I. Judul: Reaksi Uji Protein (Pengendapan dengan Logam)II. Tujuan:Untuk menguji dan mengidentifikasi protein menggunakan uji pengendapan LogamIII. Dasar TeoriProtein adalah sekelompok senyawa organik yang nyaris keseluruhannya terdiri atas karbon, hidrogen, oksigen, dan nitrogen. Protein biasanya suatu polimer yang tersusun atas banyak subunit (monomer) yang dikenal sebagai asam amino. Asam amino yang biasanya ditemukan dalam protein menunjukkan struktur sebagai berikut (Fried dan Hademenos, 2006).Fungsi protein ditentukan oleh konformasinya, atau pola lipatan tiga dimensinya, yang merupakan pola dari rantai polipeptida. Beberapa protein seperti keratin rambut dan bulu, berupa serabut, dan tersusun membentuk struktur linear atau struktur seperti lembaran dengan pola lipatan berulang yang teratur. Protein lainnya, seperti kebanyakan enzim, terlipat membentuk konformasi globular yang padat dan hampir menyerupai bentuk bola. Konformasi akhir bergantung pada berbagai macam interaksi yang terjadi (Kuchel dan Ralston, 2006).Dalam ilmu Kimia, pencampuran atau penambahan suatu senyawa dengan senyawa yang lain dikatakan bereaksi bila menunjukkan adanya tanda terjadinya reaksi, yaitu: adanya perubahan warna, timbul gas, bau, perubahan suhu, dan adanya endapan. Pencampuran yang tidak disertai dengan tanda demikian, dikatakan tidak terjadi reaksi kimia. Ada beberapa reaksi khas dari protein yang menunjukkan efek/tanda terjadinya reaksi kimia, yang berbeda-beda antara pereaksi yang satu dengan pereaksi yang lainnya. Semisal reaksi uji protein (albumin) dengan Biuret test yang menunjukkan perubahan warna, belum tentu sama dengan pereaksi uji lainnya (Ariwulan, 2011).Uji protein dengan metode identifikasi protein secara kualitatif dapat menggunakan prinsif (Khoiriah, 2012) : Uji Biuret: pembentukan senyawa kompleks koordinat yang berwarna yang dibentuk oleh Cu+ dengan gugus CO dan NH pada ikatan peptida dalam larutan suasana basa. Pengendapan dengan logam : pembentukan senyawa tak larut antara protein dan logam berat. Pengendapan dengan garam : pembentukan senyawa tak larut antara protein dan ammonium sulfat. Pengendapan dengan alkohol : pembentukan senyawa tak larut antara protein dan alkohol. Uji koagulasi : perubahan bentuk yang ireversibel dari protein akibat dari pengaruh pemanasan. Denaturasi protein: perubahan pada suatu protein akibat dari kondisi lingkungan yang sangat ekstrim.

