Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la...
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Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest …
… contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp.
Moruzzi Serena, Martini MartaUniversità degli Studi di Udine, DISA
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Presentazione del problema2000:
prime segnalazioni in FVG di alterazioni della buccia delle mele in campo e in ambiente di conservazione
Presenza di fumaggine
Presenza di agenti fungini
Dia
gnos
i di r
outin
e
Osservazione dei sintomi
Indagini fitopatologiche (stereomicroscopio e isolamento)
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Presentazione del problema2008:
Università di Udine, DISA (p.a. Borselli S., prof. Osler R., dott. Grisan S., dott. Poggetti L.)
Agenzia Regionale per lo Sviluppo Rurale (dott. Benvenuto L., dott. Malossini G., dott. Frausin C.)
FriulFruct (dott. Zampa C.)
1. Ricerca bibliografica2. Sintomatologia e diffusione della malattia: campo e ambiente di
conservazione 3. Eziologia della malattia (identificazione agente/i patogeno/i): isolamento
microrganismi e loro identificazione, postulati di Koch
4. Individuazione strategia di lotta/controllo: chimico biologico
hanno iniziato progetto di ricerca sulla malattia:
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1. Ricerca bibliografica- Problematiche simili (malattie epifitiche) risultavano comuni nelle zone
temperate e umide: diffuse in gran parte degli Stati Uniti, Europa (Olanda, Norvegia, Germania, Slovenia, Serbia, Polonia), Turchia, Giappone, Cina, Brasile
- In Italia segnalazioni in Trentino Alto Adige, Piemonte, Emilia Romagna e Friuli Venezia Giulia (Lindner, 2009; Grosso et al., 2011)
Malattia- Gloeodes pomigena (Schweinitz, 1832)
- Peltaster fructicola (Johnson et al., 1997)
- Leptodontium elatius (Johnson et al., 1997)
- Geastrumia polystigmatis (Johnson et al., 1997)
- 80 nuove presunte specie (anni 2000), tra cui:
Tripospermum spp. (Grabowski, 2007);Microcyclospora spp., Stomiopeltis spp., Microcyclosporella spp. (Gleason et al., 2011)
Classe Dothideomycetes, ordine Capnodiales (95%)
Sooty blotch (maculatura fuligginosa)
Agenti causali
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Malattia
- Schizothyrium pomi (Von Arx , 1959)
- Zygophiala jamaicensis (Mason, 1945)
- 10 nuove presunte specie (anni 2000), tra cui:Ramularia spp., Dissoconium spp. (Gleason et al., 2011)
Flyspeck (macchiolina di mosca)
- Tilletiopsis spp. (Boekhout et al., 2006)
White haze (patina bianca)
Agenti causali
1. Ricerca bibliografica
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2. SintomatologiaTipica delle malattie epifitiche (fumaggini) che si sviluppano a spese degli strati più superficiali e inerti del frutto:
Striature diffuse sulla maggior parte della superficie del frutto, concentrate soprattutto (colore nero più intenso) nei dintorni della base del peduncolo e della depressione calicina; frequentemente sembrano descrivere il percorso di un percolamento, probabilmente in corrispondenza dei punti in cui si è trovata a scorrere acqua piovana o di condensa e quindi l’organismo si è sviluppato maggiormente in concomitanza di tali zone, più ricche d’acqua
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2. Sintomatologia
Iniziale opacizzazione degli strati superficiali, che evolve in un annerimento consistente, causato dalla maturazione e sporulazione del micelio fungino
Odore organico caratteristico Nessuna lesione o distruzione dei tessuti (no rugginosità) Interferenza sul normale sviluppo dei frutti (caratteristiche organolettiche) I sintomi si evidenziano soprattutto su Golden Delicious, ma risultano
sintomatiche anche altre cultivar (Golden Lasa, Gold Rush, Brina, Summerfree)
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In genere si riscontra in cella di conservazione: Durante la conservazione in cella frigo, sia in atmosfera controllata
(ULO) che non, in condizioni di elevata umidità relativa, i sintomi si manifestano in maniera evidente
Le mele sintomatiche nei bins sono disposte in ordine sparso e non come tipicamente avviene per le malattie da conservazione (infezione che inizia in campo)
