Arapongas 2017

PROGRAMA DE POacuteS-GRADUACcedilAtildeO STRICTO SENSU MESTRADO EM SAUacuteDE E PRODUCcedilAtildeO DE RUMINANTES

SELMA ALICE FERREIRA ELWEIN

DANIELLA FURLAN

O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti

Paranaacute

DANIELLA FURLAN

Cidade ano

AUTOR

Arapongas

2017

O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti

Paranaacute

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Programa Associado entre Universidade Estadual de Londrina ndash UEL e Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPAR) como requisito parcial para a obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes Orientador Prof Dr Werner Okano

Ficha catalograacutefica elaborada com dados fornecidos pelo (a) autor (a)

Biblioteca UNOPAR Arapongas - Maria Luci Juliani Grano CRB ndash 9776

FURLAN Daniella

O efeito da relaccedilatildeo matildee progenie no estado soroloacutegico de Neospora

caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Arapongas UNOPAR 2017

67p

Orientador Werner Okano

Dissertaccedilatildeo (Mestrado) UNOPARUEL - Medicina Veterinaacuteria - Sauacutede e

Produccedilatildeo de Ruminantes 2017

1 Medicina Veterinaacuteria - Dissertaccedilatildeo de mestrado ndash UNOPARUEL 2 Sauacutede

e Produccedilatildeo de Ruminantes 3 Neospora caninum 4Bovinos leiteiros ndash

imunidade humoral 5 Bovinos leiteiros - RIFI 6 RIFI ndash meacutetodos soroloacutegicos

I OKANO Werner II Titulo

CDU 619636

O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti

Paranaacute

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Sauacutede e

Produccedilatildeo de Ruminantes (Programa Associado entre Universidade Estadual de

Londrina ndash UEL e Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPAR) como requisito

parcial para a obtenccedilatildeo do titulo de Mestre em Sauacutede e Produccedilatildeo de

Ruminantes conferida pela Banca Examinadora formada pelos professores

_________________________________________ Orientador Prof Dr Werner Okano

UNOPAR

_________________________________________ Prof Dr Luiz Daniel de Barros

_________________________________________ Prof Dr Alexey Leon Gomel Bogado

Arapongas 02 de Fevereiro de 2017

Agradecimentos

Agradeccedilo primeiramente ao Professor Dr Werner Okano meu orientador

obrigada pela oportunidade de desenvolver este trabalho pela orientaccedilatildeo dedicaccedilatildeo

paciecircncia amizade e todos conselhos valiosos sendo sempre um modelo a ser

seguido minha eterna gratidatildeo

Em especial ao meu esposo Mauricio por me apoiar incondicionalmente em

todas minhas decisotildees por ter me dado todo apoio e amor necessaacuterio nessa etapa

tatildeo difiacutecil e decisiva da minha vida

Aos meus amados pais Mara e Nelson e a minha irmatilde Carina por serem a

base de tudo em minha vida e me apoiarem obrigada por estarem sempre comigo e

mostrarem que o estudo sempre seraacute o melhor caminho

Ao Professor Dr Alexey Leon Gomel Bogado obrigada pelos conselhos e

ensinamentos por sempre estar pronto e disposto a me ajudar sempre que precisei

Ao Professor Dr Joatildeo Luis Garcia por sua coorientaccedilatildeo pela ajuda e

oportunidade de aprendizado acadecircmico profissional e pessoal

Ao acadecircmico e amigo Ceacutelio Pereira por toda ajuda dedicaccedilatildeo e atenccedilatildeo em

tudo que precisei no desenvolvimento dessa pesquisa

Aos funcionaacuterios e amigas Ana Sue Sammi Beatriz Nino e Isabelli Sayuri

Kono do Laboratoacuterio de Protozoologia Veterinaacuteria da UEL que se colocaram a

disposiccedilatildeo para ensinar a teacutecnica laboratorial minha eterna gratidatildeo e amizade

Aos colegas de turma do mestrado pela amizade em especial a meus amigos

Carla Joice e Faacutebio que fizeram com que esta etapa de aprendizado fosse mais

prazerosa

A minha amiga de estaacutegio da USP Camila Pilatildeo Navarro por todos artigos

disponibilizados para a composiccedilatildeo deste trabalho

A minhas amigas da residecircncia Cintia Andressa e Angeacutelica que estiveram

comigo nos momentos de angustia e felicidade obrigada por estarem comigo e

apoiarem nesse momento da minha vida

A Capes pela oferta da bolsa CNPQ

ldquoEacute preciso muito forccedila para desistir do que jaacute foi seu mundo um dia

E uma coragem maior ainda para buscar o que vocecirc merecerdquo

Tati Vitor

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo vertical

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

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DANIELLA FURLAN

Cidade ano

AUTOR

Arapongas

2017

O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti

Paranaacute

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Programa Associado entre Universidade Estadual de Londrina ndash UEL e Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPAR) como requisito parcial para a obtenccedilatildeo do tiacutetulo de Mestre em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes Orientador Prof Dr Werner Okano

Ficha catalograacutefica elaborada com dados fornecidos pelo (a) autor (a)

Biblioteca UNOPAR Arapongas - Maria Luci Juliani Grano CRB ndash 9776

FURLAN Daniella

O efeito da relaccedilatildeo matildee progenie no estado soroloacutegico de Neospora

caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Arapongas UNOPAR 2017

67p

Orientador Werner Okano

Dissertaccedilatildeo (Mestrado) UNOPARUEL - Medicina Veterinaacuteria - Sauacutede e

Produccedilatildeo de Ruminantes 2017

1 Medicina Veterinaacuteria - Dissertaccedilatildeo de mestrado ndash UNOPARUEL 2 Sauacutede

e Produccedilatildeo de Ruminantes 3 Neospora caninum 4Bovinos leiteiros ndash

imunidade humoral 5 Bovinos leiteiros - RIFI 6 RIFI ndash meacutetodos soroloacutegicos

I OKANO Werner II Titulo

CDU 619636

O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti

Paranaacute

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Sauacutede e

Produccedilatildeo de Ruminantes (Programa Associado entre Universidade Estadual de

Londrina ndash UEL e Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPAR) como requisito

parcial para a obtenccedilatildeo do titulo de Mestre em Sauacutede e Produccedilatildeo de

Ruminantes conferida pela Banca Examinadora formada pelos professores

_________________________________________ Orientador Prof Dr Werner Okano

UNOPAR

_________________________________________ Prof Dr Luiz Daniel de Barros

_________________________________________ Prof Dr Alexey Leon Gomel Bogado

Arapongas 02 de Fevereiro de 2017

Agradecimentos

Agradeccedilo primeiramente ao Professor Dr Werner Okano meu orientador

obrigada pela oportunidade de desenvolver este trabalho pela orientaccedilatildeo dedicaccedilatildeo

paciecircncia amizade e todos conselhos valiosos sendo sempre um modelo a ser

seguido minha eterna gratidatildeo

Em especial ao meu esposo Mauricio por me apoiar incondicionalmente em

todas minhas decisotildees por ter me dado todo apoio e amor necessaacuterio nessa etapa

tatildeo difiacutecil e decisiva da minha vida

Aos meus amados pais Mara e Nelson e a minha irmatilde Carina por serem a

base de tudo em minha vida e me apoiarem obrigada por estarem sempre comigo e

mostrarem que o estudo sempre seraacute o melhor caminho

Ao Professor Dr Alexey Leon Gomel Bogado obrigada pelos conselhos e

ensinamentos por sempre estar pronto e disposto a me ajudar sempre que precisei

Ao Professor Dr Joatildeo Luis Garcia por sua coorientaccedilatildeo pela ajuda e

oportunidade de aprendizado acadecircmico profissional e pessoal

Ao acadecircmico e amigo Ceacutelio Pereira por toda ajuda dedicaccedilatildeo e atenccedilatildeo em

tudo que precisei no desenvolvimento dessa pesquisa

Aos funcionaacuterios e amigas Ana Sue Sammi Beatriz Nino e Isabelli Sayuri

Kono do Laboratoacuterio de Protozoologia Veterinaacuteria da UEL que se colocaram a

disposiccedilatildeo para ensinar a teacutecnica laboratorial minha eterna gratidatildeo e amizade

Aos colegas de turma do mestrado pela amizade em especial a meus amigos

Carla Joice e Faacutebio que fizeram com que esta etapa de aprendizado fosse mais

prazerosa

A minha amiga de estaacutegio da USP Camila Pilatildeo Navarro por todos artigos

disponibilizados para a composiccedilatildeo deste trabalho

A minhas amigas da residecircncia Cintia Andressa e Angeacutelica que estiveram

comigo nos momentos de angustia e felicidade obrigada por estarem comigo e

apoiarem nesse momento da minha vida

A Capes pela oferta da bolsa CNPQ

ldquoEacute preciso muito forccedila para desistir do que jaacute foi seu mundo um dia

E uma coragem maior ainda para buscar o que vocecirc merecerdquo

Tati Vitor

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo vertical

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

Ficha catalograacutefica elaborada com dados fornecidos pelo (a) autor (a)

Biblioteca UNOPAR Arapongas - Maria Luci Juliani Grano CRB ndash 9776

FURLAN Daniella

O efeito da relaccedilatildeo matildee progenie no estado soroloacutegico de Neospora

caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Arapongas UNOPAR 2017

67p

Orientador Werner Okano

Dissertaccedilatildeo (Mestrado) UNOPARUEL - Medicina Veterinaacuteria - Sauacutede e

Produccedilatildeo de Ruminantes 2017

1 Medicina Veterinaacuteria - Dissertaccedilatildeo de mestrado ndash UNOPARUEL 2 Sauacutede

e Produccedilatildeo de Ruminantes 3 Neospora caninum 4Bovinos leiteiros ndash

imunidade humoral 5 Bovinos leiteiros - RIFI 6 RIFI ndash meacutetodos soroloacutegicos

I OKANO Werner II Titulo

CDU 619636

O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti

Paranaacute

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Sauacutede e

Produccedilatildeo de Ruminantes (Programa Associado entre Universidade Estadual de

Londrina ndash UEL e Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPAR) como requisito

parcial para a obtenccedilatildeo do titulo de Mestre em Sauacutede e Produccedilatildeo de

Ruminantes conferida pela Banca Examinadora formada pelos professores

_________________________________________ Orientador Prof Dr Werner Okano

UNOPAR

_________________________________________ Prof Dr Luiz Daniel de Barros

_________________________________________ Prof Dr Alexey Leon Gomel Bogado

Arapongas 02 de Fevereiro de 2017

Agradecimentos

Agradeccedilo primeiramente ao Professor Dr Werner Okano meu orientador

obrigada pela oportunidade de desenvolver este trabalho pela orientaccedilatildeo dedicaccedilatildeo

paciecircncia amizade e todos conselhos valiosos sendo sempre um modelo a ser

seguido minha eterna gratidatildeo

Em especial ao meu esposo Mauricio por me apoiar incondicionalmente em

todas minhas decisotildees por ter me dado todo apoio e amor necessaacuterio nessa etapa

tatildeo difiacutecil e decisiva da minha vida

Aos meus amados pais Mara e Nelson e a minha irmatilde Carina por serem a

base de tudo em minha vida e me apoiarem obrigada por estarem sempre comigo e

mostrarem que o estudo sempre seraacute o melhor caminho

Ao Professor Dr Alexey Leon Gomel Bogado obrigada pelos conselhos e

ensinamentos por sempre estar pronto e disposto a me ajudar sempre que precisei

Ao Professor Dr Joatildeo Luis Garcia por sua coorientaccedilatildeo pela ajuda e

oportunidade de aprendizado acadecircmico profissional e pessoal

Ao acadecircmico e amigo Ceacutelio Pereira por toda ajuda dedicaccedilatildeo e atenccedilatildeo em

tudo que precisei no desenvolvimento dessa pesquisa

Aos funcionaacuterios e amigas Ana Sue Sammi Beatriz Nino e Isabelli Sayuri

Kono do Laboratoacuterio de Protozoologia Veterinaacuteria da UEL que se colocaram a

disposiccedilatildeo para ensinar a teacutecnica laboratorial minha eterna gratidatildeo e amizade

Aos colegas de turma do mestrado pela amizade em especial a meus amigos

Carla Joice e Faacutebio que fizeram com que esta etapa de aprendizado fosse mais

prazerosa

A minha amiga de estaacutegio da USP Camila Pilatildeo Navarro por todos artigos

disponibilizados para a composiccedilatildeo deste trabalho

A minhas amigas da residecircncia Cintia Andressa e Angeacutelica que estiveram

comigo nos momentos de angustia e felicidade obrigada por estarem comigo e

apoiarem nesse momento da minha vida

A Capes pela oferta da bolsa CNPQ

ldquoEacute preciso muito forccedila para desistir do que jaacute foi seu mundo um dia

E uma coragem maior ainda para buscar o que vocecirc merecerdquo

Tati Vitor

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo vertical

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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28 DAVISON H C C S MCGARRY JW GUY F WILLIAMSDJL

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after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after

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32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

C BLAGBURN B L BOWMAN D D BUXTON D ELLIS J

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K JENKINS M C KOBAYASHI Y KOUDELA B MARSH A

E MATTSSON J G MCALLISTER M M MODRYacute D OMATA

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caninum and its differentiation from related coccidia International

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33 DUBEY J P BUXTON D amp WOUDA W Pathogenesis of bovine

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34 DUBEY J P LINDSAY D S ANDERSON M L DAVIS S W

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in cattle Journal of the American Veterinary Medical Association

vol 201 ndeg 5 p 709-713 1992a

35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti

Paranaacute

Dissertaccedilatildeo apresentada ao Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Sauacutede e

Produccedilatildeo de Ruminantes (Programa Associado entre Universidade Estadual de

Londrina ndash UEL e Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPAR) como requisito

parcial para a obtenccedilatildeo do titulo de Mestre em Sauacutede e Produccedilatildeo de

Ruminantes conferida pela Banca Examinadora formada pelos professores

_________________________________________ Orientador Prof Dr Werner Okano

UNOPAR

_________________________________________ Prof Dr Luiz Daniel de Barros

_________________________________________ Prof Dr Alexey Leon Gomel Bogado

Arapongas 02 de Fevereiro de 2017

Agradecimentos

Agradeccedilo primeiramente ao Professor Dr Werner Okano meu orientador

obrigada pela oportunidade de desenvolver este trabalho pela orientaccedilatildeo dedicaccedilatildeo

paciecircncia amizade e todos conselhos valiosos sendo sempre um modelo a ser

seguido minha eterna gratidatildeo

Em especial ao meu esposo Mauricio por me apoiar incondicionalmente em

todas minhas decisotildees por ter me dado todo apoio e amor necessaacuterio nessa etapa

tatildeo difiacutecil e decisiva da minha vida

Aos meus amados pais Mara e Nelson e a minha irmatilde Carina por serem a

base de tudo em minha vida e me apoiarem obrigada por estarem sempre comigo e

mostrarem que o estudo sempre seraacute o melhor caminho

Ao Professor Dr Alexey Leon Gomel Bogado obrigada pelos conselhos e

ensinamentos por sempre estar pronto e disposto a me ajudar sempre que precisei

Ao Professor Dr Joatildeo Luis Garcia por sua coorientaccedilatildeo pela ajuda e

oportunidade de aprendizado acadecircmico profissional e pessoal

Ao acadecircmico e amigo Ceacutelio Pereira por toda ajuda dedicaccedilatildeo e atenccedilatildeo em

tudo que precisei no desenvolvimento dessa pesquisa

Aos funcionaacuterios e amigas Ana Sue Sammi Beatriz Nino e Isabelli Sayuri

Kono do Laboratoacuterio de Protozoologia Veterinaacuteria da UEL que se colocaram a

disposiccedilatildeo para ensinar a teacutecnica laboratorial minha eterna gratidatildeo e amizade

Aos colegas de turma do mestrado pela amizade em especial a meus amigos

Carla Joice e Faacutebio que fizeram com que esta etapa de aprendizado fosse mais

prazerosa

A minha amiga de estaacutegio da USP Camila Pilatildeo Navarro por todos artigos

disponibilizados para a composiccedilatildeo deste trabalho

A minhas amigas da residecircncia Cintia Andressa e Angeacutelica que estiveram

comigo nos momentos de angustia e felicidade obrigada por estarem comigo e

apoiarem nesse momento da minha vida

A Capes pela oferta da bolsa CNPQ

ldquoEacute preciso muito forccedila para desistir do que jaacute foi seu mundo um dia

E uma coragem maior ainda para buscar o que vocecirc merecerdquo

Tati Vitor

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo vertical

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

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35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

Agradecimentos

Agradeccedilo primeiramente ao Professor Dr Werner Okano meu orientador

obrigada pela oportunidade de desenvolver este trabalho pela orientaccedilatildeo dedicaccedilatildeo

paciecircncia amizade e todos conselhos valiosos sendo sempre um modelo a ser

seguido minha eterna gratidatildeo

Em especial ao meu esposo Mauricio por me apoiar incondicionalmente em

todas minhas decisotildees por ter me dado todo apoio e amor necessaacuterio nessa etapa

tatildeo difiacutecil e decisiva da minha vida

Aos meus amados pais Mara e Nelson e a minha irmatilde Carina por serem a

base de tudo em minha vida e me apoiarem obrigada por estarem sempre comigo e

mostrarem que o estudo sempre seraacute o melhor caminho

Ao Professor Dr Alexey Leon Gomel Bogado obrigada pelos conselhos e

ensinamentos por sempre estar pronto e disposto a me ajudar sempre que precisei

Ao Professor Dr Joatildeo Luis Garcia por sua coorientaccedilatildeo pela ajuda e

oportunidade de aprendizado acadecircmico profissional e pessoal

Ao acadecircmico e amigo Ceacutelio Pereira por toda ajuda dedicaccedilatildeo e atenccedilatildeo em

tudo que precisei no desenvolvimento dessa pesquisa

Aos funcionaacuterios e amigas Ana Sue Sammi Beatriz Nino e Isabelli Sayuri

Kono do Laboratoacuterio de Protozoologia Veterinaacuteria da UEL que se colocaram a

disposiccedilatildeo para ensinar a teacutecnica laboratorial minha eterna gratidatildeo e amizade

