New Диагностика полиморфизмов в гене CYP21A2 · 2017. 10. 18. ·...
Transcript of New Диагностика полиморфизмов в гене CYP21A2 · 2017. 10. 18. ·...
Диагностика мутаций в гене CYP21A2, ассоциированных с развитием ВДКН
Д.Ю. Ключников
биолог лаборатории иммунологического типирования
ГБУЗ «МЦ Династия», г. Самара
4 сентября 2017, г.Санкт-Петербург
1
Врожденная дисфункция коры
надпочечников (адреногенитальный синдром) - группа наследственных аутосомно-рецессивных заболеваний, в основе которых дефект одного из ферментов или транспортных белков, участвующих в биосинтезе кортизола
2
Формы ВДКН
3
Формы % случаев OMIM Ген Ферменты
Дефицит 21-гидроксилазы 90-95% 201910 CYP21A2 P450c21
Дефицит 11β-гидроксилазы 5% 202010 CYP11B1 P450c11β
Дефицит 3β-гидроксистероиддегидрогеназы
Очень редко 201810 HSD3B2 3βHSD II
Дефицит 17α-гидроксилазы Очень редко 202110 CYP17A1 P450c17
Липоидная форма Очень редко 201710 STAR StAR P450scc
Метаболический путь
4
Холестерин
Альдостерон Кортизол Андрогены
АКТГ
17-ОН прогестерон
2 1 - г и д р о к с и л а з а 2 1 - г и д р о к с и л а з а
Область 6p21.3 содержащая ген в структуре RCCX элементов
Choi et al, 2016 / doi:10.6065/apem.2016.21.1.1.
5
Частота встречаемости мутаций в гене CYP21A2
6
P30L, A/C655G, Del8bp, I172N, V236E, V281L, Q318X, R356W, P453S Остальные 200-250 мутаций
Локализация мутаций в гене
7
Мутации в гене CYP21A2 и активность фермента
Группа А Группа B Группа C
Фенотип Сольтеряющая форма
1:11800-21800
Простая вирильная форма
1:11800-21800
Неклассическая форма 1:1000
Активность фермента in vitro
0%–1% 1%–10% 20%–60%
Мутации Gene deletion/conversion
I172N P30L
Del 8 bp V281L
E6 cluster P453S
F306+t
L307insT
Q318X
R356W
8
Тест-системы Intifica
1. P30L (CYP21A*8, rs9378251)
2. A/C655G (CYP21A*9, rs6467)
3. Del8bp (CYP21A*10, rs387906510)
4. Q318X (CYP21A*17, rs7755898)
5. P453S (CYP21A*19, rs6445)
9
Этапы проведения анализа
Выделение геномной ДНК
Предварительная ПЦР, разведение
продукта
RT-PCR
10
Предварительная ПЦР
11
Анализ результатов Del8bp (CYP21A*10, rs387906510)
12
Температура
плавления дуплекса,
°С
Аллель
58- 63 Аллель дикого типа
W (GAGACTAC)
43-49 Мутантная аллель M
(del)
Анализ результатов CYP21A2*17 (Q318X, rs7755898)
13
60±2°С W (C) 46±2°С M (T)
Наши результаты
№ Мутация Локализация Частота, % n=388
1 P30L (CYP21A*8, rs9378251) 1 экзон 0
2 A/C655G (CYP21A*9, rs6467) 2 интрон 18,5
3 Del8bp (CYP21A*10, rs387906510) 3 экзон 0
4 I172N (CYP21A*11, rs6475) 4 экзон 0
5 V236E (CYP21A*12, rs6476) 6 экзон 0
6 V281L (CYP21A*15, rs6471) 7 экзон 6,4
7 Q318X (CYP21A*17, rs7755898) 8 экзон 3,6
8 R356W (CYP21A*18, rs7769409) 8 экзон 0
9 P453S (CYP21A*19, rs6445) 10 экзон 0,2
14
Выявленные мутации
15
A/C655G V281L Q318X P453S
Частота, % n=388 18,5 6,4 3,6 0,2
Локализация 2 интрон 7 экзон 8 экзон 10 экзон
Группа А C А C
Форма Сольтеряющая Неклассическая Сольтеряющая Неклассическая
Активность фермента in vitro
0-1% 20%–60% 0-1% 20%–60%
OMIM 613815.0006 613815.0002 613815.0020 613815.0010