)
Quantité de Nombre de Coût (CFA) réactifs tests (ml)
Commerce 2 310 11 550 1 386 000 (CHU de Cocody)
Notre travail 2 310 11 550 86625
Différence 0 0 1 299375
Il y a un différentiel annuel de 1 299375 F CFA entre nos réactifs et ceux du commerce.
84Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat) 85
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
1- ETUDE EPIDEMIOLOGIQUE
Notre échantillon est composé de 203 sujets des deux sexes, âgés
de 18 à 30 ans avec une médiane à 24 ans, tous en bonne santé
apparente.
1) La répartition des 203 sujets en fonction de l'âge (TABLEAU VIII FIGURE 5)
Notre population d'étude a été répartie en trois tranches d'âge : La
première comprise entre 18 et 22 ans, représente 27% de
l'échantillon avec 55 sujets, la seconde, de 23 à 26 ans, regroupe
45% de l'échantillon avec 91 sujets et enfin la dernière de 27à 30
ans avec 57 sujets soit 28% de la population cible.
Les sujets de 23 à 26 ans constituent l'échantillon le plus
important, en nombre de notre étude. Ceci s'explique par le fait
que la majorité des sujets inclus dans notre travail est constituée
d'étudiants de 38 année des études médicales de l'UFR des
sciences médicales de Bouaké. Le choix de l'âge de nos sujets a été guidé par le fait que le
système immunitaire, responsable de la synthèse des anticorps
naturels anti-A et anti-B que nous recherchons dans notre étude,
est plus performant chez le sujet jeune.
Ces anticorps naturels comme il est décrit dans la littérature [1]
sont à des taux très faibles voir généralement absents à la
naissance et augmentent vers le 38 et 68 mois de la vie pour
atteindre un taux maximum vers l'adolescence. Leur titre diminue
chez les sujets âgés [1]. 86
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
2) Répartition des 203 sujets en fonction du groupe
sanguin ABO (Tableau IX ; figure 6)
L'analyse de la population en fonction du groupe sanguin ABO a
montré une prédominance des sujets de groupe O avec une
fréquence de 42,36%, suivis des sujets de groupe A qui
représentent 28,08% des cas, puis les sujets du groupe B avec
une prévalence de 23,65%. Les sujets de groupe AB arrivent en
quatrième position avec un taux de 5,91 %.Notre échantillon
respecte bien la répartition des groupes sanguins ABO dans la
population ivoirienne rapportée par CABANNES et coll. [16, 17].
En effet ces auteurs dans leur étude effectuée en Côte d'Ivoire ont
révélé des fréquences suivantes des groupes sanguins ABO : le
groupe sanguin O vient en tête avec une prévalence de 42, 10%
suivi du groupe B qui représente 31,29% de la population, le
groupe A vient en troisième avec une fréquence de 22,50%, enfin
le groupe AB exprimé par 4, 11 % de la population.
SEKA .S.J. et coll. [15], dans deux études réalisées au CHU de
Cocody à Abidjan, sur les groupes sanguins érythrocytaires ABO
dans les grands groupes ethniques, ont trouvé le même ordre de
fréquences, avec toujours une prédominance du groupe O.
Ailleurs en Afrique, DIENG. F. au Sénégal a trouvé la même
répartition que celle trouvée en Côte d'Ivoire. Des études réalisées
par MC Arthur d'une part et PENROSE d'autre part retrouvent la
même distribution des groupes sanguins ABO dans le monde avec
87 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système AB 0
une prédominance du groupe O avec une fréquence de 62,30% et
une prévalence faible du groupe AB.
Notre échantillon respecte donc la répartition de groupes sanguins
ABO dans la population mondiale en général et ivoirienne en
particulier.
3) Répartition des 203 sujets en fonction du groupe et du sexe (Tableau X ; Figure 7)
Sur les 203 sujets recrutés, 103 soit 51 % sont de sexe féminin et
100 soit 49% de sexe masculin. Il y a sensiblement autant
d'hommes que de femmes car nous n'avons pas tenu compte du
sexe dans le recrutement de nos sujets d'étude. Nos résultats
montrent cependant une variation de la répartition des groupes en
fonction du sexe.
