METODE TITRIMETRI UNTUKMENENTUKAN KONTEN GARAM IODAT

Kandungan iodin dalam sampel garam iodat diukur dengan menggunakan titrasi iodometri.Deskripsi reaksiMekanisme reaksi mencakup dua langkah:1. Pembebasan iodin bebas dari garamPenambahan H2SO4 membebaskan iodin bebas dari iodat dalam sampel garam.KI berlebih ditambahkan untuk membantu melarutkan yodium bebas, yang cukup tidak larut dalam air murni dalam kondisi normal.2. Titrasi iodin bebas dengan tiosulfatIodin bebas dikonsumsi oleh natrium tiosulfat pada saat titrasi . Titrasi tiosulfat yang digunakan adalah sebanding dengan jumlah yodium bebas terbebas dari garam. Zat pati ditambahkan sebagai indikator external (tidak langsung) dari reaksi ini dan bereaksi dengan iodin bebas untuk menghasilkan warna biru.Bila ditambahkan menjelang akhir titrasi (yaitu, ketika hanya sejumlah yodium bebas yang tersisa) hilangnya warna biru, atau titik akhir, yang terjadi dengan titrasi lebih lanjut, menunjukkan bahwa semua yodium bebas yang tersisa telah dikonsumsi oleh tiosulfat.

Langkah reaksi untuk titrasi iodometri dari iodatI03- + 5I- + 6H+ 3I + 3H2O2Na2S2O3 + I2 2NaI + Na2S4O6 (Sodium Tetrathionate )

Persiapan reagen Air yang digunakan untuk metode ini harus air suling yang direbus, yang membutuhkan penyediaan unit distilasi.Sebagai alternatif sederhana, menetralisir air dengan resin campuran sederhana deionizing dapat digunakan, sehingga menghindari kebutuhan untuk unit distilasi yang mahal. 0,005 Natrium tiosulfat (Na2S203): Larutkan 1.24g Na2S2035H20 dalam air 1000m1. Simpan di tempat sejuk dan gelap.Volume ini cukup untuk 100-200 sampel, tergantung pada kadar iodin .Solusinya stabil selama minimal satu bulan, jika disimpan dengan benar. 2 N Asam sulfat (H2504): Perlahan-lahan menambahkan 6 ml H2SO4 terkonsentrasi sampai volume 90 ml.Buatlah untuk 100m1 dengan air.Volume ini cukup untuk 100 sampel.larutan stabil tanpa batas.Selalu menambahkan asam ke air, bukan air menjadi asam, untuk menghindari pembentukan kelebihan panas Aduk larutan sambil menambahkan asam. 10% Kalium iodida (KI): Larutkan KI 100g dalam 1000 ml air.Simpan dalam tempat yang sejuk dan gelap.Volume ini cukup untuk 200 sampel.Disimpan dengan benar Larutan stabil dalam enam bulan, asalkan tidak ada perubahan terjadi pada warna dari larutan. Indikator larutan zat tepung: Larutkan reagen grade natrium klorida (NaCl) dalam 100 ml air suling ganda.Sambil diaduk, tambahkan NaCl sampai tidak ada lagi larut.Panaskan isi gelas sampai kelebihan garam larut.Sementara pendingin, kristal NaCl akan terbentuk pada sisi gelas.Ketika benar-benar dingin, Tuang supernatan ke dalam botol bersih.Larutan ini stabil selama enam sampai dua belas bulan.Larutkan 1 g patikimia dalam 10 m1 air suling ganda. Lanjutkan mendidih sampai benar-benar larut.Tambahkan larutan NaCI jenuh untuk membuat 100 ml pati Volume solution.larutan cukup untuk pengujian 20 sampai 45 sampel. Siapkan larutan pati segar setiap hari, karena larutan pati tidak dapat disimpan.