Aos colegas de turma do mestrado pela amizade em especial a meus amigos

Carla Joice e Faacutebio que fizeram com que esta etapa de aprendizado fosse mais

prazerosa

A minha amiga de estaacutegio da USP Camila Pilatildeo Navarro por todos artigos

disponibilizados para a composiccedilatildeo deste trabalho

A minhas amigas da residecircncia Cintia Andressa e Angeacutelica que estiveram

comigo nos momentos de angustia e felicidade obrigada por estarem comigo e

apoiarem nesse momento da minha vida

A Capes pela oferta da bolsa CNPQ

ldquoEacute preciso muito forccedila para desistir do que jaacute foi seu mundo um dia

E uma coragem maior ainda para buscar o que vocecirc merecerdquo

Tati Vitor

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo vertical

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

ldquoEacute preciso muito forccedila para desistir do que jaacute foi seu mundo um dia

E uma coragem maior ainda para buscar o que vocecirc merecerdquo

Tati Vitor

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo vertical

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo vertical

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

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Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

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Lista de Ilustraccedilotildees Figura 1 - Ciclo de vida heteroacutexeno de Neospora caninum 5

Figura 2 - Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum 8

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo

norte oriental do Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical

atraveacutes do teste de RIFI 48

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

Lista de Tabelas

Tabela 1 - Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses para o ano

20124

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte

oriental do Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia

Indireta (RIFI) 2016 40

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas

pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 42

Tabela 4 - Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute

nos anos de 2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de

Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016 43

Tabela 5 - Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras

em um rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 201644

Tabela 6 - Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo

vertical apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de

anticorpos alto no momento da colheita 2016 46

Lista de abreviaturas e siglas CFA Clima subtropical uacutemido mesoteacutermico (classificaccedilatildeo de Koeppen)

DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

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DNA Aacutecido desoxirribonucleacuteico

DVB Diarreia Viral Bovia

HCL Agravecido Cloriacutedrico inorgatildenico

HIV Viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana

IBGE Instituto Brasileiro de Geografia e estatiacutestica

IgG Imunoglobulina G

IgM Imunoglobulina M

RIFI Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta

microm Micrometro

Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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Sumaacuterio 1 - Introduccedilatildeo 1

2- Revisatildeo de Literatura 2

21- Histoacuterico e etiologia 2

22 - Distribuiccedilatildeo geograacutefica 2

23 - Impacto econocircmico 3

24 - Hospedeiros 4

241 - Ciclo de vida 5

242 ndash Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo 7

243 - Transmissatildeo horizontal 8

244 - Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita 10

25 - Aspectos de risco 11

251 - Idade do animal 11

252 - Fatores reprodutivos 12

253 ndash Fonte de reposiccedilatildeo 12

254- Relaccedilatildeo com outras enfermidades 12

255 - Animais silvestres na propriedade 13

256- Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas 13

3 - Patogenia 13

4 - Sinais cliacutenicos 15

41- Abortamento endecircmico e epidecircmico 16

5 - Diagnoacutestico 17

51 - Diagnoacutestico laboratorial 17

6 - Estrateacutegias de profilaxia e controle 19

7 - Tratamento da neosporose 20

8 - Referecircncias 21

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

9 - Objetivos 34

91 - Objetivo geral 34

92 - Objetivo especiacutefico 34

10 - Introduccedilatildeo 37

11 - Material e meacutetodos 38

111 - Caracterizaccedilotildees do local de estudo 38

112 ndash Animais utilizados 38

113 - Comitecirc de eacutetica 39

114 - Colheita das amostras 39

115 - Meacutetodo soroloacutegico 39

116 - Anaacutelise dos dados 40

12 - Resultados e discussatildeo 40

13 - Consideraccedilotildees finais 49

14 - Referecircncias Bibliograacuteficas 50

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Neosporose bovina eacute uma infecccedilatildeo parasitaacuteria causado pelo

protozoaacuterio cocciacutedio Neospora caninum parasita intracelular obrigatoacuterio

(DUBEY et al 1988) Pertencente ao Phylum Apicomplexa assim como outros

protozoaacuterios morfologicamente anaacutelogos como Toxoplasma gondii Sarcocystis

sp Hammondia fazem parte (SCHARES et al 1998 OSHIRO et al 2007)

Em 1988 o parasita N caninum foi descoberto em caniacutedeos surgindo

como um patoacutegeno que acomete vaacuterias espeacutecies animais como bovinos

caninos caprinos ovinos equinos e animais silvestres sendo apontada em

algumas regiotildees como uma das maiores causas de abortamento em bovino

(SCHARES et al 1988 OSHIRO et al 2007) A ampla disseminaccedilatildeo do N

caninum por vaacuterios continentes descrita por Dubey e Schares (2011) mostra

vasta quantidade de animais selvagens e domeacutesticos que entraram em contato

com este parasita

O interesse por este protozoaacuterio na Medicina Veterinaacuteria aumentou

quando o N caninum foi identificado pela primeira vez por Thilsted Dubey

(1989) como agente etioloacutegico de aborto em bovinos Foi confirmado como

uma das principais causas de abortamento no rebanho leiteiro da Califoacuternia

(ANDERSON et al 1991) No iniacutecio da deacutecada de 90 Dubey et al (1992a)

descreveram a transmissatildeo vertical do N caninum em bovinos e em 1993

atraveacutes de infecccedilatildeo experimental deste protozoaacuterio em bovinos da raccedila Jersey

foi obtido o primeiro isolado em tecido nervoso de dois fetos abortados

(CONRAD et al 1993)

O aborto em bovinos devido ao N caninum pode ocorrer em qualquer

momento da gestaccedilatildeo poreacutem com maior frequecircncia ente o 5deg e 6deg mecircs (HALL

et al 2005) Os prejuiacutezos reprodutivos e econocircmicos advecircm da morte

embrionaacuteria aumento do intervalo entre partos fetos mumificados morte fetal

natimortos nascimento de bezerros com problemas neuroloacutegicos diminuiccedilatildeo

da produccedilatildeo de leite e carne ocorrecircncia de nascimento de bezerro normal

poreacutem clinicamente infectado (HALL et al 2005 DUBEY et al 2007)

A identificaccedilatildeo de N caninum em um rebanho eacute de grande importacircncia

em virtude de grandes prejuiacutezos econocircmicos causados por problemas

reprodutivos Identificar as causas de abortamento eacute fundamental para se

determinar medidas de controle e prevenccedilatildeo (LEITE et al 2001)

2

Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

(Doutorado em Veterinaacuteria) ndash Facultad de Veterinaria Universidad

Complutense de Madrid Espanha F 301 2003

2 AMARAL R L G SILVA L B G JUNIOR J W P NETO O L S

LEAL C A S PORTO W J N BARBOSA J M P MOTA R A

Neospora caninum em bovinos em matadouros de Pernambuco e

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Diferentes teacutecnicas satildeo utilizadas para o diagnoacutestico do N caninum

como a Imunohistoquiacutemica Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) reaccedilatildeo

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) e teste Imunoenzimaacutetico (ELISA) Os

percentuais de animais positivos nos rebanhos variam e essa variaccedilatildeo estaacute

relacionada ao meacutetodo de diagnoacutestico utilizado e a procedecircncia da amostra a

qual pode ser proveniente de rebanhos com abortamento endecircmico ou de uma

amostra aleatoacuteria (SARTOR et al 2003 HADDAD et al 2005)

2 REVISAtildeO DE LITERATURA

21 Histoacuterico e etiologia

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio cocciacutedio intracelular obrigatoacuterio

descrito em catildees em 1984 (BJERKAS et al 1984) e posteriormente em

bovinos (DUBEY et al 1988) O parasita eacute morfologicamente semelhante ao

Toxoplasma gondii devido agrave similaridade estrutural dos estaacutegios assexuados

dos dois parasitas (URQUHART et al 1998 SHOEMAKER 2014)

De acordo com Dubey (1999) Goodswen et al (2013) a classificaccedilatildeo

taxonocircmica do N caninum pode ser assim descrita

Filo Apicomplexa

Classe Sporozoasida

Famiacutelia Sarcocystidae

Gecircnero Neospora

Espeacutecie Neospora caninum

22 Distribuiccedilatildeo geograacutefica

A neosporose eacute descrita como a causa principal de falhas reprodutivas

nos rebanhos bovinos estando presente nos cinco continentes Ameacuterica

Europa Aacutesia Aacutefrica e Oceania Na Ameacuterica do Sul rebanhos da Argentina

Chile Brasil Peru Uruguai Venezuela e Paraguai foram identificados como

positivos para N caninum (DUBEY et al 2007 GUEDES et al 2008) Estudos

de soroprevalecircncia satildeo importantes para entender o comportamento bioloacutegico

e distribuiccedilatildeo geograacutefica quanto a real situaccedilatildeo dos rebanhos

3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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3

A primeira descriccedilatildeo no Brasil foi feita por Gondim et al (1999) em um

feto abortado na Bahia com prevalecircncia de 1409 em bovinos leiteiros

reagentes na propriedade estudada pela teacutecnica de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) A ocorrecircncia 236 de soropositividade para neosporose foi

descrita em seis estados brasileiros Minas Gerais Mato Grosso do Sul

Paranaacute Rio Grande do Sul Rio de Janeiro e Satildeo Paulo tendo Minas Gerais a

maior percentagem de soropositivos com 290 enquanto o Rio de Janeiro a

menor com 147 Com maior ocorrecircncia em bovinos leiteiros (RAGOZO et al

2003) Em Goiaacutes Melo et al (2006) detectaram anticorpos anti- Neospora

caninum em rebanhos leiteiros e rebanho de exploraccedilatildeo mista todas fazendas

foram positivas para N caninum 304 e 433 respectivamente

23 Impacto econocircmico

O aborto eacute o maior impacto econocircmico observado na neosporose

(ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY et al 2007) O impacto financeiro altera de

acordo com o valor geneacutetico da matriz predisposiccedilatildeo produtiva da raccedila e a

idade Os custos diretos compreendem perdas fetais e problemas reprodutivos

enquanto que os indiretos incluem a reposiccedilatildeo da matriz despesa com o

diagnoacutestico perda da produccedilatildeo de leite (THURMOND amp HIETALA 1996

HERNAacuteNDEZ et al 2001 ALVAREZ-GARCIacuteA 2003 DUBEY amp SCHARES

2011)

Segundo Dubey et al (2007) o risco de descarte eacute de 17 vezes maior

em vacas soropositivas do que em soronegativas em rebanhos aleatoriamente

selecionados Isto se deve a probabilidade de abortamento em vacas

soropositivas provenientes de rebanhos epidecircmicos ser 19 vezes maior do que

vacas soronegativas

Estudo realizado por Reichel et al (2012) estimaram perdas

econocircmicas em dez paiacuteses com informaccedilotildees de risco de aborto caudados por

N caninum Com a anaacutelise dos dados pode-se concluir uma variaccedilatildeo de

perdas correspondente a 65 no setor leiteiro entre US$ 0633 a US$ 238

bilhotildees por ano conforme Tabela 1

4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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4

Tabela 1- Perdas econocircmicas de vacas e novilhas com risco de aborto por

Neospora caninum em dez paiacuteses no ano 2012

Fonte REICHEL et al 2012

24 Hospedeiros

Diferentes espeacutecies de animais selvagens e domeacutesticos satildeo expostas

ao N caninum No entanto este parasito foi isolado em um pequeno nuacutemero de

hospedeiros (catildees bovinos buacutefalos cavalos cervos de cauda branca

biacutepedes ovelhas) (DUBEY SCHARES 2011 DUBEY et al 2002) Os catildees

satildeo os hospedeiros definitivos (GONDIM et al 2004 DUBEY et al 2007)

Aleacutem dos catildees (Canis lupus familiaris) (MCALLISTER et al 1988) oocistos de

N caninum foram encontrados em coiotes americanos (Canis latrans)

(GONDIM et al 2004) dingos australianos (Canis lupus dingo) (KING et al

2010) e o lobo cinzento (Canis lupus) (DUBEY et al 2011)

5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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5

De acordo com Buxton et al (2002) e Dubey et al (2007) natildeo haacute

evidencia de infecccedilotildees por N caninum em humanos Apenas relatos de baixos

niacuteveis de anticorpos sem a detecccedilatildeo de DNA foram descritos em humanos

assim como nenhuma infecccedilatildeo acidental por N caninum foi notificada No

entanto devido ao sucesso de infecccedilatildeo em dois macacos Rhesus (Macaca

mulatta) existem preocupaccedilotildees sobre o seu potencial zoonoacutetico (DUBEY et al

2007) Lobato et al (2005) detectaram anticorpos IgG para N caninum em

38 em pacientes HIV positivos e 18 de soropositividade em pacientes com

desordens neuroloacutegicas enquanto receacutem-nascidos e indiviacuteduos saudaacuteveis

apresentaram entre 5 e 6 de soropositividade

241 Ciclo de vida

O ciclo bioloacutegico do N caninum eacute do tipo heteroacutexeno envolvendo os

caniacutedeos como hospedeiros definitivos com reproduccedilatildeo sexuada em

ruminantes suiacutenos bubalinos e outros satildeo considerados hospedeiros

intermediaacuterios nos quais ocorre a reproduccedilatildeo assexuada (CAMILLO 2011

DUBEY 2003) conforme Figura 1

Figura 1 ndash Ciclo de vida do Neospora caninum (OSHIRO et al 2013)

6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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6

O protozoaacuterio se desenvolve em trecircs estaacutegios infecciosos taquizoiacutetos

bradizoiacutetos nos cistos teciduais e esporozoiacutetos nos oocistos Taquizoiacutetos e

cistos teciduais satildeo encontrados intracelularmente nos hospedeiros

intermediaacuterios e definitivos (DUBEY et al 2002a)

O hospedeiro definitivo eacute infectado ao ingerir tecidos de origem animal

do hospedeiro intermediaacuterio contendo bradizoiacutetos taquizoiacutetos ou oocistos

causando a infecccedilatildeo tornando-se tanto hospedeiro intermediaacuterio quanto

definitivo (DUBEY et al 1988 DUBEY et al 1990 McALLISTER et al 1998

LINDSAY et al 1999) Em seguida ocorre a fase sexuada no hospedeiro

definitivo com a multiplicaccedilatildeo de oocistos no intestino e consequente

eliminaccedilatildeo destes oocistos pelas fezes A infecccedilatildeo inicial de um rebanho ocorre

quando o alimento ou aacutegua satildeo contaminados com fezes de caniacutedeos

permitindo que os ruminantes hospedeiro intermediaacuterio ingiram a forma

esporulada do oocisto (McALLISTER et al 1998 ANDERSON et al 2000

DUBEY BUXTON amp WOUDA et al 2006) No estocircmago do hospedeiro

intermediaacuterio os oocistos rompem-se pela accedilatildeo mecacircnica liberando os

esporozoiacutetos que invadem os tecidos e sofrem multiplicaccedilatildeo assexuada

originando taquizoiacutetos moacuteveis que satildeo encontrados em desenvolvimento

dentro de vacuacuteolos parasitoacutefagos de vaacuterias ceacutelulas como neurocircnios

macroacutefagos fibroblastos e mioacutecitos (COLLERY 1996)

Os cistos teciduais satildeo observados em tecido nervoso como nervos

ceacuterebro medula espinhal muacutesculos cardiacuteacos e esqueleacuteticos muacutesculos

oculares e fiacutegado Os bradizoitos ficam dentro dos cistos teciduais

representam o estaacutegio de proliferaccedilatildeo lenta na qual os parasitas formam cistos

teciduais especialmente no sistema nervoso central (ANDERSON et al 1991

DUBEY amp SCHARES 2006)

Os taquizoiacutetos e os cistos teciduais satildeo etapas do ciclo que acontecem

nos hospedeiros intermediaacuterios e ocorrem intracelularmente (DUBEY et al

2007) Os taquizoiacutetos que satildeo organismos proliferativos redondos ovoides ou

em forma semilunar Medem aproximadamente 3-7 x 15 microm podendo alterar

conforme o estaacutegio de desenvolvimento de divisatildeo e do plano de corte dos

tecidos (MONTEIRO 2010) Uma ceacutelula infectada pode conter mais de 100

taquizoiacutetos (McALLISTER et al 1998 DUBEY et al 2002) Tecircm sido

detectados em macroacutefagos ceacutelulas cerebrais fibroblastos ceacutelulas do endoteacutelio

7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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7

vascular ceacutelulas renais trofoblastos da placenta hepatoacutecitos e mioacutecitos Esses

taquizoiacutetos causam ruptura celular causando uma resposta inflamatoacuteria com

lesotildees associadas (DUBEY BUXTON WOUDA 2006)

Em ruminantes os taquizoiacutetos podem ser localizados no coraccedilatildeo

fiacutegado ceacuterebro e pulmotildees de fetos e na placenta e medula espinhal de

bezerros natimorto (DUBEY BUXTON WOUDA 2006) Sua multiplicaccedilatildeo eacute de

forma assexuada por endodiogenia onde dois novos taquizoiacutetos satildeo formados

atraveacutes do taquizoito original A multiplicaccedilatildeo acontece de forma raacutepida e gera

lise e morte celular favorecendo a dispersatildeo e estabelecimento da doenccedila

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2002)