Ainsi concernant les groupes A et B on note une prédominance
masculine avec respectivement 15,27% contre 12,8% de femmes
et 12,8% d'hommes contre 10,9% de femmes.
Dans le groupe sanguin O par contre, on note une prédominance
féminine avec 24, 13% contre18, 22% d'homme.
Dans le groupe AB il y a autant d'hommes que de femmes. Nos
résultats sont superposables à ceux de SEKA et coll. [15] qui ont trouvé la même répartition.
Notre échantillon correspond donc à la répartition de la population
ivoirienne en ce qui concerne les groupes sanguins ABO.
88 ---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
11- ETUDE DE L'ACTIVITE DES DIFFERENTS PLASMAS
RECEUILLIS
1) Critères de sélection des plasmas
Sur les 203 plasmas analysés nous avons retenus 90 sur la base
des critères de qualité régissant les normes internationales
d'utilisation des produits sanguins comme réactifs, à savoir une
sérologie négative pour le VIH, l'hépatite virale B et le Tréponema
pallidum. Nous avons également éliminé les sangs hémolysés.
Le nombre de plasmas retenu pour notre étude 90 est largement
supérieur à celui de A BIGOT et coll. [2] qui dans leur travail sur la production expérimentale des réactifs de groupage sanguin ABO au
CNTS de Cotonou se sont contentés de 35 plasmas. Ceci
s'explique par le fait que leur étude ait été réalisée à partir de
donneurs réguliers de sang chez qui il est généralement prélevé
environ 450cc de sang. Cette différence de taille des échantillons
s'explique par le fait que dans notre travail la quantité de sang
prélevée par individu n'était que de 10cc au maximum. En général,
la production d'anticorps polyclonaux de groupage sanguin ABO se
fait dans les centres de transfusion sanguine qui disposent de sang
en terme de quantité. Notre étude expérimentale étant réalisée
dans un laboratoire d'immunologie et hématologie classique il était
important de tenir compte de la taille de la population d'étude du fait
de la faible quantité de sang prélevée par personne. Ainsi en
dehors des centres de transfusion sanguine, tout laboratoire de
biologie médicale peut produire des anti-sérums de phénotypage
------------------------ 89 Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
ABO s'il dispose d'une quantité importante de prélèvement sanguin
sur anti-coagulant ; d'où la taille relativement importante de notre
échantillon.
2) Moyennes des critères de performance des 90 plasmas
retenus sur la base de leur qualité
(Tableau XI ; Figure 8)
On note de prime abord que l'avidité des sérums tests allait de 7,40
pour les anti-AB à 18,97 pour les anti-A2. Tous les sérums tests
affichaient une intensité à 3( + ). Les titres les plus élevés étaient
enregistrés pour les anti-AB avec 41,6, les anti-A2 donnant les
titres les plus bas avec une moyenne de 24,93. S'agissant des
scores, les anti-AB donnaient les scores les plus élevés avec 46,30
suivis des anti-B 41,80 puis des anti-A 1 36,40 et enfin les anti-A2 :
30,27.
L'analyse de la moyenne des critères de performance de ces
plasmas a montré que seuls ceux contenant les anticorps naturels
anti-AB ont présenté une activité moyenne relativement proche des
normes minimales auxquelles doivent répondre le sérum test anti-A
anti-B et anti-AB [2]. Nous avons alors dans une autre sélection
retenue que les plasmas qui donnent des agglutinations à un titre
supérieur ou égal à 32. Cette sélection nous a permis de retenir 60
plasmas les plus performants, pour le recueil des anti-sérums.
