PRACTICA N°09

TANINOS

1. OBJETIVO:

- Realizar la extracción e identificación de las sustancias fenólicas presentes en una materia vegetal.

- Diferenciar los taninos gálicos y catéquicos en un extracto vegetal.

2. FUNDAMENTO TEORICO:

Los taninos son sustancias no nitrogenadas, de estructura polifenólica, solubles en agua, alcohol, acetona, poco solubles en éter, de sabor astringente y con la propiedad de curtir la piel, haciéndola imputrescible e impermeable, fijándose sobre sus proteínas (distinto del curtido al cromo donde se utiliza alúmina y cromo) Las relaciones típicas entre las moléculas de estos polifenoles y las de los albuminoides no se limitan a las albúminas de la piel, sino que se extienden a numerosas proteínas solubles en agua que son precipitadas por la adición se estas sustancias curtientes. Por ejemplo, la formación de precipitado con gelatina es una importante reacción de reconocimiento del carácter curtiente de una combinación de los polifenoles implicados. A la inversa, la caseína de la leche puede utilizarse para la precipitación de las sustancias similares presentes en el té o en el café y de esa manera suavizar el sabor amargo que le proporcionan. Los taninos, dada su composición, dan por hidrólisis total una molécula de hidrato de carbono y un número mas o menos grande de moléculas de ácido gálico. Además puede hallarse algo del ácido m-digálico. A pesar de que los productos de desdoblamiento son sencillos, el establecimiento de la fórmula es dificultosa, porque los taninos no son uniformes en su composición y están formados por una mezcla de combinaciones muy semejantes entre sí. En este caso como en el de las sustancias macromoleculares, se establece solamente el principio estructural a que obedecen. El término “tanino” se refiere mas a su función que a su carácter químico. El ácido m-digálico presenta ya una cierta acción curtiente. Sin embargo, tiene un peso molecular demasiado bajo para encontrar aplicación práctica como curtiente. Solamente se encuentran sustancias curtientes utilizables en los productos de esterificación del ácido gálico y del ácido m-digálico con los hidratos de carbono (generalmente glucosa) de pesos moleculares considerablemente altos, que aparecen en la naturaleza de forma diversas recibiendo el nombre de taninos.

3. MATERIALES Y REACTIVOS:

Materiales ReactivosBaguetas BeakersCocina eléctricaEmbudosEquipo de reflujoMorterosPapel filtroPipetasProbetasTubos de ensayo

Acetato de sodioAcetato de plomo 10%Alumbre férrico 1%Agua destiladaHidróxido de calcioCianuro de potasio 5%Tricloruro férrico 5%Formaldehido 40%Ácido clorhídrico ccDicromato de potasio 5%Tanino

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

a) Extracción de taninos:Se pulverizó la droga problema. Se pesó 54.197 g de la droga pulverizada y se trató con 50 ml de agua destilada. Se calentó a baño maría hirviente y se filtró.

b) Determinación cualitativa:Se transfirió para tubos de ensayos, alícuotas del extracto acuoso conforme se indicó para cada reacción. Se anotó la intensidad y tonalidad de la coloración adquirida en la solución del precipitado formado con la adición de cada reactivo.

- Reacción con sales férricas: A 0.5 ml de extracto acuoso, se adiciona 3 ml de agua destilada y 3 gotas de tricloruro férrico al 5 %.

- Reacción con acetato de plomo:A 2 ml de extracto acuoso se adiciona 1 ml de solución de acetato de plomo al 10%.

- Reacción con Dicromato de potasio: A 2 ml del extracto acuoso se adiciona 1 ml de Dicromato de potasio al 5%.

- Reacción con hidróxido de calcio:A 2 ml del extracto acuoso se adiciona 1 ml de hidróxido de calcio.

- Reacción con hipoclorito de sodio:A 2 ml del extracto acuoso se adiciona 1 ml de hipoclorito de sodio al 5%.