Berbagai protein globular mempunyai daya kelarutan yang berbeda dalam air. Variabel yang mempengaruhi kelarutan ini adalah pH, kekuatan ion, sifat dielektrik pelarut, dan temperatur. Pemusahan protein dari campuran dengan pengaturan pH didasarkan pada harga pH isoelektrik yang berbeda-beda untuk tiap macam protein. Pada umumnya molekul protein mempunyai daya kelarutan minimum pada pH isoelektriknya. Pada pH isoelektriknya beberapa protein akan mengendap dari larutan, sehingga dengan cara pengaturan pH larutan, masing-masing protein dalam campuran dapat dipisahkan satu dari yang lainnya dengan teknik yang disebut pengendapan isoelektrik (Patong, dkk., 2012).Protein yang tercampur oleh senyawa logam berat akan terdenaturasi. Hal ini terjadi pada albumin yang terkoagulasi setelah ditambahkan AgNO3 dan (CH3COO)2Pb. Senyawa-senyawa logam tersebut akan memutuskan jembatan garam dan berikatan dengan protein membentuk endapan logam proteinat. Protein juga mengendap bila terdapat garam-garam anorganik dengan konsentrasi yang tinggi dalam larutan protein. Berbeda dengan logam berat, garam-garam anorganik mengendapkan protein karena kemampuan ion garam terhidrasi sehingga berkompetisi dengan protein untuk mengikat air. Pada percobaan, endapan yang direaksikan dengan pereaksi millon memberikan warna merah muda, dan filtrat yang direaksikan dengan biuret berwarna biru muda. Hal ini berarti ada sebagian protein yang mengendap setelah ditambahkan garam (Sri, 2012).Protein dapat diendapkan oleh ion-ion logam berat. Pengendapan ini terjadi karena ion-ion logam berat membentuk garam proteinat yang tidak larut dalam air. Pengendapan ini terjadi karena adanya reaksi penetralan muatan antara ion logam berat dengan anion dari protein.Larutan albumin ditambahkan dengan larutan HgCl2 dan larutan Pb-asetat. Setelah larutan albumin ditambahkan dengan larutan HgCl2 dan larutan Pb-asetat, terbentuk endapan berwarna putih dari garam proteinat.Larutan protein pada titik isoelektriknya memiliki kutub negatif dan positif dengan perbandingan sama. Endapan putih yang dihasilkan merupakan hasil dari reaksi penetralan muatan antara ion logam berat sebagai kation dengan molekul protein sebagai anion. Pada penambahan larutan protein dengan HgCl2dan Pb-asetat, anion-anion dari HgCl2dan Pb-asetat akan menyebabkan suasana larutan menjadi sedikit asam, sehingga protein akan mengkondisikan diri sebagai basa dan sebagian terdapat sebagai anion. Anion dari protein inilah yang bereaksi dengan ion logam berat membentuk garam proteinat yang tidak larut dalam air .Pada pH di atas titik isoelektrik protein bermuatan negative, sedangkan di bawah titik isoelektrik protein bermuatan positif. Olehkarena itu untuk mengendapkan protein dengan ion logam diperlukan pH larutan di atas titik isoelektrik, sedangkan untuk pengendapan protein dengan ion negative memerlukan pH larutan di bawah titik isoelektrik. Ion- ion positif yang dapat mengendapkan protein adalah Ag+, Ca2+, Zn2+, Hg2+,Pb2+,Cu2+,Fe2+. Sedangkan ion-ion negative yang dapat mengendapkan protein adalah ion salisilat, trikloroasetat, pikrat, tanat dan sulfosalisilat(Riawan, 1990).

IV. Alat dan Bahan Alat :1. Pipet tetes2. Gelas ukur3. Beker gelas4. Tabung reaksi5. Rak tabung reaksiBahan:1. HgCl2 0,2 M2. Timbal asetat 0,2 M3. Albumin4. Larutan Putih telur 1-5%5. Susu 1-5%

V. ProsedurKe dalam 3 mL larutan protein tambahkan 5 tetes HgCl2 0,2 M. Ulangi percobaan dengan menggunakan Pb Asetat 0,2 M

