RECONOCIMIENTO DE PROTEINAS: OVOALBUMINARESULTADOS:1- COAGULACION DE PROTEINASSOLUCIONOBSERVACION

Solucin de clara de huevo (solucin de ovoalbmina) + 5 gotas de acido actico, en presencia de calor.Se presenta la formacin de coagulo solido con un aspecto lechoso y con color amarilloso.

2- REACCION XANTOPROTEICA.SOLUCIONOBSERVACION

Solucin de ovoalbmina + acido ntrico concentrado + se somete al calor + se deja reposar + hidrxido de sodioAntes de ser sometida al calentamiento se presento un coagulo de color blanco-lechoso y tambin se presento una parte de la solucin de color transparente (fue una solucin heterognea), luego del calentamiento se presenta dos fases, la de arriba un color amarillo (muy espeso) y luego de agregarle NaOH se da un color naranja.

3- REACCION DE BIURET.SOLUCIONOBSERVACION

Solucin de ovoalbmina + el reactivo de biuret.Se presento un color violeta-roscea caracterstico

4- REACCION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS.SOLUCIONOBSERVACION

Solucin ovoalbmina + NaOH + acetato de plomo + calor.Luego del calentamiento la solucin fue poco a poco formando un color negro fuerte.

RESULTADOS.EXTRACCION DE LA CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO.Aislamiento de la casenareactivosustanciaobservacin

Acido actico 10% +20 ml de etanol + ter etlico.Leche entera 150 mlSe observo que al agregar acido actico a la leche tuvo un aspecto de descomposicin, se dio un precipitado firmando dos fases.

Peso del beaker: 33,75 gPeso beaker + caseina: 34,75gCasena: 1g.Casena + etanol: 0.8897

Se desecho el liquido y se volvi a pesar la casena resultante para llevarlo a la preparacin de esta, agregando 20 ml de agua destilada + 5ml de NaOH 1N + 5 ml de acido actico 1N. Para que quede una solucin clara para poder determinar el piDe las diferentes disoluciones hechas en los diferentes tubos se realizaron pruebas en el espectrocuan para medir la absorvancia, a continuacin se muestra en la tabla los resultados obtenidos;

TuboAcetato 0.1NAcetico0.1NActico 0.01NPH resultantePH aprox.absorbancia

10.59.5-3.23.290.259

219-3.63.420.198

31.58.5-3.84.580.231

428-43.740.4

537-4.23.960.492

646-4.54.080.477

764-4.74.510.537

882-5.14.900.108

96-45.55.540.109

108-26.15.940.076

ANALISIS DE RESULTADOS:1COAGULACION DE PROTEINAS:Al someter la solucin de ovoalbmina, lo que ocurre es que dicha protena se coagula, lo cual se debe a la desnaturalizacin irreversible, es decir; se pierden las estructuras de orden superior (secundaria, terciaria, cuaternaria.) quedando la cadena de polipeptidos reducida a un polmero sin estructura tridimensional fija, esto se debe a que al aumentar la temperatura, tambin aumenta la energa cintica de las molculas con lo cual se desorganizan las estructuras de las protenas y se destruyen las interacciones dbiles, por lo tanto la parte interna hidrofobica interacciona con el medio acuoso y se produce la agregacin y precipitacin de la protena desnaturalizada.Al mezclar la solucin de ovoalbmina con el acido, tambin se da una desnaturalizacin de la protena, pero en esta situacin se da por un cambio en el PH, esto se debe a que el acido aumenta la concentracin de protones del medio, cambia las cargas de los grupos que se pueden ionizar los cuales permiten mantener la estructura terciaria de la albumina y tambin afecta las uniones de los puentes de hidrogeno de la estructura secundaria, la perdida de estas estructuras provocan la desnaturalizacin de la albumina, el NaOH tambin puede provocar esta desnaturalizacin de la ovoalbmina que fue lo ocurrido al observar la solucin transparente gelatinosa.

2 REACCION XANTOPROTEICA.Al mezclar la solucin de ovoalbmina con el acido ntrico, en lo cual se observo una parte liquida transparente, una parte coagulada y una pequea amarillosa, lo que se provoca aqu es la desnaturalizacin de la ovoalbmina de forma irreversible ya que el PH de la albumina esta alrededor de 4.8 y a este PH capta H+ y cambia su estructura terciaria y cuaternaria, no siendo liquida sino solida, en esta se rompen los puentes de disulfuro y provocan inclusive la liberacin de H2S, luego al agregarle el NaOH se observa una parte blanca en el fondo y una superior transparente de aspecto gelatinoso, esto es debido a que la albumina se termina de desnaturalizar por accin del NaOH que es una base, lo cual indica la presencia de un compuesto aromtico nitrato, que se encuentra en la clara del huevo y son portadoras de grupos bencnicos.3 REACCION DE BIURET.La formula qumica del reactivo es:

El reactivo contiene sulfato de cobre en solucin alcalina gracias a la presencia del NaOH o KOH, esta sirve para detectar la presencia de protenas, pptidos cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptidicos, dicho reactivo es de color azul y cambia a violeta-roscea que fue lo observado al mezclar la albumina con el reactivo, por lo tanto se corrobora que es una protena.Esto se debe a los enlaces peptidicos (-CO-, -NH-) que poseen las protenas, la reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos de N que forman parte de los enlaces peptidicos presentes en las protenas, esta ultima reaccin es la que forma el color violeta-roscea observado al mezclar la albumina con el reactivo de biuret. A continuacin se muestra la reaccin de biuret.

