非病原性菌Pseudomonas fluorescens 菌体成分(ＴＴＧ)の

　　　白斑治療効果及びその作用機序に関ずる研究

　　　　　続報:ＴＴＧの各分割の作用について

７．Ｈｏｎｄａ:ClinicalEffect of TTG, the Extracted Component of Nonpathogenic Bacteria

　　　　　Pseudomonas fluorescens,and Mechanism of the Action on Leucoderma

本　田

　　　　　　　　　　緒　　　論

　私は1)2)前にpyrogenであるＴＴＧを白斑局所に皮

内分劃注射し，紫外線照射を併用する白斑の新治療法を

提唱し，その治療実験並びに基礎実験に基いて，その奏

効機序をＴＴＧの新作用として，直接的なデロジン・チ

ロジナーゼ反感系促進作用と抗ＳＨ作用の両面の作用を

もって白斑治癒をもたらすものと結論し，且つ，その

際，種々⑤比較実脈の結果，ＴＴＧを構成する多糖体部

(Ｃ)が，チロシン・チロジナーゼ反感系を促進する因子

であり，蛋自体部(Ｐ)が抗SH作用に関沢する因子で

あろうと推論した，

　末論文に於て．私はこの推論を更に確めるために，

ＴＴＧを分解して，その各分劃を使用して，生化学的実

験を行い，前述した推論を裏書きするような興味ある結

果を得たので，茲に，報告する次第である．

　　　　　第１童　ＴＴＧの各分劃単離実験

　ＴＴＧは化学的に　Lipocarbohydrate-Protein Com-

plexてjあると云われている．

　私は, TTGを構成している各分劃を得るために，河

西3)の大腸菌の菌体成分の酸分解に準嬢して実施した，

　実験方法は，図１に示す如く, TTG　ｌ ｇをとり，蒸

溜水lOOmlに溶解する．次いで氷酪酸を１％量加えて

沸騰水浴上で，8～10時間分解を続けると蛋白体は沈澱

してくる．エーテルで連続抽出し，リヒト部を除く，蛋

自体部は, glass alter で濾別し，その澄明濾液にアル

コールを加えると多糖体部が沈澱する．

　エーテル抽出液を溜去して，リヒト部とする．

゛東邦大学医学部皮膚泌尿器科教室（主任　石津俊教授）

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　― 389

龍　雄＊

図１　ＴＴＧの酷酸分解（ＭＴ１）

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　|.寿μal　に4ヽあ衆回　）一々，

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　　(52.5%)

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　（51J町）

　蛋白体部は稀アルカ!) (pH7～8）に溶解後，稀塩酸

でPH3位にすると再沈澱する．これを数回繰返したもの

を凍結乾燥し，蛋自体分劃（Ｐうとする．

　多糖体部は蒸溜水に溶かして，アルコールで再沈澱せ

しめ，これを数回繰返して凍結乾燥をし，多糖体分劃

（Ｃうとする．

390

表１　ＴＴＧの各分割の収量（％）

TTG 分　　　創 限　　　量

MTi

多新体分割　　(ッ

52.5

蚤自体分割　　ｙ 16.5

リヒト分割　　Iフ trace

MT2

(フ 45

ｙ 14

じ trace

　リヒト部は殆ど単離し得なかった．

　各分劃の収量を％で表示すれば，表１に示す如く，多

糖体分劃は45～52.5%,蛋白体分劃は14～16.5%であっ

た．

　　　　　　第２章　実験方法及び実験條件

　前章の実験に於て，収得した各分劃について，チロジ

ソ・チロジナーゼ反応系促進作用及び抗SH作用が，ど

の分劃にみられるかを知るために, Warburg検圧計を

使用して酸素消費量を測定した．

　　　表２　実験条件Warburg検圧計37.5°C

　実験条件は，表２に示す如く，酵素としては，精製

Mushroomチロジナーゼを使用直前に，適宜稀釈して

用い, Substrateとしては，モロジン浮游液C 2 mg/cc)

