Técnicas de Citogenética
-
Upload
luisurielm -
Category
Documents
-
view
227 -
download
0
Transcript of Técnicas de Citogenética
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 1/19
TÉCNICAS DE
CITOGENÉTICA
Herramientas Moleculares de la Genética M(Té
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 2/19
La citogenética es la parte de la genética que estuapariencia microscópica de los cromosomas y
anomalías en la enfermedad.
Citogenética Convencional
definir distintas entidades
comprender los mecanismos
implicados en su patogenia
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 3/19
Baja sensibilidad
Requiere células en
neoplásico
Interpretación dific
obtener cromosoma
Permite el análisis d
células
VENTAJAS LIMITACIONES
Aporta información de todos los
cromosomas
Bajo coste económico
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 4/19
• Obtencin de Muestra
• Estimulacin con !ITOHEMAG"#TININA
• Adicin de CO"CHICINA$ a%& blo'& ol& HusoAcromtico*lo'& Mitosis en +ro,ase-Meta,ase
• Administracin de una Solucin Hiotnica(.Cl)
• !i/acin en Sol& de Alco0ol Metilico-1cd&Acético (234)
• "a5ado 0asta un botn blanco$ 5olumen
• 9 usada GTG$ con Trisina : coGiemsa
• "aminilla limia& Sol& Alco0licaMetanol <= a TA• Goteo (2) a ?7-?8 cm sobre el
• @eoso or 2 mn$ en ael absoA%ua 27 C
• Obser5acin a seco ,uerte$ Bdiscromosmica
• Maduracin 2 C or ? 0rs o
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 5/19
Indicaciones Clínicas pAnálisis Cromosómico
Problemas precoces en el crecimiento y desarrollo
Nacidos Muertos y Muerte Neonatal
Problemas de Fertilidad
Nacidos Muertos y Muerte Neonatal
Problemas de Fertilidad
Historia Familiar
Neoplasia
mbara!o de una mu"er de edad a#an!ada
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 6/19
Metodología (Bandeo) ÚtiDiagnóstico de la MayoríaAlteraciones Cromos
Numéricas y structurales
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 7/19
"
!an"a# $
M$s %tili!adas
"os cromosomas se tratan rimero con Trisina aroteFnas$ : desués con Giemsa& Cada ar de crtie de una ,orma caracterFstica de bandas clar
(*ANDAS G)&
Se identi6can totalmente todos los cromosomas$ asnaturalea de las anomalFas numéricas : estructura
l colorante interact&a con las proteínas de cromosoma'
en grupos disulfuro en las bandas positi#as (oscuras)
sulf*idrilo en las negati#as (claras)' las bandas + oscura
con las cromómeras del paquiteno' que se presentan en,N- de replicación tardía' con alto contenido de -denina
relati#amente pocos genes acti#os
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 8/19
"
!an"a# $
M$s %tili!adas
"os cromosomas se tratan rimero con Trisina aroteFnas$ : desués con Giemsa& Cada ar de crtie de una ,orma caracterFstica de bandas clar(*ANDAS G)&
Se identi6can totalmente todos los cromosomas$ as
naturalea de las anomalFas numéricas : estructura
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 9/19
B!an"a# C
Hidrido de *ario teido con Giemsa
Se basa en la desnaturaliacin : renaturaliacin dcromosmico
Tie de ,orma selecti5a la #eterocromatina consde los centrmeros3 4'$ ;' : 4<'$ arte distal de J'
Ktil ara in5esti%ar rearre%los cromosmicos cre%iones ericentroméricas$ olimor6smos marcadores&
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 10/19
B!an"a# C
Hidrido de *ario teido con Giemsa
Se basa en la desnaturaliacin : renaturaliacin dcromosmico
Tie de ,orma selecti5a la #eterocromatina consde los centrmeros3 4'$ ;' : 4<'$ arte distal de J'
Ktil ara in5esti%ar rearre%los cromosmicos cre%iones ericentroméricas$ olimor6smos marcadores&
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 11/19
C
Intercam%io "e Crom&ti"e# 'ermana#
Obser5acin de un cromtide clara : otra oscura (C
en ciertas re%iones cromosmicas$ 0a: 'ue estanda
