Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary...

7
Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography A capillary electrochromatography (CEC) method with diode-array detection has been developed for the separation of the therapeutically important anthraquinones from Rhubarb extract and commercial traditional Chinese drugs containing Rhubarb. The separation of four major anthraquinones (aloe-emodin, emodin, chrysophanol, and physcion) was optimized with respect to pH and concentration of buffers, addition of acetonitrile, applied voltage, and column temperature. Baseline separation was a- chieved for the four anthraquinones in less than 12 min using a background electrolyte consisting of 5 mM acetic acid (pH 4.5) with 80% acetonitrile. The possibility of CEC for the analysis of traditional Chinese medicines was discussed*. Keywords: Anthraquinones / Rhubarb / Capillary electrochromatography / Mobile phase compo- sition EL 4118 Yan Li 1 Huwei Liu 1 Xiuhong Ji 2 Junlin Li 3 1 Department of Chemistry, Peking University, Beijing, P. R. China 2 Beijing University of Chinese Medicine, Beijing, P. R. China 3 Academy of Military Medical Science, Beijing, P. R. China 1 Introduction Rhubarb belonging to the family of Polygonaceae is a widely used traditional Chinese medicine. It has been cul- tivated as a medicinal plant by the natives of China for more than 1000 years. There are about 60 species of this genus recorded in the world and 40 Chinese Rheum spe- cies are found in China. Pharmacological investigations have shown the bioactivities of Rhubarb, such as purga- tive activities, analgesic effects, in vitro antimutagenicity, antibacterial effects, antitumor activity, prevenion of hepa- titis, antioxidant activity, and the effects on proliferation of lymphocytes and vascular smooth muscle cell [1, 2]. The pharmaceutically relevant compounds in Rhubarb are anthraquinones, including aloe-emodin (Fig. 1A), emodin (Fig. 1B), chrysophanol (Fig. 1C), physcion (Fig. 1D), rhein, and some combined anthraquinones. They have received considerable attention owing to their various pharmacological effects. Continuing interest exists in studying the natural anthraquinones from many species of Rhubarb and commercial traditional Chinese drugs containing Rhubarb. Several methods have been developed for the separation of anthraquinones in Rhubarb. The vast majority of these separation have been performed by using thin-layer chro- matography (TLC) [3], reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) [4±6], and micellar electrokinetic capillary chromatography (MEKC) [7, 8]. Capillary electrochromatography (CEC) is a relatively new microcolumn separation technique, which combines the two well-known analytical techniques, HPLC and cap- illary electrophoresis (CE). CEC uses an electrically driven flow to transport the solutes through the chromato- Correspondence: Dr. Huwei Liu, Chemistry Department, Peking University, Beijing 100871, P. R. China E-mail: [email protected] Fax: +86-10-6275-1708 Electrophoresis 2000, 21, 3109±3115 3109 WILEY-VCH Verlag GmbH, 69451 Weinheim, 2000 0173-0835/00/1515-3109 $17.50+.50/0 Figure 1. Structures of the four anthraquinones (A) Aloe- emodin; (B) emodin; (C) chrysophanol; (D) physcion. CE and CEC * Presented at the 4th Chinese Symposium on Capillary Electro- phoresis and Related Microscale Techniques (CCE© 2000), June 10±13, 2000, Guangzhou, P.R. China and the 3rd Asia- Pacific International Symposium on Capillary Electrophoresis and Related Microscale Techniques (APCE© 2000), June 14±17, Hong Kong.

Transcript of Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary...

