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POR:ANGÉLICA AQUINO
MARÍA GARRIGAMERARIS SOTO
LUIS E . OQUENDO
Tinción de esporas, tinción de flagelos y otras pruebas para
identificar bacilos Gram-positivos
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CATALASA - , NO FORMADORES DE ESPORAS
Bacilos Gram +
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Hay tres especies de Erysipelothrix: Erysipelothrix rhusiopathiae Erysipelothrix tonsillarum Erysipelothrix inopinata
Erysipelothrix rhusiopathiae es la única que causa enfermedades en humanos
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Gram-positivaCatalasa negativaNo formadora de esporasTiende a formar largos filamentosNo motilesUreasa negativoErisipeloideProduce H2S
http://www.actasdermo.org/es/forma-cutanea-difusa-erisipeloide/articulo/13052968/
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Sensible a: Penicilina Cefalosporinas Eritromicina Clindamicina
Resistente a: vancomicina
http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/A/Antibiotics.html
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Deben ser cultivadas en caldo nutriente con: 1% de glucosa 5% de CO2 A 35 ˚C
También crece en agar chocolate y agar sangre
En agar sangre las colonias son no hemolíticas
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Después de 48h de incubación se ven dos diferentes tipos de colonias
Pequeña, forma lisa transparente, reluciente y bordes enteros
Grande, colonias ásperas, estructura curvea, bordes irregulares
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Aracnobacterium, 9 especies Aracnobacterium haemolyticum Aracnobacterium pyogenes Aracnobacterium bernardiae
Catalasa negativa
Agar Sangre
Beta-hemólisis
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Tinción de Flagelos
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Tinción de flagelos
Los flagelos son órganos de locomoción
Los flagelos están compuestos por cerca de 20 proteínas, con aproximadamente otras 30 proteínas para su regulación y coordinación
La flagelina es la principal del flagelo
Tiene su origen en el protoplasma de la célula bacteriana
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Tipos de flagelos
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Métodos
Kodak Cubrir la preparación durante 5 a 10 minutos Lavarlo por 2 ó 3 minutos Observar la placa de la periferia hacia el centro
Método Leifson Fuscina básica en alcohol etílico Acido tánico en agua destilada Cloruro de sodio en agua destilada
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Tinte RYU Se utiliza en el borde del cubreobjetos Después de 5 a 10 minutos se examina la muestra
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NO FORMADORES DE ESPORA, ACTINOMICETOS AERÓBICOS
FILAMENTOSOS
Bacilos Gram +
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Actinomicetos
Grupo heterogéneo
Bacterias filamentosas ramificadas
Similar al crecimiento de hongos
Aerobios / Anaerobios facultativos
Crecimiento lento
No motil
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“Acid-fast stain”
http://www.biotechinfo.in/study-material-/acid-fast-staining-by-ziehl-neelsen-method/
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“Acid-fast Stain”
http://www.highlands.edu/academics/divisions/scipe/biology/labs/rome/acid_fast_stain.htm
http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/Lab%20Stuff/Stains/Bacterial%20Stains.htm
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Nococardia spp.
Presente en suelo y en material vegetativo
No motil
Parcialmente ácido-resistentes Se utiliza prueba
modificada Utiliza ácido débil (0.5% a 1% H2SO4)
En humanos causa infecciones pulmonares y
subcutáneas sistémica afección al Sistema
Nervioso Central
La infección progresa rápidamente
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Actinomadura spp. Gordonia spp.
A. madurae se diferencia por ser Xilosa positivo
Reduce nitratoNo tiene micelioNo motilParcialmente ácido-
resistente
Otros Actinomicetos
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Rhodococcus spp.
R. equis
Parcialmente ácido-resistente.
Se diferencia por exhibir colonias rosa-salmón en Agar Sangre Parecido a Klebsiella
http://people.upei.ca/jlewis/html/lab_4_coryne-_mycobacterium.html
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Identificación Actinomicetos
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FORMADORES DE ESPORAS, NO FILAMENTOSOS, CATALASA +
Bacilos Gram +
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Esporas
Resistentes a condiciones ambientales adversas.
Organismos que producen esporas: Hongos Plantas Bacterias
http://promocionxxii.med-unjfsc.edu.pe/2011/10/genero-clostridium.html
Clostridium difficile
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Formación de esporas
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Tinción de Esporas
1. Fijar la bacteria en la laminilla.
2. Colocar un pedazo de papel toalla en la laminilla.
3. Echar verde malaquita sobre el papel toalla.
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Tinción de Esporas
4. Calentar la laminilla por 5 minutos.
5. Lavar el frotis con agua destilada.
6. Cubrir el frotis con safranina por 30 segundos.
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Tinción de Esporas
7. Lavar con agua destilada y secar.
B. anthracis
http://textbookofbacteriology.net/Anthrax.html
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Bacilos formadores de esporas
Gram positivos
Catalasa positivos
Aeróbicos / Anaeróbicos facultativos
Muchas de las especies crecen en Agar de Sangre
Bacillus spp. & Clostridium spp.
