Nada en el mundo de las cosas vivientes es permanentemente ...
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Dr.C. María Isabel González GonzálezInvestigador Titular/ Profesor AuxiliarLaboratorio de Microbiología de AguasINHEM, CubaEmail: [email protected], [email protected]
Guías de la OMS y métodos de ensayo para la evaluación de la calidad microbiológica del agua.
Buenos Aires, Argentina 22-26 de septiembre, 2008
""""Nada en el mundo de las cosas vivientes es Nada en el mundo de las cosas vivientes es Nada en el mundo de las cosas vivientes es Nada en el mundo de las cosas vivientes es permanentemente constante.permanentemente constante.permanentemente constante.permanentemente constante.""""
Hans Hans Hans Hans ZinnserZinnserZinnserZinnser, 1953, 1953, 1953, 1953
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•Las consecuencias de las infecciones causadas por los microorganismos patógenos han afectado seriamente a la humanidad por ej. la peste, el cólera, la influenza.
•En el 2001, una revisión científica identificó 1 415 especies de organismos infecciosos patógenos para el hombre que incluían:
•217 viruses y priones•538 bacterias y rickettsias•307 hongos•66 protozoos•287 helmintos
• La emergencia de una enfermedad infecciosa es un complejo proceso que involucra factores sociales, biológicos y ecológicos(se han identificado 13 factores claves para esta emergencia:
1. Adaptación microbiana y mutación.
2. Vulnerabilidad humana.
3. Tiempo y clima.
4. Cambios en el ecosistema.
5. Desarrollo económico y uso de la tierra.
6. Comportamiento humano y demográfico.
7. Tecnología e industria.
8. Viajes internacionales y comercio.
9. Deterioro de las medidas de salud pública.
10.Pobreza y desigualdad social.
11.Guerras y hambrunas.
12. Pérdida de voluntad política.
13. Intento de daño.
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• A pesar de la inherente complejidad de los sistemas biológico y social involucrados en la emergencia, algunos estudios revelan lo siguiente:
� Virus , priones, bacterias y protozoos están más asociados a la emergencia de enfermedades.
� Patógenos zoonóticos comprenden el 75% de las enfermedades emergentes.
� Patógenos que están sujetos a una frecuencia relativa de mutaciones o eventos asociados al genoma (por ej. RNA virus y virus con segmentos de genoma).
� Patógenos que infectan múltiples hospederos o que infectan especies que pueden ser portadoras de agentes estrechamente relacionados, proveen una oportunidad para la recombinación (por ej. síndrome respiratorio agudo en gatos).
� Agentes transmitidos por más de una ruta o contacto indirecto (ej. agua, alimentos, contaminación ambiental, vectores).
Ejemplos de enfermedades emergentes y reemergentes.
1973: Rotavirus (diarrea infantil)1975: Astrovirus (diarrea)1976: Crytosporidium parvum (diarrea aguda y crónica)1977: Legionella pneumophila (legionelosis)1977: virus de Ebola (fiebre hemorrágica con un 80% d e letalidad)1977: Campylobacter jejuni (diarrea)1982: virus HTLV-2 (virus causante de la tricoleucemia)1983: Helicobacter pylori (úlcera péptica, cáncer gástrico)1983: Escherichia coli O157:H71983: Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH): SIDA1988 y 1989: Virus de la hepatitis E y hepatitis C1991: Virus de Guanarito (fiebre hemorrágica venezolana)1992: Vibrio cholerae O1391994: virus Sabiá (fiebre hemorrágica de Brasil)1995: virus del Herpes Humano tipo 81997: enterovirus 71 (encefalitis epidémica)1999: virus de la Influenza A (influenza
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Factores en la emergencia de enfermedades infecciosas.
•Cambios ecológicos: agricultura, represas, cambios en ecosistemas acuáticos, deforestación, reforestación, inundaciones, sequías, cambios climáticos.
Ej. Schistosomiasis (represas), fiebre del Valle, hantavirosis pulmonar
•Comportamiento humano: eventos sociales, crecimiento y migración de la población, guerras, hacinamiento, conflictos civiles, conducta sexual.
Ej. Introducción y diseminación de VIH, brotes de dengue
•Viajes y comercio internacional: viajes aéreos, transportación de personas y mercancías.
Ej. Malaria, diseminación de vectores, roedores transmisores de hantavirus, cólera, diseminación de Vibrio cholerae O139.
Factores en la emergencia de enfermedades infecciosas (Cont…)
•Desarrollo tecnológico e industrial: globalización de suministros de alimentos, transporte de tejidos y órganos, amplio uso de antibióticos, drogas inmunosupresoras.
Ej. Síndrome urémico hemolítico causado por Escherichia coli O157:H7 , hepatitis asociada a transfusiones, enfermedades oportunistas enpacientes inmunodeprimidos.