A volte (sulla base dell’andamento stagionale) è possibile riscontrare i sintomi iniziali già in campo, nel periodo estivo
2. Sintomatologia
Mela sintomatica in campo Mela sintomatica in conservazioneBins con mele sintomatiche
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Si è potuto osservare una maggiore diffusione della malattia:
nelle annate con lunghi periodi piovosi in primavera, seguiti da estati calde
in caso di presenza di fitta copertura fogliare
sui frutti sviluppatisi nella parte bassa della pianta
2. Sintomatologia
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DOVE CAMPO CELLA FRIGO CELLA ATMOSFERA CONTROLLATA (ULO)
COME POCHI SINTOMI EVIDENTI
AUMENTO PROGRESSIVO SINTOMI SIA COME GRAVITÀ SIA COME INCIDENZA
AUMENTO PROGRESSIVO SINTOMI SIA COME GRAVITÀ SIA COME INCIDENZA
QUANDO DA LUGLIO ALLA RACCOLTA
DALLA RACCOLTA FINO ALLA VENDITA
DALLA RACCOLTA FINO ALLA VENDITA
2. Sintomatologia
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Valutazione dei sintomi presenti su mele in campo e in cella di conservazione al fine di stabilire:
l’influenza della tipologia di conservazione (cella frigo o atmosfera controllata, ULO) sulla manifestazione dei sintomi
l’influenza dei trattamenti effettuati sulla manifestazione dei sintomi
l’influenza del regime di coltivazione (biologico o integrato) sulla manifestazione dei sintomi
2. Diffusione della malattia
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Individuazione aziende e tesi sperimentali
Integrato
Biologico
tesi trattata fino a termine consentito
tesi non trattata a partire da ingrossamento frutti
TrattamentiRegime Conservazione
Cella frigo
Atmosfera controllata
Cella frigo
Atmosfera controllata
tesi trattata in regime convenzionale da inizio ingrossamento frutti
Cella frigo
Atmosfera controllata
tesi non trattata fino alla raccolta
Cella frigo
Atmosfera controllata
Valutate e catalogate 2101 mele
Azienda 1
Azienda 2
2. Diffusione della malattia
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% di superficie colpita dalla malattia in funzione della modalità di conservazione
Azienda 1Integrato
Azienda 2 Integrato
Azienda 2Bio
Atmosfera Controllata (ULO) 16% 21% 37%
Cella Frigo 20% 17% 33%
Significatività n.s n.s n.s
Kruskal-Wallis Test (Nonparametric ANOVA) GraphPad InStat version 3.00
L’ incidenza della malattia non è risultata correlata con la tipologia di conservazione
2. Diffusione della malattia
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L’ incidenza della malattia è risultata maggiore: - nelle tesi non trattate rispetto a quelle trattate- nelle tesi biologiche rispetto a quelle integrate
% di superficie colpita dalla malattia in funzione dei trattamenti e del regime di coltivazione
Azienda 1integrato
Azienda 2Integrato
Azienda 2 Bio
Trattato 14% 10% 31%
Non Trattato 23% 30% 38%
Significatività S p <0,001 S p <0,001 S p <0,001
Kruskal-Wallis Test (Nonparametric ANOVA) GraphPad InStat version 3.00
2. Diffusione della malattia
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Conclusioni:
L’incidenza della malattia non è risultata correlata alla tipologia di conservazione (cella frigo o ULO)
L’incidenza della malattia è risultata inferiore nelle tesi trattate, rispetto a quelle in cui i trattamenti sono stati sospesi in primavera o che non sono state sottoposte a trattamenti
L’incidenza della malattia è risultata superiore nelle tesi biologiche, rispetto a quelle sottoposte a regime integrato
2. Diffusione della malattia
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IDENTIFICAZIONE SINTOMI DELLA
MALATTIA IN CAMPO
IDENTIFICAZIONE SINTOMI DELLA
MALATTIA IN CAMPO
ISOLAMENTO E IDENTIFICAZIONE
DELL’ AGENTE PATOGENO
ISOLAMENTO E IDENTIFICAZIONE
DELL’ AGENTE PATOGENO
IDENTIFICAZIONE DEL MICRORGANISMO AL
MICROSCOPIO OTTICO
IDENTIFICAZIONE DEL MICRORGANISMO AL
MICROSCOPIO OTTICO
INOCULO PATOGENO SU MELE SANE IN LABORATORIO
INOCULO PATOGENO SU MELE SANE IN LABORATORIO
OSSERVAZIONE DEI SINTOMI TIPICI E
REISOLAMENTO DA MELE INOCULATE ARTIFICIALMENTE
OSSERVAZIONE DEI SINTOMI TIPICI E
REISOLAMENTO DA MELE INOCULATE ARTIFICIALMENTE
