Reduzca sus Costes Operacionales y Aumente su ... · • Multiplexado: •QqQ-MRM: típico 4-6...
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Reduzca sus Costes Operacionales y
Aumente su Productividad en LC/MS
mediante las Tecnologías:
- RapidFire (µSPE/MS)
- Automatización:
- Preparación de muestra.
- Extracción “Dried Blood Spots” (A.A.C.E. - DBS).
Isidre Masana
Especialista Productes LC/MS
Agilent Technologies
Divisió Biociència i Anàlisi Químic
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Reduzca sus Costes Operacionales y
Aumente su Productividad en LC/MS
mediante las Tecnologías:
- RapidFire (µSPE/MS)
- Automatización:
- Preparación de muestra.
- Extracción “Dried Blood Spots” (A.A.C.E. - DBS).
Isidre Masana
Especialista Productes LC/MS
Agilent Technologies
Divisió Biociència i Anàlisi Químic
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RapidFire 360
Sistema de Alta
Resolución
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Convierta su
Espectrómetro de Masas
en un Lector de Placas
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Análisis mediante: µ-SPE-MS/MS
Mass spec 30 s
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Agilent RapidFire Mass Spectrometry
Inyector Ultra-rápido & in-line SPE:
• Reemplaza el HPLC en LC/MS
• Cartuchos µ-SPE reutilizables.
• Integrado con instrumentos standard ESI MS
• Tiempos de ciclo = 7-13 s/muestra
Compatible con matrices biológicas
• Preparaciones Microsomales.
• Sobrenadantes de cultivos celulares.
• Extractos de tejidos.
• Suero, plasma, orina, sangre entera,..
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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Principales Aportaciones RapidFire /MS
• Reduce costes de Operación a 1/10.
• Elución en sentido contrario al de carga cartucho queda limpio.
• Vida típica cartuchos µ-SPE: 2000-5000 muestras/cartucho.
• Coste cartucho µ-SPE < 0.1 €/muestra. Coste total: 0,2-0,4$/mta (LC/MS 2-4$/mta)
• Reduce enormemente el consumo de reactivos con respecto a HPLC: evita
tener que etiquetar para detectar con fluorescencia, utilizar anticuerpos, o
reactivos radiactivos.
• Reduce consumo disolventes: típico 0.3mL/muestra
• Reduce Tiempos de Análisis a 1/10.
• 7-13 seg./muestra
• 10-15 min./placa de 96 muestras 40-60min./placa de 384 muestras
• Multiplexado:
• QqQ-MRM: típico 4-6 analitos/inyección (hasta 10-20)
• TOF/QTOF: ilimitado. • durante 30-40min)
• Permite un rápido intercambio LC/MS SPE/µSPE/MS
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Ciclo RapidFire – Elución…..al MS
Estandard Interno:
(D4-a-hidroximidazolam)
Producto:
(a-hidroximidazolam)
A1 H12
A1 For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
Sip
Load Elute
Se recomienda trabajar con:
• Patrones internos
marcados isotópicamente
• Alternativa: técnica de
adición de patrones a la
propia muestra (“adición
standard”)
10-15 min./placa de 96 40-60min./placa de 384
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Excelente Correlación RapidFire/MS “versus”
LC/MS: Levetiracetam – Blinded Human Samples
•HPLC-MS Workflow
• 7.5 min/sample
• multiplex X4 (~2 min/sample)
• 768 samples/day/mass spec
•RapidFire-MS Workflow
• 9.5 sec/sample
• no multiplexing
• > 9000 samples/day/mass spec
> 10X throughput enhancement
y = 0.9901x + 0.7899 R² = 0.9993
0
20
40
60
80
100
0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0
Agil
ent
Resu
lts
(ug/
mL)
Mayo Clinic Results (ug/mL)
Correlation between RapidFire-MS and LC-MS
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
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Excelente Robustez. Datos Bioanálisis
de Metabolito Hidroxilado: HO-Midazolam
en Plasma (PPT)
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0 200 400 600 800 1000 1200 1400 1600
AU
C R
ati
o, P
/IS
# of Injections
HO-Midazolam ~ 1600 Inyecciones
% CV 2.4
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic
Procedures.