を用いた．反応器容量は16～18ccで，主室にM/15燐酸

緩衝液(pH7.38) 1～0.5CC,稀釈酵素液0.6cc,各分劃

溶液，蒸溜水，グルタチオン溶液を入れて. 2.6ccと

し，側室にSubstrate 0.6cc,中央室に20％ＫＯＨ ０.2

ccを入れ. 37.5±0. 05°Cの恒温槽で10～20分平衡後，側

室内容を混和し，酸素消費量を5～10分毎に50分迄測定

した．尚，グルタやオソ2 mg/ccを0.5cc主室に入れた場

合は，緩衝液を0. 5ccとした．

　　　　　　　　　第３章　実験成績

　第１節　多糖体分劃（ｙのチロシン・チロジナーゼ及

応系に及ぼす作用

日本皮膚科学会雑誌　第69惣　第４号

　図２に示す如く，Ｃ≒まチロシン・チロジナー七反感

系を促進する作用が認められる．

　第２節　多糖体分劃Ｃ’のグルタチオンに対する作用

　圖８に示す如く，反鷹容器中濃度62.5, 31.25及び

15.62 r/ccの各種濃度に於て，Ｃ≒よ何等の作用屯認め

底かった．

　図２　Action of Carbohydrate Fraction (C )on

　　　　Tyrosine-Tyrosinase System

図３　Action of Carbohydrate Fraction (C) on

　　　　Glutathione

ぷ４寸ぶ

　第３節　蛋自体分劃Ｐ’のチロシン・チロジナーゼ瓦

応系に及ぼす作用

　蛋自体分劃Ｐこと何等の作用も示さこい．

　第４節　蛋自体分劃Ｆのグルタチオンに対する作用

　圖４に示す如く，蛋自体分劃Ｐ≒ま，反塵容器中濃

昭和34年４月20日

図４　Action of Protein Fraction(P') on

　　　　Glutathione

imh)　'０

図５　Action of Mixture(Carbohydrate and Pr-

　　　otein Fraction) on Glutathlone

度, 125, 62.5, 31.25, 15.62, 7.81及び8.6 r/ce の

各種の濃度に於て，グルタデオンに対して作用しなかっ

た．即ち，抗SH作用は認められなかった．

　　　第５節　Ｃ’及びＰ’のAuto-oxidation

　各分劃について，種々の濃度で実験したがAuto-

oxidationは殆んど認め得なかった．

　第６節　Ｃ’及びＰ’の混合液のグルタチオンに対す

る作用

　前述した各節の実験の結果，Ｃ≒よチロシン・チロジ

391

ナー－ゼ反面系を，ＴＴＧと同様に促進する作用が認めら，

れたが，抗SH作用はなく，Ｐ'は，チロシン・チロジ

ナー七反感系に対して促進作用はなく，且つ抗SH作用J

も認められ底かった．

　しかるに，ＴＴＧでは，チコジン・チロジナー七反感

系促進作用と抗SH作用の両面の作用を有することは，

緒論に屯述べた如くであって，種々の比較実験から，蛋

白体部が抗SH作用に関沢するものであるうと推論して

いたところであるので，Ｃ/とＰ'とを混合することによ

ってＴＴＧが有する様な抗SH作用の出現する可能性も

あり得るのではないかと思って，Ｃ´とＰ'の混合液を用ﾌ

いて実験してみた.

　Ｃ'とＰ'の混合比を夫々３：１，１：１にして種々び

濃度で実験した結果，圖５に示す如く, C'a, P'l (C :

　187.5r/cc, P' :62.57/cc)及びＣ'I P'l (Ｃ': 31.25

rice, P': 31.25r/cc)が最も穎著に，抗SH作用を

呈した．しか%, C'i,P'iの如く低濃度のもので乱　混

合比如何によっては高濃度のC'3,P'lに匹敵する抗SH

作用を呈したことは，興味ある事実である．

　　　　　　　　　第４童　発熱試験

　使用したTTG.各分割及びその混合液の発熱試験をy

実施し，検討してみた．

　発熱試験は，目局, Pyrogen Test に準じて施行したl

ものである．即ち，体重2kg前後の合家兎を１週間，

23°Cの恒温室で飼育し，その環境に馴らし，７時間固定ｽ

して予備検温を行う.30分間隔で電位差計式熱電温度計･

で，直腸温を測定し，温度の変動のない家兎を撰定し，

発熱試験に使用するト予備検温の翌日或は翌々日の撰定し

された家兎を再び固定し，０時間，１時間，２時間の３度．

検温し，変動のないことを再確認してから，検体lr/kg

を耳静脈から注射し，以後４時間に亘り，15分間隔で検

温し，最高発熱度をとる，１検体につき３匹の家兎を使

用し，平均最高発熱度を発熱度としたものである．

　その結果は，表３に示す如く，分解前のＴＴＧのもっ．

　　　　　　　　　　　表　３

Pyrogenecity TestTTG

MTi 1.05°C MT, 1.06°C

Fraction Mixture Fraction

(y ド C≒F1 C'3 P'l(y ド

0.07 0.95 0.52 0.3 0.2 0.77

:392

発熱性に比較して，何れも低い発熱性を示している.

