Tesista: Cecilia V. Naspi · 2014. 5. 6. · 1 2 4 Referencias 1 – Inyector 2 – Conector de...
Transcript of Tesista: Cecilia V. Naspi · 2014. 5. 6. · 1 2 4 Referencias 1 – Inyector 2 – Conector de...
-
12
4
Referencias
1 – Inyector
2 – Conector de Columnas
3 – Horno del Cromatógrafo
4 – Detector de Masas
3
Columnas 1 y 2
1
4
Columna
1
Columna
2
2
3
0,0
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
14,0
11,0 11,5 12,0 12,5 13,0 13,5 14,0 14,5 15,0
TIC (x 106)
Time (min)
p-c
ym
en
e
1,8
-cin
eo
l +
β-p
hell
an
dre
ne
(-)-
lim
onen
e
A
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
19,0 19,2 19,4 19,6 19,8 20,0 20,2 20,4 20,6 20,8 21,0
TIC (x 106)
Time (min)
β-f
ela
ndre
no
(-)-
lim
on
en
o
(+)-
lim
on
en
o
1,8
-cin
eo
l
B
0,3
0,8
1,3
1,8
2,3
2,8
3,3
18,0 18,5 19,0 19,5 20,0 20,5 21,0 21,5 22,0
TIC (x 106)
Time (min)
C
β-f
ela
ndre
no
γ-t
erp
ineno
2,0
4,0
6,0
8,0
10,0
12,0
14,0
16,0
18,0
17,0 17,5 18,0 18,5 19,0 19,5 20,0 20,5 21,0
TIC (x 106)
Time (min)
β-f
ela
nd
ren
o
(-)-
lim
on
en
o
(+)-
lim
on
en
o
α-f
ela
ndre
no
D
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
16,3 16,5 16,8 17,0 17,3 17,5 17,8 18,0
TIC (x 106)
Time (min)
(+)-β
-pin
en
e
(-)-β
-pin
en
e
E
1,8
2,3
2,8
3,3
3,8
4,3
4,8
14,0 15,0 16,0 17,0 18,0 19,0 20,0 21,0 22,0
TIC (x 106)
Time (min)
F
(+)-β-p
ineno
(-)-β-p
ineno
(-)-
lim
on
en
o
(+)-
lim
on
en
o
SEPARACIÓN Y CARACTERIZACIÓN ENANTIOMÉRICA DE TERPENOS DE ACEITES ESENCIALES DE EUCALYPTUS: HIBRIDACIÓN INTERESPECÍFICA COMO FUENTE DE REPELENTES DE AEDES ALBOPICTUS
Tesista: Cecilia V. Naspi - Director: Héctor M. Masuh
Aceite Esencial
HPLC
Fracciones
Hexano Extracción Líquido-líquido
Extracto Orgánico
CG-EM – DB5MS
CG – Quiral
Exceso Enantiomérico
Enantiómero mayoritario – Enantiómero minoritario
Enantiómero mayoritario + Enantiómero minoritario X 100
Análisis cromatográfico
CG-EM – DB5MS
CG- Quiral
Monodimensional : Cyclosil-β
Bidimensional : DBWAX +Cyclosil-β
Monodimensional : Cyclosil-β
Bidimensional : DBWAX +Cyclosil-β
CG- EM
CG-FID : Cyclosil-β
Extracción de aceite esencial de Eucalyptus nitens por hidrodestilación y análisis por GC-MS
Aceite Esencial
Aparato de Clevenger modificado
Fraccionamiento de aceites esenciales por cromatografía líquida de alta resolución y análisis por cromatografía gaseosa quiral: Cálculo de exceso enantiomérico de monoterpenos
Sistema cromatográfico bidimensional para el estudio de la composición enantiomérica de monoterpenos
Actividad repelente de aceites esenciales contra Aedes albopictus
Ciclodextrina Permetilada
Centro de
Investigaciones de
Plagas e Insecticidas
(UNIDEF-CONICET)
J B. de La Salle 4397
(B1603ALO),
Buenos Aires, Argentina.
3,0 8,0 13,0 18,0 23,0 28,0 33,0 38,0
1
2
3
4
5
6 7
8
9
10
Cromatograma (TIC) del aceite esencial en columna DB-5MS 1. Isobutil isobutirato (6.64%) 2. Isoamil n-butirato (5.13%) 3. p-cimeno (21.65%) 4.1,8-cineol (23.22%) 5. γ-terpineno (7.72 %) 6. 4-terpineol (1.54%) 7. α-terpineol (2.44%) 8. sesquiterpeno desconocido (11.58%) 9. sesquiterpeno desconocido (1.82%) 10. sesquiterpeno desconocido (5.90%)
Principales componentes del aceite esencial de E. nitens
Columnas DBWAx y Cyclosil-β en serie
Sistema cromatográfico bidimensional 1. Inyector
2- Conector de columnas 3. Horno del cromatógrafo
4. Detector de Masas
(A) Aceite esencial de Eucalyptus tereticornis en sistema monodimensional (Cyclosil-β) y (B) Aceite esencial de Eucalyptus tereticornis en sistema bidimensional (DB-WAX + Cyclosil-β) (C – E) Fracciones obtenidas de HPLC de E. tereticornis en sistema bidimensional (columna DB-WAX + Cyclosil-β) (F) Fracción obtenida de HPLC de E. grandis x E.tereticornis en sistema bidimensional (columna DB-WAX + Cyclosil-β).