•Cambios y adaptaciones microbianas: evolución microbiana como respuesta de selección en el ambiente.
Ej. Resistencia antimicrobiana, células viables pero no cultivables.
•Crisis en las medidas de salud pública: programas de prevención reducidas o críticas, saneamiento y medidas inadecuadas en el control de vectores.
Ej. Reemergencia de tuberculosis en E. U. , cólera en campamentos de refugiados en África, reemergencia de difteria en Rusia.
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Base ambiental de la transmisión de agentes infecciosos según Feachem et al. (1983)
Propiedades relacionadas a la supervivencia ambiental
Concentración LATENCIA Dosis de patógenos ⇒⇒⇒⇒ PERSISTENCIA ⇒⇒⇒⇒ Infectivaexcretados MULTIPLICACIÓN
⇒⇒⇒⇒ IMPORTANTES PARA CONOCER EL MODO DE TRANSMISIÓN DE UN MICROORGANISMO PATÓGENO Y ESTABLECER EL CONTROL
AMBIENTAL
LATENCIA:El tiempo entre la excreción del patógeno y el tiempo en que infecta a un nuevo hospedero.
DOSIS INFECTIVA:Dosis mínima requerida de un organismo para causar la enfermedad.
SUPERVIVENCIA:Conservación de la viabilidad del organismo bajo condiciones adversas.
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PERSISTENCIA:Capacidad de un patógeno de sobrevivir en el medio por un período de tiempo.
VIABILIDAD: Propiedad que posee una parte de una población bacteriana capaz de multiplicarse cuando existan óptimas condiciones para su crecimiento.
MULTIPLICACIÓN:Posibilidad de crecimiento microbiano bajo determinadas condiciones.
Las enfermedades emergentes trasmitidas por el agua están estrechamente asociadas con su calidad microbiológica.
Ejemplos de infecciones entéricas:
Cryptosporidium parvum y Giardia lambliaFoto: HDA Lindquist, USEPA
RotavirusFoto: FP Williams, USEPA
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GastrointestinalGastrointestinalGastrointestinalGastrointestinal
BacteriaBacteriaBacteriaBacteria VirusesVirusesVirusesViruses Protozoos y helmintosProtozoos y helmintosProtozoos y helmintosProtozoos y helmintos
Ruta de Ruta de Ruta de Ruta de infeccióninfeccióninfeccióninfección
Campylobacter jejuniCampylobacter jejuniCampylobacter jejuniCampylobacter jejuniEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coliSalmonella sp.Salmonella sp.Salmonella sp.Salmonella sp.Shigella sp.Shigella sp.Shigella sp.Shigella sp.Vibrio choleraeVibrio choleraeVibrio choleraeVibrio choleraeYersinia enterocoliticaYersinia enterocoliticaYersinia enterocoliticaYersinia enterocoliticaAeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Helicobacter pyloriHelicobacter pyloriHelicobacter pyloriHelicobacter pylori
AdenovirusAdenovirusAdenovirusAdenovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusAstrovirusAstrovirusAstrovirusAstrovirusRotavirusRotavirusRotavirusRotavirusNorovirusNorovirusNorovirusNorovirusSapovirusSapovirusSapovirusSapovirusVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis AVirus de Hepatitis EVirus de Hepatitis EVirus de Hepatitis EVirus de Hepatitis E
Crystoporidium parvumCrystoporidium parvumCrystoporidium parvumCrystoporidium parvumEntamoeba hystoliticaEntamoeba hystoliticaEntamoeba hystoliticaEntamoeba hystoliticaGiardia intestinalisGiardia intestinalisGiardia intestinalisGiardia intestinalisCyclospora cayetanensisCyclospora cayetanensisCyclospora cayetanensisCyclospora cayetanensisToxoplasma gondiiToxoplasma gondiiToxoplasma gondiiToxoplasma gondiiIsospora Isospora Isospora Isospora bellibellibellibelliDracunculus medinensisDracunculus medinensisDracunculus medinensisDracunculus medinensisFasciolaFasciolaFasciolaFasciola sp.sp.sp.sp.
Vías de transmisión de algunos microorganismos patógenos en aguas.
Por ingestión de agua.
RespiratoriaRespiratoriaRespiratoriaRespiratoria
BacteriaBacteriaBacteriaBacteria VirusesVirusesVirusesViruses Algunos otros agentes en Algunos otros agentes en Algunos otros agentes en Algunos otros agentes en situaciones de alta exposiciónsituaciones de alta exposiciónsituaciones de alta exposiciónsituaciones de alta exposición
Ruta de Ruta de Ruta de Ruta de infeccióninfeccióninfeccióninfección
LegionellaLegionellaLegionellaLegionella pneumophilapneumophilapneumophilapneumophilaMycobacteriumMycobacteriumMycobacteriumMycobacterium sp.sp.sp.sp.(no tuberculoso)(no tuberculoso)(no tuberculoso)(no tuberculoso)
EnterovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusDiversas infecciones Diversas infecciones Diversas infecciones Diversas infecciones viralesviralesviralesvirales
Vías de transmisión de algunos microorganismos patógenos en aguas.