Posteriormente a infecccedilatildeo inicial os taquizoiacutetos se transformam em

bradizoiacutetos de multiplicaccedilatildeo celular lenta satildeo encontrados dentro dos cistos

teciduais no interior da musculatura e tecidos neurais causando pouca ou

nenhuma resposta inflamatoacuteria geralmente satildeo ovais e redondos medem

aproximadamente 2 x 8 microm Contecircm organelas encontradas em outros

integrantes do filo Apicomplexa como gracircnulos densos grandes e pequenos

micronemas conoacuteides e roptrias que podem medir entre 6 e 12 microm Podem

persistir durante toda vida do hospedeiro sem causar manifestaccedilotildees clinicas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 DUBEY et al 2007)

Segundo Dubey Schares e Ortega Mora (2007) os taquizoiacutetos podem

passar pela placenta dos hospedeiros intermediaacuterios causando a infecccedilatildeo do

feto A transmissatildeo vertical (endoacutegena) eacute o principal responsaacutevel pela

manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo dentro do rebanho (HALL et al 2004) Um estudo

realizado por Schares et al (1998) descreve que em um rebanho australiano

tinha soroprevalencia de 75 de vacas relacionadas com a transmissatildeo

vertical

242 Vias de infecccedilatildeo e transmissatildeo

Neospora caninum pode ser transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos atraveacutes das vias vertical e horizontal (DUBEY et al 2007)

conforme Figura 2

8

Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

VetSci 2011

Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

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Figura 2- Visatildeo geral das formas de transmissatildeo de Neospora caninum em bovinos Fonte

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Conforme a figura 2 a transmissatildeo de N caninum pode ocorrer de

forma endoacutegena ou exoacutegena A transmissatildeo exoacutegena de N caninum eacute

disseminada pelo hospedeiro definitivo como catildees e coiotes (MCALLISTER et

al 1998) O hospedeiro definitivo elimina os oocistos do parasita em suas

fezes em aacutereas onde o gado tem acesso isso pode levar a possiacutevel

contaminaccedilatildeo de fontes de alimentos e aacutegua especialmente se natildeo forem

instituiacutedas medidas preventivas e sanitaacuterias para evitar o acesso caniacutedeo os

alimentos ou aacutegua contaminados com oocistos pode ser consumido pelo gado

podendo ocorrer o aborto (MCALLISTER et al 1996) ou infecccedilatildeo de bezerros

que nascem saudaacuteveis poreacutem persistentemente infectados com N

caninum (WILLIANS 2005)

243 Transmissatildeo horizontal

A transmissatildeo horizontal ocorreraacute quando bovinos hospedeiros

intermediaacuterios ingerirem oocistos esporulados de N caninum (DUBEY et al

9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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9

2006) por meio da ingestatildeo de aacutegua e alimentos contaminados com oocistos

expelidos nas fezes de catildees domeacutesticos (BARTELS et al 1999) e outros

carniacutevoros silvestres como coiotes (GONDIM et al 2004)

No catildeo a infecccedilatildeo ocorre pela ingestatildeo de tecidos de animais com

cistos de N caninum como placentas fetos bovinos e bezerros infectados por

via congecircnita e tambeacutem por ingestatildeo de oocistos do meio ambiente

(MCALLISTER et al 1998)

De acordo com Dubey et al (2006) abortos epidecircmicos geralmente

ocorrem pela infecccedilatildeo horizontal primaria por meio da ingestatildeo de oocistos

presentes nos alimentos ou aacuteguas e pode resultar em uma elevada taxa de

abortos Em outros casos a transmissatildeo horizontal em rebanhos leiteiros natildeo

resulta no aumento da taxa de abortos por estes rebanhos estarem infectados

com uma amostra de N caninum com cepa de baxa virulecircncia

Dubey et al (2007) descrevem que natildeo foi evidenciada a presenccedila do

N caninum nas secreccedilotildees e excreccedilotildees de animais portadores adultos

assintomaacuteticos e a transmissatildeo horizontal bovino para bovino tambeacutem natildeo foi

observada (DUBEY SCHARES 2011) Em vaacuterios mamiacuteferos Andreotti et al

(2003) observam que haacute o comportamento de placentofagia As vacas ingerem

a sua placenta e a de outras vacas e a presenccedila de estaacutegios infecciosos de N

caninum nesse material gerou um debate de que essa fosse uma via de

transmissatildeo horizontal para bovinos

A transmissatildeo horizontal nos rebanhos estaacute relacionada agrave presenccedila de

catildees nas fazendas (DUBEY et al 2007) Estudos descrevem associaccedilatildeo

significativa entre fatores de risco comuns como o manejo que favorece o

estabelecimento da infecccedilatildeo por N caninum com animais soropositivos e a

presenccedila de catildees nos rebanhos (GUEDES et al 2008 BRUHN et al

2012) O hospedeiro intermediaacuterio ingere os oocistos esporulados que estatildeo

presentes nas fezes dos hospedeiros definitivos atraveacutes de aacutegua e alimentos

contaminados (FORTUNATO et al 2010 VANLEEUWEN et al 2010) Em

estudos realizados por Gondim et al (2005) pode-se evidenciar que catildees mais

velhos com idade ateacute trecircs anos eliminam menos oocistos do que animais mais

jovens com 10 a 14 semanas

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

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35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

10

244 Transmissatildeo vertical transplacentaacuteria ou congecircnita

A transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena segundo Dubey et al (2006) eacute

definida como a infecccedilatildeo fetal que ocorre com o resultado da infecccedilatildeo primaacuteria

pela ingestatildeo de oocistos pela vaca durante a gestaccedilatildeo Jaacute a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena eacute definida como a infecccedilatildeo do feto de uma vaca

persistentemente infectada (adquirida antes da prenhez e provavelmente

congecircnita) depois de recrudescecircncia ou reativaccedilatildeo da infecccedilatildeo durante a

gestaccedilatildeo (TREES et al 2005)

A transmissatildeo vertical contribui expressivamente para a persistecircncia do

N caninum no rebanho e para a proliferaccedilatildeo da infecccedilatildeo sendo que os

animais infectados assim permanecem durante toda a vida podendo transmitir

a infecccedilatildeo para suas geraccedilotildees de forma consecutiva ou intermitente (DUBEY

et al 2006) A maioria das infecccedilotildees congecircnitas resulta em bezerros

clinicamente normais poreacutem persistentemente infectados (SARTOR et al

2005) Rebanhos soropositivos tanto leiteiros como de corte tem maior

probabilidade de ocorrecircncia de abortos e ateacute 95 dos bezerros nascidos de

matildees soropositivas podem ser infectados congenitamente mas nascem

clinicamente normais (DUBEY et al 2006)

A ocorrecircncia de um decreacutescimo na proporccedilatildeo de bezerros infectados

congenitamente eacute descrita por alguns autores em vacas com maior nuacutemero de

partos o que pode ser explicado pelo aumento da imunidade protetora contra a

transmissatildeo transplacentaacuteria ou seja transmissatildeo vertical eacute mais frequente em

fecircmeas mais jovens Pesquisadores tecircm indicado o desenvolvimento de

imunidade protetora contra novos abortos em vacas apoacutes a primo-infecccedilatildeo com

N caninum (DUBEY et al 2006)

Com relaccedilatildeo ao secircmen de touros infectados que pode ser possiacutevel via

da transmissatildeo do N caninum no entanto haacute poucos estudos que sugerem

essa transmissatildeo O DNA de N caninum pode ser localizado no secircmen de

touros naturalmente expostos Resultados indicam que a viabilidade desses

organismos quando presentes eacute pequena e natildeo frequente (GAY et al 2006

DUBEY et al 2007)

A transferecircncia de embriotildees foi demonstrada por Baillargeon et al

(2001) e Ladmann et al (2002) ser uma teacutecnica segura para o controle da

transmissatildeo vertical uma vez que os embriotildees provindos de doadoras

11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

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11

positivas quando transferidos para receptoras negativas interrompem o ciclo

da infecccedilatildeo congecircnita No entanto pode acontecer um processo antagocircnico

caso ocorra transferecircncia de embriotildees de doadoras tanto positivas como

negativas para receptoras positivas ao N caninum estas satildeo suscetiacuteveis de

transmitir a infecccedilatildeo ao feto Na pesquisa realizada por Baillargon et al (2001)

a transmissatildeo vertical no qual os embriotildees foram implantados em receptoras

positivas apresentou uma taxa de 75

25 Aspectos de risco

A ciecircncia dos fatores de risco relacionados agrave infecccedilatildeo por N caninum

em rebanhos bovinos de acordo com Dubey amp Shares (2011) eacute de grande

importacircncia para elaborar e determinar medidas de controle da neosporose

bovina Haacute numerosas pesquisas que estabelecem a associaccedilatildeo dos fatores de

risco com a presenccedila ou ausecircncia da neosporose nos rebanhos bovinos

251 Idade do animal

A idade do animal ou a quantidade de partos pode agravar o risco de

contrair a infecccedilatildeo do N caninum A transmissatildeo horizontal eacute de grande

importacircncia nos rebanhos vaacuterios estudos sugerem que a infecccedilatildeo eacute

provavelmente influenciada pela frequecircncia constante do hospedeiro

intermediaacuterio com o hospedeiro definitivo (DUBEY et al 2007) A presenccedila de

anticorpos anti N caninum associado entre animais idosos foram

demonstrados em estudos realizados na Etioacutepia e Croaacutecia (BECK et al 2010

ASMARE et al 2013) Essa correlaccedilatildeo natildeo estaacute evidente para outros autores

(ESCALONA et al 2010 SOUSA et al 2012)

A ausecircncia de anticorpos em soros ou fluidos fetais em fetos infectados

por N caninum natildeo pode ser descartada Os anticorpos satildeo determinados pela

condiccedilatildeo imunoloacutegica do feto que por sua vez depende da idade do mesmo

da dose infectante e da resposta imune da matildee (DUBEY et al 1998)

12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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12

252 Fatores reprodutivos

Distuacuterbios reprodutivos satildeo correlatados agraves vacas com histoacuterico de

soropositividade ao N caninum em que o aborto eacute o sinal clinico mais

constante (MOORE et al 2009 BECK et al 2010 GHALMI et al 2012

ASMARE et al 2013 CEDENtildeO amp BENAVIDES 2013) podendo apresentar

como ocorrecircncia de problemas reprodutivos distocia retenccedilatildeo de placenta

repeticcedilatildeo de estro e anestro temporaacuterios e nascimento de descendentes fracos

(BRUHN et al 2012 ASMARE et al 2013)

Novilhas de corte podem natildeo apresentar abortos subsequentes podem

desenvolver outras alteraccedilotildees como infertilidade diferentemente das novilhas

leiteiras (DANTAS et al 2010)

253 Fonte de reposiccedilatildeo de novilhas

A alta taxa de bezerras soropositivas nascidas de matildees tambeacutem

soropositivas para o N caninum confirma a importacircncia da via de transmissatildeo

vertical (DUBEY et al 2007) Pesquisas realizadas por Asmare et al (2013) e

Beck et al (2010) mostraram que animais adquiridos sem a realizaccedilatildeo preacutevia

de sorologia apresentam maiores chances de introduzir animais positivos no

rebanho

254 Relaccedilatildeo com outras enfermidades

Vaacuterios autores sugerem que a infecccedilatildeo causada por N caninum

poderia ser propiciada por infecccedilotildees que causam imunossupressatildeo (DIJKSTRA

et al 2001 WOUDA et al 1999) Vanleeuwen et al (2010) demonstraram

associaccedilatildeo positiva entre animais soropositivos com Diarreia Viral Bovina

(DVB) No entanto outro estudo natildeo encontrou associaccedilatildeo entre vacas

soropositivas e outras doenccedilas como Herpes viacuterus Tipo I Leptospira Hardjo e

Salmonella dublin (BARTELS et al 1999) Por fim um estudo realizado por

Frandoloso et al (2008) das 26 propriedade leiteiras estudadas foi possiacutevel

afirmar que o viacuterus da Leucose Viral Bovina (BLV) Diarreacuteia Viral Bovina (DVB)

Herpes Virus e N caninum encontra-se presente em mais de 50 das

13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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13

propriedades investidadas com iacutendices de prevalecircncia de ateacute 60 nos

rebanhos estudados

255 Animais silvestres

Um estudo realizado nos Estados Unidos encontrou ligaccedilatildeo positiva

entre a presenccedila de animais silvestres como raposas e coiotes entre rebanhos

leiteiros (BARLING et al 2001) Estudos de vaacuterios fatores epidemioloacutegicos

realizados no Brasil tambeacutem revelou associaccedilatildeo significativa com a doenccedila

devido ao acesso de animais domeacutesticos e selvagens agraves instalaccedilotildees das vacas

leiteiras e o contato com seu alimento (MARTINS et al 2012 SOUSA et al

2012)

256 Ingestatildeo de colostro ou leite de vacas infectadas

A transmissatildeo vertical via colostro de acordo com Uggla et al (1998)

evidencia ser uma possiacutevel rota de infecccedilatildeo de receacutem-nascidos com poucas

horas de vida Outro estudo realizado por Dubey et al (1998) indicou que os

taquizoiacutetos de N caninum natildeo satildeo resistentes ao HCL gaacutestrico

Moskwa et al (2007) e Uggla et al (1998) concluiram que em certas

circunstacircncias se houver um grande nuacutemero de taquizoiacutetos presente no

colostro ou leite de um animal bezerros podem ser infectados via colostro Jaacute

pesquisas realizadas por Davison et al (2001) a amamentaccedilatildeo de bezerros

nascidos de matildees soronegativas em vacas soropositivas natildeo resultou em uma

infecccedilatildeo

3 PATOGENIA

Ao invadir a ceacutelula hospedeira ocorreratildeo dois episoacutedios diferentes

adesatildeo e penetraccedilatildeo celular O primeiro episoacutedio de aderir-se a ceacutelula

acontece por um contato de baixa afinidade que acarreta na secreccedilatildeo de

micronemas resultando assim uma ligaccedilatildeo mais especiacutefica com a superfiacutecie da

ceacutelula hospedeira sucedendo assim a entrada da ceacutelula Satildeo necessaacuterios

receptores adequados na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para que este evento

aconteccedila (HEMPHIL amp GOTTSTEIN et al 1998)

14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

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14

De acordo com Naguleswaran et al (2002) tanto N caninum quanto T

gondii satildeo capazes de invadir e se proliferar em diversos tipos de ceacutelulas de

mamiacuteferos os autores propotildeem que os parasitas possam diferencia um ou

muacuteltiplos receptores na superfiacutecie da ceacutelula hospedeira para a adesatildeo inicial e

subsequente invasatildeo

Barr et al (1994) descreveram que as ceacutelulas uterinas ao serem

invadidas pelo parasita multiplicam-se e causam uma lesatildeo local nos tecidos

da matildee e do feto desencadeando uma resposta inflamatoacuteria Com isso as

lesotildees se expandem para a regiatildeo corio-alantoacuteide entre os cotileacutedones

Simultaneamente com as lesotildees ocorre a entrada do parasita na corrente

sanguiacutenea e outros tecidos com preferecircncia no sistema nervoso central ao

redor dos vasos sanguiacuteneos A inflamaccedilatildeo linfoide associada a destruiccedilatildeo de

ceacutelulas fetais tambeacutem pode ocorrer em outros tecidos como pulmatildeo fiacutegado

coraccedilatildeo e muacutesculo esqueleacutetico

Lesotildees macroscoacutepicas podem estar presentes no muacutesculo coraccedilatildeo e

ceacuterebro poreacutem satildeo incomuns Jaacute as lesotildees neurais baseiam-se em

encefalomielite natildeo supurativa caracterizada por infiltraccedilatildeo multifocal com ou

sem necrose No Sistema Nervoso Central (SNC) a lesatildeo caracteriacutestica da

neosporose consiste em um foco de infiltraccedilatildeo de ceacutelulas mononucleares ao

redor de uma zona central de necrose (DUBEY et al 2006)

N caninum eacute capaz de causar lesotildees necroacuteticas perceptiacuteveis em

poucos dias ocasionando em apoptose atraveacutes da ativa multiplicaccedilatildeo dos

taquizoitos sendo capaz de acarretar doenccedilas neuromusculares graves em

bovinos catildees e diversas espeacutecies lesionando grande nuacutemero de ceacutelulas

neurais envolvendo nervos espinhais e craniais afetando a condutibilidade

dessas ceacutelulas (CANTILE amp ARISPICI 2002)

Em adiccedilatildeo a liberaccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e uma resposta

imune Th1 na interface materno-fetal podem ser desencadeadas pela infecccedilatildeo

de N canimum e causar danos para a gestaccedilatildeo A interrupccedilatildeo do fornecimento

de oxigecircnio e nutrientes para o feto eacute devido aos danos causados pelos

taquizoiacutetos a placenta materna podendo matar o feto (DUBEY et al 1992b

INNES et al 2005) Portanto quando haacute uma infecccedilatildeo em uma vaca gestante

acontece um desequiliacutebrio na interaccedilatildeo hospedeiro-parasita causando assim

por parte do parasita agrave destruiccedilatildeo focal dos tecidos da interface materno-fetal

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

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19 CAMILLO G CEZAR A S ANTONELLO A M SANGIONI A

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35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

15

(placentoma) por parte da vaca gestante ocorre o iniacutecio de uma resposta

inflamatoacuteria local (BUXTON et al 2002)

4 SINAIS CLIacuteNICOS

O principal sinal cliacutenico da neosporose em bovinos satildeo abortamento e

perdas neonatais (DUBEY amp LINDSAY 1996) Pode manifestar-se em novilhas

e vacas de forma esporaacutedica endecircmica ou epidecircmica em qualquer fase da

prenhez sendo mais frequente entre o 5ordm e 6ordm mecircs de gestaccedilatildeo (SILVA et al

2008 TREES et al 2005) nesse periacuteodo em as fecircmeas gestantes tem-se

aumento do tiacutetulo de IgG o que indica uma atividade maior do parasita Assim

no iniacutecio da gestaccedilatildeo natildeo eacute eficaz mensurar o niacutevel de anticorpos para

prognosticar se a gestaccedilatildeo ocorreraacute um aborto ou o nascimento de um animal

cronicamente infectado (ANTONELLO et al2015)

