Tecnica de uso de la parafina
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OBTENCIÓN DE MUESTRAS
FIJACIÓN
DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO
INCLUSIÓN
CORTE
TINCIÓN DE LOS CORTES
MONTAJE
OBSERVACIÓN
PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
Todas las muestras de tejido, ya sea
obtenidas de materiales quirúrgicos,
necropsias, biopsias deben ser procesadas
adecuadamente para obtener buenos
cortes histológicos.
Se debe obtener toda la
información posible del
material a procesar.
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
En caso de ser necesario se debe realizar
un examen y descripción preliminar de los
materiales y su adecuación para un
correcto procesamiento.
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
OBTENCIÓN DE MUESTRAS
FIJACIÓN
Tratamiento del tejido con sustancias
químicas que no solo retardan las alteraciones
hísticas posteriores a la muerte, sino que
conservan la configuración normal del tejido.
Fijador:
Sustancia que detiene en forma rápida los
procesos de autólisis y que, al mismo tiempo,
conserva los tejidos, en lo posible, en el estado
en que se encontraban en la vida.
FIJACIÓN
Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.
Calor seco: Bacteriología.
Calor húmedo: Microquímica, Zoología.
Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los
procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja
de actuar los mismos se reanudan.
TIPOS DE FIJADORES
Físicos:
FIJACIÓN
Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .
Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).
Alcoholes (precipitan proteínas).
Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).
Picratos (precipitan proteínas).
Químicos:
TIPOS DE FIJADORES
FIJACIÓN
Aldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más
utilizados. Los tejidos son fijados por uniones
cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los
grupos amino.
La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza
normalmente al 10%, en una solución bufferada.
TIPOS DE FIJADORES
Químicos:
FIJACIÓN
FIJACIÓN
Un defecto de fijación no
puede ser subsanado.
Es inútil hacer un estudio
histológico de un material
mal fijado.
No debe olvidarse que:
FIJACIÓN
DESHIDRATACIÓN
Se obtiene por medio de un reactivo anhidro
pero ávido de agua:
Alcohol Etílico.
Alcohol Isopropílico.
Alcohol Butílico.
Acetona
ACLARADO
Se debe embeber la pieza con una sustancia
miscible con el alcohol y la parafina:
Xileno.
Tolueno.
Benceno.
INCLUSIÓN
La parafina penetra en los vasos, en los espacios
intercelulares y también en el interior de las células
embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención
de cortes con el micrótomo.
Procesador Automático
Procesador Automático
Obtención del bloque de parafina de forma
regular, para ser cortado con el micrótomo.
CONFECCIÓN DEL TACO
CONFECCIÓN
DEL TACO
CORTE
Micrótomo Rotativo.
Micrótomo de Deslizamiento.
Micrótomo de Congelación.
Crióstato.
Micrótomo Rotativo.
Micrótomo Rotativo.
Micrótomo Rotativo.
Crióstato
Crióstato
EXTENSIÓN
Utilizar portaobjetos limpios y
preparados con el adhesivo
adecuado.
Se realiza en agua tibia (38oC).
Precaución: el preparado debe
quedar bien extendido y sin
pliegues.
Rotular.
Luego de escurrir el exceso de
agua llevar a estufa (60 °C) no
más de dos horas.
EXTENSIÓN
TINCIÓN DE LOS CORTES
Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:
Colorantes que diferencian los componentes
básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y
eosina).
Colorantes especializados que distinguen los
componentes fibrosos de la matriz extracelular.
Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y
forman depósitos de metales en ellos.
HEMATOXILINA
Actúa como un colorante BÁSICO que se asocia y tiñe componentes ÁCIDOS de la
célula como estructuras aniónicas
(que posean fosfatos, sulfatos y/o carboxilos ionizados)
- Heterocromatina y nucléolos
- ARN ribosomal,
- Matriz extracelular (por los sulfatos de los GAGs).
Color: azul o violeta
EOSINAColorante ÁCIDO
(predomina densidad de carga negativa), que se
asocia y colorea estructuras catiónicas (componentes
BASICOS) del citoplasma y matriz extracelular
- Filamentos citoplasmáticos.
- Componentes membranosos intracelulares.
- Fibras extracelulares (por sus aminoácidos básicos ionizados).
Color: rosado
Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:
TINCIÓN DE LOS CORTES
La reacción de los grupos aniónicos con un
colorante básico se denomina BASOFILIA
(que tiene afinidad por lo básico)
La reacción de los grupos catiónicos con un
colorante ácido se denomina EOSINOFILIA
(que tiene afinidad por lo ácido)
Coloración con
HematoxilinaColoración con
Eosina
Coloración
Hematoxilina-Eosina
OBSERVACIÓN
Basófilo
(azul)
Acidófilo
(rosado)