Por inhalación y aspiración de bioaerosoles
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Piel, membranas de las mucosas, heridas, ojosPiel, membranas de las mucosas, heridas, ojosPiel, membranas de las mucosas, heridas, ojosPiel, membranas de las mucosas, heridas, ojos
BacteriaBacteriaBacteriaBacteria VirusesVirusesVirusesViruses ProtozoosProtozoosProtozoosProtozoos y y y y helmintoshelmintoshelmintoshelmintos
Ruta de Ruta de Ruta de Ruta de infeccióninfeccióninfeccióninfección
BurkholderiaBurkholderiaBurkholderiaBurkholderia pseudomalleipseudomalleipseudomalleipseudomalleiMycobacteriumMycobacteriumMycobacteriumMycobacterium sp. (no sp. (no sp. (no sp. (no tuberculoso)tuberculoso)tuberculoso)tuberculoso)Aeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Aeromonas sp.Pseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaPseudomonas aeruginosaLeptospiraLeptospiraLeptospiraLeptospira sp.sp.sp.sp.
Vías de transmisión de algunos microorganismos patógenos en aguas.
Por contacto
AdenovirusAdenovirusAdenovirusAdenovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirusEnterovirus
AcanthamoebaAcanthamoebaAcanthamoebaAcanthamoeba sp.sp.sp.sp.SchistosomaSchistosomaSchistosomaSchistosoma mansoniimansoniimansoniimansoniiNaegleriaNaegleriaNaegleriaNaegleria fowlerifowlerifowlerifowleri
Cianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumoCianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumoCianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumoCianobacterias tóxicas de importancia actual en aguas de consumo....
Especies tóxicasEspecies tóxicasEspecies tóxicasEspecies tóxicas
Microcystis , Anabaena , Planktothrik Microcystis , Anabaena , Planktothrik Microcystis , Anabaena , Planktothrik Microcystis , Anabaena , Planktothrik Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis Nostoc, Hapalosiphon, Anabaenopsis
MicrocystinasMicrocystinasMicrocystinasMicrocystinasHígadoHígadoHígadoHígado
Fuente: Cyanosite
Órgano primarioÓrgano primarioÓrgano primarioÓrgano primario Tipo de cianotoxinasTipo de cianotoxinasTipo de cianotoxinasTipo de cianotoxinas
NodulariaNodulariaNodulariaNodularia HígadoHígadoHígadoHígado NodularinaNodularinaNodularinaNodularina
Anabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaena, Planktothrik, AphanizomenonAnabaenaAnabaenaAnabaenaAnabaenaLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikLyngbya, Schizothrix, PlanktothrikCylindrospermopsis, Aphanizomenon, Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Cylindrospermopsis, Aphanizomenon, Umezakia, Raphidiosis curvataUmezakia, Raphidiosis curvataUmezakia, Raphidiosis curvataUmezakia, Raphidiosis curvataLyngbyaLyngbyaLyngbyaLyngbyaAnabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya, CylindrospermopsisCylindrospermopsisCylindrospermopsisCylindrospermopsis
Sistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nervioso
PielPielPielPielHígadoHígadoHígadoHígado
Piel, tracto intestinalPiel, tracto intestinalPiel, tracto intestinalPiel, tracto intestinalSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nerviosoSistema nervioso
AnatoxinaAnatoxinaAnatoxinaAnatoxina----aaaaAnatoxinaAnatoxinaAnatoxinaAnatoxina----a (S)a (S)a (S)a (S)AplysiatoxinaAplysiatoxinaAplysiatoxinaAplysiatoxina
CylindrospermopsinaCylindrospermopsinaCylindrospermopsinaCylindrospermopsina
LyngbyatoxinaLyngbyatoxinaLyngbyatoxinaLyngbyatoxina----aaaaSaxotoxinasSaxotoxinasSaxotoxinasSaxotoxinas
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Calidad del agua:
La calidad del agua se define con relación su uso o actividad en que se emplee (por ej. aguas de consumo, aguas recreativas, aguas residuales y grises para la agricultura o acuicultura, aguas envasadas, aguas mineromedicinales para hidrología médica, aguas para hemodiálisis).
Para evaluar los cambios que las diferentes aplicaciones del agua pueden originar en su calidad, se emplean parámetros físicos, químicos y biológicos, también llamados indicadores de calidad de agua.
Criterio de calidad de agua:
Es la relación cuantificable de exposición-efecto basada en evidencias científicas entre el nivel de algún indicador de calidad de agua y los riesgos potenciales para la salud asociados con su uso.