O periacuteodo da gestaccedilatildeo que ocorre a infecccedilatildeo por N caninum eacute

importante no decorrer da doenccedila Se a infecccedilatildeo adquirida ocorre no comeccedilo

da prenhez antes de o feto desenvolver o sistema imune frequentemente

causa morte fetal reabsorccedilatildeo ou autoacutelise fetal antes de cinco meses de

gestaccedilatildeo podem resultar em mumificaccedilatildeo e retenccedilatildeo fetal por vaacuterios meses

(DUBEY 1999) Infecccedilatildeo no meio da gestaccedilatildeo pode resultar em aborto ou

nascimento de bezerro persistentemente infectado (COLLANTES-

FERNANDEZ et al 2006) Os bezerros infectados no periacuteodo final da

gestaccedilatildeo quando o feto eacute imunocompetente ao nascerem podem estar

congenitamente infectados com peso reduzido dificuldade para se locomover

e manifestaccedilatildeo nervosa (FERRE et al 2003)

Os sinais cliacutenicos neuroloacutegicos apresentados em bezerros neonatos

satildeo deformaccedilatildeo dos membros toraacutecicos e peacutelvicos com ocorrecircncia de

membros anteriores ou posteriores hiperestendidos ou flexionados ataxia

perda da consciecircncia diminuiccedilatildeo do reflexo patelar exoftalmia assimetria

ocular e deformidades que estatildeo associadas com lesotildees de ceacutelulas nervosas

(DUBEY amp LINDSAY 1996 LOCATELLI-DITTRICH et al 2003)

Alguns bezerros nascidos de matildees infectadas apresentam sinais

cliacutenicos cinco dias posteriormente ao parto sendo incapazes de levantar-se

desde o nascimento observa-se ainda mielite miocardite e encefalite

associado ao N caninum Eacute provaacutevel que a maioria dos bezerros com

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

(Doutorado em Veterinaacuteria) ndash Facultad de Veterinaria Universidad

Complutense de Madrid Espanha F 301 2003

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p 417-431 2000

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Diagnostico e controle da neosporose em bovinos EMBRAPA

Documento 136 Campo Grande ndash MS 2003

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contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

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1806 2001

22

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21 CEDENtildeO D Q BENAVIDES B Seroprevalence and risk factors

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22 COLLANTES-FERNANDEZ E Patogenia de la neosporosis em el feto

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23 COLLANTES-FERNANDEZ E RODRIGUEZ-BERTS A ARNAIZ-

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35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

16

neosporose cliacutenica morram nas primeiras quatro semanas de vida (BARR et al

1993 DUBEY LINDSAY 1996 LINDSAY et al 1989)

Segundo Thurmond et al (1999) grande parte dos bezerros infectados

intra-uterinamente ao nascerem mostram tiacutetulos de anticorpos anti- N

caninum 80 a 90 dos bezerros de vacas soropositivas satildeo congenitamente

infectados e satildeo responsaacuteveis pela manutenccedilatildeo da neospora no rebanho

Tiacutetulos de anticorpos no uacuteltimo terccedilo da gestaccedilatildeo satildeo uma provaacutevel reativaccedilatildeo

da infecccedilatildeo que ocorre no segundo terccedilo de gestaccedilatildeo a partir do quinto mecircs

de gestaccedilatildeo eacute mais visiacutevel tiacutetulos elevados (ANTONELLO 2015)

As vacas infectadas apresentam geralmente na primeira lactaccedilatildeo

baixa produccedilatildeo de leite expondo um risco maior de aborto e maior

possibilidade de serem refugadas (FORTUNATO et al 2010)

41 Abortamento endecircmico e epidecircmico

Abortamento eacute definido como teacutermino da gestaccedilatildeo por observaccedilatildeo da

expulsatildeo do feto entre 42 e 260 dias apoacutes a inseminaccedilatildeo ou pela assumida

perda fetal num intervalo maior que 120 dias entre duas inseminaccedilotildees

(WOUDA et al 1998)

Os abortos podem ser considerados como endecircmico ou epidecircmico

Satildeo considerados abortos epidecircmicos de acordo com DUBEY amp LINDSAY

(2006) se 10 dos animais considerados de risco abortar nas primeiras oito

semanas Logo os abortos endecircmicos satildeo considerados se mais de 5 dos

animais tiverem aborto por anos consecutivos Acredita-se que a infecccedilatildeo

primaacuteria dos animais aconteccedila devido a surtos epizooacuteticos devido agrave ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos ou por exposiccedilatildeo dos

animais a outro agente infeccioso como o viacuterus do BVD (MCALLISTER et al

2000 PARKISON 2009)

Os abortos endecircmicos satildeo mais frequentes em vacas infectadas

congenitamente os fetos que satildeo precocemente infectados na gestaccedilatildeo estatildeo

mais propensos ao aborto Poreacutem quando ocorre a infecccedilatildeo fetal tardiamente

os fetos sobrevivem e nascem congenitamente infectados A transmissatildeo

transplacentaacuteria decresce com o aumento do nuacutemero de partos dos animais

indicando que possa existir imunidade nos animais congenitamente infectados

(DUBEY et al 2006 FORTUNATO et al 2010 GUY et al 2001)

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

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Netherlands (1995 to 1997) Theriogenology vol 52 ndeg2 p 247-257

1999

13 BASSO W VENTURINI L VENTURINI M C MOORE D P

RAMBEAU M UNZAGA J M CAMPERO C BACIGALUPE D

DUBEY J P Prevalence of Neospora caninum infection in dogs from

beef cattle farms dairy farms and from urban areas of Argentina

Journal of Parasitology vol 87 ndeg 4 p 906-907 2001

14 BECK R MARINCULIĆ A MIHALJEVIĆ Ž BENIĆ M

MARTINKOVIĆ F Seroprevalence and potential risk factors of

Neospora caninum infection in dairy cattle in Croatia Veterinarski

Arhiv vol 80 nordm 2 p 163-171 2010

15 BJERKAringS I MOHN SF PRESTHUS J Unidentified cyst-forming

sporozoan causing encephalomyelitis and myositis in dogs Zeitschrift

fuumlr Parasitenkunde vol 70 nordm 2 p 271-274 1984

16 BOWMAN D Parasitologia Veterinaacuteria de Georgis [traduccedilatildeo Cid

Figueiredo e Thais H Bittencourt Figueiredo] ed8 Barueri ndash SP

Manole p 102 2006

17 BRUHN F R P DAHER D O LOPES E BARBIERI J M DA

ROCHA C M B M GUIMARAtildeES A M N Factors associated with

seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle in southeastern

23

Brasil Tropical Animal Health and Production vol 45 ndeg 5 p 1093-

1098 2012

18 BUXTON D McALLISTER MM DUBEY JP The comparative

pathogenesis of Neosporosis Trends in Parasitology vol 18 ndeg 12 p

546 ndash 552 2002

19 CAMILLO G CEZAR A S ANTONELLO A M SANGIONI A

FLORES E F PEREIRA G R GONCcedilALVES P B D VOGEL F S

F Detecccedilatildeo de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras

individuais e coletivas de leite de bovinos pela reaccedilatildeo de

imunofluorescecircncia indireta Pesquisa Vetererinaacuteria Brasileira vol

31 ndeg6 p 482-486 2011

20 CANTILE C ARISPICI M Necrotizing cerebellits due to Neospora

caninum infection in a old dog Journal of Veterinary Medicine vol

49 ndeg 1 p 47-50 2002

21 CEDENtildeO D Q BENAVIDES B Seroprevalence and risk factors

associated to Neospora caninum in dairy cattle herds in the municipality

of Pasto Colombia Revista Mvz Cordoba vol 18 ndeg1 p 3311-3315

2013

22 COLLANTES-FERNANDEZ E Patogenia de la neosporosis em el feto

bovino y em um modelo murinho experimental 277p Tese (doutorado)-

Universidad Complutense de madrid 2003

23 COLLANTES-FERNANDEZ E RODRIGUEZ-BERTS A ARNAIZ-

SECO I MORENO B ADURIZG ORTEGA-MORA LM Influence

of the stage of pregnancy on Neospora caninum distribuition parasite

loads and lesions in aborted bovine foetuses Theriogenelogy vol 65

ndeg 3 p 629-641 2006

24 COLLERY P Neosporosis in domestic animals Irish Veterinary

Journal vol 49 ndeg 3 p152-156 1996

25 CONRAD P A BARR B C SVERLOW K W ANDERSON M

DAFT BKINDE H DUBEY J P MUNSON L ARDANS A In vitro

isolation and characterization of a Neospora sp from aborted bovine

foetuses Parasitology v106 n3 p239-249 1993

26 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C DIAS M M Aborto

bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia Rural

Santa Maria vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

24

27 DANTAS C C O SILVA L C R P NEGAtildeO F M Manejo sanitaacuterio

de doenccedilas do gado leiteiro PUBVET vol 4 ndeg 32 ed 137 art 928

2010

28 DAVISON H C C S MCGARRY JW GUY F WILLIAMSDJL

KELLY DF TREES AJ Experimental studies on the transmission of

Neospora caninum between cattle Research in Veterinary Science

vol 70 ndeg 2 p 163ndash168 2001

29 DIJKSTRA T EYSKER M SCHARES G CONRATHS F J

WOUDA W BARKEMA H W Dogs shed Neospora caninum oocysts

after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after

ingestion of colostrums spiked with Neospora caninum tachyzoites

International Journal for Parasitology vol 31 ndeg 8 p 747-752

2001

30 DUBEY J P HATTEL A L LINDSAY D S TOPPER M J

Neonatal Neospora caninum infection in dogs Isolation of the causative

agent and experimental transmission Reports of Original Studies

JAVMA vol 193 ndeg 10 p 1259-1263 1988

31 DUBEY J P Recent advances in Neospora and neosporosis

Veterinary Parasitology vol 84 ndeg 3-4 p 349-367 1999

32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

C BLAGBURN B L BOWMAN D D BUXTON D ELLIS J

T GOTTSTEIN B HEMPHILL A HILL D E HOWE D

K JENKINS M C KOBAYASHI Y KOUDELA B MARSH A

E MATTSSON J G MCALLISTER M M MODRYacute D OMATA

Y SIBLEY L D SPEER C A TREES A J UGGLA A UPTON

S J WILLIAMS D J LINDSAY D S Redescription of Neospora

caninum and its differentiation from related coccidia International

Journal Parasitology vol 32 ndeg 8 p 929-946 2002a

33 DUBEY J P BUXTON D amp WOUDA W Pathogenesis of bovine

neosporosis Journal of Comparative Pathology vol 134 ndeg 4 p

267-289 2006

34 DUBEY J P LINDSAY D S ANDERSON M L DAVIS S W

SHEN S K Induced transplacental transmission of Neospora caninum

in cattle Journal of the American Veterinary Medical Association

vol 201 ndeg 5 p 709-713 1992a

35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

17

Comumente abortos epidecircmicos acontecem pela infecccedilatildeo horizontal

primaacuteria atraveacutes da ingestatildeo de oocistos presentes em aacutegua ou alimentos jaacute os

abortos endecircmicos ocorrem em animais persistentemente infectados

(transmissatildeo transplacentaacuteria endoacutegena) atraveacutes recrudescecircncia da infecccedilatildeo

durante a gestaccedilatildeo (SILVA et al 2008 TREES et al 2005)

5 DIAGNOacuteSTICO

51 Diagnoacutestico Laboratorial

O diagnoacutestico laboratorial do N caninum eacute geralmente caro (DUBEY amp

SCHARES 2011) isso se deve ao fato das manifestaccedilotildees cliacutenicas nos animais

cronicamente infectados serem ausentes (MOTA et al 2008) A detecccedilatildeo da

infecccedilatildeo em bovinos se fundamenta na verificaccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

anti- N caninum no soro por meio de teacutecnicas soroloacutegicas (COLLANTES-

FERNANDEZ 2003) A transmissatildeo congecircnita eacute avaliada por anticorpos que

satildeo detectados no soro preacute-colostral de bezerros receacutem-nascidos jaacute que em

bovinos natildeo existe transferecircncia de anticorpos de matildee para o feto no decorrer

da gestaccedilatildeo (PAREgrave et al 1996)

Os meacutetodos diretos utilizados para pesquisa e diagnoacutestico de

Ncaninum satildeo os exames imunohistoquiacutemico histopatoloacutegicos o isolamento

in vitro e in vivo pelo meio da inoculaccedilatildeo do material suspeito em cultivo celular

ou em animais de laboratoacuterio a detecccedilatildeo do DNA do parasita por Reaccedilatildeo em

Cadeia da Polimerase (PCR) e a observaccedilatildeo dos cistos nos tecidos a fresco

(sem coloraccedilatildeo) Esta teacutecnica vem sendo utilizada para detectar o DNA de N

caninum tanto em infecccedilotildees naturais quanto experimentais (HOLMDAHL amp

MATTSSON 1996 HO et al 1997)

Dentre os meacutetodos indiretos estatildeo Ensaio imunoenzimaacutetico (ELISA)

Reaccedilatildeo de Imunofluorescecircncia indireta (RIFI) Imunoblotting (IB) e Testes de

aglutinaccedilatildeo (NAT) que podem detectar anticorpos especiacuteficos para N caninum

(DUBEY 2003) O exame soroloacutegico com a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos

tornou-se uma ferramenta bastante uacutetil devido ao difiacutecil isolamento do agente

A realizaccedilatildeo da sorologia fetal em lesotildees compatiacuteveis com a

enfermidade no coraccedilatildeo ceacuterebro e fiacutegado de fetos abortados associados aos

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

(Doutorado em Veterinaacuteria) ndash Facultad de Veterinaria Universidad

Complutense de Madrid Espanha F 301 2003

2 AMARAL R L G SILVA L B G JUNIOR J W P NETO O L S

LEAL C A S PORTO W J N BARBOSA J M P MOTA R A

Neospora caninum em bovinos em matadouros de Pernambuco e

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5 ANDREOTTI R LOCATELLI-DITTRICH R SOCCOL V T PAIVA F

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Documento 136 Campo Grande ndash MS 2003

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22

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18 BUXTON D McALLISTER MM DUBEY JP The comparative

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24 COLLERY P Neosporosis in domestic animals Irish Veterinary

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DAFT BKINDE H DUBEY J P MUNSON L ARDANS A In vitro

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26 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C DIAS M M Aborto

bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia Rural

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27 DANTAS C C O SILVA L C R P NEGAtildeO F M Manejo sanitaacuterio

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28 DAVISON H C C S MCGARRY JW GUY F WILLIAMSDJL

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WOUDA W BARKEMA H W Dogs shed Neospora caninum oocysts

after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after

ingestion of colostrums spiked with Neospora caninum tachyzoites

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2001

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Neonatal Neospora caninum infection in dogs Isolation of the causative

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JAVMA vol 193 ndeg 10 p 1259-1263 1988

31 DUBEY J P Recent advances in Neospora and neosporosis

Veterinary Parasitology vol 84 ndeg 3-4 p 349-367 1999

32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

C BLAGBURN B L BOWMAN D D BUXTON D ELLIS J

T GOTTSTEIN B HEMPHILL A HILL D E HOWE D

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E MATTSSON J G MCALLISTER M M MODRYacute D OMATA

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caninum and its differentiation from related coccidia International

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33 DUBEY J P BUXTON D amp WOUDA W Pathogenesis of bovine

neosporosis Journal of Comparative Pathology vol 134 ndeg 4 p

267-289 2006

34 DUBEY J P LINDSAY D S ANDERSON M L DAVIS S W

SHEN S K Induced transplacental transmission of Neospora caninum

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35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

18

exames histoquiacutemicos e moleculares do parasito mediante o PCR em tecidos

fetais confirmam a infecccedilatildeo pelo agente (MOTA FERRE FARIA 2008)

A RIFI foi agrave primeira teacutecnica soroloacutegica descrita e eacute utilizada como

prova de referecircncia soroloacutegica (DUBEY et al 1988) sendo amplamente

utilizado para detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos do N caninum (SARTOR et

al 2003 GHALMI et al 2012) Para estudos epidemioloacutegicos de pesquisa de

anticorpos a sorologia eacute a teacutecnica mais importante considerada como padratildeo

ouro (MOORE et al 2002)

Em um microscoacutepio equipado com fonte de luz ultravioleta os

taquizoitos satildeo observados com coloraccedilatildeo verde atraveacutes reaccedilatildeo de

fluorescecircncia A presenccedila de anticorpos IgM origina da infecccedilatildeo aguda A

infecccedilatildeo aguda ocorre pela presenccedila dos anticorpos IgM entretanto em

bovinos a produccedilatildeo de IgM na neosporose natildeo eacute muito conhecida (MOORE et

al 2002)

A teacutecnica de imunofluorescecircncia indireta eacute considerada positiva quando

em todo taquizoiacuteta apresentar fluorescecircncia apresentando soros com tiacutetulos

moderados a elevados (ALVAREZ-GARCIA 2003) Nos tiacutetulos considerados

baixos ocorre a fluorescecircncia reduzida ou apical assim como em reaccedilotildees

cruzadas natildeo especiacuteficas como Toxoplasma gondii (PIRES 1987) Natildeo haacute uma

padronizaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos do N caninum em bovinos que

determine a infecccedilatildeo Os anticorpos natildeo especiacuteficos que causam uma reaccedilatildeo

cruzada e em consequecircncia a uma fluorescecircncia reduzida satildeo desconhecidos

A reaccedilatildeo cruzada entre os anticorpos de N caninum e Toxoplasma gondiiacute natildeo

foi observada em soros de bovinos (Dubey amp Lindsay 1996)