Prosedur:1. Garam dengan berat 10 g, diisi pada Erlenmeyer 2. Larutkan garam dengan sekitar 30 ml air suling3. Tambahkan dengan air suling sampai volume akhir adalah 50 ml4. Tambahkan dengan 1 ml 2 N H2SO45. Tambahkan dengan 5 ml KI 10%.Jika garam itu mengandung iodin, warna larutan akan berubah menjadi kuning6. Tutup Erlenmeyer dan simpan pada tempat yang gelap sekitar 10 menit7. Titrasi denganx natrium tiosulfat (Na2S2O3) solusi sampai warnanya kuning pucat8. Tambahkan dengan sekitar 2 ml larutan zat tepung, warna akan berubah menjadi ungu tua.9. Lanjutkan titrasi sampai warna hilang10. Volume Na2S2O3 yang digunakan dibandingkan dengan tabel untuk menghitung konsentrasi iodinCatatan:1. Penambahan zat pati ketika warna larutan adalah kuning pucat2. Kondisi reaksi harus di bawah 30C karena iodin adalah zat uap

INDEX DIASTASE DALAM URINE

PENDAHULUANZat pati merupakan bagian utama dari diet manusia untuk sebagian besar orang di dunia, serta hewan lainnya.Zat patidi sintesis secara alami dalam berbagai tanaman. Contoh beberapa tanaman dengan kadar zat pati tinggi adalah jagung, kentang, beras, sorgum, gandum, dan singkong.Hal ini tidak mengherankan bahwa semua ini adalah bagian dari apa yang kita konsumsi untuk memperoleh karbohidrat.Mirip dengan selulosa, molekul zat pati adalah glukosa polimer dihubungkan bersama oleh, alfa-1,4 dan alpha-1,6 glucosidic bonds, yang bertentangan dengan ikatan beta-1,4 glucosidic untuk selulosa. Untuk memanfaatkan karbon dan energi yang tersimpan di zat tepung, sistem pencernaan manusia, dengan bantuan dari enzim amilase, terlebih dahulu harus memecah polimer menjadi gula assimilable lebih kecil, yang akhirnya dikonversi ke unit glukosa individu dasar.Karena adanya dua jenis hubungan, alpha-1,4 dan alpha-1, 6, struktur yang berbeda mungkin terdapat pada molekul zat pati. Rantai polimer tunggal yang tidak bercabang dan memiliki 500-2000 subunit glukosa dengan hanya alfa-1,4 glucosidic bonds disebut amilosa. Adanya hubungan dengan alfa-1,6 glucosidik yang menghasilkan polimer glukosa yang bercabang disebut amylopectin. Percabangan dari derajat amilopektin adalah sekitar satu per dua puluh lima unit glukosa dalam segmen percabangan.Fungsi lain dari senyawa tersebut berhubungan erat sebagai penyimpanan glukosa pada sel hewan yang disebut glikogen, yang memiliki satu cabang per 12 unit glukosa. Derajat percabangan dan panjang rantai samping bervariasi dari sumber ke sumber, tetapi secara umum semakin banyak rantai yang bercabang, semakin zat patidapat terlarut.Zat patiumumnya tidak larut dalam air pada suhu kamar.Karena itu, zat pati di alam disimpan dalam sel sebagai butiran kecil yang dapat dilihat di bawah mikroskop. Granula zat pati yang cukup tahan terhadap penetrasi oleh air dan enzim hidrolitik karena pembentukan ikatan hidrogen dalam molekul yang sama dan dengan molekul yang berdekatan. Namun,ikatan inter- dan intra-hidrogen bisa menjadi lemah karena suhu suspensi yang dinaikkan. Ketika larutan suspensi zat pati dipanaskan, ikatan hidrogen melemah, air dapat diserap, dan menjadi butiran zat tepung. Proses ini biasa disebut gelatinisasi karena dalam larutan yang dihasilkan memiliki konsistensi seperti gelatin dan memilik viskositas yang tinggi.Proses yang sama telah lama digunakan untuk mengentalkan kaldu dalam persiapan makanan.Tergantung pada lokasi relatif dari obligasi yang dihitung dari ujung rantai, produk dari proses pencernaan adalah dekstrin, maltotriosa, maltosa, dan glukosa. Dekstrin lebih pendek, segmen pati pecah yang membentuk sebagai hasil darihidrolisis acak obligasi glucosidic internal.Sebuah molekul dari maltotriosa terbentuk jika ikatan ketiga dari ujung molekul pati yang dibelah, sebuah molekul maltosa terbentuk jika titik serangan adalah obligasi kedua, sebuah molekul glukosa dihasilkan jika ikatan yang dibelah adalah terminal satu, dan sebagainya.