Guía de calidad del agua:
Es una densidad máxima sugerida del indicador en el agua que está asociada con riesgos inaceptables para la salud.
Norma:
Obtenida de los criterios y las guías nacionales e internacionales y es de obligatorio cumplimiento.
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Organismos Valor guíOrganismos Valor guíOrganismos Valor guíOrganismos Valor guíaaaa
•Toda agua de consumo Toda agua de consumo Toda agua de consumo Toda agua de consumo
Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli o bacterias No debe detectarse eno bacterias No debe detectarse eno bacterias No debe detectarse eno bacterias No debe detectarse encoliformescoliformescoliformescoliformes termotolerantes ninguna muestra de 100mltermotolerantes ninguna muestra de 100mltermotolerantes ninguna muestra de 100mltermotolerantes ninguna muestra de 100ml
•Agua tratada que entra al sistema de distribuciónAgua tratada que entra al sistema de distribuciónAgua tratada que entra al sistema de distribuciónAgua tratada que entra al sistema de distribución
Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli o bacterias No debe detectarse en o bacterias No debe detectarse en o bacterias No debe detectarse en o bacterias No debe detectarse en coliformes termotolerantes ninguna muestra de coliformes termotolerantes ninguna muestra de coliformes termotolerantes ninguna muestra de coliformes termotolerantes ninguna muestra de 100ml100ml100ml100ml
•Agua tratada en el sistema de distribuciónAgua tratada en el sistema de distribuciónAgua tratada en el sistema de distribuciónAgua tratada en el sistema de distribución
Escherichia coliEscherichia coliEscherichia coliEscherichia coli o bacterias No debe ser detectado en o bacterias No debe ser detectado en o bacterias No debe ser detectado en o bacterias No debe ser detectado en coliformes termotolerantes coliformes termotolerantes coliformes termotolerantes coliformes termotolerantes ninguna muestra de 100mlninguna muestra de 100mlninguna muestra de 100mlninguna muestra de 100ml
Valores Guías en agua potable para verificar la calidad microbiológica
Escherichia coli por 100 mL de agua = 0
Muy difícil en estas situaciones por lo que se aplica esta clasificación según el grado de afectación a la salud. Por ejemplo:
�0 Escherichia coli/100ml, valor aceptable
�1-10 Escherichia coli/100ml, valor tolerable
�10-100 Escherichia coli/100ml, requiere tratamiento
�>100 Escherichia coli/100ml, inadecuado para el consumo sin
tratamiento apropiado.
Valor guía recomendado para la evaluación de lacalidad del agua en situaciones de emergencias y desastres.
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Límites permisibles para aguas de hemodiálisis
¿Que son los indicadores microbiológicos?
Microorganismos cuyas densidades o concentraciones en el agua pueden ser cuantitativamente relacionadas con el riesgo a la salud que implica ésta.
Un indicador microbiológico de la calidad del agua es generalmente (no necesariamente bacteria) el que ha entrado al agua al mismo tiempo que las heces, pero es más fácil de medir que el amplio rango de microorganismos de riesgo para la salud.
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�Debe ser empleado para la evaluación de la eficacia de los procesos del tratamiento.
Ej. indicador de un proceso, indicador de la desinfección, turbiedad como un indicador de la filtración.
�Debe ser usado con la finalidad que en sus orígenes jugaron los indicadores, como medida de la contaminación fecal.
Ej. índice de la contaminación fecal, conductividad en aguas subterráneas como un índice de deterioro.
Término Indicador
Término Índice
Características que debe tener un indicador:
• Estar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fueEstar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fueEstar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fueEstar ausente en aguas no contaminadas y presentes cuando la fuente de nte de nte de nte de microorganismos patógenos está presente.microorganismos patógenos está presente.microorganismos patógenos está presente.microorganismos patógenos está presente.
•No deben multiplicarse en el ambiente.No deben multiplicarse en el ambiente.No deben multiplicarse en el ambiente.No deben multiplicarse en el ambiente.
•Estar presentes en mayor número que los microorganismos patógenoEstar presentes en mayor número que los microorganismos patógenoEstar presentes en mayor número que los microorganismos patógenoEstar presentes en mayor número que los microorganismos patógenos.s.s.s.
•Responder a las condiciones del ambiente natural y a los procesoResponder a las condiciones del ambiente natural y a los procesoResponder a las condiciones del ambiente natural y a los procesoResponder a las condiciones del ambiente natural y a los procesos de tratamiento s de tratamiento s de tratamiento s de tratamiento de manera similar que los microorganismos patógenos.de manera similar que los microorganismos patógenos.de manera similar que los microorganismos patógenos.de manera similar que los microorganismos patógenos.
•Fáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionFáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionFáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionFáciles de aislar, identificar y enumerar por métodos convencionales.ales.ales.ales.