Packham et al (1998) consideram que bovinos adultos soropositivos

tenham tiacutetulos de 1160 jaacute Dubey e Lindsay (1996) consideram tiacutetulo de 200

Os resultados devem ser interpretados com cautela

Os testes de ELISA do soro ou do leite satildeo mais objetivos e podem ser

automatizados possibilitando uma anaacutelise mais raacutepida e pode ser utilizado em

estudos epidemioloacutegicos de larga escala (MOTA FERRE FARIA 2008)

A prova de aglutinaccedilatildeo direta (NAT ndash neospora agglutination test) eacute de

faacutecil interpretaccedilatildeo utilizam-se poucos materiais e equipamentos (ROMAND

THULLIEZ DUBEY 1998) A teacutecnica mais importante da biologia molecular eacute a

reaccedilatildeo da polimerase em cadeia (PCR) devido seu amplo avanccedilo no

diagnoacutestico de vaacuterias doenccedilas pela amplificaccedilatildeo de segmentos especiacuteficos do

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

(Doutorado em Veterinaacuteria) ndash Facultad de Veterinaria Universidad

Complutense de Madrid Espanha F 301 2003

2 AMARAL R L G SILVA L B G JUNIOR J W P NETO O L S

LEAL C A S PORTO W J N BARBOSA J M P MOTA R A

Neospora caninum em bovinos em matadouros de Pernambuco e

Alagoas Pesquisa Veterinaacuteria Brasileira vol 32 nordm 10 p 963-966

outubro 2012

3 ANDERSON M L BLANCHARD P C BARR B C DUBEY J

PHOFFMAN R L CONRAD P A Neospora-like protozoan infection

as a major cause of abortion in California dairy cattle Journal of the

American Veterinary Medical Association vol198 nordm 2 p 241-244

1991

4 ANDERSON M L ANDRIANARIVO A G amp CONRAD P A

Neosporosis in cattle Animal Reproduction Science vol 60- 61 nordm 2

p 417-431 2000

5 ANDREOTTI R LOCATELLI-DITTRICH R SOCCOL V T PAIVA F

Diagnostico e controle da neosporose em bovinos EMBRAPA

Documento 136 Campo Grande ndash MS 2003

6 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira vol 16 nordm 14 p 553-559 2015

7 ASMARE K REGASSA F ROBERTSON L J SKJERVE E

Seroprevalence of Neospora caninum and associated risk factors in

intensive or semi-intensively managed dairy and breeding cattle of

Ethiopia Veterinary Parasitology vol 193 nordm 1-3 p85-94 2013

8 BAILLARGEON P FECTEAU G PAREacute J LAMONTHE P SAUVEacute

R Evaluation of the embryo transfer procedure proposed by the

international Embryo Transfer Society as a method of controlling vertical

transmission of Neospora caninum in cattle Journal of the American

Veterinary Medical Association Schaumburg vol 218 nordm 11 p 1803-

1806 2001

22

9 BARLING K S MCNEILL J W PASCHAL J C MCCOLLUM F T

CRAIG T M ADAMS L G THOMPSON J A Ranch-management

factors associated with antibody seropositivity for Neospora caninum in

consignments of beef calves in Texas USA Preventive Veterinary

Medicine vol 52 nordm 1 p 53-61 2001

10 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 nordm 1 p 113-117 1993

11 BARR B C CONRAD P A SVERLOW K TARANTAL A F

HENDRICKX A G Experimental fetal and transplacental Neospora

infection in the nonhuman primate Laboratory Investigation

Baltimore vol 71 ndeg 2 p 236-242 1994

12 BARTELS C J M WOUDA W SCHUKKEN Y H Risk factors for

Neospora caninum-associated abortion storms in dairy herds in the

Netherlands (1995 to 1997) Theriogenology vol 52 ndeg2 p 247-257

1999

13 BASSO W VENTURINI L VENTURINI M C MOORE D P

RAMBEAU M UNZAGA J M CAMPERO C BACIGALUPE D

DUBEY J P Prevalence of Neospora caninum infection in dogs from

beef cattle farms dairy farms and from urban areas of Argentina

Journal of Parasitology vol 87 ndeg 4 p 906-907 2001

14 BECK R MARINCULIĆ A MIHALJEVIĆ Ž BENIĆ M

MARTINKOVIĆ F Seroprevalence and potential risk factors of

Neospora caninum infection in dairy cattle in Croatia Veterinarski

Arhiv vol 80 nordm 2 p 163-171 2010

15 BJERKAringS I MOHN SF PRESTHUS J Unidentified cyst-forming

sporozoan causing encephalomyelitis and myositis in dogs Zeitschrift

fuumlr Parasitenkunde vol 70 nordm 2 p 271-274 1984

16 BOWMAN D Parasitologia Veterinaacuteria de Georgis [traduccedilatildeo Cid

Figueiredo e Thais H Bittencourt Figueiredo] ed8 Barueri ndash SP

Manole p 102 2006

17 BRUHN F R P DAHER D O LOPES E BARBIERI J M DA

ROCHA C M B M GUIMARAtildeES A M N Factors associated with

seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle in southeastern

23

Brasil Tropical Animal Health and Production vol 45 ndeg 5 p 1093-

1098 2012

18 BUXTON D McALLISTER MM DUBEY JP The comparative

pathogenesis of Neosporosis Trends in Parasitology vol 18 ndeg 12 p

546 ndash 552 2002

19 CAMILLO G CEZAR A S ANTONELLO A M SANGIONI A

FLORES E F PEREIRA G R GONCcedilALVES P B D VOGEL F S

F Detecccedilatildeo de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras

individuais e coletivas de leite de bovinos pela reaccedilatildeo de

imunofluorescecircncia indireta Pesquisa Vetererinaacuteria Brasileira vol

31 ndeg6 p 482-486 2011

20 CANTILE C ARISPICI M Necrotizing cerebellits due to Neospora

caninum infection in a old dog Journal of Veterinary Medicine vol

49 ndeg 1 p 47-50 2002

21 CEDENtildeO D Q BENAVIDES B Seroprevalence and risk factors

associated to Neospora caninum in dairy cattle herds in the municipality

of Pasto Colombia Revista Mvz Cordoba vol 18 ndeg1 p 3311-3315

2013

22 COLLANTES-FERNANDEZ E Patogenia de la neosporosis em el feto

bovino y em um modelo murinho experimental 277p Tese (doutorado)-

Universidad Complutense de madrid 2003

23 COLLANTES-FERNANDEZ E RODRIGUEZ-BERTS A ARNAIZ-

SECO I MORENO B ADURIZG ORTEGA-MORA LM Influence

of the stage of pregnancy on Neospora caninum distribuition parasite

loads and lesions in aborted bovine foetuses Theriogenelogy vol 65

ndeg 3 p 629-641 2006

24 COLLERY P Neosporosis in domestic animals Irish Veterinary

Journal vol 49 ndeg 3 p152-156 1996

25 CONRAD P A BARR B C SVERLOW K W ANDERSON M

DAFT BKINDE H DUBEY J P MUNSON L ARDANS A In vitro

isolation and characterization of a Neospora sp from aborted bovine

foetuses Parasitology v106 n3 p239-249 1993

26 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C DIAS M M Aborto

bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia Rural

Santa Maria vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

24

27 DANTAS C C O SILVA L C R P NEGAtildeO F M Manejo sanitaacuterio

de doenccedilas do gado leiteiro PUBVET vol 4 ndeg 32 ed 137 art 928

2010

28 DAVISON H C C S MCGARRY JW GUY F WILLIAMSDJL

KELLY DF TREES AJ Experimental studies on the transmission of

Neospora caninum between cattle Research in Veterinary Science

vol 70 ndeg 2 p 163ndash168 2001

29 DIJKSTRA T EYSKER M SCHARES G CONRATHS F J

WOUDA W BARKEMA H W Dogs shed Neospora caninum oocysts

after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after

ingestion of colostrums spiked with Neospora caninum tachyzoites

International Journal for Parasitology vol 31 ndeg 8 p 747-752

2001

30 DUBEY J P HATTEL A L LINDSAY D S TOPPER M J

Neonatal Neospora caninum infection in dogs Isolation of the causative

agent and experimental transmission Reports of Original Studies

JAVMA vol 193 ndeg 10 p 1259-1263 1988

31 DUBEY J P Recent advances in Neospora and neosporosis

Veterinary Parasitology vol 84 ndeg 3-4 p 349-367 1999

32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

C BLAGBURN B L BOWMAN D D BUXTON D ELLIS J

T GOTTSTEIN B HEMPHILL A HILL D E HOWE D

K JENKINS M C KOBAYASHI Y KOUDELA B MARSH A

E MATTSSON J G MCALLISTER M M MODRYacute D OMATA

Y SIBLEY L D SPEER C A TREES A J UGGLA A UPTON

S J WILLIAMS D J LINDSAY D S Redescription of Neospora

caninum and its differentiation from related coccidia International

Journal Parasitology vol 32 ndeg 8 p 929-946 2002a

33 DUBEY J P BUXTON D amp WOUDA W Pathogenesis of bovine

neosporosis Journal of Comparative Pathology vol 134 ndeg 4 p

267-289 2006

34 DUBEY J P LINDSAY D S ANDERSON M L DAVIS S W

SHEN S K Induced transplacental transmission of Neospora caninum

in cattle Journal of the American Veterinary Medical Association

vol 201 ndeg 5 p 709-713 1992a

35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

19

DNA (ELLIS 1998 ELLIS et al 1999) Este meacutetodo de diagnoacutestico permitiu a

caracterizaccedilatildeo molecular do N caninum (DUBEY amp LINDSAY 1996) e levou a

descoberta de que os isolados do parasita de catildees e de bovinos satildeo

geneticamente iguais e pertencem agrave mesma espeacutecie (MARSH et al 1998)

6 ESTRATEacuteGIAS DE PROFILAXIA E CONTROLE

O conhecimento dos fatores de risco de um rebanho associado com N

caninum eacute significativo para a implantaccedilatildeo programas de controle que devem

incorporar um caacutelculo de custo-benefiacutecio comparando as despesas com a

realizaccedilatildeo de testes diagnoacutesticos e das medidas de controle com o benefiacutecio

da diminuiccedilatildeo das perdas econocircmicas devido a infecccedilatildeo ou abortamentos

associados ao N caninum (DUBEY amp SCHARES 2011) A vacinaccedilatildeo como

forma de prevenir o aborto em bovinos segundo DUBEY (2003) tem sido

testada em vaacuterias partes do mundo poreacutem com resultados insatisfatoacuterios

A identificaccedilatildeo e descarte de vacas sorologicamente positivas eacute uma

forma de controlar o agente no rebanho evitando assim a transmissatildeo vertical

Mas em propriedades onde a prevalecircncia eacute elevada essa medida torna-se

economicamente impraticaacutevel Em fecircmeas positivas de alto valor zooteacutecnico

podem ser utilizadas como doadoras de embriotildees utilizando-se receptoras

negativas como opccedilatildeo de evitar a transmissatildeo vertical (DUBEY 2003)

Determinadas medidas satildeo importantes para minimizar a transmissatildeo

horizontal o catildeo naturalmente infectado elimina oocistos de N caninum nas

fezes (BASSO et al 2001) A medida preventiva para evitar a infecccedilatildeo dos

bovinos com oocistos esporulados de N caninum seria impedir a presenccedila de

caniacutedeos domeacutesticos e silvestres nas propriedades evitando o acesso dos

catildees as fontes de aacutegua e alimentos dos bovinos e manter silos e depoacutesitos de

raccedilatildeo fechados evitando assim que os bovinos sejam infectados pela ingestatildeo

de aacutegua ou alimentos contaminados com oocistos esporulados (CORBELLINI

2000)

Medidas higiecircnicas devem ser tomadas com o objetivo de prevenir a

infecccedilatildeo em animais soronegativos e reduzir possiacuteveis contaminaccedilotildees

ambientais pelas diferentes fases do parasita Deve-se remover de restos de

placentas fetos abortados e terneiros mortos das pastagens assim como

animais mortos de qualquer idade dificultando a ingestatildeo pelos catildees e

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

(Doutorado em Veterinaacuteria) ndash Facultad de Veterinaria Universidad

Complutense de Madrid Espanha F 301 2003

2 AMARAL R L G SILVA L B G JUNIOR J W P NETO O L S

LEAL C A S PORTO W J N BARBOSA J M P MOTA R A

Neospora caninum em bovinos em matadouros de Pernambuco e

Alagoas Pesquisa Veterinaacuteria Brasileira vol 32 nordm 10 p 963-966

outubro 2012

3 ANDERSON M L BLANCHARD P C BARR B C DUBEY J

PHOFFMAN R L CONRAD P A Neospora-like protozoan infection

as a major cause of abortion in California dairy cattle Journal of the

American Veterinary Medical Association vol198 nordm 2 p 241-244

1991

4 ANDERSON M L ANDRIANARIVO A G amp CONRAD P A

Neosporosis in cattle Animal Reproduction Science vol 60- 61 nordm 2

p 417-431 2000

5 ANDREOTTI R LOCATELLI-DITTRICH R SOCCOL V T PAIVA F

Diagnostico e controle da neosporose em bovinos EMBRAPA

Documento 136 Campo Grande ndash MS 2003

6 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira vol 16 nordm 14 p 553-559 2015

7 ASMARE K REGASSA F ROBERTSON L J SKJERVE E

Seroprevalence of Neospora caninum and associated risk factors in

intensive or semi-intensively managed dairy and breeding cattle of

Ethiopia Veterinary Parasitology vol 193 nordm 1-3 p85-94 2013

8 BAILLARGEON P FECTEAU G PAREacute J LAMONTHE P SAUVEacute

R Evaluation of the embryo transfer procedure proposed by the

international Embryo Transfer Society as a method of controlling vertical

transmission of Neospora caninum in cattle Journal of the American

Veterinary Medical Association Schaumburg vol 218 nordm 11 p 1803-

1806 2001

22

9 BARLING K S MCNEILL J W PASCHAL J C MCCOLLUM F T

CRAIG T M ADAMS L G THOMPSON J A Ranch-management

factors associated with antibody seropositivity for Neospora caninum in

consignments of beef calves in Texas USA Preventive Veterinary

Medicine vol 52 nordm 1 p 53-61 2001

10 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 nordm 1 p 113-117 1993

11 BARR B C CONRAD P A SVERLOW K TARANTAL A F

HENDRICKX A G Experimental fetal and transplacental Neospora

infection in the nonhuman primate Laboratory Investigation

Baltimore vol 71 ndeg 2 p 236-242 1994

12 BARTELS C J M WOUDA W SCHUKKEN Y H Risk factors for

Neospora caninum-associated abortion storms in dairy herds in the

Netherlands (1995 to 1997) Theriogenology vol 52 ndeg2 p 247-257

1999

13 BASSO W VENTURINI L VENTURINI M C MOORE D P

RAMBEAU M UNZAGA J M CAMPERO C BACIGALUPE D

DUBEY J P Prevalence of Neospora caninum infection in dogs from

beef cattle farms dairy farms and from urban areas of Argentina

Journal of Parasitology vol 87 ndeg 4 p 906-907 2001

14 BECK R MARINCULIĆ A MIHALJEVIĆ Ž BENIĆ M

MARTINKOVIĆ F Seroprevalence and potential risk factors of

Neospora caninum infection in dairy cattle in Croatia Veterinarski

Arhiv vol 80 nordm 2 p 163-171 2010

15 BJERKAringS I MOHN SF PRESTHUS J Unidentified cyst-forming

sporozoan causing encephalomyelitis and myositis in dogs Zeitschrift

fuumlr Parasitenkunde vol 70 nordm 2 p 271-274 1984

16 BOWMAN D Parasitologia Veterinaacuteria de Georgis [traduccedilatildeo Cid

Figueiredo e Thais H Bittencourt Figueiredo] ed8 Barueri ndash SP

Manole p 102 2006

17 BRUHN F R P DAHER D O LOPES E BARBIERI J M DA

ROCHA C M B M GUIMARAtildeES A M N Factors associated with

seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle in southeastern

23

Brasil Tropical Animal Health and Production vol 45 ndeg 5 p 1093-

1098 2012

18 BUXTON D McALLISTER MM DUBEY JP The comparative

pathogenesis of Neosporosis Trends in Parasitology vol 18 ndeg 12 p

546 ndash 552 2002

19 CAMILLO G CEZAR A S ANTONELLO A M SANGIONI A

FLORES E F PEREIRA G R GONCcedilALVES P B D VOGEL F S

F Detecccedilatildeo de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras

individuais e coletivas de leite de bovinos pela reaccedilatildeo de

imunofluorescecircncia indireta Pesquisa Vetererinaacuteria Brasileira vol

31 ndeg6 p 482-486 2011

20 CANTILE C ARISPICI M Necrotizing cerebellits due to Neospora

caninum infection in a old dog Journal of Veterinary Medicine vol

49 ndeg 1 p 47-50 2002

21 CEDENtildeO D Q BENAVIDES B Seroprevalence and risk factors

associated to Neospora caninum in dairy cattle herds in the municipality

of Pasto Colombia Revista Mvz Cordoba vol 18 ndeg1 p 3311-3315

2013

22 COLLANTES-FERNANDEZ E Patogenia de la neosporosis em el feto

bovino y em um modelo murinho experimental 277p Tese (doutorado)-

Universidad Complutense de madrid 2003

23 COLLANTES-FERNANDEZ E RODRIGUEZ-BERTS A ARNAIZ-

SECO I MORENO B ADURIZG ORTEGA-MORA LM Influence

of the stage of pregnancy on Neospora caninum distribuition parasite

loads and lesions in aborted bovine foetuses Theriogenelogy vol 65

ndeg 3 p 629-641 2006

24 COLLERY P Neosporosis in domestic animals Irish Veterinary

Journal vol 49 ndeg 3 p152-156 1996

25 CONRAD P A BARR B C SVERLOW K W ANDERSON M

DAFT BKINDE H DUBEY J P MUNSON L ARDANS A In vitro

isolation and characterization of a Neospora sp from aborted bovine

foetuses Parasitology v106 n3 p239-249 1993

26 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C DIAS M M Aborto

bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia Rural

Santa Maria vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

24

27 DANTAS C C O SILVA L C R P NEGAtildeO F M Manejo sanitaacuterio

de doenccedilas do gado leiteiro PUBVET vol 4 ndeg 32 ed 137 art 928

2010

28 DAVISON H C C S MCGARRY JW GUY F WILLIAMSDJL

KELLY DF TREES AJ Experimental studies on the transmission of

Neospora caninum between cattle Research in Veterinary Science

vol 70 ndeg 2 p 163ndash168 2001

29 DIJKSTRA T EYSKER M SCHARES G CONRATHS F J

WOUDA W BARKEMA H W Dogs shed Neospora caninum oocysts

after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after

ingestion of colostrums spiked with Neospora caninum tachyzoites

International Journal for Parasitology vol 31 ndeg 8 p 747-752

2001

30 DUBEY J P HATTEL A L LINDSAY D S TOPPER M J

Neonatal Neospora caninum infection in dogs Isolation of the causative

agent and experimental transmission Reports of Original Studies

JAVMA vol 193 ndeg 10 p 1259-1263 1988

31 DUBEY J P Recent advances in Neospora and neosporosis

Veterinary Parasitology vol 84 ndeg 3-4 p 349-367 1999

32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

C BLAGBURN B L BOWMAN D D BUXTON D ELLIS J

T GOTTSTEIN B HEMPHILL A HILL D E HOWE D

K JENKINS M C KOBAYASHI Y KOUDELA B MARSH A

E MATTSSON J G MCALLISTER M M MODRYacute D OMATA

Y SIBLEY L D SPEER C A TREES A J UGGLA A UPTON

S J WILLIAMS D J LINDSAY D S Redescription of Neospora

caninum and its differentiation from related coccidia International

Journal Parasitology vol 32 ndeg 8 p 929-946 2002a

33 DUBEY J P BUXTON D amp WOUDA W Pathogenesis of bovine

neosporosis Journal of Comparative Pathology vol 134 ndeg 4 p

267-289 2006

34 DUBEY J P LINDSAY D S ANDERSON M L DAVIS S W

SHEN S K Induced transplacental transmission of Neospora caninum

in cattle Journal of the American Veterinary Medical Association

vol 201 ndeg 5 p 709-713 1992a

35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

20

caniacutedeos silvestres Catildees devem alimentar-se a base de raccedilotildees ou quando