5. RESULTADOS:a. Esquematizar el procedimiento , señalando los resultados observados:

Se pulverizo la tara Se pesó 54.197 g de tara

Se disolvió en agua destilada

Se calentó a 80°C por 30 min, para solubilizar los taninos

Se separó la fase liquida de la fase solida por decantación Se filtró la fase liquida para

obtener así solo los taninos, que son los solubles en agua.

Ácido tánico (ac) + FeCl3.6H2O precipitado negro intenso de tanato férrico.

Ácido tánico (ac) + Acetato de plomo (ac) precipitado amarillento de tanato de plomo

Ácido tánico (ac) + Ca(OH)2 (ac) precipitado mostaza de tanato de calcio

6. CUESTIONARIO:

1) Indique las propiedades fisicoquímicas de los taninos.

Los taninos solubles en agua son precipitados de sus soluciones por sales de metales pesados (Cu, Fe, Hg, Pb, Zn, Sn), rara vez se los obtiene cristalinos y los agentes oxidantes los transforman en productos de color oscuro llamados Flobafenos. Por poseer –OH fenólicos se colorean con las sales férricas, los galotaninos y elegitaninos dan coloración azul-negro, mientras que los taninos catéquicos dan coloración marrón-verdoso. Precipitan con los alcaloides, molibdato de amonio, tugstato de sodio y soluciones de albúmina (gelatina). Los taninos catéquicos son precipitados por el agua de bromo, el formol clorhídrico. Todos los taninos son facilmente oxidables sobre todo en medio alcalino. Estudios recientes (González Fresada y otros. 2001)han demostrado que las catequinas y flavonoides son fuente de protección por sus propiedades antioxidantes. Por la similitud estructural con los taninos condensados, fueron estudiados éstos en especies forestales (pino, casuarina, mimosa, eucaliptus) frente a la capacidad protectora de los rayos UV. Los estudios demostraron la eficiencia en la protección de las bacterias contra el daño de los UV. (actividad antioxidante).

Ácido tánico (ac) + Dicromato de potasio precipitado chocolate de tanato de potasio

Finalmente vertimos el filtrado que no ha sido diluido en un crisol para que se endurezca en unos dias

2) Indique las diferencias entre los taninos catéquicos y los taninos gálicos.

Taninos no hidrolizables, condensados o catéquicos.

Estas sustancias no son hidrolizables por los ácidos ni por las enzimas. Los ácidos fuertes en caliente o los agentes de oxidación los convierten en sustancias rojas u oscuras, insolubles en la mayor parte de los solventes, llamados “Flobafenos”. Estos taninos no son derivados del ácido gálico sino que derivan de los catecoles, a los que se los considera protaninos. Poseen estructura relacionada con los flavonoides y por ser no glucídicos son poco solubles en agua y en lugar de hidrolizarse cuando se los hace hervir en ácido diluido, se transforman en producto de condensación. Las catequinas se consideran precursores de los taninos condensados. Los taninos presentes en las uvas son catequinas y sobre todo leucoantocianidinas.

* Corresponde a dos centros de asimetría dando lugar a isómeros, de los cuales la (-) epicatequina se halla presente naturalmente en las hojas del té. Las catequinas no son sustancias curtientes , se transforman en estas mediante reacciones de condensación

Taninos Hidrolizables:

Son ésteres de ácidos fenoles y de osas, se denominan así por ser facilmente hidrolizables por ácidos, bases, enzimas. Antiguamente se les llamaban taninos pirogálicos, porque procedian del pirogalol, por destilación seca. Se diferencian dos grupos, los galotaninos y los elagitaninos. Galotaninos:Son ésteres del ácido gálico y del ácido digálico unidos entre sí por funciones ésteres entre el –COOH de uno de ellos y el -OH del otro. A su vez unidos a osas como la glucosa, a veces la hamamelosa (derivada de la ribosa). A este grupo pertenece el tanino de Nuez de Agalla, la glucogalina del Ruibardo, el hamamelitanino de las hojas de hamamelis, los taninos de los Arces etc. El tanino de Agalla da por hidrólisis, por cada molécula de glucosa 9 a 10 moléculas de ácido gálico. Es una mezcla de compuestos isómeros, siendo el principal el que tiene 5 –OH de la glucosa esterificados por 5 moleculas de ácido galoil-gálico. Otro posible isómero es el que tiene en la glucosa el -OH del carbono 1 esterificado por un ácido penta-galoil-gálico y en los otros –OH una molécula de ácido gálico.