•Incrementar su número al aumentar el grado de contaminación en eIncrementar su número al aumentar el grado de contaminación en eIncrementar su número al aumentar el grado de contaminación en eIncrementar su número al aumentar el grado de contaminación en el medio.l medio.l medio.l medio.
•Aplicables a cualquier tipo de agua.Aplicables a cualquier tipo de agua.Aplicables a cualquier tipo de agua.Aplicables a cualquier tipo de agua.
•Mayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógeMayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógeMayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógeMayor y más predecible el tiempo de supervivencia que los patógenos.nos.nos.nos.
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Características que debe tener un indicador:
Actualmente se adicionan los siguientes:Actualmente se adicionan los siguientes:Actualmente se adicionan los siguientes:Actualmente se adicionan los siguientes:
•Las pruebas para su determinación deben ser baratas para el procLas pruebas para su determinación deben ser baratas para el procLas pruebas para su determinación deben ser baratas para el procLas pruebas para su determinación deben ser baratas para el procesamiento de esamiento de esamiento de esamiento de numerosas muestras.numerosas muestras.numerosas muestras.numerosas muestras.
•No deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la sNo deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la sNo deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la sNo deben ser microorganismos patógenos (reducir el riesgo a la salud de los alud de los alud de los alud de los analistas).analistas).analistas).analistas).
Los resultados negativos del indicador empleado en una muestra dLos resultados negativos del indicador empleado en una muestra dLos resultados negativos del indicador empleado en una muestra dLos resultados negativos del indicador empleado en una muestra de agua no e agua no e agua no e agua no garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.garantizan que la ausencia de microorganismos patógenos.
La detección de un microorganismo patógeno no está normalmente aLa detección de un microorganismo patógeno no está normalmente aLa detección de un microorganismo patógeno no está normalmente aLa detección de un microorganismo patógeno no está normalmente asociado a un sociado a un sociado a un sociado a un indicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patindicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patindicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patindicador ni tampoco indica la ausencia o presencia de otros patógenos.ógenos.ógenos.ógenos.
Ejemplos de varios métodos relacionados con el análisis de microorganismos.
Crecimiento selectivo en agar, conteo de unidades formadoras de colonias
Filtración pormembrana
Bacteria
Tinción inmunológica/conteo de quistes fluorescentes
Filtración porpor cartuchos/Separación inmunomagnética
Protozoosparásitos
Viruses
Cultivo de células/efecto citopático, conteo de unidades formadoras de placa
Detección/Enumeración
Adsorción-eluciónConcentración
Grupos de microorganismos
Métodos
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Métodos para la identificación y cuantificación de indicadores y patógenos bacterianos en aguas.
MÉTODOS CONVENCIONALES
* CUALITATIVO Ausencia/ Presencia { Hisopo de Moore{ Cultivo directo a) Volumen/volumen
b) Dilucionesc) Concentración
* CUANTITATIVO Tubos Múltiples: NMP { a) Diluciones decimalesb) Concentración por
Filtro de membranaTierra de diatomeas
Filtro de membrana: UFC { Concentración
10-1 10-2Peptonasalina
20 ml
Diluciones
0,01 ml
0,1 ml1 ml10 ml100 ml
1 ml1 ml 1 ml10 ml100 ml
FILTRACIÓN POR MEMBRANA (FM)
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Podría ser mejor el recobrado de microorganismos dañados o estresados en algunas circunstancias
El costo de los recursos es alto en algunos paísesLos recursos están disponibles en la mayoría de los países
No es aplicable a aguas turbiasAplicable a todo tipo de agua
Capaz de ser adaptado en el campoNo se puede adaptar a trabajo de campo
Los resultados son obtenidos directamente por conteo de colonias (alta precisión)
Los resultados son obtenidos indirectamente por aproximación estadística (baja precisión)
Menos sensibleMás sensible
Requiere menos cristaleríaRequiere más cristalería
Requiere menos medio de cultivoRequiere más medio de cultivo.
Menos laboriosoMás laborioso
Más rápida, resultados cuantitativos o presuntivos alrededor de 8 horas.
Más lenta, requiere 48 horas para observar la positividad
Técnica de Filtración por membranaTécnica de tubos múltiples
Comparación de dos métodos de ensayo más utilizados en la vigilancia de la calidad microbiológica del agua.
Conteo total de bacterias heterótrofas.
�Bacterias que requieren el carbono orgánico para su crecimiento. Incluyen la flora autóctona y la alóctonapresente.
�Se utiliza fundamentalmente la efectividad del proceso de tratamiento de agua.
�Es una medida del número de organismos con posible importancia sanitaria por ej. en aguas de hemodiálisis
�Podría ser una medida de la interferencia posible a la técnica de coliformes fecales con medios de cultivo con lactosa.