Page 1: Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography

��������� ������ �� �������������� ����� ������ � � � ������� �� ��������������������������

� ��������� �������� �������� ����� ��� ��� ���������� ����� ��� �������� ��� � �������� �� � ����������� � ����� ������������ ��� ������� ���� ��� �� ����� ��������� ����� ����� ��������� �������� ���������� �� ���� � �� ������������ ����� ����! ����! ������������! ������������ ��� ��� �"� ��� ���� � �# ��� ���������� �� ������! ������� ����������! ������ �����! ��� ���� � ������ $����� �������� ��� ������� ��� � ���� ������������ �� ��� ��� %& �� ����� � ���'������ ��������������� �� ( ) ���� ���� ��# *�(� ��� +,- ��������� �� ���������� �� ��� ���� �������� �� ��������� ����� ������ ��� ��������.�

�������� ������������ / ������� / ��������� �������� �������� / )���� ���� �� ���

����� �0 *%%+

� ���

����� ����

����� � �!

� �� ��"

%1��� � �� �� ����!2'��� 3�������!$� ���! 2� 4� �����

&$� ��� 3������� ������� )�����!$� ���! 2� 4� �����

5���� � �� )������)����� 6����!$� ���! 2� 4� �����

� # ���������

������� �������� � � �� ��� �� ������ ��� �� ������ ��� ��������� ����� ������ 7 ��� �� �������� �� � ������� ���� �� � ����� �� ����� ��� �� ��� %,,, ����� ��� �� ���� 8, ����� �� ������� ������ �� � ����� ��� *, ����� ����� ������ �� ����� �� ������ 2��� ���������� �������������� ����� � ���������� �� �������! ���� �� �������� �������! �������� ����! �� ����� ��� ��������!���������� ����! ���� �� ������! ������� �� �������! ��������� ������! ��� � ���� �� ����������� ���� ������ ��� �������� � ��� ���� ��� 9%! &:� ������ ��������� ����� �� ������ �� ������� ��������������! ��������� ���� ���� �;��� %��! �����;��� %$�! ������������ �;��� %��! �������� �;��� %1�!����! ��� �� �� ���� ������������� ��� �������� ���������� ����� ����� � ��� ����������� ���������� ����� ��������� ���� ���� ��������� � ������ ������������ ��� ��� ������� ������� ��� �� ����� ��������� ����� �������������� ��������

6���� ���� ��� �� ������ ��� � ���������� ������������ �� �������� �� ��� � ���� �� ���������� ��� �� ����� � �� ����� �������� ����� �������� ��0�� 95:! ���������� ���� ����� ��������� ���� �������� �42�#20�� 9*<8:! ��� ����������'���� ��������� ���� �������� �)�=�� 9>! +:�

��������� �������� �������� ����� �� � ��������� �������� � �������� ������! ����� �� ����� �� ����'���� ��������� �������! #20� ��� ���������� ����������� ����� ��� ��� �� �������������� ���� � ������� � ����� ������ � ���� ���

$������ �� ��� 1�� #��� 0��! �� ���� 1��� �! 2'���3�������! $� ��� %,,+>%! 2� 4� �����%&���� �����?�� ���� ��'�������'(� @+8�%,�8&>(�%>,+

�� ����������� &,,,! ��! 5%,A<5%%( 5%,A

B C70�D�E�# E���� F �#! 8A*(% C���� ! &,,, ,%>5�,+5(/,,/%(%(�5%,A G%>�(,@�(,/,

'����� �) 6������ �� � ���� ������������ ��� ���� ����H �$� ����H ��� ������������H �1� ���������

$%

�$%$

. 2���� � � *� ����� 6� ����� �� ��������� ������������� ��� 4��� )�������� �������� ����I &,,,�!J�� %,<%5! &,,,! F����"���! 2�4� ����� ��� � 5�� �����2������ 7��������� 6� ����� �� ��������� ��������������� 4��� )�������� �������� ��2��I &,,,�! J�� %*<%>!#��� =����

Page 2: Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography

������� ���� �� 6������� ��� � ������ �� ���������� ������� ��� �� �����! ��������� ���� �������� �� � �� ������� �� �� �� 9A<%&:� #����! ��� ���' ���� ���� � ������� �� ��� �� � � �������"� �� �� ��������� ������ ��� � ����� �������� �� ��� #20� 9%5! %*:� � ����! ��� ��� �� ��� ������ � � �������� �� ���� �������� ��� ����� ����� ������� 6��� � �� ������� �� ������������� ���� ����� ����� �� ������� ��� �� ���! ������� ������ �� � �������� �� ����� ����� ������ �������� �� ������ ��' ������ � ��� �������� ��' ������ #��! � ������ �� �������� �� ��� ��� ����� �� �)6� ��� ��� � ��� ����� �������� � ������� ����� ��� ������ ����� ���� ��������� �� ����� �� ����� ����� ������� #�����! �� ������������ �� ���� �� �� 9%(: �� � � ������ �� ��������� ����� �� ����� ��� ��� ��������! ���� �� ����� ������ ����� �616�! ����� ������������� ��� ������ �� ������ �� ������������� 9>! +:� $���� ��������� ��� ��� ������� ���� � �� �� ���! � ��� ������� �� ��� ������� � � �� �������� ��� )6! �'��� � ������� � ������ �� ��� ���� � �����" ����� ����� ������� 7� ��� ���� � ����� � ���������� �� �������� ��� � �������� �� ���� ������������ �� � ���������� ����� �����! �������� �� �� �� ��� ���'��� � ������� �� � ��� ��� ��� � ������ ��� ������ ��� ��� � �� �� �������� �� �� �������� � ��������� ����� ������

! *����� � ������

!)� $������

�� ���� ����! ����! ������������ ��� ������������������ �� '����� ������� �� � ���� � �� )������� )����� 6���� �$� ���! 2� 4� ������� ��� �� ������� �� �������������� ����K ���� ����! ���������������� ��� ����� �������� ��� $� ��� �� ���� ;������$� ���! 2� 4� ������H ����������� ����� ��� ��������� ��� =��� � 2������ ��� �� ���� ����������� ���� �$� ���! 2� 4� ������H ������ ��� 0�� 0� 1����� ���� ;����� �$� ���! 2� 4� ������H �����������L� ��� 6� D�� $�� ����� ��������� �� ��������� ��! 2� 4� ������� 2�� ��� ������ �� )�����M 6��� �)�������! $�����! )�! 36�� ��� ��� ��� ��� �������������� �� ���� ���� �� ������� ������ �������0� �� ����� ������� �� ������ �� ���� ����� ��� �������� �� � ���� � �� )������ )����� 6����� ���� ����� ��������� ����� ������ L�� #���� J�1� 2��� ��� ���� 4� ���� ���������� ����� )������ ;����� �$� ���! 2� 4� ������! L�� #���� 6����M��� 2��� ��� N���� ���� ���������� ����� )�����;����� ����� ��! 2� 4� ������! 1� #���� N� ����� C��

��� ���� 4� ���� ���������� ����� )����� ;������ �$� ���! 2� 4� ������ �� �������� ��� ����� ���������

!)! # ����� ����

��� ��������� �� ����� � �� �� ����� ��������������������� ��� ��� ����������� ��� � ���� ��������� ������ ����������! 2��� ���! ��! 36���� %,, � 71 � 5>( � O1 ����#������ �%+ ���� ������� ����������! C��������! F� ���� ��� ����'� �� ���� �� *, � �5 � ������ ��"� ������� �� ��� ���� � ���� �*+�( � � ��� � ���� ��� ���'� �� ���� +�( � �� ����� ������� ����������� ������ �� ����� �� � ��������� ���� � ��� ������� � *,��� �� ������ ����� ��� 5, 'E ���� ����� ��� ��� � (�( ��� $�� ��� ��� ��� ���������"� � ( ��� ������ ����������� ��� ��������������'���� �� ���� ��� ��� �&, 'E ��� %, �� ��� ������ ��� ����� � � � ������� �� &%* � ���&(* � �

!)" +��������

�� ������ ��������� ���� ���� �� ���� �� �� ��� �� ����� �# ��� ��� ,�% ) L�O# �� 5,- #��� ���� �# ��� �� ���! � ����� ��� ��L �� ���� ���� ����� �������� �� ����� ������ ,�*( � ����� ����� ��� ������ �� ������������� ��� �������� ��� %, �� ���� �� �� �������� � � ���/��� ������ ;��� ������� ������������! ���� ����! ����! ������������! ��� ��������! �� �������� ����L � ����������� �� ,�(! ,�5! ,�+! ��� ,�( �/ 0! ���������! ������ �� �� ��������� ��� ��� ����������� � ,�*( � ���� ����� 2�����"� ���� ����� ������� �% �� ��� �� �� ����� ��������� ������ ������ ���� & �� �� ����� �� ����������� � ��� ��L ���� %, 0� ��� 5, ��� �� ������� �������� � &+,, �� ��� &, ��! ����� ������� ,�*( � ���� ����! ��� ����� � %, 0 �����L� ������� ��� ��� �� � ��� � ��'�� ������������� �� � �� ��������� ���� � �� ������ ��� ���������� �������� �� ���� � ��� ����� ��� � ����� ���������� ( ) ���� ��� ����� � �# � + ��� 5,- #������ +,- ��L ��� ������� ��� A, ��� ���� ������� ������ �� �������� %& ��� ������ �� � ������ ��� ������ �� � ����� ��� ( � &( 'E �� ( 'E!%, �� ���� L� � ������ %& ��� ������ �� �������� ��� � ����� �&( 'E� ��� ���� 5, �� ��� �������� � ����� ��� ���� ������� �� ����� ������ � ��� ��������� ��� ��� �� ���'������ ������� �$F�� ��� � ��� 5, �� ���� ��� �� ��� ���� ��� $�� �������� �������! � ������������ ������������� ��� $F� ��� %, ��� �� ��� ��

5%%, D� 0� �� �� �� ����������� &,,,! ��� 5%,A<5%%(

Page 3: Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography

��� �� ��� ������ ��� ��������� �� ����� �� � � �� ����� �� ��� ���'! ����������� �� � ���� 9%8:� 7���� ���� �� ��� ����� ��� � �� �� �� ��������� �� ��������� ��� ��� ��� ��� ����� 9%>!%+:� ���� � ��� ������� ��� ������ ������ ������� ��� ���'�

" ,���� � ������

")� $����� �� ����������� ������

")�)� %����� �� ��

�� �� ���� ������� �� � ���� ������������ ������ �;��� %� ���� � � � ��' ����� �� � � ������ �� ������� �������� ������ ���� ��� ����������� ����� �� ��� ��� ����� �� � � �������� ��� 8�, �� ��L ������� ���� ��� �# �� � ��������������� � � ������ 9%*:! � ���� �� �� � �������� ������� ��� � ������ �� �#! ����� ��������� ���������� �� � ������� ������ �� � ���������� ���� ��� �� � ���'��� ������ $���� �� � �������� ���� �� � ������������ ��� � ������ ������� ��O;�! � ���� ��� �� ��'���� ����� ��� �( )

���� ��� +,- ��L! �# A�%%�� #����! � ���� �# �( )

���� ��� +,- ��L! �# +<A�%%� ��� �� � ���� ��������� ��� � �� �� ��� � ��� ���� � ����'���������� � ���� �� $F�� � �# ��� *�( ��� A�%% ����� 1������� �# ����� �� �� ������ �� ��� �� � ��� ��� �� ������ �� � ������� �������� � ����� � �# >! ���� ����� �� �� ��� ���� ���� � ��� ����'���� �� ���� ��� ��' ������� ��� �� � ��� �� �� ������ ��� ���� �� ��������������H � �# 8! ���� ����� �� � �� ����� � ���� � ���! �� ��' ����� ��� ����� �����H � �# *�(! ��� ���� ������������ ��� ������ �� ���� � ��� ��� �� ��' ����� ��� ������ �������� � �;��� &��

O�� ����� ����� �� �� �� �� ���� ��� ������������� ����� �� � ��� ����� � � ���� �# � ��������������� ������ �� ������������ ��������� ������� ����H � �� ��� �������� ��� � � � �� �� ���� ��� ���� � ����'�������� ��� ���� ���� ��� ������ �������� �� ���� ������������ ��� � �� ����� � ��� ���� � ����'�������� �� �������� ��� ���� ������� ������ � ���� ����� ��� � �# �������� ��� A�%% � *�(� ���� ���� ������� ������� ����� � ��4� ��� �������� �# ��� >�,� 8�, �� ��� �� � �� ������� ����� �� � �O;!�� ��� �� � �� �� ����� �� ����� � ����������� ��� �# 8�, � *�(� �� �O; ��� � �# *�( ��%�&( /�� 6��� � ���� �� ������� ������ � �����#! �� ���������� ������ ��� � ������ ���� �� �O;� $� �������� � �# �� � �����! � ����

���������� ������ ���� ������ 6��� � �� ������� � �O;! ����� ���� ������! � ������ ������ �� ��� ������� � ������ �# � ����� �� ������� ������ ��� �� ����� ���� ��������������H� ���������� ������ ����� ��� �� ��� ��������� � ���� �#� $� ��� ������������ ���� ���� �����! ��� ���� �# ���� ����� �O;��� � �� ������� ����� �� � ������� ������������ � � ������� �� � ��� ���� � �� ���� �����! � ��������� ���� � ��� ��� ��� �� � ������� � � ��� ��� �# ����H �����! �# *�( �������� �� � ��� �� �# ���� ���� ��� �# ���� �������� � ����� �� ���� � ��� ��� ��� ���� ������������� ��� ���� ��� � ����� �������� � ��� ��� ��' �����

")�)! %����� �� ������ �� �� �����

�� ��� �" � ���! � ����������� �� ���� ������ ������ ��� ( � &, )� � �������� ���� ��������� �� ��� ���� ������������ ��� ������ ��� �����( ) ���� ���� ����� �� � ����� ��� � �;��� 5�

�� ����������� &,,,! ��! 5%,A<5%%( ��� �� ������������ 5%%%

'����� !) ���� �� � �# �� � $F�� )���� ����K��� ( ) ���� ����! �# *�(! ��� +,- ��LH �$� ( ) ������# 8�,� ��� +,- ��LH ��� ( ) ����! �# >�,! ��� +,-��L� ���������K �� ����! &, 'E ��� %, �H *, � �%,, � ���� � �����#������ �%+/5 � �H 5, 'E! &,����� ( ��� ������� 2�'�K %! ���� ����H &! ����H5! ������������H *! ���������

Page 4: Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography

�� � � ���� ����� �����! ��� ���� ����� �O;��� ���� �����! ����� ������ ��� &, �� �&, )

���� ����� � (�( �� �( ) ���� ������

")! %����� �� -$. �� �� �����

������� �� ������� ������� ��� ����� � �O;� 6��������� 9%*! %(! %A! &,: ������ �� ��L �� ��� ��� ���� ������� ������ �� ���� O� � ��� ����! � �������� �� ��L � � $F� ��� ����� � ��������� �� ������� ������ ��� � ���� �� ���� �� ��� ������� ����������� �� ��L ��� &, � A,- �� ��!+,- ��L ��� � ������ � � ��� � � #���� ����������� �� ��L ������ � �������� � ! ������� �������� ��� ������� ��'�� �� ������ �� ���L ���������� ����� � ����� �� � ������!����� � �O; ������� ����� �� ����� �������� ��������� �� ����� � �� ���� ������������������ ��� %%�&A>! %*�>*>! &5�&5,! ��� 5&�5,> ��� A�&,>! %,�A,5! %*�A%,! ��� %+�+(5 ��! ��������!��� ��������� � ��L ���������� ��� 8, � +,-�� $F� �( ) ���� ���� �# *�(� � &, 'E� 7� �������!��������� � � ��� �� ��L �� � $F� ���� �� ������ ������! ��� ��� � ���������� ������� ����� �� ��� � ��������� �� ��' ������� � ������������ �� ��� �� � �� �� �� ������� �� #20� �� � ������� ���� � 9&%:� #����!� ��� ������ �������� ������� �� ��L ����� P +,-���� �� � ����� �� �������"���� �� ��L ��� �'� $F� ������������� �� ��� ����! �������� ��� �$F� ��� ��� ����� ��L ���������� � *,�� ����

� � ������ �� ��L �������"���� �� �� ����� ��� ���� �� ������! ����� ��� ���� �� � ��������'���� ������ � ���� ��� ���'�

")" %����� �� ������ ������ � ����������

�� ������� �� ������ ����� ��� ����� �� ��������� �� � ������ ��� ������ �� �O; ������

5%%& D� 0� �� �� �� ����������� &,,,! ��� 5%,A<5%%(

'����� ") ���� �� � ���� ���� ���������� �� �$F�� ���������K ���� ����! ���� ���� ��# *�(� ���+,- ��LH �� ����! &, 'E ��� %, �H *, � � %,, � ����� � �����#������ �%+/5 � �H 5, 'E! &,�� ��� ( ���������� ��� ���� ����H ��� ����H ��� �������������H ��� ���������

/��� �) 4�������� �� � ����� � �� � ������������� �� ���������

������������ �4� ����� 461%�-��� 461&�-���

���� ���� 8�>55 %�&> %�8(� ���� >�(&> %�&+ %�>8������������ A�8A* %�%, %�>A2������� %%�%58 %�%8 %�+8

�� ���������K ( ) ���� ���� ����� ��# *�(� ��� +,-��������! 5, 'E! *,��! ��� ( ��� �������

�� 4���� � �� C�������� ����� ������� ������� �� ����� � �� $������ ����� ������� ������� �� �����

'����� 0) ���� �� ��� ����� ��� �$� ������ ����������K ���� ����! ( ) ���� ����! �# *�(! ��� +,-��L� O�� ��������� ��� �� ���� �� �� ;��� 5�

Page 5: Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography

�� � ��� ���� � �� �� ��'�� � ���� �� ���� ��� ���� �� ��� �� �� ����� �� � ������� ��� ��������� � ���'� �� 9&&:� ���� � ��� ������ � ����������� � ������ � ���� ��� O�� ����� ���� ���� ������ �� � ����� ����� �� �������� �� ������ � ���� � �������� ������ ������ �;��� *��� C��� ����� ��� �������! � ������� � � ������ ����� �� � �������� ��� ����� � ����� ������� �;��� *$�� 7�������� � ����� ���������� � ���� ������ ��O; ������� ��� ,�A( /�� &(�� � %�&( /� � *,���! ���� � ���������� �������� �� � �����! ��� ���� � ����� �� ������� ���� ����� ��� � ���� �� �� ������ ���� ����� ������ ��� %( � 5, 'E ��� ������ ��� &,� *��! 5, 'E ��� *,�� ����� � � � ��! �����5, 'E ��� � ����� ������ ����� ��� � ����� ���������� ������������ ��� � ��������� � � ��� ������ �� � ��� ���� �! � �������� ����������� � � ��� &, ��� *,��� E���� ��� ���� � ����� ��� ����� �� ������� ���������� ���� �������� �� ����� ��� ��� ���� � ������������ ���

")0 '� � ����������

1���� ��� �������� ����� � � �� ��������!&%* � ��� &(* � ! ����� �� � �������� �� ���� � 3E ��������� �� � ��������� &(* � ������� ��� � ����� ����� �� � �� �������������������� ���� ��� ���� �������� ;������ � $F���������� �� ( ) ���� ���� ��# *�(� ��� +,- ��L���� ��������� �� 5, 'E ������ �����! *,�� ���� � �����! &(* � 3E �����! ��� &, 'E ��� %, �����'���� �� ���� ��� ����� � ������ � �� ����������

")1 *����� �������

�� ��������� �� �� ���� �� ��� �� ������� � ���� �� $F� ����� ��� �������� ��������� ����������� ��������� �� ��� �� � ���������������� �� � ����� � ��� ���� ����� %��#����! � ��������� ��������� �461Q%%-� ���������� ��������� �461Q&(-� �� � ��' ����� ������������� �� �������"���� �� ��L ���������� � � ������ �� � ����������� ;�� ������������� �� ������ �� ������������ �� ���������� ������! � ������ ������� ��� ������ ���� � � ���� � ��� ���������� �� ����� ������������� �� ���! � �� ���� � ����� � ��� � $F� �� ��� ��� � ��������� �� �� ���� � ���������� �� � $F� �� ������� ��� ���� �� ��� ����� �� � ��� ����� �� ��� � �# ������ �� ��������� �� ��� ��� �� �� ����� �� � ���� ������������! ��� � $F� ���� ����� ��� � �������

���� ���� � �� ���� �� � ��� ���� � ��� �������� C ��� �� ����� � ���� � ������ ��� ����� �� ��� ���� ���� ����� #����! � ��� ������� � �������� �� �� �������� � ��� � ������� ����� �� ������ � � ��������� ���! ��� �������� ���� � �� �� �������� � ���'���

")2 $%$ ��� ��� ����

����������� �������� �� ��� ��� ������� ����� ������ ����� ����� �� ������� �� � �� ��� �������� � �� � ��'� �� ���� ����! ����! ������������� ��� �������� �� � �������� ����� � �� ����� ��� ������ �� ���'��� �������� �� ��� �� ���� ������ ��� 3E ��������� ����� ��� ��� �� ��������� �;��� (�� ����������� �������� �� �� �� ����� ��������� ����� ������ ��� ���� ����� ��� ���� � �� �������� �;��� 8�� �� ����������� �� � ��� �"� ��� ��������� ����������� �� ��������� � ��� �� ���� #����! � ��'

�� ����������� &,,,! ��! 5%,A<5%%( ��� �� ������������ 5%%5

'����� 1) 4������� �������� ����� � �������������� �� ��������� ��� 6������ ������������� �������H �$� �������� �� ��� ���������K ��������! ( ) ���� ����! �# *�(! ��� +,- ��LH ������������ �� �� ;��� 5! ��� *,��� 2�'�K %! ���� �����H &! ����H 5! ������������H *! ���������

Page 6: Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography

���� �� ��' L��� 5 ��� * �� ��� �� ��� �;���� ( ���8� �� �� �� ���� �� �� �� � ������� �������! ����� ��� � ����� �� � ��������� �� �� �� ������� ��������� ����� ����� ��� � �������� ���� ������������ �����

0 $� ����� � ����3

�� ���' ����� � ������ �� � ���� ������������� ��� � ������ ������ �� � ������� ���� � �Q %& ��� �� ���� �� �������� ��� ����� � ����

�� � �� �� � ������! ��� ������� �����! �� ��������� �� � ������������� ����� 6� �� ���� ���� �� ��� �� ��� ���� � ��� �� ���� ���� ������ ����� ���������� � �� ��� �� ����� �� ������ ����� ������� �� ��� ������ ��������������� ����� � ���������� ;�� ����� ��������� �� ������ �� ������������ �� ������� ���������� ����� ������! ������ �������� ������ ����� ;���� ��! � ������ �� � �������� � ������ �� �������� � ��� ���� � ��� �������� ������� � ����� �� ��� ��� � ��� ������ ����� ����

5%%* D� 0� �� �� �� ����������� &,,,! ��� 5%,A<5%%(

'����� 2) ��������� ����� ��� �� ����� ��������� ����� ������ ��������� ������������ L�� #���� J� 1� 2���!�$� L�� #���� 6���� M��� 2���!��� 1� #���� N� ����� C������������ �� ��� �� ;��� (�2�'�K 5! ������������H *! ����������

Page 7: Optimized separation of pharmacologically active anthraquinones in Rhubarb by capillary electrochromatography