Ill- ETUDE DES POOLS DE PLASMAS CONSTITUES
A partir des 60 plasmas sélectionnés, nous avons constitué trois
pools en regroupant les plasmas en fonction du type d'anticorps
------------------------- 90 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
qu'ils contiennent. Nous avons ainsi obtenu trois pools de plasmas
contenant respectivement des anti-A, des anti-B et des anti-AB, qui
ont servi à l'étude des critères de performance.
1) Critères de performance des pools de plasmas
avant Je traitement (tableau XII)
L'analyse des résultats montre des valeurs proches des normes
minimales auxquelles doivent répondre le sérum test anti-A, anti-B
et anti-AB. Ainsi en ce qui concerne l'avidité, le pool de plasmas
contenant des anti-A donne une agglutination à 9 secondes avec
les hématies A1 et 12 secondes avec les hématies A2 ; les normes
étant respectivement de 8 secondes et 12 secondes.
De même, le pool de plasmas contenant les anti-B réagit à 1 O
secondes alors que la norme est de 8 secondes.
Quant aux titres ils sont identiques aux valeurs de référence soit 64
pour les pools de plasmas contenant les anti-A (avec le A1) et les
anti-AB. Ils sont cependant bas soit 32 pour l'anti-B et l'anti-A avec
le A2. L'intensité des agglutinations est déjà bonne à ce stade avec
trois croix pour chaque plasma. Les scores obtenus qui sont de 46
et de 41 sont proches de la norme qui est de 50. [2]
Avant le traitement déjà les pools de plasmas constitués donnent
des résultats satisfaisants quant à leur avidité et à l'intensité de la
réaction comparée aux normes de référence. La rapidité de la
réaction (avidité) et l'intensité qui sont diminuées dans notre cas
peuvent s'expliquer par le fait qu'avant le traitement, certains sites
de reconnaissance des anticorps ne sont pas libérés. Dans ces
------------------------- 91Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
conditions les anticorps sont moins avides. D'où nécessité de
traitement préalable pour améliorer l'activité de ces anticorps
naturels.
2) Activité des pools de plasmas après le traitement
(Tableau XII, XIII, XIV)
L'analyse des résultats montre une nette amélioration de la
performance des sérums après le traitement. L'avidité passe, de 9,
12, 10, et 8 (tableau XII) à 5, 10, 9 et 4 respectivement pour les
anti-A 1, anti-A2, anti-B et anti-AB (tableau XIII).
Les titres sont passés du simple au double pour les sérums tests et
les scores ont connu une élévation substantielle supérieure ou
égale à 20 unités pour chaque anti-sérum. Ceci s'explique par le
fait qu'après traitement, l'encombrement stérique est levé et les
sites anticorps libérés. Ainsi le titre maximum passe de 64 à 128
quand le titre minimal est de 64. Le score maximum de l'anti-AB
passe de 46 à 69.
Les agglutinations s'obtiennent plus rapidement à partir de 4
secondes pour l'anti-AB et à partir de 5 secondes pour l'anti-A
avec le A1.
L'intensité des agglutinations reste toujours à 3 ( +) pour tous les
sérums.
Comparés aux valeurs minimales auxquelles doivent répondre le
sérum test anti-A, anti-B, anti-AB [2] nos résultats se situent au
dessus des normes (tableau XIV). Aussi considérant le temps de
réaction, les anti-A obtenus dans notre série donnent une réaction 92----------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
avec les hématies A1 à 5 secondes comparativement à la norme qui
est de 8 secondes. Jusqu'à un titre 128, l'anti-A de notre série
donne une réaction avec les hématies A1.
Les anti-sérums anti-B et anti-AB sont tous aussi performants,
comparés aux valeurs de référence.
Nos résultats sont superposables à ceux obtenus par d'autres
auteurs notamment à A. Bigot et coll. [2] à Cotonou d'une part et N.
SAID et coll. [13] en Tunisie d'autre part. En effet A. Bigot et coll.
