TÉCNICAS BACTERIOLÓGICAS BÁSICAS

DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

SEMINARIOMicrobiología General

2010Bioq. María Viviana Bojanich

Para llegar al correcto diagnóstico de laboratorio hay que conocer:

Técnicas o métodos a utilizar (TBB)RAZONAR

1- muestras2- precauciones para recuperar y diagnosticar m.o. asociados a

la patología y no FN3- conservación de la muestra4- técnica diagnóstica a utilizar en cada caso5- interpretación de los resultados6- utilidad en el contexto del cuadro del paciente.

Ciclo o etapas del diagnóstico microbiológico

Recolección adecuadade la

muestra

Consulta al médico

Orden de análisis

Envío al laboratorioTransporte y conservación

Ingreso de los datos

Procesamiento de la muestra

Interpretación de cultivos

Interpretación del resultadoInforme final

Interpretación del informe e instauración de la terapia

Identificaciónbacteriana

RECOLECCIÓN DE MUESTRAS CONCEPTOS BÁSICOS

La muestra debe ser material del verdadero sitio de infección.Debe recogerse con un mínimo de contaminación (ej. saliva, piel, orina)Momento o período óptimo para tener la oportunidad de aislar los m.o.Obtener suficiente cantidad de muestra.Uso de dispositivos de recolección de muestras y medios de cultivo adecuados.

Obtener las muestras antes de la administración de ATB.Rotular correctamente el envase que contiene la muestra

NombreNº de IDMaterial de ………..MédicoDía/HoraDiagnóstico presuntivo

CUANDO LA MUESTRA NO ES BUENA POCO PUEDE HACER EL LABORATORISTA PARA LLEGAR A UN BUEN RESULTADO.

TENER CLARO SI EL AISLAMIENTO ESTÁ ASOCIADO AL CUADRO CLÍNICO

Transporte de muestrasTiempo límite de dos horas entre la recolección y su procesamiento.Medios de transporte ( Stuart, Amies, Carey-Blair).Función: preservar la viabilidad sin permitir multiplicación significativa de m.o.Transporte externo embalar y rotular .

OMS 2005- Manual de bioseguridad en el laboratorio

Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categoría A

OMS 2005- Manual de Biseguridad en el laboratorio

Embalaje/envasado y etiquetado de sustancias infecciosas de la categoría B

Ejemplos de sistemas de embalaje/envasado triple (Ilustraciones amablemente cedidas por la IATA, Montreal (Canadá))

Algunas consideraciones…Inoculación: proceso de introducción de bacterias viables en un medio de cultivo líquido o sobre la superficie de un medio sólido.Cultivo puro: población bacteriana homogénea.Colonia: masa visibles de bacterias que se replicaron luego de ser diseminadas en la superficie de un medio de cultivo sólido.Clon: las bacterias que se encuentran en una colonia y derivan de una única célula.UFC (unidad formadora de colonias)

Identificación: permite encuadrar un organismo en un grupo taxonómico específico, dentro de una “clasificación” previamente establecida.Nomenclatura: forma en que se puede definir y comunicar las características taxonómicas de un grupo de bacterias, denominadas especies.Especie: bacterias agrupadas y estudiadas según sus aspectos genéticos, morfológicos, fisiológicos y culturales. (Sistema binomial de Ligneo, Género y especie, más variedades, biovares, tipos, etc) Ejemplo: Staphylococcus aureus, Escherichia coli

Procesamiento de muestras

MUESTRA

EXAMEN MICROSCÓPICO EXAMEN MACROSCÓPICO

CULTIVO para aislamiento primario

e IDENTIFICACIÓN

Examen microscópico directo

Examen Microscópico

DIRECTO

FrescoObservación directa entre porta y cubre Gram Ziehl-Neelsen

Kinyoun

Examen en FrescoPermite ver:

Calidad de la muestraGrado de inflamación

(neutrófilos, piocitos, hematíes)Elementos levaduriformes y

micelialesEstructuras parasitariasMovilidad bacteriana

ColoracionesGramZielhl-NeelsenGiemsaAzul de metileno

Coloración de GRAM

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Cultivo para aislamiento primario

Medios de cultivosólidos

Medios generaleso enriquecidos Medios selectivos Medios diferenciales

Técnicas de siembraEstríaAgotamientoRecuento semi-cuantitativo de colonias

Condiciones de cultivo1) Seleccionar temperatura y atmósfera de incubación- Temperatura 35-37ºC- Atmósfera :(de acuerdo a las exigencias de O2 y CO2)- Aerobiosis o aire: 21% O2- Lata con vela: 12 a 17% O2 y 3 a 5 % CO2- Microaerofilia: porcentaje constante de 10% CO2 y 5% O2- Anaerobiosis: sistemas que provean 5% CO2, 85% N2, 10% H2 y NADA

de O2 de manera constante.- Humedad

2) Tiempo necesario para visualizar el desarrolloEn general: 24-48 hsMycobacterium tuberculosis más de 30 días

Estudio de colonias

Características macroscópicas de las coloniasObservar: bordes o margen, color, hemólisis, textura,

forma, elevaciónColoración de gram o gram de colonia

Identificación preliminar basada en características metabólicas

Pruebas rápidas de identificaciónTrabajar siempre con una colonia aislada y previa coloración de gramSon pruebas que se realizan en poco tiempo (de 2 min a 30 min)Permite “entrar” en los algoritmos de identificación.Ejemplos: catalasa, oxidasa, PyR, coagulasa en portaobjeto o ligada.

Catalasa Oxidasa PyR

Pruebas de identificación bioquímicaConsiste en el estudio de sistemas enzimáticos que son únicos para cada especie y sirven como marcadores de identificación.Ejemplos: utilización y/o fermentación de azúcares (lactosa, glucosa, manitol), movilidad, actividad de Dnasa, coagulasa libre, reducción de nitratos, solubilidad en bilis, crecimiento en NaCl, etc.

Existen sistemas comerciales.

Ejemplos: galerías API

Siembra en tubo pico de flauta

Pruebas de susceptibilidad a antibióticosSe realiza con la bacteria identificadaNo se aplica a todos los aislamientos