Tema 1: Técnicas Histológicas(2da Parte)

Prof. Luis Betancourt

1.Describir otras técnicas de coloración y contrastación como: PAS, Sudán, tricrómico, Impregnaciones.2.Describir las diversas técnicas especiales de análisis utilizadas en biología celular e Histología.

OBJETIVOS

MÉTODOS BASADOS EN LA REACCIÓN DE SCHIFF PARA GRUPOS ALDEHÍDO

El Método del ácido peryódico-Schiff (PAS) se emplea para determinar la presencia de moléculas como el glucógeno, glucoproteínas y glucosaminoglucanos.

El Reactivo de Schiff es la leucofucsina o bisulfato de fucsina. Es incoloro, pero puede formar un color rojo estable producto de adición con grupos aldehído.

Lo que hace es romper la unión de los anillos de las hexosas formando grupos aldehído o rompen los enlaces de las hexosaminas de los glucosaminoglucanos, también formando grupos aldehído y haciendo reaccionar a estos grupos con el reactivo de Schiff. También sirve para identificar membranas basales y fibras reticulares.

http://www.flickr.com/photos/euthman/3423439397/

http://www.bris.ac.uk/vetpath/cpl/histmeth.htm#Top

• http://www.bris.ac.uk/vetpath/cpl/histmeth.htm#Top

HISTOLOGICAL STAINING TECHNIQUESFrom the Veterinary Histopathology LaboratoryA participant in the External Quality Assessment Scheme in Veterinary PathologyHELP

El Método de Feulgen este es un método especifico para la determinación histoquímica del DNA, donde la hidrólisis ácido débil con cloruro de hidrógeno (HCl) se separan los grupos púricos del DNA. De este modo se abre el anillo de desoxirribosa, y se forma un grupo aldehído que reacciona con el reactivo de Schiff. Se obtiene un color magenta o rojo. No se tiñe el RNA.

Histological and Histochemical Methods, Theory and Practice, J.A. Kiernan, Third Edition, 1999.

http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/Mitose/img/tec-feul.jpg

DETERMINACIÓN HISTOQUIMICA DE LIPIDOS

Luego de la fijación con formalina se realizan cortes por congelación, por lo que se evita extraer los lípidos con los solventes orgánicos.

Para la determinación histoquímica se emplean muy a menudo los denominados COLORANTES SUDÁN. Estos son casi insolubles en agua. El colorante Sudán se emplea disuelto en un solvente orgánico en el cual los lípidos sean relativamente insolubles, y en el que también el colorante sea sólo parcialmente soluble.

Además, el colorante debe ser más soluble en lípidos que en el solvente, puesto que la coloración tiene lugar porque las moléculas del colorante se distribuyen entre los lípidos y el solvente en relación con su solubilidad en ambos. Para evitar la extracción del colorante y los lípidos, luego de la coloración se montan los cortes en medio acuoso.

Los colorantes Sudán tiñen fuertemente los TRIGLICÉRIDOS,como por ejemplo:  •SUDÁN RED O SUDÁN III, EN LA COLORACIÓN DE CÉLULAS ADIPOSAS.   •SUDÁN BLACK O SUDÁN IV, SE EMPLEA EN LA COLORACIÓN DE LAS VAINAS MIELÍNICAS DE LAS FIBRAS NERVIOSAS COMPUESTAS POR LIPOPROTEÍNAS.  

http://www.histol.chuvashia.com/atlas-en/connective-03-en.htm

The Golgi silver impregnation technique is a simple histological procedure that reveals complete three-dimensional neuron morphology. This method is based in the formation of opaque intracellular deposits of silver chromate obtained by the reaction between potassium dichromate and silver nitrate (black reaction)

Camillo Golgi Santiago Ramón y Cajal

The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1906 was awarded jointly to Camillo Golgi and Santiago Ramón y Cajal "in recognition of their work on the structure of the nervous system"

Photos: Copyright © The Nobel Foundation

This image shows some animal cells. They are stained to show the cytoskeleton licrotubules (green), actin filaments (red), and the nucleus (blue). The cytoskeleton is not usually shown in simple diagrams (Courtesy of Mark Shipman, James Blyth and Louise Cramer, Laboratory for Molecular Cell Biology, University College London, UK)