[2], dans leurs études sur la production expérimentale des réactifs
de groupage sanguin ABO au CNTS de Cotonou ont trouvé des
valeurs proches des nôtres aussi bien en ce qui concerne l'avidité ,
l'intensité , le titre que le score. Ainsi les sérums tests produits par
A Bigot et coll. [2]. Dans leur étude réagissent entre 7 et 12
secondes pour l'anti-A quand le nôtre agglutine entre 5 et 10
secondes. L'anti-B réagit à 9 secondes comme le nôtre. {Tableau
XIV).
Concernant l'anti-AB, nous avons fait réagir le nôtre uniquement sur
des hématies AB ce qui a donné une meilleure avidité 4 secondes
par rapport à celui du CNTS de Cotonou qui a été testé sur les
hématies A1(8 secondes) A2(12 secondes) et B (8secondes).
{Tableau XIV).
Ceux obtenus par A Bigot vont de 256 pour l'anti-A à 64 pour l'anti
B. Toutefois la norme minimale requise étant 64 notre sérum anti-A
garde toute sa qualité en tant que réactif de groupage. Les
performances des sérums tests obtenus par N. Said et coll [13] au 93-------------------------
Y api Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
CNTS de Tunisie bien que superposables aux nôtres sont
meilleures.
En outre ces auteurs ont obtenu des sérums dont les avidités
varient entre 2,67 secondes pour l'anti-A et 4,22 secondes pour
l'anti-B. Leurs réactifs ont réagi à des titres très élevés allant de
64(seul anti-8) à 512 (pour les autres). Deux explications peuvent
justifier la qualité de leur sérum. D'abord leur pool était constitué de
moins de sérums par rapport au nôtre, soit 5 sérums par pool
contre 20 dans nôtre cas. En suite ayant fait leur sélection chez des
donneurs réguliers de sang dans un centre de transfusion sanguine
(au CNTS de Tunisie), ils ont eu la possibilité de sélectionner les
sérums ayant présenté les meilleures performances pour constituer
leur pool. Si les réactifs obtenus par N. Said et coll. [13] ont
présenté de meilleures performances par rapport aux nôtres, nos
sérums demeurent de qualité acceptable par rapport aux normes
minimales requises. 3) Contrôle de qualité des sérums de notre série
(Tableau XV, XVI)
Nous avons effectué une étude comparative entre nos sérums tests
et les sérums vendus dans le commerce. Cette étude comparative
a porté sur le groupage sanguin de 150 sujets, composé de
patients adressés au laboratoire d'immunologie et d'hématologie du
CHU de Cocody pour phenotypage érythrocytaire dans le système
ABO. Les performances obtenues avec les réactifs du commerce
vont de 1 seconde à 2 secondes pour l'avidité. 94 ----------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Les réactifs ont réagi à des titres très élevés, allant jusqu'au titre
256, avec des scores entre 69 et 76 (tableau XV). Les valeurs
obtenues avec les réactifs du commerce sont plus proches de
celles obtenues par N. Said et coll. [13] en Tunisie. Il faut noter que
les réactifs du commerce sont des anticorps monoclonaux, c'est à
dire produits par un seul clone de lymphocytes B par la technique
des hybridomes de Këhler et Milstein [8] et donc de pureté, de
spécificité et d'affinité plus élevées que les anticorps polyclonaux.
Cependant, nos réactifs ont permis de déterminer, il faut le dire, les
groupes sanguins du système ABO de notre échantillon dans des
proportions superposables à celles des réactifs du commerce
(tableau XV), et de caractéristiques de performance acceptables
par rapport aux normes admises (tableau XIII).
IV) ETUDE DU COÛT DE REVIENT DE NOS REACTIFS
(Tableau XVII, XVIII, XIX)
Il ressort de cette étude que les conditions matérielles minimales
à réunir pour la production de nos réactifs de groupage sanguin
ABO, sont de réalisation facile.
Il convient de mentionner qu'en dehors des colorants, des filtres,
des flacons des produits chimiques, que nous avons eu à acquérir
par financement propre (Tableau XVII), le reste du matériel se
retrouve dans l'équipement de base d'un laboratoire Immunologie
et hématologie classique.