ingerirem ou viacutesceras ou carnes estas devem ser sempre bem cozidas Outra

medida profilaacutetica eacute manter o controle na propriedade com a entrada de catildees

selvagens (LINDSAY et al1989)

Antes de um animal ser introduzido no rebanho devem ser realizados

testes soroloacutegicos com o intuito de impedir a entrada de animais infectados na

propriedade (FARIAS 2002)

7 TRATAMENTO DA NEOSPOROSE

Para o tratamento da neosporose os quimioteraacutepicos nos dias de hoje

natildeo tecircm comprovado seguranccedila e eficaacutecia De acordo com Strohbusch et al

(2009) estudos experimentais com o Toltrazuril e Ponazuril tecircm demonstrado

efeitos sobre taquizoiacutetos de N caninum in vitro e in vivo em bezerros No

ceacuterebro e em outros oacutergatildeos de bezerros tratados com Ponazuril o parasita natildeo

foi detectado Experimentos de modificar o curso da infecccedilatildeo de N caninum

utilizando bolus de monensina com liberaccedilatildeo lenta em vacas tiveram resultados

inconclusivos (VANLEEUWEN et al 2011)

Estudos realizados no Canadaacute por VanLeeuwen et al (2010) vacas

secas eram alimentadas com monensina em que foi observada reduccedilatildeo do

risco de soropositividade para N caninum Mas o tratamento em bovinos natildeo eacute

econocircmico pois esses quimioteraacutepicos poderiam ser utilizados de forma

preventiva e por isso por longo tempo havendo o risco de resiacuteduos no leite e

na carne produzidos (DUBEY amp SCHARES 2011)

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

neospora caninum con intereacutes inmunodiagnoacutestico en bovinos Tese

(Doutorado em Veterinaacuteria) ndash Facultad de Veterinaria Universidad

Complutense de Madrid Espanha F 301 2003

2 AMARAL R L G SILVA L B G JUNIOR J W P NETO O L S

LEAL C A S PORTO W J N BARBOSA J M P MOTA R A

Neospora caninum em bovinos em matadouros de Pernambuco e

Alagoas Pesquisa Veterinaacuteria Brasileira vol 32 nordm 10 p 963-966

outubro 2012

3 ANDERSON M L BLANCHARD P C BARR B C DUBEY J

PHOFFMAN R L CONRAD P A Neospora-like protozoan infection

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American Veterinary Medical Association vol198 nordm 2 p 241-244

1991

4 ANDERSON M L ANDRIANARIVO A G amp CONRAD P A

Neosporosis in cattle Animal Reproduction Science vol 60- 61 nordm 2

p 417-431 2000

5 ANDREOTTI R LOCATELLI-DITTRICH R SOCCOL V T PAIVA F

Diagnostico e controle da neosporose em bovinos EMBRAPA

Documento 136 Campo Grande ndash MS 2003

6 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira vol 16 nordm 14 p 553-559 2015

7 ASMARE K REGASSA F ROBERTSON L J SKJERVE E

Seroprevalence of Neospora caninum and associated risk factors in

intensive or semi-intensively managed dairy and breeding cattle of

Ethiopia Veterinary Parasitology vol 193 nordm 1-3 p85-94 2013

8 BAILLARGEON P FECTEAU G PAREacute J LAMONTHE P SAUVEacute

R Evaluation of the embryo transfer procedure proposed by the

international Embryo Transfer Society as a method of controlling vertical

transmission of Neospora caninum in cattle Journal of the American

Veterinary Medical Association Schaumburg vol 218 nordm 11 p 1803-

1806 2001

22

9 BARLING K S MCNEILL J W PASCHAL J C MCCOLLUM F T

CRAIG T M ADAMS L G THOMPSON J A Ranch-management

factors associated with antibody seropositivity for Neospora caninum in

consignments of beef calves in Texas USA Preventive Veterinary

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10 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 nordm 1 p 113-117 1993

11 BARR B C CONRAD P A SVERLOW K TARANTAL A F

HENDRICKX A G Experimental fetal and transplacental Neospora

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Baltimore vol 71 ndeg 2 p 236-242 1994

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Neospora caninum-associated abortion storms in dairy herds in the

Netherlands (1995 to 1997) Theriogenology vol 52 ndeg2 p 247-257

1999

13 BASSO W VENTURINI L VENTURINI M C MOORE D P

RAMBEAU M UNZAGA J M CAMPERO C BACIGALUPE D

DUBEY J P Prevalence of Neospora caninum infection in dogs from

beef cattle farms dairy farms and from urban areas of Argentina

Journal of Parasitology vol 87 ndeg 4 p 906-907 2001

14 BECK R MARINCULIĆ A MIHALJEVIĆ Ž BENIĆ M

MARTINKOVIĆ F Seroprevalence and potential risk factors of

Neospora caninum infection in dairy cattle in Croatia Veterinarski

Arhiv vol 80 nordm 2 p 163-171 2010

15 BJERKAringS I MOHN SF PRESTHUS J Unidentified cyst-forming

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16 BOWMAN D Parasitologia Veterinaacuteria de Georgis [traduccedilatildeo Cid

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Manole p 102 2006

17 BRUHN F R P DAHER D O LOPES E BARBIERI J M DA

ROCHA C M B M GUIMARAtildeES A M N Factors associated with

seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle in southeastern

23

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1098 2012

18 BUXTON D McALLISTER MM DUBEY JP The comparative

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546 ndash 552 2002

19 CAMILLO G CEZAR A S ANTONELLO A M SANGIONI A

FLORES E F PEREIRA G R GONCcedilALVES P B D VOGEL F S

F Detecccedilatildeo de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras

individuais e coletivas de leite de bovinos pela reaccedilatildeo de

imunofluorescecircncia indireta Pesquisa Vetererinaacuteria Brasileira vol

31 ndeg6 p 482-486 2011

20 CANTILE C ARISPICI M Necrotizing cerebellits due to Neospora

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49 ndeg 1 p 47-50 2002

21 CEDENtildeO D Q BENAVIDES B Seroprevalence and risk factors

associated to Neospora caninum in dairy cattle herds in the municipality

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2013

22 COLLANTES-FERNANDEZ E Patogenia de la neosporosis em el feto

bovino y em um modelo murinho experimental 277p Tese (doutorado)-

Universidad Complutense de madrid 2003

23 COLLANTES-FERNANDEZ E RODRIGUEZ-BERTS A ARNAIZ-

SECO I MORENO B ADURIZG ORTEGA-MORA LM Influence

of the stage of pregnancy on Neospora caninum distribuition parasite

loads and lesions in aborted bovine foetuses Theriogenelogy vol 65

ndeg 3 p 629-641 2006

24 COLLERY P Neosporosis in domestic animals Irish Veterinary

Journal vol 49 ndeg 3 p152-156 1996

25 CONRAD P A BARR B C SVERLOW K W ANDERSON M

DAFT BKINDE H DUBEY J P MUNSON L ARDANS A In vitro

isolation and characterization of a Neospora sp from aborted bovine

foetuses Parasitology v106 n3 p239-249 1993

26 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C DIAS M M Aborto

bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia Rural

Santa Maria vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

24

27 DANTAS C C O SILVA L C R P NEGAtildeO F M Manejo sanitaacuterio

de doenccedilas do gado leiteiro PUBVET vol 4 ndeg 32 ed 137 art 928

2010

28 DAVISON H C C S MCGARRY JW GUY F WILLIAMSDJL

KELLY DF TREES AJ Experimental studies on the transmission of

Neospora caninum between cattle Research in Veterinary Science

vol 70 ndeg 2 p 163ndash168 2001

29 DIJKSTRA T EYSKER M SCHARES G CONRATHS F J

WOUDA W BARKEMA H W Dogs shed Neospora caninum oocysts

after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after

ingestion of colostrums spiked with Neospora caninum tachyzoites

International Journal for Parasitology vol 31 ndeg 8 p 747-752

2001

30 DUBEY J P HATTEL A L LINDSAY D S TOPPER M J

Neonatal Neospora caninum infection in dogs Isolation of the causative

agent and experimental transmission Reports of Original Studies

JAVMA vol 193 ndeg 10 p 1259-1263 1988

31 DUBEY J P Recent advances in Neospora and neosporosis

Veterinary Parasitology vol 84 ndeg 3-4 p 349-367 1999

32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

C BLAGBURN B L BOWMAN D D BUXTON D ELLIS J

T GOTTSTEIN B HEMPHILL A HILL D E HOWE D

K JENKINS M C KOBAYASHI Y KOUDELA B MARSH A

E MATTSSON J G MCALLISTER M M MODRYacute D OMATA

Y SIBLEY L D SPEER C A TREES A J UGGLA A UPTON

S J WILLIAMS D J LINDSAY D S Redescription of Neospora

caninum and its differentiation from related coccidia International

Journal Parasitology vol 32 ndeg 8 p 929-946 2002a

33 DUBEY J P BUXTON D amp WOUDA W Pathogenesis of bovine

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267-289 2006

34 DUBEY J P LINDSAY D S ANDERSON M L DAVIS S W

SHEN S K Induced transplacental transmission of Neospora caninum

in cattle Journal of the American Veterinary Medical Association

vol 201 ndeg 5 p 709-713 1992a

35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

SPEER C A KWOK O C H SHEN S K Canine neosporosis

21

8 REFEREcircNCIAS

1 AacuteLVAREZ-GARCIA G Identificacioacuten y caracterizacioacuten de antiacutegenos de

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seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle in southeastern

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546 ndash 552 2002

19 CAMILLO G CEZAR A S ANTONELLO A M SANGIONI A

FLORES E F PEREIRA G R GONCcedilALVES P B D VOGEL F S

F Detecccedilatildeo de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras

individuais e coletivas de leite de bovinos pela reaccedilatildeo de

imunofluorescecircncia indireta Pesquisa Vetererinaacuteria Brasileira vol

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20 CANTILE C ARISPICI M Necrotizing cerebellits due to Neospora

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22 COLLANTES-FERNANDEZ E Patogenia de la neosporosis em el feto

bovino y em um modelo murinho experimental 277p Tese (doutorado)-

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26 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C DIAS M M Aborto

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24

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de doenccedilas do gado leiteiro PUBVET vol 4 ndeg 32 ed 137 art 928

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after ingestion of naturally infected bovine placenta but not after

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32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

C BLAGBURN B L BOWMAN D D BUXTON D ELLIS J

T GOTTSTEIN B HEMPHILL A HILL D E HOWE D

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E MATTSSON J G MCALLISTER M M MODRYacute D OMATA

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35 DUBEY J P DOROUGH K R JENKINS M C LIDDELL S

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22

9 BARLING K S MCNEILL J W PASCHAL J C MCCOLLUM F T

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ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

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11 BARR B C CONRAD P A SVERLOW K TARANTAL A F

HENDRICKX A G Experimental fetal and transplacental Neospora

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12 BARTELS C J M WOUDA W SCHUKKEN Y H Risk factors for

Neospora caninum-associated abortion storms in dairy herds in the

Netherlands (1995 to 1997) Theriogenology vol 52 ndeg2 p 247-257

1999

13 BASSO W VENTURINI L VENTURINI M C MOORE D P

RAMBEAU M UNZAGA J M CAMPERO C BACIGALUPE D

DUBEY J P Prevalence of Neospora caninum infection in dogs from

beef cattle farms dairy farms and from urban areas of Argentina

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14 BECK R MARINCULIĆ A MIHALJEVIĆ Ž BENIĆ M

MARTINKOVIĆ F Seroprevalence and potential risk factors of

Neospora caninum infection in dairy cattle in Croatia Veterinarski

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15 BJERKAringS I MOHN SF PRESTHUS J Unidentified cyst-forming

sporozoan causing encephalomyelitis and myositis in dogs Zeitschrift

fuumlr Parasitenkunde vol 70 nordm 2 p 271-274 1984

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Manole p 102 2006

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seroprevalence of Neospora caninum in dairy cattle in southeastern

23

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1098 2012

18 BUXTON D McALLISTER MM DUBEY JP The comparative

pathogenesis of Neosporosis Trends in Parasitology vol 18 ndeg 12 p

546 ndash 552 2002

19 CAMILLO G CEZAR A S ANTONELLO A M SANGIONI A

FLORES E F PEREIRA G R GONCcedilALVES P B D VOGEL F S

F Detecccedilatildeo de anticorpos anti-Neospora caninum em amostras

individuais e coletivas de leite de bovinos pela reaccedilatildeo de

imunofluorescecircncia indireta Pesquisa Vetererinaacuteria Brasileira vol

31 ndeg6 p 482-486 2011

20 CANTILE C ARISPICI M Necrotizing cerebellits due to Neospora

caninum infection in a old dog Journal of Veterinary Medicine vol

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21 CEDENtildeO D Q BENAVIDES B Seroprevalence and risk factors

associated to Neospora caninum in dairy cattle herds in the municipality

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22 COLLANTES-FERNANDEZ E Patogenia de la neosporosis em el feto

bovino y em um modelo murinho experimental 277p Tese (doutorado)-

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SECO I MORENO B ADURIZG ORTEGA-MORA LM Influence

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25 CONRAD P A BARR B C SVERLOW K W ANDERSON M

DAFT BKINDE H DUBEY J P MUNSON L ARDANS A In vitro

isolation and characterization of a Neospora sp from aborted bovine

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26 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C DIAS M M Aborto

bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia Rural

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24

27 DANTAS C C O SILVA L C R P NEGAtildeO F M Manejo sanitaacuterio

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2010

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32 DUBEY J P BARR B C BARTA J R BJERKAS I BJOumlRKMAN

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267-289 2006

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113 WOUDA W DJIKSTRA Th KRAMER AMH van MAANEN C amp

BRINKHOF JMA Seroepidemiological evidence for a relationship

between Neospora caninum infection in dogs and cattle International

Journal for Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1677-1682 1999

34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

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9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

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34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

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51

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34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

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34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

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34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

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ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

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3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

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caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

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4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

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GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

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34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

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34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

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Parasitology vol 175 ndeg 3-4 p 372ndash376 2011

110 VETSCI [SPECIAL] Development of a web based database for orphan

genes of the apicomplexan 2011

111 WILLIANS D J L GUY CS MCGARY J W GUY F TASKER L

SMITH R F MACEACHERN K CRIPPS P J KELLY D F

TREES A J Neospora caninum- associated abortion in cattle The

time of experimentally- induced parasitaemia during gestation

determines foetal survial Parasitology vol 53 ndeg 4 p 142-148 2005

112 WOUDA W MOEN A R SCHUKKEN Y H Abortion risk in progeny

of cows after a Neospora caninum epidemic Theriogenology vol 49

ndeg 7 p 1311-1316 1998

113 WOUDA W DJIKSTRA Th KRAMER AMH van MAANEN C amp

BRINKHOF JMA Seroepidemiological evidence for a relationship

between Neospora caninum infection in dogs and cattle International

Journal for Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1677-1682 1999

34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

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2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

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CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

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4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

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5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

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1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

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41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

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Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

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12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

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Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

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experimental transmission Journal of the American Veterinary

Medical Association vol ndeg 10 1988

15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

34

9 Objetivos

91 Objetivo geral

Avaliar a presenccedila de anticorpos anti- N caninum em famiacutelias de

vacas leiteiras em um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute

92 Objetivo especiacutefico

Realizar a sorologia de todo o rebanho no ano de 2015 pela Reaccedilatildeo de

Imuno Fluorescecircncia Indireta (RIFI)