9 ICH uede indicar >S de *loom o esosicin a ael DNA
A los culti5os de lin,ocitos u otras células durrelicacin se le a%re%a un anlo%o de base la desoiuridina)$ durante dos ciclos ms
Se cosec0a de la ,orma 0abitual : se de/a acuorescente de Hoec0st se tratan con una solucineonen a lu ultra5ioleta (#) -lmara %ermici(?8 nanmetros)-
Tincin con Giemsa&
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 12/19
C
Intercam%io "e Crom&ti"e# 'ermana#
Obser5acin de un cromtide clara : otra oscura (C
en ciertas re%iones cromosmicas$ 0a: 'ue estanda9 ICH uede indicar >S de *loom o esosicin a ael DNA
A los culti5os de lin,ocitos u otras células durrelicacin se le a%re%a un anlo%o de base la desoiuridina)$ durante dos ciclos ms
Se cosec0a de la ,orma 0abitual : se de/a acuorescente de Hoec0st se tratan con una solucineonen a lu ultra5ioleta (#) -lmara %ermici(?8 nanmetros)-
Tincin con Giemsa&
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 13/19
&
(egione# Organi)a"ore# Nucleolare#
Genes ara @NA de tio ribosomal (r@NA) el nitraselecti5amente estas re%iones 'ue ,ueron transc
acti5a durante la inter,ase : resentes econdensados en la subsecuente meta,ase (acrocéntricos)
Estudio de los olimor6smos arentales : demostrar el ori%en de cromosomas marcasatelitados&
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 14/19
&
(egione# Organi)a"ore# Nucleolare#
Genes ara @NA de tio ribosomal (r@NA) el nitraselecti5amente estas re%iones 'ue ,ueron transc
acti5a durante la inter,ase : resentes econdensados en la subsecuente meta,ase (acrocéntricos)
Estudio de los olimor6smos arentales : demostrar el ori%en de cromosomas marcasatelitados&
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 15/19
!an"a# *
Primera desarrollada para cromosomas *umanos' 4aspers
Ktiles ara detectar 5ariantes ocasionales de mor,olo%Fa o la tincin de los cromosomas$0eteromor6smo&
Di0idrocloruro de 'uinacrina o mostaa de 'uinacr
min$ se en/ua%a a la bre5edad en a%ua destilada&"a 'uinacrina se une al DNA : roduce un atruorescencia brillante : menos brillante (bandeo Gre%iones ericentroméricas de los cromosomas 4débilmente teidas& "os satélites de los acrocéntricodel cromosoma JP estn brillantemente teidas
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 16/19
!an"a# *
Primera desarrollada para cromosomas *umanos' 4aspers
Ktiles ara detectar 5ariantes ocasionales de mor,olo%Fa o la tincin de los cromosomas$0eteromor6smo&
Di0idrocloruro de 'uinacrina o mostaa de 'uinacr
min$ se en/ua%a a la bre5edad en a%ua destilada&"a 'uinacrina se une al DNA : roduce un atruorescencia brillante : menos brillante (bandeo Gre%iones ericentroméricas de los cromosomas 4débilmente teidas& "os satélites de los acrocéntricodel cromosoma JP estn brillantemente teidas
( li i, "- " l /0 ! " (
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 17/19
y
(e+licaci,n tar"-a "el /0 !an"a (
@e%iones claras en esas técnicas son 5istas oscuras o
Obtencin incubando las laminillas en soluciones desués teidas con Giemsa
(colorante uorescente naran/a de acridina) 'ue alDNA : ecitada or la lu # de una lmara dmicroscoio con uorescencia$ roduce un atrn 5erde
st$ndar en caso de mal procedimiento en + o 6' ,utrillau
rearre%los 'ue in5olucren lostelmeros
( li i, t "- " l /0 ! " (
7/21/2019 Técnicas de Citogenética
http://slidepdf.com/reader/full/tecnicas-de-citogenetica 18/19
y
(e+licaci,n tar"-a "el /0 !an"a (
@e%iones claras en esas técnicas son 5istas os
bandeo @PObtencin incubando las laminillas en solucicalientes : desués teidas con Giemsa
(colorante uorescente naran/a de acridiintercalarse en el DNA : ecitada or la lulmara de mercurio en un microscoio con
roduce un atrn de bandeo ro/o : 5erde
st$ndar en caso de mal procedimiento en + o 6' ,utrillau
rearre%los 'ue in5olucren lostelmeros