C'est à partir du sang prélevé chez les tout-venants pour le phénotypage érythrocytaire dans le système ABO, d'un minimum
95--------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
de matériel et de quelques produits chimiques courants, facilement
accessibles dans le commerce que nous avons préparé les réactifs
de groupage sanguin ABO.
La technique de préparation des anticorps polyclonaux anti-A, anti
B et anti-AB a été facile et moins onéreuse.
La disponibilité du matériel et des réactifs suscités nous a permis
de répéter nos tests et de nous rendre compte de la reproductivité
de la technique ; les résultats étant identiques d'un test à un autre,
en terme d'avidité, d'intensité de la réaction, de titre que de score.
Dans le commerce, la quantité de chaque réactif de groupage
sanguin dans le système ABO est de 10 ml.
Les 3 flacons d'anti-A, d'anti-B et d'anti-AB nécessaires pour le
phénotype ABO complet, réalisent au total 150 groupages sanguins
dans le système ABO, ce qui équivaut alors à 30 ml de réactif.
(Tableau XVIII). Le prix d'achat d'un flacon de chaque spécificité
d'anticorps est de 6.000 F CFA d'où un coût total de 18.000 F CFA
pour grouper 150 individus. Dans notre étude, le prix de revient de 10ml de chaque
spécificité d'anticorps est de 375 F CFA ce qui revient à un coût
total de 1125 F CFA les 30 ml, pour réaliser 150 phénotypage
ABO. (Tableau XVIII).
La comparaison des coûts du commerce (anticorps monoclonaux)
et de notre étude (anticorps polyclonaux) montre un net avantage
en faveur de nos réactifs (Tableau XVIII). 96 ---------------------------
Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Quand nous faisons la comparaison avec le CHU de Cocody où
nous avons réalisé ce travail, les dépenses sont de 1.386.000 F
CFA pour l'achat de réactifs de groupage ABO par an.
Cette structure utilise 231 flacons de réactifs, ce qui correspond à
2.310 ml de réactifs et réalise 11.550 tests de phénotypage ABO.
(Tableau XIX). Si nous faisons une estimation par an avec nos
réactifs pour le même nombre de tests les dépenses se chiffrent à
86625 F CFA soit un différentiel de 1299375 F CFA même si l'on
inclut dans notre cas, certains coûts additionnels comme la
maintenance des appareils etc., le prix unitaire du flacon de 10ml
de nos réactifs n'excéderait pas la moitié du prix d'un flacon de 10
ml de réactif de commerce.
Le prix de revient de nos réactifs peut être estimé au moins à 16
fois moins chers que celui du commerce. Cette marge bénéficiaire
est sensiblement identique à celle retrouvée par
A. Bigot et coll. [2] qui est de 1.336.440 F.
97 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
98 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
De ce qui précède, on peut relever que, la découverte en 1975 de
la technique des hybridomes par Georges Kahler et César Milstein,
a entraîné une révolution dans la production des anticorps
monoclonaux. L'effet de mode aidant, tous les utilisateurs
d'anticorps se sont lancés dans la consommation des
monoclonaux, au détriment des polyclonaux, sans regarder au coût
de ces réactifs. La Côte d'Ivoire elle aussi dans les années 1980 a
opté pour l'utilisation des anticorps monoclonaux pour le
phénotypage érythrocytaire. Ceci était bien supportable parce que
coïncidant avec la relative prospérité du pays. Aujourd'hui la donne
a changé. Notre pays vit une crise qui a relégué son pouvoir
d'achat au plus bas ; malgré cela, il faut que les activités dans tous
les secteurs se poursuivent et particulièrement dans les centres de
santé. La transfusion sanguine, importante activité thérapeutique,
s'accompagne de phénotypage érythrocytaire préalable. Faut-il dès
lors persister dans l'usage de monoclonaux, quand la preuve vient
d'être faite qu'avec du sérieux, l'on peut produire des réactifs
polyclonaux à coût nettement inférieur ?