Applicazione dei POSTULATI
DI KOCH
3. Eziologia
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Isolamento da mele sintomatiche da
campo e da cella frigo, su diversi substrati (Potato Dextrose Agar, Potato Carrot Agar, Agar buccia di mela) e diverse
metodiche (da porzione di buccia infetta, da raschiatura, da acqua di lavaggio di buccia infetta; incubazione a T° ambiente o T°
controllata a 25°C) per isolare tutta la flora microbica presente
Sviluppo di un unico microrganismo ricorrente
3. Eziologia
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Dictiospore di Alternaria al microscopio ottico
Identificazione dell’agente causale al microscopio ottico, confermata da riconoscimento presso Istituto di Micologia Olandese (CBS):
gruppo Alternaria alternata
3. Eziologia
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Reisolamento su piastra da sintomatologia indotta
Inoculo artificiale in laboratorio su mela sana
(immersione intere mele in soluzione di spore di Alternaria 2*105 spore/ml, conservazione in
cella frigo o a T° ambiente fino a comparsa dei sintomi)
3. EziologiaVerifica dei postulati di Koch:
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3. EziologiaConclusioni:
l’agente causale della malattia è risultato appartenere al genere Alternaria spp.
l’applicazione dei Postulati di Koch ha confermato un solo microrganismo fungino quale agente della malattia, sia in campo che nelle celle di conservazione
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4. Strategia di controllo chimico:agricoltura convenzionale
• Dodina (Syllit)• Penconazolo (Topas)• Pyrimethanil (Scala)• Metiram (Polyram)• Iprodione (Rovral)• Captano (Make-up)
• Cyprodinil (Chorus)• Difenconazolo (Score)• Fluazinam (Ohayo)• Zolfo puro (Thiopron)• Pyraclostrobin (Bellis)• Boscalid (Cantus)
Capacità inibitoria dei principali fungicidi usati in melicoltura:
Inibizione della crescita del micelio di Alternaria
Inibizione della capacità germinativa delle spore di
Alternaria
2 prove parallele:
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4 principi attivi sono risultati efficaci:
- Difenconazolo (Score)
- Iprodione (Rovral)
- Penconazolo (Topas)
- Cyprodinil (Chorus)
Inibizione della crescita del micelio di Alternaria:
4. Strategia di controllo chimico:agricoltura convenzionale
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Inibizione della capacità germinativa delle spore di Alternaria
4. Strategia di controllo chimico:agricoltura convenzionale
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AgrofarmacoRiduzione
germinazione spore di
Alternaria
Riduzione crescita micelio di Alternaria
Pyrimethanil (Scala) si no
Metiram (Polyram) si no
Captano (Make-up) si no
Penconazolo (Topas) si si
Cyprodinil (Chorus) si si
Difenconazolo (Score) no si
Iprodione (Rovral) no si
4. Strategia di controllo chimico:agricoltura convenzionale
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Penconazolo(Topas)
2% di spore di Alternaria germinate
Principio attivo
Inoculopatogeno
Inoculo patogeno
Testimone Testimone
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Cyprodinil(Chorus)
15% di spore di Alternaria germinate
Principio attivo
Inoculopatogeno
Inoculo patogeno
Testimone Testimone
![Page 27: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/27.jpg)
23 volte la doseconsigliata inetichetta (80 gr/lt)
12 volte la doseconsigliata inetichetta (40 gr/lt)
Colonia a 4 giorni di crescita su PCA
29 volte la doseconsigliata inetichetta (100 gr/lt)
17 volte la doseconsigliata inetichetta (60 gr/lt)
Rame ossicloruro
4. Strategia di controllo chimico:agricoltura biologica
![Page 28: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/28.jpg)
Conclusioni: Sono stati individuati alcuni principi attivi in grado di controllare la
crescita del micelio e la germinazione delle spore di Alternaria spp., in particolare il Penconazolo e il Cyprodinil sono risultati i più efficaci
Il rame ossicloruro, utilizzato nei regimi di agricoltura biologica, non dotato di selettività ed efficace nei confronti di gran parte degli organismi microfungini, non si è dimostrato efficace nei confronti di Alternaria spp.
