TP 2 - F.Z & R.G

1 Principe

1.1 Principe de l’extraction solide-liquide

Il s'agit d'extraire l’ochratoxine A présente dans la farine pour la faire passer dans le

chloroforme. L’ochratoxine a plus d’affinité avec le solvant qu’avec la farine.

1.2 Principe de l’évaporation

Il s’agit de diminué le solvant chloroforme pour concentrer l’échantillon en le faisons évaporé

1.3 Principe de la CCM

La chromatographie sur couche mince repose sur les phénomènes d’adsorption et

d’interactions.

2 But

Analyse qualitatives et semi-quantitatives de l’ochratoxine A dans un echatillon de farine de

blé et la vérification de l’efficacité de la methode d’extraction.

3 Mode opératoire

3.1 Préparation de l’échantillon

Un mélange de 10 g de la farine de blé, 30 ml du chloroforme et 2,5 ml de d’acide sulfurique

0,1 M est mis en agitation pendant 30 minutes. Le mélange est ensuite filtré et puis évaporé à

sec à 60°C. Le résidu est reconstitué dans 500 µl de méthanol avec 1ml de hexane. Après

centrifugation (6000 rpm, 20 min), la phase organique inférieure est récupérée.

3.2 Chromatographie couche mince

3.2.1 Préparation du solvant

Le solvant est un mélange de 60 ml de toluène, 30 ml d’acétate d’éthyle et 10 ml acide

formique.

3.2.2 Préparation de la couche mince

1

TP 2 - F.Z & R.G

Figure 1 : mode opération de la CCM et révélation du résultat probable

3.3 Préparation des dilutions pour la courbe d’étalonnage

A partir d’une solution initiale de concentration 5 PPM = 5000 PPB

Règle appliquée C1∗V 1=C2∗V 2

Tableau 1 : préparation des dilutions pour la courbe d’étalonnage

Concentration souhaité dans un volume de 1ml 5 PPB 10 PPB 100

PPB

500

PPB

Volume de la solution en µl 1 2 20 100

Volume d’eau distillée en µl 999 998 980 900

4 Résultat et discutions

4.1 Courbe d’étalonnageTableau 2 : valeur de la densité optique en fonction de la concentration de la solution en ochratoxine en PPB

Concentration en PPB 5 10 100 500

DO 0.007 0.5 0.3 0.96

2

Solution d’ochratoxine 45 ppb

Échantillon dopée

Échantillon de la farine

Solvant

Sous UV

Après

migration

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0tan28a5

66028

0tan21a5

66021

0tan14a5

66114

0tan7a5

66170tan28a566028

0tan29a566029

0tan1a56601

f(x) = 0.00186053376618474 x + 0.0431929334490959R² = 0.987259329000062

ochratoxineLinear (ochratoxine)

concentration en PPB

DO

Figure 2 : courbe d’étalonnage concentration en ochratoxine (PPB) en fonction de la densité

optique

concentration enoc hratoxine echantillon dopé=0.05−0.04320.0019

=3.578 ppb = 3.578*10-3 ppm

Remarque puisque R2 est proche de 1 (0.9873) l’équation obtenue est fiable

Rendement de l’extraction = 3.578

45∗100=7.95 % le rendement d’extraction étant très faible la

technique d’extraction n’est pas très efficace.

4.2 Prévention de la contamination des céréales par l’ochratoxine A

Appliquée les principes de la BPA avant la moisson, lors de la moisson, conservation,

entreposage et transport. CX/FAC 00/17 Janvier 2000

Exemple : Sécher les céréales pour atteindre un degré d’humidité correspondant à une activité

de l'eau de moins de 0,70 (moins de 14 pour cent d'humidité dans les céréales à petits grains)

aussi rapidement que possible. Pour éviter la formation d'ochratoxine A, commencer le

séchage immédiatement après la moisson et utiliser de préférence un séchoir à air chaud. En

climat tempéré, si le stockage intermédiaire est nécessaire en raison d'une faible capacité de

séchage, s'assurer que la teneur en eau est inférieure à 16 pour cent, que le temps

d'entreposage ne dépasse pas 10 jours, et que la température reste en dessous de 20ºC.

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