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Drug Discovery with RapidFire/MS
• Genomics
• Proteomics
• Metabolomics
• Lipidomics
• Animal models
• Knockouts
Target
Selection
Preclinical
Testing
Clinical
Trials
Label-free
HTS using
native
substrate
Secondary
screen
Selectivity
screen
ADMET
• DDI (Drug-Drug Interact.)
• Met Stab
• Permeability
• Protein binding
• Pgp inhibition
• CYP inhibition
Bioanalysis:
• PK /PD
• Toxicology
Lead
Optimization
Bioanalysis
• PK /PD
• TDM (Ther. Drug Mon.)
Lead Discovery
High-throughput
Target Screening (HTS)
Therapeutic Areas
• Metabolic disease/diabetes
• Epigenetics
• Cardiovascular disease
• Kinases
• Oncology
• Anti-infectives
• Inflammation/Pain
• Neurology
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
High Throughput
Screening
In vitro /In vivo
ADME Clinical Research
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Aplicaciones y ÁreasTípicas en Investigación Clínica
Pharma Drugs
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic
Procedures.
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Notas de Aplicación Clínicas
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.
• Ultrafast Analysis of Tacrolimus in Whole Blood Using the Agilent
RapidFire High‐throughput Mass Spectrometry System (5990‐9994EN)
• Ultrafast Analysis of Levetiracetam in Serum Using the Agilent RapidFire
High‐throughput Mass Spectrometry System (5990‐9995EN)
• Simultaneous Analysis of Tacrolimus, Sirolimus, Everolimus, and Cyclosporin A in Whole
Blood using the Agilent RapidFire High‐throughput Mass Spectrometry System (5991‐
0263EN)
• Ultrafast Analysis of 6 Antiepileptic Drugs in Serum Using the Agilent RapidFire
High‐throughput Mass Spectrometry System
• Automated High‐throughput Analysis of Proteins and Peptides in Blood‐Based Matrices
Using Immunoaffinity Purification and Ultra fast SPE/MS/MS (5991‐0380EN)
• High‐throughput SISCAPA‐Based Peptide Quantitation Using the Agilent RapidFire
High‐throughput Mass Spectrometry System (5991‐0380EN)
• Ultra Fast Analysis of the THC Metabolite (THC‐COOH) in Urine Using the Agilent
RapidFire High‐ throughput Mass Spectrometry System (5990‐9763EN)
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Resumen Tecnología RapidFire
• Reduce Costes:
• 1/10 con respecto a LC/MS
• +1/10 con respecto a inmunoensayo.
• x10 veces Más Rápida que LC/MS:
• Aumenta la capacidad del laboratorio
• Proporciona una respuesta muy rápida, para toma de
decisiones urgentes.
• Proporciona Resultados Equivalentes a LC/MS.
• Mejora la especificidad y sensibilidad de las
técnicas de inmunoensayo.
• Permita mantener los flujos de trabajo tradicionales.
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Reduzca sus Costes Operacionales y
Aumente su Productividad en LC/MS
mediante las Tecnologías:
- RapidFire (µSPE/MS)
- Automatización:
- Preparación de muestra.
- Extracción “Dried Blood Spots” (A.A.C.E. - DBS).
Isidre Masana
Especialista Productes LC/MS
Agilent Technologies
Divisió Biociència i Anàlisi Químic
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¿Porqué Automatizar la Preparación de Muestra?
En algún punto, usted no podrá hacerlo bien sin automatización!
• Mantener la calidad de datos con una mayor capacidad de muestras.
• Reducir costes.
La solución para preparación en placas: Agilent AssayMAP Bravo. Una plataforma de
alto rendimiento para Manejo de líquidos + Preparación de muestra analítica mediante
Microcromatografia Cuantitativa.
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AssayMAP Bravo Head & Syringe: Microcromatografía
Preparativa en Placas de 96 posiciones
Bravo 96AM head with AssayMAP technology
• Direct displacement, ultra-low dead volume syringe with probe.