4. Strategia di controllo chimico:agricoltura convenzionale e biologica
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Inizio progetto: 2011Il progetto di ricerca AGER STAYFRESH “Strategie innovative
rispondenti ai bisogni delle imprese nel comparto degli ortofrutticoli della IV gamma”, si è occupato anche della ricerca di trattamenti
fitoiatrici sostenibili, basati sull’utilizzo di antagonisti naturali contro i patogeni vegetali.
Attività previste (Task/activities):
Progetto Ager StayFresh
1.2.4. Ricerca di antagonisti naturali contro malattie di post-raccolta su mela
1.2.5. Applicazione di antagonisti naturali e monitoraggio su mela
(+) Caratterizzazione dell’agente causale della malattia
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Valutazione della possibile variabilità genetica (caratterizzazione molecolare) del patogeno, a causa della difficoltà del
riconoscimento morfologico delle specie di Alternaria «small-spored» (Polizzotto et al., 2012):
Analisi molecolari su 41 ceppi di Alternaria spp. isolati da mele sintomatiche:
Caratterizzazione dell’agente causale
Estrazione del DNA da micelio funginoAmplificazione della regione ITS (Internal
Transcribed Spacer) con tecniche di PCR-RFLPConfronto con i profili di restrizione dei ceppi
di riferimento di A. alternata, A. arborescens e A. tenuissima
A. alternata
A. arborescens
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Amplificazione della regione IGS (Intergenic Spacer) con
tecniche PCR-RFLP Confronto con i profili di
restrizione dei ceppi di riferimento di A. alternata,
A. arborescens e A. tenuissima
Caratterizzazione dell’agente causaleAnalisi molecolari su 41 ceppi di Alternaria spp.
isolati da mele sintomatiche:
A. arborescens
A. arborescens
A. alternata
A. alternata
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Caratterizzazione morfologica su 41 ceppi di Alternaria spp. isolati da mele sintomatiche:
osservazione delle colonie su terreni Potato Carrot Agar e DRYES
A. arborescens A. alternata
Caratterizzazione dell’agente causale
Tot: 17 ceppi A. arborescens, 24 ceppi A. alternata
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Ripetizione prova di patogenicità:
inoculo patogeno su mela sana mele sterilizzate in superficie con
esposizione a raggi UV-C (UNIUD-DIAL, 10’ per lato, λ 254 nm)
individuati 6 spot per ciascuna mela, in 3 diverse posizioni (calice, peduncolo, equatore) e inoculati con una soluzione di spore (2*105 spore/ml) di Alternaria arborescens (3 ceppi diversi) e Alternaria alternata (3 ceppi diversi)
valutazione dello sviluppo dei sintomi tipici della malattia (fumaggine nerastra) a T ambiente e a 0°C
Caratterizzazione dell’agente causale
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0%
10%
20%
30%
40%
50%
60%
70%
80%
90%
100%
Mele infettate con A. arborescens 0°C
Mele infettate con A. arborescens T° amb
Mele infettate con A. alternata 0°C
Mele infettate con A. alternata T° amb
Spot sintomatici alla fine della prova(30 dpi a T° amb, 80 dpi a 0°C)
Perc
entu
ale
di s
pot c
on s
into
mi
Spot sintomatico, a occhio nudo e allo stereomicroscopio
Caratterizzazione dell’agente causale
![Page 35: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/35.jpg)
Conclusioni: Sono stati isolati diversi ceppi fungini associati alla sintomatologia
descritta e appartenenti al gruppo di Alternaria alternata
In particolare, sono stati identificati 24 ceppi di A. alternata e 17 ceppi di A. arborescens
Le prove di patogenicità effettuate hanno permesso di stabilire che A. arborescens è in grado di provocare sintomi identici a quelli
osservati in campo
A. alternata invece ha manifestato una minor virulenza, con sintomi più lievi e assenza del caratteristico odore organico
La valutazione dei sintomi ad occhio nudo è risultata spesso difficoltosa (necessità di uso dello stereomicroscopio)
Caratterizzazione dell’agente causale
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Ricerca degli antagonisti:
90 isolamenti da mele asintomatiche in cella frigo
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
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73 isolati tra lieviti e funghi utilizzati per prove di antagonismo preliminari in vitro contro Alternaria spp.