��� �� ��� ��� ������ ��� � ������ ��� ������ �������� ���! �����! ������� �� ������ �������������� ��� � ��������� ����� ����� ���������� $���� �� �� �� ��������� ������� ��������� �� � ������� ������! � ��� ��� ������ ������ � ������ � �� �� ��'� �� )6 ����������� � )6� ������ ��� ��� � � ��� ����� �������� ��� ��� � ��������"���� ��� ������ �������� ��������� ����� �������

�� ������� !��" �#� �� � #��!�"�� $����� � ����%���� ��� �����"��� ��� $����� &����� �� ���������������� ��" ��� &�& ����� ��� !��# !�� ��������" �'()&� *���� '�� �+,-.//��

4���� )���� &5! &,,,

1 ,����� ��

9%: 2��� ������� �� � �����! ������ ������ �� ���%��0� ������ �� &����! F�������� 6��� R ���� 2���!F����"��� %AA(! ��� %8<%>�

9&: N���! J� #�! 1� ���2��� ��"� 3���� %AA+! 4/! 5<(�

95: #! 0� D�! 0��! 6� 4�! $ �� ������ ���� (��� %A+,! �.!(((<(8&�

9*: N���! J� #�! S�! D�! 0��! N� ��! 1� ���2��� ��"� 3���� %A+>!�+! *,+<*%,�

9(: 6��! 0� C�! N���! J� #�! 1� ���2��� ��"� 3���� %AA5! �.!%(<&,�

98: #���! S� =�! C���! N� #�! 0�! M� D�! 5���� &���� 6�� %AA8!�,! 5+<5A�

9>: N���! D� D�! ��! N� ��! 1� '����� ���"� %AA(! .,! (>><(+&�

9+: N���! D� D�! D�! )� ��! N��! N� M�! ��! N� ��! $ �� ������% ���� (��� %AA(! 4/! (A*<(A+�

9A: ��'���! )� F�! $���! =� 1�! 4�����! )� )�! )���! 2�!�����! )� 4�! $���� %AA+! ��4! +>4<%,&4�

9%,: �����! =� 1�! 6 ��! L� C�! ��������! �� #�! &��������������%AA>! 78! 88*<8>*�

9%%: )�����! J� #�! ���������! )� 6�! 9&�*& %AA+! �8! 58<*%�

9%&: 1� ���! )� )�! 4�"���! F� 2�! 1� &���������� $ %AA8!-77! 85<>*�

9%5: ���T�! 0� ��! F��! D�! ;� ��! ��! $��� &���� '�!� )��%����� %AA>! $����� �� 78�$:78-$�

9%*: #���! ��! #����! 6� #�! 1� &���������� $ %AAA! ,48!5%(<5&*�

9%(: ���! J� D�! #����! J�! 1� &���������� $ %AA(! -/4!88><8A&�

9%8: C�! C�! C���! D� )�! 0��! F� ��! D��! ��! &���� 1� $���&���� %AA>! 4.! 58%<58(�

9%>: 6 ��! L� C�! �����! )� $�! &�������������� %AA*! 4,!8*A<8(>�

9%+: $���������! 4� J�! 3�������! ��! 2�����! �� J�! &���%����������� %AA(! 7/! 5&A<55(�

9%A: ���T�! 0� ��! =� ����! J� ;�! 4����! �� )�! ;� ��! �� )�!�� ����������� %AA>! �,! &%8&<&%>*�

9&,: 1� ���! )� )�! 4�"���! F� 2�! 1� �� �� �� (��� %AA>! +!5AA<*,+�

9&%: ;�! F�! S�! $� J�! 0�! D! 0��! #� C�! F��! N� C�! N���! J� #�!1� ���2��� ��"� 3���� %AA+! 4/! %8<&%�

9&&: 0�! ;�! F�! J� 0�! ;�! 4� L�! &���� 1� &���������� %AA>! �.!5A&<5A(�

�� ����������� &,,,! ��! 5%,A<5%%( ��� �� ������������ 5%%(