REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA(PCR)1980 nico procedimiento para amplificacin : clonacin gnica.

En 1983 Kary Mullis de Cetus Corporation

Nueva tcnica para amplificar ADN en un tubo de ensayo

Pueden utilizarse cantidades pequeas o una sola molculaPCR: Permite amplificar los fragmento de ADN miles de millones de veces en el transcurso de unas pocas horas.

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3Cada una de las dos cadenas de nucletidos pueden servir de molde.

La cantidad de ADN se duplica con cada replicacin.

Inicio de sntesis en el molde es determinado por los cebadores:

Fragmentos cortos de ADN (17-25 nucletidos) complementarios al molde.

Cebador diferente para cada cadena.

Con cada ciclo, la cantidad de ADN objetivo se duplica; de modo que ste aumenta en forma geomtrica:

Actualmente PCR se utiliza en lugar de clonacin, pero tiene limitaciones:Anlisis de las secuencias de ADN

Secuenciacin del ADN.Consiste en determinar la secuencia de bases en el ADN.

Permite leer la informacin gentica en el ADN

informacin acerca de funcin y estructura del gen Hibridacin in situLas sondas de ADN pueden utilizarse para determinar la ubicacin cromosmica de un gen o la localizacin celular de un ARNm El ADN o ARN se visualiza mientras esta en la clula.Actualmente sondas unidas a colorantes fluorescentes que se observan por microscopa.

Es posible utilizar simultneamente varias sondas de colores distintos para secuencias o cromosomas distintos.

Tambin puede utilizarse para determinar la distribucin en los tejidos de ARNm

Cmo la expresin del gen vara segn el tipo celular

Footprinting del ADNDetermina las secuencias de ADN importantes que sirven para la fijacin de protenas.

La posicin del footprinting identifica los nucletidos fijados por la protena.MutagnesisMutagnesis dirigida:

Proceso para estudiar la funcin del gen creando mutaciones en localizaciones especficas para poder estudiar los efectos de las mutaciones en el organismo. La secuencia cortada es reemplazada por un oligonucletido con secuencia mutada.

El xito depende de sitios de restriccin que flanquean secuencia por ser alterada.

MUTAGENESIS DIRIGIDA POR UN OLIGONUCLEOTIDO

Mapeo GnicoSe utilizan marcadores genticos.

Un grupo de marcadores analiza:

Polimorfismo de longitud de fragmentos de restriccin (RFLP).Son las variaciones en los fragmentos producidos cuando las mol de ADN son cortadas con la misma enzima de restriccin.

Base: uso de diferencias genticas que producen diferencias fenotpicas observablesLa mayora de los rasgos estn influidos por ambiente y genes mltiples.

Rasgos con base gentica para el uso de mapeo es limitado.

Fingerprinting del ADN (huellas del ADN) Algunas partes del genomas son muy variables cada secuencia del ADN de una persona es nica Es el uso de secuencias de ADN para identificar a personas individualesEn las primera tcnicas se utilizaban enzimas de restriccin:Las sondas detectan regiones muy variables por lo que la posibilidad de que el ADN de dos personas produzcan el mismo patrn de bandas es bajo.

Actualmente utilizan secuencias de ADN llamadas:

Microsatlites o nmero variable de repeticiones en tndem (VNTR)