　ＣｎよＭＴ１及びＭＴ２の由来に関係底く低発熱性とな

り，同時に施行した奢呂ﾆ試験に於て乱著しく毒性か弱

くなっている．特にＣ'とＰ'の混合液にっいては，その

混合比１：１及び３：１のものが，分解前のＴＴＧのも

っ発熱性に比較して50％以上有発熱性を減少しているこ

とは，注目すべきことであると思う．

　　　　　　　　　第５童　考　按

　私は, Pyrogenの範喘に入り，化学的にLipocarbo-

hydrate-Protein ComplexであるＴＴＧを，白斑局所

に皮内注射し．紫外線照射を併用する白斑の新治療法を

提唱し，その治療実験及び基礎実験に基いて，ＴＴＧの

局所作用としての奏効機序をＴＴＧの新作用として，直

,接的に，チロシン・チロジナー七反面系を促進し，且つ

抗SH作用を示すと云う雨面の作用をもって白斑治癒

をもたらすものであると結論し，更に，その際，発熱性

及びPiromenとの比較実験の結果より, TTGを構成

する多糖体部分か，チロシン・チロジナー七反塵系を促

ﾗ進する因子であり，蛋自体部分が，抗SH作用に関輿

するものであるうと推論し，これを日皮会誌, 68, 589,

昭83に詳報した．

　しかしながら，果して, TTGを構成する各分劃が軍

触に，或は，綜合された形態で作用するのかと云う問題

に対しては，未解決であった．今同は，この問題につい

て解明するために，私は，ＴＴＧを酷酸分解して，多糖

体分劃Ｃ'及び蛋自体分劃Ｐ'を得，これをin vitro で

'実験してみた結果，圖６の模圖に示す如く，Ｃ≒ま，明

らかにチロシン・チロジナーゼ反面系を促進する因子で

あることか確認され，Ｐ≒よ単独では，抗SH作用を示

こさ次いか，Ｃ'と試験管内で混合するだけで，即ち，Ｐ'

はＣ'と共存する場合に抗ＳＨ作用因子として作用する

濾のであることが判明した．

　しか乱　混合比率の差により，抗SH作用の強弱の

,問題右判明した．即ち，本論文，第８章，第６節の実験

に示す如く，低濃度のものでも，即ち, C : P'か１：

１で，各々の反塵容器中濃度かS1.25r/ccのものが，

心:Ｐ'が３：１で187.5r/cc : 62.5 r/ccの高濃度のも

のと同程度の抗ＳＨ作用の強さを示した事実は, TTG

を構成する蛋自体部の比率的差によって，抗SH作用

口強弱かおることを実証したものである．

　叉，第４章に述べた如く，発熱試論に於て，Ｃ'とＰ'

jの混合液，即ち１ ：１及び３：１の混合比のものが，分

丿解前のＴＴＧのもっ発熱性に比較して50％以上乱それ

Ｔt-　V

日本皮膚科学会雑誌　第69忿　第４号

図　　６

　Ｌ:　Lipid

　Cこ　Carbohydrate (Poiysaccharide)

　Ｐ:　Protein (Polysaccharide)

　C: Carbohydrate fraction

　P': Protein fraction

が減少していることは，ＴＴＧの白斑治療の際，発熱と

云う問題に於て，多発性及び巨大白斑に対する場合に，

特に初同使用量を或る程度制限しなければからないこと

を考慮するとき，副作用としての発熱と云う問題より解

放され，チロシン・チロジナーゼ反男系の促進作用と抗

SH作用も強く，且つ，臨床的により容易に使用出来る

発熱物質或は菌体成分由来の新物質がよりよい白斑治療

剤として出現する可能性を示唆するものとして，注目す

べきことであると思う．

　　　　　　　　　　　結　　　論

　ＴＴＧを酷酸分解して牧得した多糖体分劃Ｃ’及び蛋

自体分劃Ｆを使用して，それらの色素形成促進作用を

in vitroで実験した結果を要約すると次の如くである.

　1）Ｃ≒よ，チロシン・チロジナー七反男系の促進作

用を有するが，抗SH作用はみられない，

　2) P' !よ単独では，チロシン・チロジナーゼ反男系

の促進作用も抗SH作用奄認められない.

　8）しかるに，（ｙとＰとの混合液の場合には，抗

SH作用を呈する．この事実は，Ｐ’がＣ’と共存する場

合に抗SH作用因子として作用するものと思引

　4）その際，抗SH作用の強弱はＰ’ :（ンの比率に

よって左右される．

昭和34年４月20日

　5）混合液の発熱性は，分解前のＴＴＧの示す発熱性

に比較して，50％以上七減少している.

　6）以上の実験の結果，ＴＴＧの白斑治癒作用は，

ＴＴＧを構成している多糖体部が，チロシン・チロジナ

ー七反鹿系促進因子であり，蛋白体部が抗SH作用因

子として作用するものであるとの推論を実証し，且つ，

臨床上，副作用としての発熱の問題を克服し，発熱物質

或は菌体成分由来の新物質が，よりすぐれた白斑治療剤

として出現する可能性をも示唆し得るものと思う．

393'

　本論文の要旨は，日本皮膚科学会東京地方会第372回･

例会にて発表した．

　摺筆するにあたり，御校閲を頂いた石津教授，並びに一

種々御協力を得た藤沢薬品会社関係者各位に謝意を表し

ます．

　　　　　　　　　　　文　　献

　1）本多：東邦医誌, 4,83,昭3乙

　2）本多：日皮会誌, 68, 589,昭33.

　3）河西：日本細菌学雑誌, 5,(6), 385,昭25.

　　　　　　　　　　（昭和34年2 M14H受付，特掲）