Conclusiones
Es de suma importancia conocer la composición enantiomérica de los aceites esenciales y cómo es modificada por la hibridación entre especies de Eucalyptus. El
análisis quiral por GC-MS con una única columna no siempre resuelve todos los componentes presentes en muestras complejas como los aceites esenciales. Para ello
se construyó un sistema bidimensional donde la primera columna separa a los terpenos que luego son resueltos en sus enantiómeros en una segunda columna
quiral. Cuando el sistema bidimensional no logra resolver los componentes debido a coeluciones, el uso de técnicas de prefraccionamiento por HPLC permite obtener
fracciones más puras que son fácilmente analizables por GC-MS. Estos estudios son el punto de partida para el análisis posterior de la actividad
repelente y electróantenográfica de los terpenos obtenidos a partir de los aceites esenciales de Eucalyptus.
Introducción Aedes albopictus es un mosquito transmisor del dengue y la fiebre amarilla. Una alternativa para evitar la infección es el uso de repelentes basados en aceites esenciales (AE) y sus componentes. La hibridación interespecífica de Eucalyptus es una estrategia que permite modular la composición enantiomérica de los terpenos presentes en los AE. Los AE de E. grandis, E. camaldulensis, E. tereticornis, E. badjensis, E. nitens y sus híbridos se analizaron mediante cromatografía GC-MS en columnas quirales para conocer la composición enantiomérica de monoterpenos. Estos estudios son el punto de partida para el análisis posterior de la actividad repelente y electroantenográfica de los terpenos obtenidos del aceite esencial de Eucalyptus.
a Los compuestos se indican según el orden de elucion; b Indice Relativo de Retencion; c Exceso Enantiomerico (e.e.) expresado como porcentaje, el enantiomero predominante se muestra entre parentesis; - significa “no presente en el aceite esencial; d Exceso Enantiomerico calculado a partir del prefracionamiento con HPLC y por analisis GC-MS bidimensional (DB-WAX+Cyclosil-b). e Exceso Enantiomerico calculado a partir del prefracionamiento con HPLC y por analisis GC-MS monodimensional (Cyclosil-b). n.c terpenos que están siendo analizados para el cálculo de la composición enantiomérica
Compuestos
Enantiomericosa
RRI b
Exceso Enantiomerico / Enantiomero Predominante c
E. grandis E. tereticornis E. grandis x E.
tereticornis
E.
camaldulensis
E. grandis x E.
camaldulensis E.badjensis E.nitens
E.badjensis x
E.nitens
(S)-(-)-α-pineno 977 89.0 / (+) 47.2 / (+) 84.8 / (+) 56.2 / (+) 87.4 / (+) 73.6 / (+) n.c. 82.9 / (+)
(R)-(+)-α-pineno 980
(S)-(-)-camfeno 1010 74.3 / (+) - 43.3 / (+) - 10.1 / (+)e - - -
(R)-(+)-camfeno 1015
(R)-(+)-β-pineno 1025 34.7 / (-) 50.2 / (-)d 83.8 / (-) 30.13 / (-)d 80.7 / (-) 76.7 / (-) - -
(S)-(-)-β-pineno 1031
(S)-(-)-limoneno 1059 61.5 / (+)e 29.2 / (+)d 5.1 / (+)d n.c. 22.3 / (+)e 52.4 / (+)e n.c. n.c.
(R)-(+)-limoneno 1075
(R)-(-)-linalool 1219 75.1 / (+) 82.1 / (+) - 88.7 / (+) - - - -
(S)-(+)-linalool 1226
(S)-(+)-4-terpineol 1301 64.5 / (+) 82.6 / (-) 11.2 / (-) 82.4 / (-) - - n.c. -
(R)-(-)-4-terpineol 1308
(S)-(-)-borneol 1344 88.6 / (+) - 20.6 / (-) - 11.8 / (+) - - -
(R)-(+)-borneol 1348
(S)-(-)-α-terpineol 1352 66.1 / (+) 31.1 / (+) 7.2 / (-) 15.6 / (+) 26.5 / (+) 16.5 / (+) n.c. 17.2 (+)
(R)-(+)-α-terpineol 1362
Exceso enantiomérico de monoterpenos en aceites esenciales de Eucalyptus