VI. Hasil PengamatanTabel Hasil PengamatanNoSampelPenambahan

HgCl2Pb-Asetat

1AlbuminLarutan putih + endapan putihLarutan bening + endapan putih

2Putih telur 1%Larutan beningLarutan bening + endapan putih

3Putih telur 2%Larutan beningLarutan bening + endapan putih

4Putih telur 3%Larutan beningLarutan bening + endapan putih

5Putih telur 4%Larutan keruhLarutan keruh + endapan putih

6Putih telur 5%Larutan keruhLarutan keruh + endapan putih

7Larutan Susu 2 %Larutan putihLarutan putih + endapan

VII. Persamaan Reaksi

VIII. PembahasanPada percobaan ini, yaitu reaksi uji protein dengan uji pengendapan dengan logam. Pada Uji pengendapan dengan logam sampel yang digunakan yaitu larutan putih telur 1%-5%,susu 2% dan albumin. Prinsip dari Pengendapan dengan logamini adalah pembentukan senyawa tak larut antara protein dan logam berat.Pada reaksi ini, putih telur 1%-5%,susu 2% dan albumin ditambahkan dengan HgCl2 dan Pb-Asetat . Pada penambahan HgCl2 larutan albumin berubah dari bening menjadi putih dan terdapat endapan putih,pada larutan putih telur 1%-3% larutan bening,pada putih telur 4-5% larutan keruh sedangkan pada susu larutan putih. Pada penambahan Pb asetat,Larutan putih telur 1%-3% bening,putih telur 4-5% keruh,semua sampel larutan putih telur hanya terjadi gumpalan bukan endapan. Sedangkan pada albumin larutan bening dan ada endapan putih pada susu larutan putih dan ada endapan. Dari sampel yang ada putihh telur hal ini menunjukkan uji negatif terhadap pengendapan logam,susu positif terhadap Pb-Asetat dan albumin menunjukkan uji positif terhadap pengendapan logam (HgCl2 dan Pb-Asetat),albumin terbentuk endapan saat bereaksi dengan HgCl2 dan Pb-Asetat. Seharusnya semua sampel menunjukkan hasil positif,menurut teori bahwa logam berat dapat mengendapkan protein dengan cara menaikkan pH diatas titik isoelektrik (Ridwan, 1990) . Pada penambahan larutan protein dengan HgCl2 dan Pb-asetat, anion-anion dari HgCl2 dan Pb-asetat akan menyebabkan suasana larutan menjadi sedikit asam, sehingga protein akan mengkondisikan diri sebagai basa dan sebagian terdapat sebagai anion. Anion dari protein inilah yang bereaksi dengan ion logam berat membentuk garam proteinat yang tidak larut dalam air. Protein yang tercampur oleh senyawa logam berat akan terdenaturasi. Hal ini terjadi pada albumin yang terkoagulasi setelah ditambahkan HgCl2 maupun timbal asetat Hal ini disebabkan karena adanya kemampuan protein untuk berikatan dengan ion logam di atas titik isoelektriknya. Kemampuan ini disebabkan karena pada saat pH berada di atas titik isoelektrik protein, maka ia akan bermuatan negatif sehingga mampu mengikat ion logam yang bermuatan positif. Adanya pertambahan ion logam menyebabkan putusnya jembatan disulfida dan ikatan kovalen S-S pada protein yang mengandung gugus sulfuhidril. Banyaknya gumpalan dan endapan yang terjadi pada penambahan HgCl2 dan Pb-Asetat berbeda karena dipengaruhi oleh tetapan disosiasi dan Ksp. Tetapan disosiasi dari HgCl2 lebih besar dibandingkan dengan Pb asetat dan Ksp Pb lebih besar dari Ksp Hg.. Semakin besar harga Ksp suatu senyawa, maka semakin mudah larut senyawa tersebut,maka seharusnya endapan pada HgCl2 lebih banyak daripada endapan pada Pb-Asetat,namun pada percobaan ini terjadi kesalahan dimana endapan pada Pb-Asetat lebih banyak dari endapan pada HgCl2.Dengan adanya endapan saat protein beereaksi dengan HgCl2 dan Pb-Asetat menunjukkan bahwa protein dapat bertindak sebagai antidotum/penawar racun pada keracunan logam berat seperti Hg dan Pb. Salah satu sumber protein adalah susu.Banyak faktor yang harus diperhatikan selama praktikum,seperti volume larutan,degradasi warna serta endapan yang terjadi. Kesalahan yang terjadi bisa disebabkan oleh kurang telitinya praktikan saat praktikum,bisa juga karena alat atau bahan yang digunakan pada saat praktikum.

IX. Kesimpulan1. Pada reaksi uji protein dengan penambahan logam berat seperti logam Hg dan Pb bereaksi positif dengan adanya pengendapan2. Pada pengendapan protein dengan ion logam berat, pengendapan terjadi karena ion logam berat dengan protein membentuk garam proteinat yang tidak larut dalam air3. Larutan protein pada titik isoelektriknya memiliki kutub negatif dan positif dengan perbandingan sama. Endapan putih yang dihasilkan merupakan hasil dari reaksi penetralan muatan antara ion logam berat sebagai kation dengan molekul protein sebagai anion4. Sampel yang menunjukkan hasil positif terhadap uji pengendapan logam adalah albumin