ORGANISMI EFFICACI
ORGANISMI NON EFFICACI
Alternaria
antagonista
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
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57 microrganismi sono risultati in grado di ostacolare la crescita del patogeno
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
![Page 39: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/39.jpg)
Identificazione degli antagonisti:
Suddivisione morfologica
Estrazione rapida del DNA genomico fungino
PCR-RFLP
Sequenziamento e confronto in GenBank
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
![Page 40: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/40.jpg)
Identificazione degli antagonisti:
Series10
5
10
15
20
25
30
Aureobasidium
Cryptosporiopsis
Epicoccum
Acremonium
Funghi diversi
Lieviti diversi
N°d
i col
onie
ott
enut
e da
gli i
sola
men
ti
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
![Page 41: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/41.jpg)
Azione degli antagonisti:
Prove di antagonismo in vitro a T° ambiente
per : Aureobasidium Cryptosporiopsis Acremonium
Alternaria (controllo)
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
![Page 42: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/42.jpg)
7 giorni 14 giorni 21 giorni 28 giorni0
102030405060708090
100
AureobasidiumAcremoniumCryptosporiopsisAlternaria (controllo)
Crescita della colonia di Alternaria (in mm) in presenza degli antagonisti(temperatura ambiente)
Dia
met
ro d
ella
col
onia
in m
mRicerca di potenziali microrganismi
antagonisti
![Page 43: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/43.jpg)
Azione degli antagonisti:
Prove di antagonismo in vitro in cella frigorifera (≈ 0°C)
per : Aureobasidium Cryptosporiopsis Acremonium
Alternaria (controllo)
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
![Page 44: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/44.jpg)
4 sett 5 sett 6 sett 7 sett 8 sett 9 sett0
5
10
15
20
25
Aureobasidium
Acremonium
Cryptosporiopsis
Alternaria (controllo)
Crescita della colonia di Alternaria (in mm) in presenza degli antagonisti(0°C)
Dia
met
ro d
ella
col
onia
in m
mRicerca di potenziali microrganismi
antagonisti
![Page 45: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/45.jpg)
Analisi della porzione ITS
nessuna differenza evidenziabile
Analisi molecolari su 27 ceppi isolati di Aureobasidium spp.:
Le sequenze ottenute dalla porzione ITS di 2 ceppi rappresentativi hanno mostrato una similarità di sequenza del 100% con la sequenza di A. pullulans var. pullulans strain CBS 584.75 (accession
number FJ150906) presenti in banca dati
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
Analisi con tecniche di rep-PCR
suddivisione in circa 10 gruppi molecolari
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Verifica dell’azione antagonistica in vitro di ciascun gruppo nei confronti di diversi ceppi di Alternaria spp.
(3 A. arborescens + 3 A. alternata)
Azione antagonista di A. pullulans (A)nei confronti di A. arborescens (B)
Azione antagonista di A. pullulans (A)nei confronti di A. alternata (B)
A. pullulans è risultato svolgere una valida azione antagonista nei confronti di A. arborescens, mentre non è risultato molto efficace nei confronti di A. alternata
A A
B B
A A
BB
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
Scelta di 4 ceppi rappresentativi di A. pullulans da usare nelle prove di antagonismo in vivo su mele frigoconservate: 1-4-6-10
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Conclusioni: Sono stati isolati diversi organismi con azione antagonistica nei confronti di
Alternaria spp. Gli organismi rivelatisi maggiormente efficaci (appartenenti a 3 diversi
generi) sono stati utilizzati per prove di antagonismo a temperatura ambiente e a circa 0°C (t delle celle di conservazione) e hanno mostrato di ostacolare in maniera significativa la crescita del patogeno in entrambe le
condizioni di temperatura Gli organismi isolati appartenevano principalmente (27 su 57) alla specie
Aureobasidium pullulans, appartenenti a 10 gruppi molecolari L’azione antagonistica è risultata più efficace nei confronti di A. arborescens
che nei confronti di A. alternata 4 ceppi di A. pullulans più efficaci in vitro sono stati scelti per prove in vivo
Ricerca di potenziali microrganismi antagonisti