BAGAIMANA CARA PENGGUNAANNYA?Tes darah untuk amilase digunakan untuk mendiagnosis pankreatitis (pembengkakan pankreas) dan penyakit pankreas lainnya.Kenaikan hampir amilase segera pada awal serangan pankreatitis, dan turun setelah sekitar 2 hari, membantu untuk menentukan diagnosis ini.Amilase ini juga digunakan (pada tingkat lebih rendah) dalam diagnosis dan tindak lanjut dari kanker pankreas, ovarium, atau paru-paru; serangan kandung empedu, dan gondok.Tes amilase dapat dilakukan jika Anda menunjukkan gejala gangguan pankreas, seperti sakit perut yang parah , demam, kehilangan nafsu makan, atau mual.Nilai normal untuk amilase tergantung pada metode yang digunakan untuk mengujinya. Pada pankreatitis, tingkat amilase yang sangat tinggi, sering 5 - 10 kali tingkat normal. Peningkatan kadar amilase juga dapat menunjukkan kanker pankreas, ovarium, atau paru-paru; tuba) kehamilan; serangan kandung empedu; gondok; obstruksi usus, atau ulkus berlubang. Penurunan kadar amilase dapat mengindikasikan kerusakan pada pankreas, kanker pankreas, penyakit ginjal, dan toksemia kehamilan.Pada pankreatitis akut, tingkat kadar amilase tinggi biasanya berhubungan dengan enzim lain yang disebut lipase. amilase dan lipase biasanya memerintahkan sama untuk mendiagnosis pankreatitis akut.Pankreatitis kronis sering dikaitkan dengan alkoholisme.Hal ini juga dapat disebabkan oleh trauma, obstruksi duktus pankreas, dan berhubungan dengan kelainan genetik seperti cystic fibrosis.Tingkat amilase dapat cukup meningkat dengan pankreatitis kronis atau mungkin akan menurun ketika sel-sel yang menghasilkan amilase di pankreas menjadi rusak atau hancur.

PRINSIPPada beberapa larutan yang mengandung volume zat pati terlarut yang sama, tambahkan dengan konsentrasi amilase, inkubasi pada suhu 37C, selama 30 menit, amilase akan menguraikan zat pati menjadi erythrodexin.Pada konsentrasi terkecil, amilase dapat menguraikan zat pati menjadi erythrodexin yang disebut indeks diastase.Dalam percobaan ini kita menggunakan urin sebagai sumber amilase (diastase).

Reagen1. Larutan zat tepung: zat pati0,1% yang mengandung NaCl 0,5%2. Larutan iodin

PROSEDUR Semua pipet yangdigunakan, harus ditutupi dengan kapas Siapkan 10 tabung, memberikan nomor dari 1-10 Memasukkan urin ke dalam tabung dengan volume yang berbeda pada setiap tabung, tambahkan dengan air sampai volume akhirnya adalah 1 mlCatatan: Tabung 1-5 isi dengan urin encer (1:10) 6-10 tabung isi dengan urin tanpa pengenceran Campur, inkubasi semua tabung dalam water bath 37C selama 30 menit dengan tepat Dinginkan di air 5 menit untuk menghentikan reaksi Tambahkan 1 tetes larutan iodin ke dalam setiap tabung, campur dan lihat perubahan warna Ketika warna hilang, tambahkan dengan 1-2 tetes larutan iodin lagi Tabung yang terlihat berwarna pink (bukan biru atau ungu) yang mengandung amilase cukup di tambahkan 2 ml larutan zat pati 0,1% untuk diubah menjadi erythrodextrinIndeks Diastase Urine (d 37 / 30 ') =Volume terkecil dari urin yang di tambahkan 2 ml larutan zat pati0,1% pada 37C selama 30 menit