Estudo genealoacutegico da linha materna para estabelecer famiacutelias

positivas

Realizar a sorologia e titulaccedilatildeo de todos os integrantes das famiacutelias

positivas nos anos de 2013 e 2014

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

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5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

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51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

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Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

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10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

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12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

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Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

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14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

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15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

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Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

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17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

35

Artigo

FURLAN Daniella O efeito da relaccedilatildeo matildee progecircnie no estado soroloacutegico

de Neospora caninum em fazenda leiteira de Arapoti Paranaacute Dissertaccedilatildeo

de Mestrado Acadecircmico Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes (Mestrado

Acadecircmico em Sauacutede e Produccedilatildeo de Ruminantes) Universidade Norte do

Paranaacute Arapongas 2017

RESUMO

Neospora caninum eacute um protozoaacuterio parasita que causa grandes prejuiacutezos

econocircmicos e reprodutivos em bovinos devido agrave neosporose bovina ser uma

enfermidade vastamente disseminada pelo mundo A doenccedila vem sendo

relacionada a casos de abortamento esporaacutedico endecircmico e epidecircmico em

bovinos causando perdas econocircmicas consideraacuteveis na pecuaacuteria leiteira

aumentando o intervalo entre partos queda na produccedilatildeo de leite e descarte de

animais Neospora caninum eacute transmitida de forma muito eficiente nos

rebanhos bovinos pode ser transmitida atraveacutes de duas vias vertical e

horizontal Este estudo teve como objetivo avaliar a detecccedilatildeo de anticorpos no

soro sanguiacuteneo para N caninum empregando o teste de imunofluorescecircncia

indireta (RIFI) em famiacutelias de bovinos leiteiros de Arapoti Paranaacute Para avaliar

a relaccedilatildeo dos anticorpos encontrados com aspectos da infecccedilatildeo congecircnita

foram analisadas 557 amostras de soro sanguiacuteneo de fecircmeas bovinas atraveacutes

do meacutetodo soroloacutegico de RIFI para detecccedilatildeo de anticorpos anti- N

caninum Anticorpos anti- Neospora caninum foram detectados em 359

(20557) das vacas analisadas cujos tiacutetulos variam de 1100 a 11600 Dos 557

animais testados um total de 9 famiacutelias trecircs famiacutelias (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelias 1 3 e 5) enquanto as outras seis famiacutelias

(6667) apresentaram animais somente positivos (2 4 6 7 8 9) O baixo

iacutendice de transmissatildeo vertical pode ser explicada devido a estimulaccedilatildeo

continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos com infecccedilatildeo

endecircmica De acordo com os valores encontrados e o sistema de criaccedilatildeo

podemos observar que a infecccedilatildeo por N caninum estaacute distribuiacuteda entre

bezerras e novilhas do rebanho leiteiro da mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute sendo a transmissatildeo vertical a provaacutevel rota de transmissatildeo de N

caninum nas vacas da propriedade e a recrudescecircncia da infecccedilatildeo eacute a provaacutevel

causa de manutenccedilatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

Palavras chave Neosporose oocistos soroprevalecircncia taquizoitos transmissatildeo

vertical

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

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51

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10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

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Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

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Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

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Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

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17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

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CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

36

FURLAN Daniella The effect of the mother progeny relationship in the serosurid state of Neospora caninum in Arapoti dairy farm Paranaacute Masters Dissertation in Health and Ruminant Production (Masters Degree in Health and Ruminant Production) - University North of Paranaacute Arapongas 2017

Abstract

Neospora caninum is a parasitic protozoan that causes countless economic and

reproductive damage in cattle due to bovine neosporosis being a widespread

disease throughout the world The disease has been related to cases of

sporadic endemic and epidemic abortion in cattle being responsible for

significant economic losses in dairy farming increasing the interval between

calving drop in milk production and animal discard Neospora caninum is

transmitted very efficiently in cattle herds can be transmitted through two

routes vertical and horizontal The aim of this study was to analyse the

detection of serum antibodies to N caninum using the indirect

immunofluorescence test (IFAT) in a dairy cattle families of Arapoti Paranaacute In

order to determine the vertical transmission of N caninum in a closed herd in

the north eastern mesoregion of Paranaacute in the city of Arapoti 557 bovine serum

samples were analysed by the IFAT serological method for the detection of anti-

N caninum Anti-Neospora caninum antibodies were detected in 359

(20557) of the analysed cows whose titles varied from 1 100 to 1 1600 Of

the 557 animals tested a total of 9 families analysed three families (3333)

presented vertical transmission (in families 1 3 and 5) while the other six

families (6667) presented only positive animals (2 4 6 7 8 9) The low rate

of vertical transmission can be explained due to the continuous stimulation of

the humoral immune system of the mother in the herds with endemic infection

According to the values found and the breeding system we can observe that N

caninum infection is distributed among heifers and heiferettes of the dairy herd

of the north eastern mesoregion of Paranaacute with the vertical transmission being

the probable transmission route of N caninum in the cows of the estate and the

recrudescence of the infection is the probable cause of maintenance of the

infection in the herd

Key words Neosporosis oocystis seroprevalence tachyzoite vertical transmission

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

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Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

37

10 Introduccedilatildeo

Neospora caninum eacute um parasito intracelular obrigatoacuterio assemelha-se

morfologicamente ao Toxoplasma gondii poreacutem geneticamente e

antigenicamente distintos (CORBELLINI et al 2000 LOBATO et al 2006) N

caninum infecta animais domeacutesticos e silvestres como bovinos ovinos

caprinos equinos e catildees A neosporose eacute considerada uma das principais

causas de abortamento em bovinos leiteiros e de corte em todo mundo

(SCHARES et al 1998 CORBELLINI et al 2000 DUBEY et al 2007

GHALMI et al 2012)

Os caniacutedeos satildeo considerados os hospedeiros definitivos do N

caninum enquanto os bovinos o hospedeiro intermediaacuterio (MCALLISTER et al

1988) A transmissatildeo vertical eacute a principal via de infecccedilatildeo de N caninum em

bovinos eacute responsaacutevel pela permanecircncia ou expansatildeo da infecccedilatildeo no rebanho

podendo ocorrer por consecutivas geraccedilotildees (BARR et al 1993 GONZALEZ-

WARLETA et al 2008)

A neosporose bovina acontece como decorrecircncia de uma infecccedilatildeo

maternal atraveacutes da transmissatildeo transplacentaacuteria exoacutegena que ocorre apoacutes

uma infecccedilatildeo primaacuteria tndo um animal gestante ingerido oocisto a transmissatildeo

transplacentaacuteria endoacutegena acontece durante a gestaccedilatildeo no animal

cronicamente infectado antes da prenhez apoacutes a reativaccedilatildeo (recrudescecircncia)

da infecccedilatildeo (BENAVIDES et al 2012 TREES amp WILLIAMS 2005) O estudo

da dinacircmica de anticorpos possibilita uma interpretaccedilatildeo mais satisfatoacuteria das

anaacutelises soroloacutegicas Eacute comumente aceito que o aumento da resposta imune

manifestado pelas vacas gestantes infectadas por N caninum refere-se aacute

reativaccedilatildeo do parasito e sua transmissatildeo transplacentaacuteria para o feto (INNES

et al 2002)

Para o diagnoacutestico soroloacutegico a Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) foi agrave

primeira teacutecnica descrita (DUBEY et al 1988) e eacute utilizada para pesquisa de

anticorpos de N caninum considerada como padratildeo ouro (MOORE et al

2002) O exame soroloacutegico eacute realizado atraveacutes da detecccedilatildeo de anticorpos

especiacuteficos do parasito em bovinos eacute uma das ferramentas mais importantes

para confirmar a presenccedila do agente (BJORKMAN amp UGLA 1999 MOTA et

al 2008)

38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

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3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

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38

O objetivo do estudo foi avaliar detecccedilatildeo de anticorpos no soro

sanguiacuteneo para N caninum em famiacutelias de vacas leiteiras em um rebanho

fechado de Arapoti Paranaacute

11 MATERIAL E MEacuteTODOS

111 Caracterizaccedilatildeo do local de estudo

O estudo retrospectivo foi realizado em uma propriedade no municiacutepio

de Arapoti localizado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute O municiacutepio

possui aacuterea de 1360498 Kmsup2 e localiza-se a uma latitude de 23ordm39rsquo00rdquo

longitude 51ordm21rsquo18rdquo (IBGE 2016)

O clima eacute classificado como Cfa segundo a Koumlppen e Geiger O clima eacute

considerado como subtropical uacutemido Com uma temperatura meacutedia de 221 degC

Janeiro eacute o mecircs mais quente do ano A temperatura meacutedia em Junho eacute de 126

degC durante o ano eacute a temperatura meacutedia mais baixa (CLIMA-DATEORG

2016)

112 Animais utilizados

Os bovinos do estudo eram da raccedila Holandesa variedade preta e

branca com idade variando entre um mecircs e nove anos de idade criados em

piquetes e os animais em lactaccedilatildeo em sistema de confinamento free stall nos

quais eram realizadas duas ordenhas diaacuterias com produccedilatildeo de leite tipo B Os

animais consumiam silagem de milho e raccedilatildeo concentrada aleacutem de preacute-secado

(quando disponiacutevel) e feno de Coast cross durante o ano inteiro A aacutegua eacute

proveniente de poccedilos artesianos

Todas as vacas eram inseminadas artificialmente os bezerros receacutem-

nascidos satildeo mantidos 24 horas com suas respectivas matildees e receberam o

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto Bezerros receacutem-nascidos

machos quase sempre eram descartados do rebanho um dia apoacutes o

nascimento As bezerras eram mantidas em baias individuais ateacute o desmame

receberam leite atraveacutes de mamadeira O controle de tuberculose e brucelose eacute

realizado anualmente

39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

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39

O sistema utilizado na propriedade para identificaccedilatildeo dos animais eacute

feito atraveacutes de brincos Desde 2011 a propriedade eacute considerada fechada ou

seja natildeo haacute compras de animais

113 Comitecirc de eacutetica

O presente estudo foi aprovado pelo ldquoComitecirc de Eacutetica Para Uso de

Animais da Universidade Norte do Paranaacute ndash UNOPARrdquo sob o protocolo de

nuacutemero 01613

114 Colheitas das amostras

Amostras de sangue para a obtenccedilatildeo de soro foram colhidas atraveacutes

de venopunccedilatildeo da veia cocciacutegena Foi utilizado para cada coleta em tubo a

vaacutecuo siliconizados com tampa sem anticoagulante e devidamente

identificados Apoacutes a retraccedilatildeo do coaacutegulo o soro foi aliquotado em tubos de

Eppendorfreg identificados e armazenados em temperatura de -20ordmC ateacute a

realizaccedilatildeo do teste soroloacutegico

Foram realizadas as anaacutelises soroloacutegicas de 470 animais em 2015 A

partir dos resultados positivos um estudo retrospectivo com amostras da

soroteca da propriedade foi realizado nas famiacutelias dos animais sororeagentes

em 2014 (n= 25) e 2013 (n= 62) totalizando 557 soros analisados

115 Meacutetodo soroloacutegico

Para a detecccedilatildeo de anticorpos especiacuteficos anti- N caninum foi utilizada

a teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) segundo metodologia

preconizada por Conrad et al (1993) O antiacutegeno foi produzido a partir de

cultura celular derivada de taquizoiacutetos da cepa NC-1 Foi feita a diluiccedilatildeo dos

soros dos animais em 150 e 1100 os quais foram incubados em lacircminas com

antiacutegeno por 30 minutos em temperatura de 37ordm C e depois lavados com PBS

(pH 90) Anticorpos IgG foram detectados com isoticianato de fluorescecircncia

anti-bovino IgG Os soros foram considerados positivos quando toda a

superfiacutecie de taquizoiacutetas foi fluorescente (PAREacute et al 1995) e os tiacutetulos de

anticorpos ge 100

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

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17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

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CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

40

116 Anaacutelise dos dados

Para avaliaccedilatildeo dos dados soroloacutegicos foi realizada anaacutelise descritiva

simples pelo encontro de frequecircncias absolutas e relativas

12 RESULTADOS E DISCUSSAtildeO

Na anaacutelise global das 557 amostras 20 (359) foram positivas e 537

(9641) negativas para o diagnoacutestico de N caninum pelo meacutetodo diagnoacutestico

de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) No ano de 2015 foi utilizado o rebanho

total da propriedade foram testadas 470 amostras sendo 9 (191) positivas e

461 (9809) negativas atraveacutes das amostras positivas de 2015 foi

pesquisado retrospectivamente os antecedentes e descendentes nos anos de

2014 e 2013 No ano de 2013 foram testadas 63 amostras sendo 5 (806)

positivas e 57 (9193) negativas 2014 foram testadas 25 amostras sendo 6

(24) positivas e 19 (76) negativas Conforme demonstrado na Tabela 2

Tabela 2 - Total de animais soropositivos e soronegativos para N caninum em

2015 2014 e 2013 em rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Ano Nordm de animais testados

Nordm de animais positivos

Nordm de animais negativos

2013 62 5 (806) 57 (9194)

2014 25 6 (24) 19 (76)

2015 470 9 (191) 461 (9809)

Total 557 20 (359) 537 (9641)

Estudos realizados no Brasil satildeo observados uma variabilidade de

soroprevalecircncia de 68 a 678 de anticorpos anti- N caninum (GENNARI

2004 BENETTI et al 2009) Essa variabilidade pode estar relacionada a

vaacuterios fatores como pontos de corte variados e a falta de padronizaccedilatildeo das

teacutecnicas soroloacutegicas nuacutemero de amostras coletadas caracteriacutesticas dos

rebanhos e ao histoacuterico de problemas reprodutivos Haacute um consenso de que a

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

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17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

41

infecccedilatildeo pelo protozoaacuterio N caninum estaacute disseminada por todos estados do

Brasil (CAMILLO et al 2010)

A baixa ocorrecircncia de animais soropositivos nesse estudo pode estar

relacionado a ausecircncia de catildees na propriedade portadores de anticorpos

contra N caninum ou indicar que a soropositividade associada a transmissatildeo

vertical se deve ao fato do parasito N caninum manter-se no rebanho mesmo

sem o hospedeiro definitivo (BENETTI et al 2009)

Os animais usados no presente estudo apresentaram tiacutetulos de

anticorpos IgG anti- Neospora variando de 100 aacute 1600 A Tabela 3 apresenta

os resultados dos tiacutetulos soroloacutegicos realizados nos anos de 2013 2014 e

2015 De 557 amostras 20 sendo positivas seis apresentaram tiacutetulo de 1100

(30) duas amostras apresentaram tiacutetulo de 1200 (10) quatro amostras

apresentaram tiacutetulo de 1400 (20) seis amostras apresentaram tiacutetulo de

1800 (30) e apenas duas amostras apresentaram tiacutetulo elevado de 1 1600

(10) conforme observado na Tabela 4

Os resultados demonstraram a dificuldade de interpretar o teste que

detectam anticorpos para N caninum resultados de baixos tiacutetulos ou negativos

natildeo significam necessariamente que o animal natildeo esteja infectado e reforccedilam

sobre a flutuaccedilatildeo nos niacuteveis de anticorpos no decorrer da gestaccedilatildeo

influenciada pela reativaccedilatildeo de N caninum O conhecimento desse processo eacute

importante para a epidemiologia e patogenia da infecccedilatildeo assim como para o

diagnoacutestico (ANTONELLO 2015)

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

Neospora infections Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

caninum infection in dogs Isolation of the causative agent and

experimental transmission Journal of the American Veterinary

Medical Association vol ndeg 10 1988

15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

42

Tabela 3 - Tiacutetulo de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti Paranaacute realizadas pela

teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta (RIFI) 2016

Nordm ID Animal

Coleta Mecircs Nasc

Idade atual

Idade coleta

Titulaccedilatildeo 1100

1200

1400

1800

11600

1 02-2013 0 0 P N N N N

138 02-2013 10-2008 8 5 P N N N N

214 02-2013 02-2008 8 5 P N N N N

1478 07-2014 02-2005 11 9 P N N N N

138 06-2015 10-2008 8 7 P N N N N

629 06-2015 03-2014 2 1 P N N N N

582 07-2014 12-2013 3 1 P P N N N

412 06-2015 06-2012 4 3 P P N N N

2306 02-2013 05-2007 9 6 P P P N N

137 07-2014 10-2008 8 6 P P P N N

514 06-2015 03-2013 3 2 P P P N N

738 06-2015 02-2015 1 4m P P P N N

1716 02-2013 03-2007 9 6 P P P P N

467 07-2014 12-2012 4 2 P P P P N

544 07-2014 07-2013 3 1 P P P P N

137 06-2015 10-2008 8 7 P P P P N

544 06-201507-2013 3 2 P P P P N

582 06-2015 12-2013 3 2 P P P P N

159 07-2014 03-2009 7 5 P P P P P

755 06-2015 05-2015 1 1m P P P P P

Total 20 6 2 4 6 2

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

Neospora infections Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

caninum infection in dogs Isolation of the causative agent and

experimental transmission Journal of the American Veterinary

Medical Association vol ndeg 10 1988

15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

43

Tabela 4 ndash Total de tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas

leiteiras soropositivas de um rebanho fechado de Arapoti- Paranaacute nos anos de

2013 2014 e 2015 realizadas pela teacutecnica de Imunofluorescecircncia Indireta

(RIFI) 2016

Titulaccedilatildeo total 2013 2014 2015

le 1100 6 (30) 3 1 2

ge 1200 2 (10) 0 1 1

ge 1400 4 (20) 1 1 2

ge 1800 6 (30) 1 2 3

ge 11600 2 (10) 0 1 1

Total 20 5 POSITIVOS 6 POSITIVOS 9 POSITIVOS

Em relaccedilatildeo agraves amostras positivas (5) testadas em 2013 2014 e 2015

houve diferenccedila com relaccedilatildeo aos tiacutetulos de anticorpos anti- IgG para N

caninum variando de um ano para o outro A amostra 137 foi positiva no ano de

2014 com titulaccedilatildeo 1400 e no ano de 2015 houve aumento da titulaccedilatildeo com

