Tecnica delle Fette
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TECNICA DELLE FETTE 1-Prelievo organo 2-Fissazione 3-Disidratazione (serie alcool ascendenti) 4-Chiarificazione in solventi organici (xilene –
Histolimon) 5-Inclusione in paraffina 6-Sezioni al microtomo 7-Distensione fette su vetrini 8-Sparaffinatura in solventi organici 9-Serie alcool discendenti 10-Colorazione 11-Disidratazione in serie ascendenti alcool 12-Chiarificazione 13-Montaggio in balsamo (resine sintetiche)
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FISSAZIONE
Chimica
Fisica
Congelamento- Sostituzione
Congelamento- Essiccazione
Congelamento
Coagulanti
Non coagulanti
Alcool etilicoAlcool metilicoSublimato corrorivo
Formalina
Acido picrico
Acido aceticoAlcool tricloracetico
Tetrossido di osmio
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Inclusione in paraffina
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Raccolta delle fette
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Fette al microtomo
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Distensione delle fette
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Colorazione – Disidratazione- Montaggio in balsamo
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Tecnica delle fette in Microscopia elettronica
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fissazioneinclusionesezionamentospessore fettesupportocolorazionemontaggio
Microscopia otticaformalina+ac.picricoparaffinamicrotomo7 µmvetrinocolarantibalsami
Microscopia elettronicaparaformald, ac. osmico
resine epossidicheultramicrotomo
100 nm ( 0,1 µm)retino di ramemetalli pesanti si butta
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PARTICOLARI TECNICHE IN MICROSCOPIA ELETTRONICA
Colorazione negativa -campioni in rilievo contro uno sfondo scuro
Il campione, sospeso in un colorante elettrondenso, è
applicato su un retino ricoperto da un sottile film di plastica. Si asciuga all’aria e si osserva al TEM
Virus mosaico del tabacco
batteriofago
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Ombreggiatura al platino
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Criofrattura – freeze etching – deep etching
deep etching – vescicola legata a un microtubulo
Criofrattura –membrana di un globulo rosso
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Composizione chimica del Protoplasma Acqua (H2O - libera e legata) 80%Proteine 15%Lipidi 2.5%Glucidi (zuccheri semplici e composti ) 1%Acidi nucleici (DNA, RNA) 1%Sali minerali (K+, Na+, Ca++, Mg++, Cl-, SO4
--, PO4
---,HCO3-, CO3
--, NO3-, elementi traccia) 0.5%
Composizione percentuale di C+O+H+N 98% Unitarietà dei viventi = Stessa composizione chimica