HASILIndeks diastase dalam urin normal = 5-20Dalam beberapa penyakit pankreas, peningkatan nilai mungkin lebih dari 200.

Catatan: Ketika nilai yang terlalu tinggi, eksperimen harus diulang lagi dengan urin encer. Bila sebelum 30 menit, larutan telah berubah menjadi merah muda; sampel harus dienceran juga.

Bottom of FormTop of FormPEMISAHAN SERUM PROTEIN DENGAN ELEKTROFORESIS

TeoriPartikel bermuatan dalam larutan bermigrasi ke elektroda muatan yang berlawanan ketika sebuah medan listrik diterapkan, dan prinsip ini digunakan dalam elektroforesis untuk memisahkan molekul yang berbeda.Mobilitas elektroforetik terutama tergantung pada kelompok hadir pada permukaan partikel dan besarnya muatan yang dibawa oleh kelompok ionogenic bervariasi sesuai dengan kekuatan ion dan pH dari medium dengan cara yang khas. Pemisahan molekul dapat dilaksanakan dengan memilih media yang sesuai.

Media pendukungPengaruh konveksi dapat dikurangi seminimal mungkin jika elektroforesis dilakukan pada media pendukung diresapi dengan larutan buffer.Pemisahan yang tegas antara campuran dapat diefektifkan menjadi zona yang berbeda dan teknik ini telah menggantikan metode klasik elektroforesis terikat batas.

Selulosa asetatBahan ini menunjukkan keberhasilan pemisahan minimal adsorpsi dan jelas campuran ke dalam zona diskrit.Karena itu, senyawa yang mudah dielusi dengan pemulihan yang baik.Jumlah yang sangat kecil bahan yang diperlukan dan pemisahan dapat diselesaikan hanya dalam satu jam atau lebih dibandingkan dengan semalam untuk elektroforesis kertas.Selulosa asetat Namun lebih mahal dari kertas.

Larutan bufferMedia suspensi perlu hati-hati dipilih karena beberapa ion penyangga bereaksi dengan senyawa yang diselidiki; borate untuk kompleks bentuk contoh dengan sugas.PH dipilih tergantung, tentu saja, pada campuran tertentu dalam penyelidikan tetapi pemisahan maksimum secara umum diperoleh pada titik isoelektrik dari salah satu senyawa. PH yang dipilih tidak harus menyebabkan perubahan kimia atau ion denaturasi dari molekul pada pemeriksaan.Kekuatan ionik dari buffer adalah seperti yang biasanya terletak dalam kisaran 0,05-0,15 dan merupakan kompromi antara dua ekstrem.Pada kekuatan ion rendah, ada migrasi cepat dan produksi panas rendah tetapi difusi ditandai.Di sisi lain, pada ikatan tinggi kekuatan ion tajam diperoleh tetapi ada produksi panas lebih tinggi dan migrasi melalui jarak pendek.