Elagitaninos:O taninos elágicos. Son sustancias complejas, que dejan un depósito insoluble durante el curtido de las pieles (tanado), ello es debido a la precipitación del ácido elágico (dilactona, unión de dos ácidos gálicos) que en el vegetal vivo estarían unidos a azúcaras. Esta dilactona se formaría durante la extracción del tanino en agua hirviente. Su hidrólisis produce glucosa, ácido elágico y ácido gálico.

3) Señale la composición química de las drogas vegetales estudiadas en la práctica.

Constituyentes químicos de la tara :

De las vainas: contiene taninos hidrolizables (galotaninos) en un rango de 40% a 60% según las condiciones ecológicas en las que vegeta, la hidrólisis de estos taninos conduce a la separación del ácido gálico; asimismo se han aislado galato de etilo y cuatro galatos del ácido quínico correspondiendo a los ésteres metílicos de 4,5-di-O-galoilquínico y de 3,4,5-tri-O-galoilquínico, y a los ácidos 3,4-di-O- galoilquínico y 3,4,5-tri-O-galoilquínico.

De las semillas: del endospermo se ha separado la goma o hidrocoloide galactomanánico en la que los componentes monoméricos galactosa y manosa se encuentran en una relación de 24,41:70,90 (1:2,9). La viscosidad intrínseca permitió determinar su peso molecular promedio en 351400, así mismo la goma da lugar a soluciones acuosas con característica de fluido pseudoplástico con una viscosidad promedio de 4000 cp.

También se aislaron dos lectinas de las semillas, una se señala como aislada de la C. tinctoria y la otra de la C. spinosa. La primera se caracteriza porque contiene 8,3% carbohidratos y exhibe actividad aglutinante contra eritrocitos humanos de los grupos ABO, con una composición de aminoácidos conteniendo un gran número de residuos ácidos e hidrofóbicos y una masa molecular de 12,5 kDa. Igualmente se indica que la lectina contiene 10% de -hélice, 38% de -hoja u hoja plegada, 28% con forma no ordenada y 6% de PII (poli-L-prolina II conformación hélice). De la segunda lectina se dice que es también capaz de aglutinar eritrocitos humanos del grupo B Rh+, tiene un tamaño molecular de 29 kDa, y la característica de los aminoácidos

Estructura parcial del tanino (a) , de los galatos del ácido quínico (b)

Estructura parcial de la goma de tara

es de carácter ácido y sumamente hidrofóbica, siendo el porcentaje de residuos ácidos de 16,3%, básicos 8,9%, neutros 17,0% y 57,8% de residuos hidrofóbicos.

De las hojas: El tamizaje fitoquímico de cuatro muestras de hojas , colectadas en Ayacucho , en Cajamarca y lima mostraron la presencia de: aminoácidos (reacción de la ninhidrina) , taninos (reacción con FeCl3 y con gelatina),flavonoides (reacción de shinoda), triterpenos y/o esteroides (reacción de lieberman-Bourchard), y de antraquinonas (reacción de Bömtrager), en este caso la reacción fue ligeramente positiva.

Bibliografía:

http://www.agro.unlpam.edu.ar/catedras-pdf/sustancias_fenolicas.pdfhttp://perubiodiverso.pe/assets/Monograf%C3%ADa-del-cultivo-de-la-tara1.pdfhttp://books.google.com.pe/books?id=gdwglEpVJKMC&pg=PA370&lpg=PA370&dq=sales+ferrosas+a+taninos&source=bl&ots=zU1IReFy5l&sig=oboyxp7UhvSa597--KEbKJg3_18&hl=es&sa=X&ei=yh7aU73ELKjKsQSDhoHYBg&ved=0CCMQ6AEwAQ#v=onepage&q=sales%20ferrosas%20a%20taninos&f=true