Técnicas Avançadas em Biologia Cultivo de células Celular ... · Radioautografia Radioautografia...
Transcript of Técnicas Avançadas em Biologia Cultivo de células Celular ... · Radioautografia Radioautografia...
1
Técnicas Avançadas em Biologia Celular e Molecular
Cultivo de células
George Gey, 1951Células HeLa (Henrietta Lacks): primeira cultura de células
Cultura de bactérias, Escherichia coli
Centrifugação FracionadaRadioautografia
Radioautografia Histoquímica e citoquímicaLocalização intracelular das diversas substâncias que compõem as células
:Ácido nucléico:Polissacarídeo:Lipidio:Íons:Proteinas...
2
ImunocitoquímicaÉ uma reação altamente específica porque envolve interação entre moléculas de antígeno e anticorpo
ImunocitoquímicaÉ uma reação altamente específica porque envolve interação entre moléculas de antígeno e anticorpo
CromatografiaMistura de componentes dissolvidos éfracionada a medida que se move através de uma matriz porosa
Cromatografia de troca iônica Cromatografia por afinidade
Eletroforese
Difração de raio X ou cristalografia de raio X
DNA
processo de cristalografia por raio-Xpadrão resultante de difração –
estrutura tridimensional do DNA
Difração de raio X ou
cristalografia de raio X
3
Hibridação de ácidos nucléicos
Método para identificação e localização de ácidos nucléicos em materiais fixados
Cromossomos
Fibra de cromatina
CélulasNúcleo
Tecidos
DNA imobilizado
Sondas cromossômicas
Cariótipo humano masculino normal
Hibridação de ácidos nucléicos
Hibridação em núcleos interfásico
Cromossomo 18 (azul), X (verde) e Y (vermelho)
Cromossomo 13 (vermelho) e 21 (verde)
Hibridação cromossômica
Alteração cromossômica estrutural: Translocação
HibridaHibridaHibridaHibridaçççção cromossômicaão cromossômicaão cromossômicaão cromossômica
AlteraAlteraAlteraAlteraçççção cromossômica estruturalão cromossômica estruturalão cromossômica estruturalão cromossômica estrutural : : : : DeleDeleDeleDeleççççãoãoãoão
AlteraAlteraAlteraAlteraçççção cromossômica numão cromossômica numão cromossômica numão cromossômica numéééérica: rica: rica: rica: AneuploidiaAneuploidiaAneuploidiaAneuploidia ---- TrissomiaTrissomiaTrissomiaTrissomia
EXEMPLO - síndrome de Down em humanos (trissomia do autossomo 21)
normais: 2n = 46
com síndrome de Down: 2n = 46 + 1Normal
Cromossomo 13 (azul) e 21 (vermelho)
Down
Cromossomo 13 (azul) e 21 (vermelho)
Hibridação cromossômica
4
célula normal masculina
célula tumoral feminina
Alterações cromossômicas estruturais em células tumorais
Hibridação cromossômica
Mapeamento dos cromossomos humanos – “pintura cromossômica”
Hibridação cromossômica
Polymerase Chain Reaction (PCR)
Síntese de DNA in vitro
DNA totalDNA totalDNA totalDNA total
30 ciclos de PCR30 ciclos de PCR30 ciclos de PCR30 ciclos de PCR
PCRPCRPCRPCR
----DiagnDiagnDiagnDiagnóóóósticossticossticossticos molecularesmolecularesmolecularesmoleculares----IdentificaIdentificaIdentificaIdentificaççççãoãoãoão e e e e isolamentoisolamentoisolamentoisolamento de genes de genes de genes de genes ----MarcadoresMarcadoresMarcadoresMarcadores molecularesmolecularesmolecularesmoleculares----Expressão gênica (RTExpressão gênica (RTExpressão gênica (RTExpressão gênica (RT----PCR e PCR em tempo real)PCR e PCR em tempo real)PCR e PCR em tempo real)PCR e PCR em tempo real)
AAAAPLICAPLICAPLICAPLICAÇÇÇÇÕES ÕES ÕES ÕES ExExExEx: : : : Teste de paternidade e identificaTeste de paternidade e identificaTeste de paternidade e identificaTeste de paternidade e identificaçççção de indivão de indivão de indivão de indivííííduosduosduosduos
MMMM FFFF SPSPSPSP MMMM FFFF SPSPSPSP MMMM FFFF SPSPSPSP
APLICAAPLICAAPLICAAPLICAÇÇÇÇÕES ÕES ÕES ÕES dadadada PCR PCR PCR PCR
5
Um exame de DNA, feito sem o consentimento de
Roberta Jamilly Martins Borges, 23, provou, segundo a
polícia, que ela não é filha natural de Vilma Martins Costa,
47, mulher acusada de levar o hoje adolescente Pedrinho
-registrado como Osvaldo Martins Borges Júnior- de uma
maternidade, em 1986.
Por meio de uma bituca de cigarro deixada por Roberta
no lixo da delegacia, em janeiro deste ano, os peritos
conseguiram isolar a saliva da jovem e fazer o exame. Os
policiais tiveram ajuda de especialistas em genética e do
Instituto de Pesquisa de DNA Forense, da Polícia Civil de
Brasília.
GENGENGENGENÉÉÉÉTICA FORENSETICA FORENSETICA FORENSETICA FORENSE
Ex: identificação de criminosos
caso de estupro
ExExExEx: : : : Polimorfismo da enzima conversora da Polimorfismo da enzima conversora da Polimorfismo da enzima conversora da Polimorfismo da enzima conversora da AngiotensinaAngiotensinaAngiotensinaAngiotensina I I I I →→→→ AngiotensinaAngiotensinaAngiotensinaAngiotensina IIIIIIII→→→→ CardiopatiasCardiopatiasCardiopatiasCardiopatias
Alelo IAlelo IAlelo IAlelo I
Alelo DAlelo DAlelo DAlelo D
IndivIndivIndivIndivííííduosduosduosduos
APLICAAPLICAAPLICAAPLICAÇÇÇÇÕES ÕES ÕES ÕES dadadada PCR PCR PCR PCR CursoCursoCursoCurso de de de de FFFFéééériasriasriasrias
Introdução Prática àBiologia Molecular
18 a 22 de julho de 2011
Realização
Informações: www.ibb.unesp.br (link eventos), ou pelo email: [email protected]