1800 a amostra 138 positiva em 2013 com titulaccedilatildeo 1100 e em 2015 a

titulaccedilatildeo se manteve com 1100 amostra 514 foi negativa no ano de 2014 e

positiva em 2015 com tiacutetulo de 1400 amostra 544 foi positiva em 2014 com

tiacutetulo de 1800 e positiva em 2015 com decreacutescimo do tiacutetulo para 1200 por fim

a amostra 582 foi positiva em 2014 com tiacutetulo de 1200 e em 2015 teve

aumento do tiacutetulo de anticorpos para 1800 como mostra a Tabela 5

Estes resultados que mostram variaccedilatildeo nos tiacutetulos de anticorpos com

aumento e decliacutenio pode ser explicado segundo Pareacute et a (1996) em que

mesmo as amostras que apresentam tiacutetulos baixos ou que satildeo soronegativas

em um ano natildeo significa que o animal natildeo esteja infectado indicando-se

assim flutuaccedilatildeo dos tiacutetulos de anticorpos ou uma possiacutevel reativaccedilatildeo da

infecccedilatildeo devido a uma nova estimulaccedilatildeo de anticorpos do agente

Apenas a amostra positiva 138 manteve seus niacuteveis de anticorpos no

ano de 2013 e 2015 Um estudo prospectivo feito por Maley et al (2001) em

que foi utilizado bezerros infectados experimentalmente atraveacutes do meacutetodo

soroloacutegico RIFI mostrou que os niacuteveis de anticorpos especiacuteficos dos animais

estudados permaneceram altos por quase um ano e com pouca flutuaccedilatildeo

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

Neospora infections Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

caninum infection in dogs Isolation of the causative agent and

experimental transmission Journal of the American Veterinary

Medical Association vol ndeg 10 1988

15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

44

poreacutem ao realizar o meacutetodo diagnoacutestico de ELISA alguns animais

apresentaram baixos tiacutetulos de anticorpos apresentando assim uma flutuaccedilatildeo

de anticorpos

Tabela 5 ndash Anaacutelises soroloacutegicas de animais positivos para N caninum que

havia amostras nos anos de 2013 2014 e 2015 de vacas leiteiras em um

rebanho fechado de Arapoti-Paranaacute 2016

Nordm ID Animal 2013Titulaccedilatildeo 2014Titulaccedilatildeo 2015 Titulaccedilatildeo

137 Natildeo avaliado Positiva 1400 Positiva 1800

138 Positiva 1100 Natildeo avaliado Positiva 1100

514 Natildeo avaliado Negativa Positiva 1400

544 Natildeo avaliado Positiva 1800 Positiva 1200

582 Natildeo avaliado Positiva 1200 Positiva 1800

Total = 5 1 3 5

Os resultados de animais soropositovos podem ser usados para o

monitoramento soroloacutegico do rebanho bovino considerando-se a detecccedilatildeo de

IgG anti- N caninum como indicativo Neste estudo natildeo foram pesquisados os

niacuteveis de IgM nos animais positivos a pesquisa de IgG e IgM em conjunto

contribui para aumentar a sensibilidade do diagnoacutestico soroloacutegico de N

caninum A infecccedilatildeo por N caninum foi relatada em certos estudos de

patogenia em que se observou que os niacuteveis de IgM e IgG durante a infecccedilatildeo

aguda natildeo se diferencia Apoacutes o periacuteodo de 30 dias da infecccedilatildeo o IgG atinge

niacuteveis maacuteximos e os niacuteveis de IgM caem nesse periacuteodo (CADORE et al 2010)

Os niacuteveis de anticorpos anti- N caninum podem apresentar flutuaccedilatildeo

de acordo com a idade e o tempo de infecccedilatildeo a soroprevalecircncia em bovinos

de 13 a 24 meses apresenta-se mais baixa com relaccedilatildeo a outras idades

indicando que essa ocorrecircncia eacute devido ao baixo niacutevel de anticorpos de N

caninum em bovinos congenitamente infectados (HIETALA et al 1999

BENETTI 2009) No presente estudo animais com ateacute 24 meses no momento

da coleta sanguiacutenea para obtenccedilatildeo de soro apresentaram tiacutetulos variados eacute

esperado essa variaccedilatildeo porque depende do estaacutegio da infecccedilatildeo a maior

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

Neospora infections Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

caninum infection in dogs Isolation of the causative agent and

experimental transmission Journal of the American Veterinary

Medical Association vol ndeg 10 1988

15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

45

ocorrecircncia (4 animais) foi em animais com dois anos de idade como mostra a

Tabela 4

O tiacutetulo de anticorpos eacute um indicador da exposiccedilatildeo antigecircnica para o

sistema imunoloacutegico a resposta humoral eacute um meio para indicar a atividade do

parasita no hospedeiro e a resposta imune celular eacute a mais decisiva para evitar

ou determinar a recrudescecircncia do N caninum (ANTONELLO et al 2015)O

animal pode apresentar uma resposta soroloacutegica quando ele eacute exposto ao N

caninum mas se o animal natildeo tiver uma estimulaccedilatildeo imunoloacutegica por

consecutivas exposiccedilotildees ou uma infecccedilatildeo persistente o niacutevel de anticorpos do

animal diminui (HIETALA amp THURMOND 1999 GONDIM et al 2004) A

resposta imune celular nestes animais esta baixa por causa da accedilatildeo das

citocinas devido aacute resposta imune humoral natildeo ser capaz de conter a infecccedilatildeo

de forma eficaz (ANTONELLO et al 20015)

No periacuteodo de gestaccedilatildeo ocorre a modulaccedilatildeo da resposta imune celular

para imune humoral onde a reativaccedilatildeo de bradizoitos pode ocorrer jaacute que o

controle da proliferaccedilatildeo dos taquizoitos eacute feita atraveacutes da imunidade celular

(INNES et al 2005 ANTONELLO 2015) Vacas com tiacutetulos de anticorpos

altos durante a gestaccedilatildeo satildeo mais propensas a ter bezerros soropositivos do

que vacas com tiacutetulos de anticorpos baixos (HIETALA amp THURMOND 1999

GONDIM et al 2004) No presente estudo famiacutelias que apresentaram

transmissatildeo vertical foi possiacutevel verificar tiacutetulos variados nas vacas

consideradas matildees poreacutem somente uma famiacutelia (Famiacutelia 3) Figura 3 foi

possiacutevel observar que no momento da gestaccedilatildeo a vaca apresentava tiacutetulo de

anticorpos alto (1800) Tabela 6

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

Neospora infections Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

caninum infection in dogs Isolation of the causative agent and

experimental transmission Journal of the American Veterinary

Medical Association vol ndeg 10 1988

15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

46

Tabela 6 ndash Tiacutetulos de anticorpos IgG anti- Neospora caninum em vacas leiteiras

soropositivas consideradas matildees que apresentaram transmissatildeo vertical

apresentando apenas uma vaca prenha com tiacutetulo de anticorpos alto no momento da

colheita 2016

Matildee filha

Nascimento mecircsano 02-2013 tiacutetulo 07-2014 tiacutetulo 06-2015 tiacutetulo

Matildee ID 137 10-2008 Natildeo avaliado 1400 1800 Filha ID 582 12-2013 Natildeo avaliado 1200 1800 Matildee ID 159 032009 Natildeo avaliado 11600 Natildeo avaliado Filha ID 738 02-2015 Natildeo avaliado Natildeo avaliado 1400 Matildee ID 1716 03-2007 1800 Natildeo avaliado Natildeo avaliado Filha ID 514 03-2013 Natildeo avaliado Negativa 1400

Total 3 FAMILIAS

A frequecircncia de transmissatildeo vertical do protozoaacuterio N caninum no

rebanho fechado na mesorregiatildeo norte oriental do Paranaacute foi realizada atraveacutes

das amostras positivas (20) pelo teste de imunofluorescecircncia indireta e

consequentemente foi realizado o teste soroloacutegico em seus respectivos

descendentes para verificaccedilatildeo de transmissatildeo vertical como mostram as

aacutervores genealoacutegicas abaixo (Figura 3) de 557 animais testados 9 famiacutelias

apresentaram animais positivos e apenas trecircs (3333) apresentaram

transmissatildeo vertical (famiacutelia 1 3 e 5) enquanto as outras seis (6667) famiacutelias

apresentaram animais positivos mas natildeo observou-se transmissatildeo vertical

(famiacutelia 2 4 6 7 8 e 9)

Todos os bezerros receacutem-nascidos do presente estudo receberam

colostro dentro de poucas horas apoacutes o parto e foram mantidos por 24 horas

com suas matildees O fato de alguns animais natildeo soroconverteram nesse estudo

pode ser segundo Tizard (2002) devido a uma falha da transferecircncia de

anticorpos da matildee para o bezerro atraveacutes do colostro em que a matildee pode ter

uma produccedilatildeo insuficiente de colostro ou colostro de maacute qualidade tambeacutem

pode ocorrer falha na ingestatildeo por parte do animal receacutem-nascido ou atraveacutes

do epiteacutelio intestinal ocorrer falha de absorccedilatildeo dos anticorpos Atraveacutes do

intestino o bezerro eacute capaz de absorver imunoglobulinas da matildee atraveacutes do

leite nas primeiras 24-36 horas apoacutes o nascimento Podendo adquirir a infecccedilatildeo

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

Neospora infections Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

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13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

caninum infection in dogs Isolation of the causative agent and

experimental transmission Journal of the American Veterinary

Medical Association vol ndeg 10 1988

15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

47

por N caninum devido os anticorpos terem especificidade idecircntica aacute da matildee

(CARDOSO et al 2009)

Em bovinos a placenta sindesmocorial natildeo permite a transferecircncia de

imunoglobulina materna para a circulaccedilatildeo fetal a placenta protege o feto no

uacutetero contra vaacuterios viacuterus e bacteacuterias poreacutem impossibilita a passagem das

imunoglobulinas (FEITOSA 1999) Os bezerros receacutem-nascidos satildeo

praticamente desprovidos de anticorpos por esse motivo eacute originaacuterio do feto

qualquer anticorpo no soro preacute-colostral indicando que haacute contra a infecccedilatildeo do

parasito uma resposta imune ativa Desta forma o bezerro adquire uma

proteccedilatildeo imunoloacutegica somente apoacutes a ingestatildeo do colostro (FEITOSA 1999

CARDOSO et al2008)

Hietala e Thurmond (1999) demonstraram que vacas positivas para N

caninum que forneceram colostro para bezerros soronegativos converteram-se

para soropositivos e os anticorpos colostrais diminuiacuteram aos 128 dias apoacutes o

nascimento No presente estudo todas coletas foram apoacutes o fornecimento de

colostro para os bezerros e apenas dois animais tiveram coletas com menos de

128 dias a amostra 738 e 755 como consta na Tabela 3

Em um trabalho realizado com 284 bezerros soronegativos para N

caninum 17 soroconverteram e 13 desses animais que tiveram a

soroconversatildeo que ocorreu apoacutes a ingestatildeo de colostro no periacuteodo neonatal

Isso indica que a soroconversatildeo pode ter ocorrido nos primeiros meses de vida

dos bezerros foram infectados congenitamente mas natildeo houve uma resposta

de anticorpos no nascimento A soroconversatildeo dos bezerros pode ter sido

influenciada pela especificidade e sensibilidade do teste diagnoacutestico de

imunofluorescecircncia indireta (HIETALA e THURMOND 1999)

Eacute importante ressaltar que os resultados da transmissatildeo vertical neste

estudo podem conter falhas tendo como exemplo uma vaca soropositiva no dia

da coleta de sangue pode ter sido soronegativa no dia da pariccedilatildeo e pode ter

gerado uma filha negativa Estudos semelhantes para avaliar a transmissatildeo

vertical tambeacutem podem superestimar a transmissatildeo horizontal e vertical

(BERGERON et al 2000 ROMERO et al 2003)

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

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and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

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dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

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control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

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16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

48

Figura 3 - Aacutervores genealoacutegicas do rebanho leiteiro fechado na mesorregiatildeo norte oriental do

Paranaacute avaliando se houve transmissatildeo vertical atraveacutes do teste de RIFI

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

Neospora infections Journal of Veterinary Diagnostic Investigation

Columbia vol 5 ndeg 4 p 572-578 1993

13 CORBELLINI L G DRIEMEIER D CRUZ C F E DIAS M M

Aborto bovino por Neospora caninum no Rio Grande do Sul Ciecircncia

Rural vol 30 ndeg 5 p 863-868 2000

14 Dubey JP Hattel AL Lindsay DS Topper MJ Neonatal Neospora

caninum infection in dogs Isolation of the causative agent and

experimental transmission Journal of the American Veterinary

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15 DUBEY JP SCHARES G ORTEGA-MORA L M Epidemiology and

control of neosporosis and Neospora caninum Clinical Microbiology

Reviews vol 20 ndeg 2 p 323-367 2007

16 DUBEY JP SCHARES G Neosporosis in animals ndash The last five

years Veterinary Parasitology vol 180 ndeg 1-2 p 90-108 2011

17 FEITOSA F L F Importacircncia da transferecircncia da imunidade passive

para a sobrevivecircncia de bezerros neonatos Revista educo conlin

CRMV-SP I ComimlOlIs Education Joumal CRMV-SP Satildeo Paulo

volume 2 fasciacuteculo 3 p 017 - 022 1999

49

13 CONCLUSAtildeO

Dentro das famiacutelias positivas o teste de RIFI natildeo foi capaz de apontar

todos os integrantes positivos na RIFI provavelmente devido a flutuaccedilatildeo

de anticorpos que ocorreram nos indiviacuteduos

A transmissatildeo vertical ficou caracterizada em algumas famiacutelias pela

observaccedilatildeo de indiviacuteduos positivos com antecedentes tambeacutem positivos

A baixa ocorrecircncia de transmissatildeo vertical pode ser explicado devido a

estimulaccedilatildeo continua do sistema imune humoral da matildee nos rebanhos

com infecccedilatildeo endecircmica

50

14 REFEREcircNCIAS

1 ANTONELLO A M CAMILLO G WEBER A BRAUNIG P

SANGIONI L A VOGEL F S F Dinacircmica soroloacutegica de anticorpos

contra Neospora caninum durante a gestaccedilatildeo de vacas naturalmente

infectadas Ciecircncia Animal Brasileira Goiacircnia vol 16 ndeg 14 p 553-

559 2015

2 BARR B C CONRAD P A BREITMEYER R SVERLOW K

ANDERSON M L REYNOLDS J CHAUVET A E DEBEY J P

ARDANS A A Congenital Neospora infection in calves born from cows

that had previously aborted Neospora-infected fetuses four cases

(1990-1992) Journal of the American Veterinary Medical

Association vol 202 ndeg 1 p 113-117 1993

3 BENAVIDES J KATZER F MALEY S W BARTLEY P M

CANTON G PALAREA-ALBALADEJO J PURSLOW C A PANG

Y ROCCHI M S CHIANINI F BUXTON D INNES E A High rate

of transplacental infection and transmission of Neospora

caninum following experimental challenge of cattle at day 210 of

gestation Veterinary Ressearch 4383 2012

4 BENETTI A H SCHEIN F B SANTOS T R TONIOLLO G H

COSTA A J MINEO J R LOBATO J SILVA D A O GENNARI

S M Pesquisa de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos

leiteiros catildees e trabalhadores rurais da regiatildeo sudoeste do Estado do

mato Grosso Revista Brasileira de Parasitologia Veterinaacuteria

Jaboticabal vol 18 ndeg 1 p 29-33 dez 2009

5 BJORKMAN C UGGLA A Serological diagnosis of Neospora caninum

infection Internatinal Journal of Parasitology vol 29 ndeg 10 p 1497-

1507 1999

6 BERGERON N FECTEAU G PARE J MARTINEAU R

VILLENEUVE A Vertical and horizontal transmission of Neospora

caninum in dairy herds in Quebec Canadian Veterinary Journal vol

41 ndeg 6 p 464-467 2000

7 CADORE G C VOGEL F S F SANGIONI L A PENA H F J

GENNARI S M IgM e IgG como marcadores da infecccedilatildeo

transplacentaacuteria por Neospora caninum em fetos bovinos Pesquisa

Veterinaacuteria Brasileira vol 30 ndeg 7 p 551-553 2010

51

8 CAMILLO G CADORE G CEZAR AS TOSCAN G BRAumlUNIG P

SANGIONI LA VOGEL FSF Anticorpos anti-Neospora caninum em

bovinos de leite do sudoeste do estado do Paranaacute Arquivo Brasileiro

Medicina Veterinaacuteria e Zootecnia vol 62 ndeg 6 p1511-1513 2010

9 CANADA N MEIRELES CS FERREIRA J COSTA MC ROCHA

A Artificial insemination of cows with semen in vitro contaminated with

Neospora caninum tachyzoites failed to induce neosporosis Veterinary

Parasitology vol 139 ndeg 1-3 p 109ndash114 2006

10 CARDOSO J M S FUNADA M R SOARES R M GENNARI S M

Perfil soroloacutegico dos anticorpos colostrais para Neospora caninum em

bezerros livres da infecccedilatildeo Brazilian Journal of Veterinary Research

and Animal Science Satildeo Paulo vol 45 ndeg 5 p 379-384 2008

11 CLIMA-DATEORG Disponiacutevel em httpptclimate-

dataorglocation43743 Acesso em 11 de nov 2016

12 CONRAD P A SVERLOW K ANDERSON M A et al Detection of

serum antibody responses in cattle with natural or experimental

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