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Biofilm o biopelicula
Colonias de bacterias asentadas sobre las superficies de los circuitos hidráulicos, protegidas por un ecosistema de precipitados minerales y una matriz polisacárida mucosa extracelular, que se reproducen y generan en lugares de estancamiento. Su presencia se asocia a fuerte contaminación bacteriana >1000 UFC/ml. Es fuente activa de endotoxinas y otros derivados bacterianos biológicamente activos. Es resistente a la mayoría de los
desinfectantes.
Biofilm o biopelicula
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Biofilm o biopelicula
Son comunidades bacterianas englobadas en una matriz de exopolisacáridos producida por las bacterias y adheridas a una superficie viva o inerte.
En la naturaleza constituyen un modo de crecimiento protegido que permite la supervivencia de las bacterias en un medio hostil.
Las estructuras que forman estas microcolonias contienen canales por los que circulan los nutrientes, y en las distintas partes del biofilm las células expresan diferentes genes, como si fueran un tejido organizado.
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Conteo de bacterias heterótrofas
�Verificar efectividad de los procedimientos de limpieza y desinfección.
� Determinar el origen de la contaminación durante el proceso de diálisis.
�Verificar condiciones óptimas de almacenamiento y transporte del agua utilizada para alimentar el sistema de diálisis.
Grupo Coliforme
�El término coliforme fue usado por primera vez en los años 1980 y descrito como bacilos curvos aislado de heces humanas.
�Pertenecen taxonómicamente a la familia Enterobacteriaceae y comprende algunos géneros y especies.
�De los coliformes normalmente presentes en el intestino de los animales de sangre caliente, las bacterias de la especie E.coli son la mas numerosas y las que raramente crecen en el ambiente.
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Distribución del grupo coliforme en heces de humanos y animales.
4.0 (A)
7.4 (B)
2.0 (A)94.0 (A)
92.6 (B)
Heces animales
1.7 (A)1.5 (A)94.1 (A)
96.8 (B)
Heces humanas
Enterobacter/Citrobacter
Klebsiella sp.E.coli
Porcentaje de coliformes totalesTipo de muestra
(A) Dufour (1977)(B) Allen y Edberg (1995)
Coliformes totales
Representación gráfica del grupo coliforme
Coliformes fecales (actualmente termotolerantes)
Escherichia coli(≈95% de los coliformes en las heces)
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Coliformes totales (CT)
No son un grupo taxonómico
Bacterias Gram Negativas
No esporulados
Anaerobios facultativos
Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y
gas a 36±1º C en 24-48h
Hábitat: Tracto gastrointestinal de animales de sangre
caliente (son bacterias entéricas,) además son comunes en
otros ambientes como en suelos, vegetales, etc.
Ej.: Escherichia coli, Enterobacter spp., Citrobacter spp.,
Klebsiella spp.
Coliformes termotolerantes o fecales (CF)
No son un grupo taxonómico (Subgrupo de lo CT)
Bacterias Gram Negativas
No esporulados
Anaerobios facultativos
Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y gas
a 36±1º C en 24-48h y a 44.5 ±0.2 º C en 24 h
Hábitat: bacterias entéricas propias de las heces (E. coli,...)
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Escherichia coli
Especie bien definida taxonómicamente
Bacterias Gram Negativas
No esporulados
Anaerobios facultativos
Fermentadores de la lactosa con producción de ácido y gas
a 36±1º C en 24-48h y a 44.5 ±0.2 º C en 24 h
Característica de heces de animales homeotermos
Crecimiento (Turbidez)
Crecimiento (Turbidez)
Caldo Dextrosa azida (Presuntiva)Medio de Pfizer(Confirmativa)
Enterococos(Incubar 35°C ± 0.5°C)
Producción de gas y ácido
Caldo EC (Confirmativa)
Coliformes termotolerantes(Incubar 44.5°C ± 0.2°C)
Producción de gas y ácido
Producción de gas y ácido
Caldo Lactosado o Caldo Lauril Sulfato (Presuntiva)
Caldo Bilis verde Brillante(Confirmativa)
Coliformes totales(Incubar 35°C ± 0.5°C)
Reacción PositivaMedio de CultivoIndicador Bacteriano
Coliformes y enterococos-Tubos múltiples de ferment ación
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100,10,1m-Enterococos(Slanetz –Bartley)
Enterococos(Incubar 35°C ± 0.5°C)
24- 48 h
100,10,1m-FCColiformes termotolerantes
(Incubar 44.5°C ±0.2°C)
100,10,1Agar Endo LES o Medio m-Endo
Coliformes totales(Incubar 35°C ± 0.5°C)
Volumen inoculado (mL)
Medio de CultivoIndicador Bacteriano
Coliformes y enterococos-Filtración por membrana
� m-FC
� m-Enterococos
� m-Endo LES
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Ejemplos de género y especies del Grupo Coliforme dentro de la familia Enterobacteriaceae
Citrobacter diversusCitrobacter freundii
Citrobacter
Enterobacter cloacaeEnterobacter aerogenes
Enterobacter
Klebsiella pneumoniaeKlebsiella oxytoca
Kebsiella
Escherichia coliEscherichia
EspecieGénero
Estreptococos fecales y Enterococos
No forman un grupo taxonómico bien definido
Incluyen especies de los géneros Enterococcus y Streptococcus
Ej.: E. faecalis, E. faecium, E. durans, E. hiriae, E. avium,
E.gallinarum, E. cecorum y Streptococcus bovis, S. equinus,
S.intestinalis, S. alactolyticus, S. hyointestinalis y S.acidominimus
Los Enterococos según el criterio de Sherman´s
� Crecimiento a 35-45º C en 48h en medios estandarizados
� Capacidad de crecer a 10 y 45 ºC, a pH 9,6, en presencia de 6,5%
NaCl y de resistir a 60º C durante 30 min
� Crecimiento a pH 9.6
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�Están aún en etapa de desarrollo.