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Bacillus spp.
B. anthracis No motil No fermenta lactosa Infecciones humanas
B. cereus Infecciones humanas Motiles Beta hemolítico
B. thuringienses Insectos Beta hemolítico
B. subtillis Beta hemolítico Aspecto liso, mucoide
o rugoso
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B. anthracis
Son grandes, grises y planas.
En Agar Sangre no son hemolíticas.
Son halófilas y crecen en medios alcalinos.
Susceptibles a penicilina, fluroquinolinas, entre otros.
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“Medusa head”
B. anthracis
http://biogefahr.shopkeeper.de/cgi-bin/nw/biogefahr-de/
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B. cereus
Tiene dos enterotoxinas Emética Diarrea
Crece a 37˚C en Agar Sangre.
Resistentes a penicilina.
Susceptible a vancomicina y clindamicina.
Figura 16-19 Bacillus cereus en Agar de Sangre
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BACILOS CATALASA +, NO FORMADORES DE ESPORAS Y NO FILAMENTOSOS
Identificación de Bacilos Gram + Aeróbicos
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Características Generales
Se encuentran en el ambiente (agua y suelo) con facilidad.
No se consideran altamente patogénicos, mas sin embargo se están aislando en infecciones clínicas con mayor frecuencia.
Unos pocos son menos comunes, mas causan enfermedades severas.
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Diagrama de Identificación
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Corynebacteria
C. (ulcerans, diphtheriae, pseudotuberculosis) Catalasa + No motil CTBA (medio) forman
“halo” marrón
C. diphtheria No produce ureasa Fermenta glucosa y
maltosa Reduce nitrato a nitrito Prueba de Elek para
detectar toxina
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Elek’s Test
Corta papel de filtro de 75% diámetro de plato de agar y 2 cm de ancho.
Saturar con antitoxina C. diphtheria y esperar que seque.
Añadir suero de conejo y “potassium tellurite” al agar caliente.
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Elek’s Test
Coloca los papeles en el plato de agar caliente y deja que llegue al fondo.
Luego de sólido, añade el organismo y pon paralelo a este, controles negativos y positivos.
Incubar de 18- 24 horas.
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Identificación de C. diphtheria
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Rothia and Listeria
Rothia spp.
Cocos Gram + Disimulan ser BacilosFamilia
MicrococcaceaNitrato +No motilHidrolizan esculinaUreasa Negativa2/3 catalasa +
Listeria monocytogenes
Bacilos Gram +Familia ListericeaCatalasa +Hidrolizan esculinaMotilesB-hemolíticosCrece en 6.5% NaCl
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IDENTIFICACIÓN Y DIFERENCIACIÓN DE BACILOS GRAM POSITIVOS
Resultados de Pruebas Bioquímicas
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Pruebas de Identificación
http://es.slideshare.net/jmhr23/bacilos-gram-positivos-aerobios-no-esporulados
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Pruebas de Identificación
https://www.scribd.com/doc/28806551/Bacteriologia-diagnostica
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Pruebas de Identificación
Tabla 1 – Identificación y Diferenciación de géneros relacionados
Pruebas Listeria Lactobacillus Erysipelothrix
Microscopia Cocobacilos Bacilos Bacilos
Catalasa + - -
Vancomicina S R R
Motilidad +(flagelos)
- -
H2S - - +
Bilis Esculina + - -
NaCl 6.5% + - -
B hemólisis V - - S – Susceptible, R – Resistente, V - Variable
http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf
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Pruebas de Identificación
http://bvs.panalimentos.org/local/file/Manual_Listeria_monocytogenes_2008.pdf
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Pruebas de Identificación
Diferenciación de especies del género BacillusPruebas B. firmus B. subtillis B. sphaericusCatalasa + + +Espora + (central) + (central) + (central)Oxidasa - - +Licuefacción de gelatina
+ + +
Hidrólisis de almidón + + -
Citrato - + -Crecimiento NaCl 7% + + d
Reducción Nitrato d + -Crecimiento anaeróbico
- - -
Fermentación Glucosa + + -
L-arabinosa - + -D-xilosa - + -D-manitol + - -Ureasa - - +Motilidad + + -VP - + -Indol - - -
d – Reacción débilhttp://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis404.pdf