Nous pensons que le perfectionnement de la technique de
production des anticorps polyclonaux, pour le phénotypage
érythrocytaire dans le système ABO, en attendant d'arriver à
d'autres systèmes, notamment le système Rhésus, offre d'énormes
perspectives pour nos centres de santé dans la période per, mais
surtout post crise.
Yapi Yapi Aurélien Doctorat eu Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Il importe donc que :
1-le service d'immunologie poursuive le travail afin d'arriver à
produire ces réactifs en grande quantité
2-Le service d'immunologie affine la méthode de
conditionnement de ces réactifs
3-Un travail de sensibilisation des structures de consommation
des réactifs de groupage soit entrepris, afin de les amener à utiliser
ces réactifs polyclonaux qui, en terme de performance donnent
toute la satisfaction attendue, avec des coûts très concurrentiels.
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Cette étude expérimentale et comparative nous a permis d'analyser 203 plasmas de sujets adressés au laboratoire d'immunologie et d'hématologie pour bilan biologique, en vue de sélectionner les plasmas présentant une meilleure réactivité anticorps et utilisables comme réactifs de phénotypage érythrocytaire dans le système ABO. 60 plasmas ont été retenus sur la base des critères de qualité régissant les normes internationales d'utilisation des produits sanguins. Ces plasmas ont servi à constituer trois pools de sérums anti-A, anti-B et anti-AB comprenant chacun 20 types de sérums différents. Un premier test réalisé avec ces pools avant traitement a donné des résultats proches des normes de référence. Après le traitement on a obtenu de meilleurs résultats par rapport à ces normes de référence. 30cc de nos réactifs ont permis de faire le groupage sanguin ABO de 150 individus. Les résultats ont confirmé ceux des réactifs du commerce. Le prix de revient de 30cc de nos réactifs pour grouper ces 150 sujets est de 1225 francs CFA alors que 30cc de réactifs du commerce pour phénotyper les 150 sujets reviennent à 18.000F.
A ce coût, les comparaisons ont montré qu'une structure sanitaire qui utilise les réactifs du commerce dépense annuellement 1.386.000 F CFA contre 86625 F CFA pour nos anticorps en nombre de tests égal et à performances superposables.
Ces résultats nous fondent à recommander la vulgarisation de la technique perfectionnée de production de ces anticorps polyclonaux, pour mettre à la disposition de nos formations sanitaires, des réactifs de performance avérés et moins onéreux.
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Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
________________________________ 104 Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
1) Assim lmmunogénétique des groupes sanguins in Assim immunologie générale deuxième édition Paris Arnette 1992. 291
2) Bigot A., Zohoun 1., Seclonde Ch., Lafia E., Kodjoh N. Guerrierie Cl. De Bruyer M. Production expérimentale des réactifs de groupage ABO au CNTS de Cotonou Médecine d'Afrique Noire, 1994 Vol 41 (7).
3) Brou Melaine Thibaut. Influence du paludisme grave plasmodium falciparum sur le test à l'antiglobuline (coombs direct) chez l'enfant ivoirien. Thèse médecine Abidjan (cote d'ivoire); université de cocody 2004-2005 N°4039.
4) Djohan Vincent. Contribution au phénotypage érythrocytaire chez les donneurs de sang.
Mémoire ces d'immunologie médicale Abidjan ( cote d'ivoire) ; université de cocody 2002-2003 N°1111.
5) Elmehdi A G Amahady . perfectionnement d'une techniquede production d'ac poly clonaux anti-érythrocytaire :systèmes ABO et RHESUSMémoire ces d'immunologie médicale Abidjan (cote d'ivoire) ;université de cocody 2002-2003 N°890.
6) Genetet B., système de groupe sanguine in B. Genetet hématologie ministère de l'éducation nationale.