�La baja concentración de patógenos en el agua dificultan la sensibilidad de los métodos de detección.
�Sólo una pequeña parte del gran número de patógenos presentes son detectados.
�El análisis de las muestras de aguas para patógenos requiere de un laboratorio especializado con personal altamente calificado yentrenado y apropiadas medidas de bioseguridad.
�Aunque algunos patógenos pueden ser examinados rápidamente, la mayoría de los métodos de muestreo y detección necesitan varios días para verificar el resultado.
Métodos para detección de microorganismos patógenos.
1. Métodos de filtración.Adsorción/ elución de virusUltrafiltración
2. Métodos inmunológicosSeparación inmunomagnética (IMS)
3. Floculación.Adsorción de virus con hidróxido de aluminio.Floculación de quistes de Cryptosporidium con carbonato de calcio.
4. CentrifugaciónFlujo continuo de centrifugado Separación/aislamiento por densidad de gradiente
5. Citometría de flujo.6. Técnicas de preenriquecimiento y enriquecimiento.7. Otra técnicas (hidroextracción, extracción por solventes).
Métodos para el análisis de microorganismos patógenos.
25
1. Cultivo de bacterias.� Técnica del Número Más Probable (NMP) en medio líquido.� Prueba de Presencia/Ausencia en medio líquido.� Placa vertida.� Filtración por membrana.� Enriquecimiento en medio líquido +confirmación o aislamiento
en medio sólido.
2. Cultivo en células hospederas.� Cultivo de fagos.� Cultivo de virus (ej. Enterovirus)� Cultivo de protozoos sobre medios artificiales (ej. Entamoeba
hystolitica y Giardia lamblia).
Técnicas de cultivo de patógenos (más convencionales).
Género Salmonella
•Microorganismos pertenecientes a la familia Enterobacteriaceaeque tienen las siguientes características:
•Bacilos Gram Negativos, catalasa y oxidasa negativo.
•Anaerobios facultativos, usualmente fermentan la glucosa con producción de gas y de sulfuro de hidrógeno.
•Citrato es utilizado como única fuente de carbono.
•Decarboxilan la lisina y la ornitina.
•La mayoría de los diferentes serotipos (más de 2 000) están presentes en animales domésticos y salvajes y pueden ser reservorios de la salmonelosis humana
Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.
26
Flujograma de la técnica de Salmonella sp.
Muestra de agua
Siembra directa Hisopo de Moore Filtración por membrana
Agua peptonada bufferada (APB)
18-24h/35-37 °C
Caldo Rappaport Vassiliadis (RV) radio inóculo: 1/100Caldo Tetrationato Muller Kauffmann radio inóculo: 10/100
24h/42 °C
Agar Verde BrillanteAgar Salmonella Shigella
Agar XLD
18-24h/37 °C
Agar Kligler
18-24h/37 °CCultivos con imagen presuntiva
Pruebas bioquímicas y serológicas
Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.
Género Vibrio.
•Microorganismos pertenecientes a la familia Vibrionaceae que
tienen las siguientes características:
•Bacilos Gram negativos, no esporulados, rectos o curvos de
0.5-0.8 µµµµm de ancho y 1.5-3.0 µµµµm de largo.
•Aerobios y anaerobios facultativos.
•Móviles por flagelos monotricos o lofotricos.
•La mayoría de las especies son oxidasa y catalasa positiva y
fermentan la glucosa con producción de ácido (sin gas).
•Generalmente halofílicos y su hábitat natural en ambientes
marinos y estuarinos.
27
Modelo hipotético de transmisión de Vibrio cholerae en la naturaleza.
Características físicasy químicas del agua
•temperatura•luz solar•tensión de O2 disuelto•pH•lluvia•salinidad y otros•nutrientes químicos
Características biológicas
•afloramiento de algas•afloramiento de fitoplancton
Afloramiento de zooplancton(¿entra en los no cultivables ?)