• Liquid handling via probes directly, through the cartridge.
• Unidirectional liquid handling through cartridges for fine control of separation and true, single pass, chromatography.
• Fully enabled for Bravo liquid handling – pipette tips can be pressed on the probe, partial head, deck accessories, ….
CO
N p
un
ta r
ell
en
ab
le
SIN
pu
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en
ab
le
Relleno para
microcromatografía
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Cabezal con 96
puntas pipeta
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Automatización Preparación Muestra en Placas: Bravo AssayMAp
DIY Captures
Streptavidin
Protein Digestion
Trypsin
Sample Clean Up
Reverse Phase
• Reverse Phase for sample clean up before LCMS
• Protein characterization workflows – Peptide mapping, Oxidation analysis.
• MALDI desalting & spotting steps.
• Streptavidin for Ab, antigen, protein/peptide, small molecule
capture for purification
• Anything that can be biotinylated can be immobilized
• Protein A for general Ab capture and Immunoprecipitation
• Used in all of the targeted workflows – protein purification and characterization.
• Trypsin for rapid, on-column digestion
• Protein characterization workflows – Peptide mapping, Oxidation analysis
General Ab Capture
Protein A
Immunoprecipitation
Protein A
Se puede también combinar con la estación Encore Multispan
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The Encore Multispan Liquid Handling System
Feature Set
Expanded Pipetting Deck
• Sample from tube or plate based formats
• Ample deck space for locating accessories, labware, and more
• Maximize integration capabilities through removable sections of the
deck
• Process more samples in parallel (x8 en 2 grupos independientes de 4)
Intelligent Software
• 3D workflow simulator / Drag & drop interface increases productivity by making configuration and
optimization quick and easy
• Auto calibration & one touch teaching gets you up and running quickly
• Scripting facilitates the creation of complex protocols. Forms allow for customized user interfaces
Permite interaccioar
con el “exterior”
Preparación de muestra en Tubos o Placas
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Flexible Multispan Pipetting
• Cherry pick ~2x more samples by spanning in 2 directions
• Variable and independent pipette spacing for addressing all labware
types
• Transfer the correct amount of liquid with pressure based liquid level and
clot detection
Automatización: The Encore Multispan
Liquid Handling System Feature Set
Built-In Robotic Arm
• Robust management of labware both on and off deck
• Integrate more instruments with 21 inches of reach off each side
• No teaching required on deck. One touch teaching for simple movement
programming off deck
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Ejemplo de Automatización Flujos de Trabajo
Preparación de muestra LC/MS
• Samples that require many separation steps prior to sampling by the LC/MS
• Applications in pain management experience high sample volume
• An Encore Multispan system can feed multiple LC/MS systems without any manual
separations
Puede combinarse con el robot AssayMap Bravo para preparaciones de
muestra que requieran el uso de microcromatografia preparativa.
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Reduzca sus Costes Operacionales y
Aumente su Productividad en LC/MS
mediante las Tecnologías:
- RapidFire (µSPE/MS)
- Automatización:
- Preparación de muestra.
- Extracción “Dried Blood Spots” (A.A.C.E. - DBS).
Isidre Masana
Especialista Productes LC/MS
Agilent Technologies
Divisió Biociència i Anàlisi Químic
Sistema LC/MS Agilent Automatizado de Extracción en
Línea de Tarjetas con Gotas de Sangre (DBS: Dried Blood Spots - AACE System)
Muestreo
1. Colectar ~ 15 mL sangre
2. depositar en la tarjeta.
Análisis
1. Extracción en línea de parte de la
mancha (NO requiere preparación muestra).
2. Análisis por LC/MS
Dispone de almacén/
dispensador de tarjetas
Ahorra de costes de transporte, almacenamiento y preparación de muestra
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Informe Cuantitativo Incluyendo Imágenes de Antes y
Después de la Extracción
Pre Extraction Image
Post Extraction Image
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mediante las Tecnologías:
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- Automatización:
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