7) Harvey Williame, la circulation du sang. Trad. du latin et précédé d'une étude historique par Charles Richet, ... Paris, Masson, 1692,232p
8) Kohler G. Milstein C. continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined speciality Nature,Aout 1975,256
105---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
9) Landsteiner. K, Winer. A, an agglutinable factor in human blood recognized by immum seraford Rhesus blood proc. soc. exp bail New York, 1940, 45.
10) N'goran kouassi lue kouame.contribution a l'étude desgroupes sanguins érythrocytaires : inventaire et répartitionselon les ethnies. Thèse médecine Bouaké (cote d'ivoire) ;université de Bouaké 2002-2003 N°52.
11) Race, Sanger Blood groups in man oxford, 1968 Blackwell Ed.
12) Race, Sanger Blood groups in man oxford, 1975 Blackwell Ed.
13) Said N., Regaya F., Benahmed F., Karoui M., Boukef K. Etude comparative de réactifs de groupa sanguin ABO Tunisie médicale, Nov. 1995, Vol73, N°11 447-480
14) Sanogo Adama, système Duffy et paludisme grave. Mémoire CES d'immunologie médicale Abidjan (Côte d'Ivoire) ; Université de Cocody 2003-2004 N°1126.
15) Seka Seka Joseph. Contribution à l'étude des groupes sanguins érythrocytaires : inventaire et répartition selon les ethnies thèse à Abidjan (Côte d'Ivoire) ; Université de Cocody 1985-1986 N°680
16) Seka Seka Joseph,Sombo Mambo François, Cabanes R. les groupes sanguins érythrocytaires en Côte d'Ivoire. Inventaire et répartition selon les ethnies, première partie. Publication médicale africaine, N°83, juin Juillet 1987
17) Sombo Mambo Francois, Seka Seka Joseph, Cabanes R. les groupes sanguins érythrocytaires en Côte d'Ivoire. Inventaire et répartition selon les ethnies, deuxième partie. Publication médicale africaine, N°94, 1988.
106---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
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SERMENT D'HIPPOCRATE
En présence des maîtres de cette écoleet de 111es chers condisciples, je prometet je jure au 110111 de l'être suprême, d'êtrefidèle aux lois de l'honneur et de la probitédans ] 'exercice de la médecine.
Je donnerai mes soins gratuits à l'indigentet je n'exigerai jamais de salaires au-dessusde mon travail.
Admis à l "intérieur des niaisons, mes yeuxne verront pas ce qui s'y passe, 111a langue tairales secrets qui me seront confiés et 111011 étatne servira pas à corrompre les mœursni à favoriser les crimes.
Respectueux et reconnaissant envers mes maîtres,je rendrai à leurs enfants l'instruction que j'ai reçuede leur part.
Que les hommes m'accordent leur estime si je suisresté fidèle à mes promesses, que je sois couvertd'opprobres et méprisé de 111es confrères si j'ymanque.
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
109------------------------------------ Y api Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Ce travail réalisé de Mars à septembre 2006 est le résultat d'une étude expérimentale et comparative. Il nous a permis de perfectionner une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-A anti-B et anti-AB. Cette étude s'est déroulée au laboratoire d'immunologie et d'hématologie du CHU de COCODY en trois étapes. La première étape a consisté à faire le phénotypage érythrocytaire dans le système ABO de 203 sujets des deux sexes, âgés de 18 à 30 ans. Dans une seconde étape 90 plasmas recueillis ont été sélectionnés sur la base de leur qualité puis ont subi une série de tests dans un ordre bien défini à savoir: -La recherche des critères de performance des anticorps naturels contenus dans ces plasmas que sont l'avidité, l'intensité de la réaction, le titre et le score. -La recherche et l'élimination des sérums contenant des anticorps immuns par deux tests :
~ Le test en milieu salin ~ Le test de Coombs indirect
Enfin, dans une troisième étape nous avons retenu 60 plasmas ayant donné des agglutinations à des titres supérieurs ou égaux à 32. A partir de ces plasmas retenus, nous avons constitué trois pools en regroupant les plasmas par type d'anticorps qu'ils contiennent. Ainsi chaque pool contient 20 types de plasmas. Avions ainsi pour le pool 1 des anti-A pour le pool 2 des anti-B et pour le pool 3 des anti- AB.