![Page 48: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/48.jpg)
Applicazione di potenziali microrganismi antagonisti
in pre-harvest Prova di antagonismo in vivo contro A. arborescens:
individuazione a Maggio di un meleto da condurre senza trattamenti fungicidi preparazione di una soluzione di cellule di Aureobasidium pullulans ceppi 1-4-
6-10 ad una concentrazione finale di 2* 108 CFU/ml 10 piante trattate ciascuna con 500 ml della soluzione ottenuta, distribuita con
atomizzatore sull’intera chioma 4 trattamenti durante la stagione: 28.06.13; 27.08.13; 03.09.13; 16.09.13
raccolta mele da 10 piante trattate (circa 1000 frutti) e da 10 non trattate (circa 800
frutti) (controllo negativo) il 26.09.13 individuati 6 spot per ciascuna mela in 3 diverse posizioni con le stesse
modalità utilizzate per la prova di patogenicità, inoculati con una soluzione di spore di Alternaria arborescens (2*105 spore/ml)
valutazione dello sviluppo dei sintomi tipici della malattia (fumaggine nerastra) in presenza o assenza dell’antagonista, su mele conservate in ambiente con bassa umidità relativa a T° ambiente e a 0°C
![Page 49: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/49.jpg)
Prova di antagonismo in vivo contro A. arborescens:
mele non trattate inoculate per immersione in una soluzione di cellule di Aureobasidium pullulans (5*108 cfu/ml)
individuati 6 spot per ciascuna mela, in 3 diverse posizioni e con le stesse modalità utilizzate per la prova di patogenicità, e inoculati con una soluzione di spore di Alternaria arborescens (2*105 spore/ml)
valutazione dello sviluppo dei sintomi tipici della malattia (fumaggine nerastra) in presenza o assenza dell’antagonista, su mele conservate in ambiente con elevata umidità relativa a T° ambiente e a 0°C
Applicazione di potenziali microrganismi antagonisti
in post-harvest
![Page 50: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/50.jpg)
Prova di antagonismo in vivo contro A. arborescens a T° ambiente
Comparsa dei primi sintomi (15 dpi) Fine prova (40 dpi)
Perc
entu
ale
di s
pot c
on s
into
mi
Mele non trattate con elevata u.r.
Mele trattate in post-harvest
Mele non trattate con bassa u.r.
Mele trattate in pre-harvest
B
B
AA
Applicazione di potenziali microrganismi antagonisti
in pre- e post-harvest
Fisher’s exact test: P < 0.0001, estremamente significativo
![Page 51: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/51.jpg)
Prova di antagonismo in vivo contro A. arborescens in cella frigorifera
Comparsa dei primi sintomi (120 dpi) Fine prova (200 dpi)
Perc
entu
ale
di s
pot c
on s
into
mi
Mele non trattate con elevata u.r.
Mele trattate in post-harvest
Mele non trattate con bassa u.r.
Mele trattate in pre-harvest
AA
B B
Applicazione di potenziali microrganismi antagonisti
in pre- e post-harvest
Fisher’s exact test: P < 0.0001, estremamente significativo
![Page 52: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/52.jpg)
Applicazione di potenziali microrganismi antagonisti in pre- e
post-harvestConclusioni:
Sono stati effettuati trattamenti per verificare la capacità dell’antagonista di contenere la malattia, in pre-raccolta, con buoni risultati ma con alcune
criticità:
si sono manifestati leggeri sintomi a carico delle foglie (piccole necrosi fogliari), dovuti probabilmente alla eccessiva quantità di cellule di A. pullulans utilizzate ed alla modalità di trattamento
si sono osservati dei sintomi di fumaggine (provocata da A. pullulans e diversa da quella causata da A. arborescens) durante la conservazione, nelle porzioni maggiormente umide
Sarà necessario mettere a punto i trattamenti, con una minore quantità di spore per ottimizzare l’azione dell’antagonista, e trovando il momento
ideale per l’applicazione
![Page 53: Strategie di difesa con agenti di biocontrollo in pre- e post-harvest … … contro la «fumaggine» causata da Alternaria spp. Moruzzi Serena, Martini Marta.](https://reader036.fdocument.pub/reader036/viewer/2022062418/5542eb73497959361e8d9f04/html5/thumbnails/53.jpg)
Applicazione di potenziali microrganismi antagonisti in pre- e
post-harvestConclusioni:
Sono stati effettuati trattamenti per verificare la capacità dell’antagonista di contenere la malattia quando utilizzato in post-
raccolta, con ottimi risultati
Aureobasidium pullulans si è dimostrato un organismo di biocontrollo efficace anche nei confronti della fumaggine del melo