4 REACCION XANTOPROTEICA.En esta prueba la albumina de la clara de huevo reacciona formndose cogulos blancos lo que nos indica que la protena se desnaturaliza, ya que el acetato de plomo y el NaOH son metales pesados. Si la albumina se encuentra a PH superior a su punto isoelctrico definindose como el PH al que una sustancia anftera tiene carga neta cero, y al reaccionar con estos metales forman los correspondientes proteinatos insolubles, en el caso del acetato de plomo, se formo sulfuro de plomo5 EXTRACCION Y PURIFICACION DE CASEINACon la experiencia realizada en la purificacin y extraccin de casena al agregarle el acido actico a la leche pudimos notar que esta poco a poco fue presentando una solucin de coagulo que luego se fue dando una solucin de dos fases en la cual el precipitado era la casena o como comnmente se le conoce como queso, lo y en la parte superior presento una solucin de color verde claro o ms conocida como lacto suero en esta se encuentran tambin algunas protenas que se le denomina protenas del lacto suero.Esta precipitacin se debi a la presencia del acido que lo que ocurre es la desnaturalizacin de forma irreversible de la protena como tal, y por ende la ruptura de las estructuras de orden superior, dando como resultado un producto denominado caseinato, estas reaccin es parecida a cuando se trabajo con la ovoalbmina.CUESTIONARIO 1. HACER EL ESQUEMA GRAFICODEL PROCEDIMIENTO ANALITICO. QUE SUCEDERIA SI SE REPRESENTA LA TRASMITANCIA? En el laboratorio, una vez determinado el porcentaje de transmitancia, ste se transforma a absorbencia, la cual, segn la ley de Beer es directamente proporcional a la concentracin de una sustancia, La mayora de los instrumentos utilizados hoy en da para estas determinaciones, llamados espectrofotmetros, realizan esta conversin automticamente, de forma tal que el valor reportado es la absorbencia, no la transmitancia.

2. CUAL ES EL PUNTO ISOELECTRICO DE LA CASENAEl punto isoelctrico (pI) de la casena es 4.6. A este pH, la casena se encuentra en su punto de menor solubilidad, debido a la reduccin de repulsiones intermoleculares, por lo que precipita.

A diferencia de muchas otras protenas, la casena no precipita al calor. Precipita bajo la accin de la renina (enzima proteoltica presente en el estmago de terneros) para formar la paracasena. Al precipitar por accin de cidos se le llama casena cida. Este precipitado blanco forma la base para la elaboracin de todo tipo de quesos.

3. PORQUE LA PROTEINA TIENEN SOLUBILIDAD MINIMA EN EL PINTO ISOELECTRICOLas protenas generalmente tienen muchos grupos ionizables, los que tienen una variedad de pK. Cada protena tiene un pH caracterstico al cual las cargas positivas se encuentran en igual cantidad a las cargas negativas, a este pH se conoce como punto isoelctrico, pI, el cual puede ser conocido atreves del isoelectroenfoque. En el pI las protenas tienen una solubilidad mnima y son insensibles al salting in. La solubilidad se incrementa cuando el pH se aleja del pI.CONCLUSIONESEn nuestra experiencia en el laboratorio que corresponde a la primera parte de protenas podemos concluir que las reacciones utilizadas se obtuvieron los resultados previstos en cada una de ellas, como son coagulacin de protenas, reaccin xantoproteica, del biuret, de los aminocidos azufrados.Pudimos comprobar tambin la solubilidad de las protenas y las fuerzas que actan en ella. Y darnos cuenta que son efectivas estas reacciones para la desnaturalizacin de la albminaprotenas.Y observamos la precipitacin de las protenas con el hidrxido sdico y sulfato cprico que estaban presentes en el reactivo de Biuret.Adems determinamos el pH de la casena con la que trabajamos.En la segunda parte de protenas se extrajo casena mediante procedimiento qumico de la leche entera liquida, con el fin de determinar el punto isoelctrico de esta.BIBLIOGRAFA la Gua de laboratorio N3 , Protenas (parte 2)1. Bioqumica, segunda edicin Christopher K. Mathew y K.E. Van Holde .1996, Espaa.1. www.medvet.una.ac.cr/carrera/mva505_Practica4.pdf.