Afin d'améliorer la performance, chaque pool de plasmas a été stérilisé par de l'azide de sodium, recalcifié par du chlorure de calcium enfin, de l'héparine a été ajoutée pour bloquer la fibrinoformation. La distinction de ces trois pools entre eux a nécessité une coloration par l'éosine et le vert de méthyl. Les sérums ainsi préparés ont servi au phénotypage érythrocytaire de 150 sujets dans le système ABO.
Nos résultats ont laissé noter que nos réactifs avec des performances comparables à celles des réactifs du commerce confirment l'efficacité de la technique de production de ces anticorps polyclonaux. MOTS CLES: mise au point, technique de production, Anticorps polyclonaux, anti érythrocytaire.
110---------------------------- Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
Mise au point d'une technique de production d'anticorps polyclonaux anti-érythrocytaires dans le système ABO
Lu et approuvé Le président du jury d'Abidjan, Monsieur le professeur KODO Michel
Le Doyen de l'UFR des Sciences Médicales
Monsieur le professeur DIOMANDE Nohenou Isidore Jean-Marie
Vu et permis d'imprimer, Le président de l'Université de Cocody-Abidjan
Monsieur le professeur THEA Gokou Célestin
Par délibération, la faculté a arrêté que les opinions émises dans les dissertations qui lui sont présentées doivent être coïncidées comme propres à leur auteur et qu'elle n'entend leur donner aucune approbation, ni improbation.
111Yapi Yapi Aurélien Doctorat en Médecine (Thèse d'Etat)
'
RESUME
Ce travail réalisé de Mars à septembre 2006 est le résultat d'une étudeexpérimentale et comparative.
Il nous a permis de perfectionner une technique de production d'anticorpspolyclonaux anti-A anti-8 et anti-AB. Cette étude s'est déroulée au laboratoired'immunologie et d'hématologie du CHU de COCODY en trois étapes.
La première étape a consisté à faire le phénotypage érythrocytaire dans lesystème ABO de 203 sujets des deux sexes, âgés de 18 à 30 ans. Dans uneseconde étape 90 plasmas recueillis ont été sélectionnés sur la base de leur qualitépuis ont subi une série de tests dans un ordre bien défini à savoir :
. -La recherche des critères de performance des anticorps naturels contenusdans ces plasmas que sont l'avidité, l'intensité de la réaction, Ae titre et le score.
-La recherche et l'élimination des sérums contenant des anticorps immunspar deux tests :
+ Le test en milieu salin
+ Le test de Coombs indirect
Enfin, dans une troisième étape nous avons retenu 60 plasmas ayant donnédes agglutinations à des titres supérieurs ou égaux à 32. A partir de ces plasmasretenus, nous avons constitué trois pools en regroupant les plasmas par typed'anticorps qu'ils contiennent. Ainsi chaque pool contient 20 types de plasmas.Avions ainsi pour le pool 1 des anti-A pour le pool 2 des anti-8 et pour le pool 3des anti- AB.
Afin d'améliorer la performance, chaque pool de plasmas a été stérilisé parde l'azide de sodium, recalcifié par du chlorure de calcium enfin, de l'héparine aété ajoutée pour bloquer la fibrinoformation. La distinction de ces trois pools entreeux a nécessité une coloration par l'éosine et le vert de méthyl.
Les sérums ainsi préparés ont servi au phénotypage érythrocytaire de 150sujets da1ts le système ABO.
Nos résultats ont laissé noter que nos réactifs avec des performancescomparables à celles des réactifs du commerce confirmentss l'efficacité de latechnique de production de ces anticorps polyclonaux.
MOTS CLES: mise au point, technique de production, Anticorps polyclonaux, anti-érythrocytaires.
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