Bidang elektrikSebuah sumber DC yang stabil dibutuhkan yang sebaiknya memberikan tegangan konstan atau saat ini.Sebuah kekuatan medan dari 2 sampai 8 panjang V / cm cocok untuk pemisahan paling pada suhu kamar.Jika kekuatan medan lebih besar dari 10 V / cm efek pemanasan adalah sedemikian rupa sehingga jumlah berlebihan air hilang oleh penguapan. Buffer arus dari tangki penyangga untuk menggantikan air yang hilang, sehingga menyebabkan perpindahan zona.Jika pemanasan berlebihan, senyawa dapat di denaturasi.Metode pendinginan media pemisahan tersedia sehingga bidang kekuatan 100 V / cm dapat digunakan, tetapi peralatan khusus dengan sejumlah perangkat sangat mudah diperlukan untuk bekerja pada tegangan tinggi.Keuntungan dari elektroforesis tegangan tinggi, tentu saja, bahwa pemisahan sangat cepat.Senyawa dengan berat molekul rendah mengalami difusi berlebihan dan sebaiknya diselesaikan dengan elektroforesis pada tegangan tinggi.Asam amino dan peptida dari hydrolysated proteins dapat dengan cepat dipisahkan dalam kondisi dan tempat-tempat kompak diperoleh sebanding dengan melihat pada kertas kromatografi.

Elektroforesis aparatusAparat elektroforesis terdiri dari media memisahkan terhubung ke dua tank electroda melalui kertas saring atau kain kassa.Tank-tank dibuat dalam dua kompartemen yang dihubungkan dengan sumbu; satu bagian berisi elektroda platinum dan yang lainnya adalah berhubungan dengan media elektroforesis.Perubahan pH terjadi di wilayah dari elektroda bahkan dalam larutan buffer, dan pembagian tangki menjadi dua kompartemen memastikan bahwa perubahan tersebut dekat dengan fase dukungan diminimalkan.Hubungan antara fase dan larutan buffer dibuat oleh beberapa ketebalan kertas filter Whatman 3 mm atau kasa saturasi rumah sakit dengan larutan buffer.Koneksi ini harus menyebabkan penurunan minimum dalam potensial di seluruh panjangnya.Diagram dari tangki khas untuk pemisahan horisontal .

AplikasiElektroforesis pada tegangan rendah paling baik digunakan untuk pemisahan molekul besar (WM> 1000) seperti peptida, protein dan asam nukleat.Pemisahan semalam rendah senyawa dengan berat molekul biasanya miskin karena difusi yang berlebihan, sehingga senyawa asam amino tersebut sebaiknya diselesaikan pada tegangan tinggi.Ada berbagai aplikasi elektroforesis dalam bidang kedokteran dan biokimia klinis, dan salah satu contohnya adalah analisis protein serum untuk kehadiran normal konstitusi dan perubahan dalam ransum, globulin albumin dalam penyakit.

Bahan1. Horisontal elektroforesis aparatus2. Power pack3. Barbitone buffer (0,07 M, pH 8,6)4. Pewarna ponceau S protein (0,2% dalam 3% trichlor asam asetat / TCA)5. Asam asetat (0,5%)6. Serum / plasma7. Selulosa asetat strip8. Kertas Whatman 3 mm

Metode: Melembabkan strip selulosa asetat (10x2,5 cm) dengan menempatkannya pada permukaan buffer dalam piring datar dan memungkinkan buffer untuk soal naik dari bawah Benamkan strip sepenuhnya dengan lembut goyang hidangan, lalu keluarkan dengan forsep Ringan menghapuskan strip, tempat di sumbu kertas Beralih pada saat ini dan menyesuaikan diri dengan 0,4 mA per sentimeter lebar strip Oleskan beruntun serum / plasma dari katoda.Hal ini paling baik dilakukan dengan membimbing aplikasi dengan penggaris ditempatkan di tangki Melakukan elektroforesis untuk 1,5-2 jam Keluarkan strip dan noda dengan Ponceau S selama 10 menit.Sebelum pemanasan tidak diperlukan di sini sejak TCA perbaikan protein untuk pewarnaan.Hapus pewarna kelebihan dari strip dengan mencuci berulang kali dalam asam asetat 5% sampai latar belakang akan dihapus Biarkan kering dan memeriksa pola yang diperoleh