V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae viable pero no cultivable en lacolumna de agua adherido a partículas.(¿relación de simbiosis o comensal?)
Transmisión de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae al hombre poringestión de agua con copépodoscolonizados u otros vectores.
Retorno de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae alagua por vía fecal.
Características físicasy químicas del agua
•temperatura•luz solar•tensión de O2 disuelto•pH•lluvia•salinidad y otros•nutrientes químicos
Características biológicas
•afloramiento de algas•afloramiento de fitoplancton
Afloramiento de zooplancton(¿entra en los no cultivables ?)
V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae viable pero no cultivable en lacolumna de agua adherido a partículas.(¿relación de simbiosis o comensal?)
Transmisión de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae al hombre poringestión de agua con copépodoscolonizados u otros vectores.
Retorno de V. cholerae V. cholerae V. cholerae V. cholerae alagua por vía fecal.
La fisiología y ecología de Vibrio cholerae en aguas
está estrechamente ligada a tres factores principales:
(1)la relación de temperatura y salinidad,
(2) adherencia a superficies
(3) colonización de la macrobiota con quitina.
28
Flujograma de la técnica de Vibrio cholerae.
Muestra de agua
Siembra directa Hisopo de Moore Filtración por membrana
Agua peptonada alcalina (APA)6-8 h y 18-24h/35-37 °C
Agar TCBSAgar MacConkey
18-24h/37 °C
Agar Kligler
18-24h/37 °CCultivos con imagen presuntiva
Pruebas bioqu²<<<as y serológicas
Flujograma para el aislamiento de Vibrio cholerae en plantas acuáticas.
Plantas acuáticas
Pesar 10gr de la muestra (porción apropiada) yHomogeneizar con 90ml de solución salina estéril
Enriquecimiento de 10ml en 5ml de APA (3X)
Incubar por 6-4 horas
Estriar sobre agar TCBS y agar TTGA
Incubar por 18-24 horas a 37ºC
Picar colonias sospechosas y subcultivar sobre placa s de AG
Identificación preliminar por la prueba de oxidasa
Pruebas bioquímicas y serológicas para Vibrio cholerae
29
Género Aeromonas (Familia Aeromonadaceae)
•Bacterias en forma de bacilos Gram negativos, no esporulados, de
0.4-1.0 µµµµm de ancho y 1.0-4.4 µµµµm de largo.
•Aerobios - anaerobios facultativos.
•Móviles por flagelos monotricos o lofotricos.
•La mayoría de las especies son oxidasa y catalasa positiva y
fermentan la glucosa con producción de ácido.
•Tienen requerimientos nutricionales simples.
•Su hábitat natural es en ambiente dulceacuícola.
Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.
Infecciones asociadas al género Aeromonas
•Causa infecciones en animales de sangre fría y caliente.
•En humanos son agentes causales de infecciones intestinales (diarrea, la más frecuente manifestación clínica) y extraintestinales (infecciones en heridas).
•En peces y algunos animales de sangre fría, pueden causar infecciones severas tales como la furunculosis.
30
Taxonomía.•Género: Aeromonas (Stanier 1943)•Familia: Aeromonadaceae (Colwell et al. 1986)•Orden: Aeromonadales (Martin-Carnahan y Joseph, 2005)•Especies: •Aeromonas allosaccharophila (Martinez-Murcia et al. 1992, sp. nov.)•Aeromonas caviae (ex Eddy 1962, Popoff 1984, sp. nov.) A. punctata subsp. caviae (Scherago, 1936)•Aeromonas culicicola (Pidiyar et al. 2002, sp. nov.) Aeromonas veroniibiovar sobria (Hickman-Brenner et al. 1988).•Aeromonas encheleia (Esteve et al. 1995).•Aeromonas enteropelogenes (Schubert et al. 1991 sp. nov.) Aeromonas trota (Carnahan et al. 1992).•Aeromonas eucrenophila (Schubert y Hegazi 1988, sp. nov.)•Aeromonas hydrophila (Chester 1901, Stanier 1943)•Aeromonas hydrophila subsp. anaerogenes (Schubert 1964)•Aeromonas hydrophila subsp. dhakensis (Huys et al. 2002)A•Aeromonas hydrophila subsp. hydrophila (Chester, 1901)•Aeromonas hydrophila subsp. proteolytica (Merkel et al. 1964)•Aeromonas hydrophila subsp. ranae (Huys et al. 2003 subsp. nov.)•Aeromonas ichthiosmia (Schubert et al. 1991, subsp. nov.)•Aeromonas jandaei (Carnahan et al. 1992, sp. nov.)•Aeromonas media (Allen et al. 1983, sp. nov.)•Aeromonas molluscorum (Minana-Galbis et al. 200, sp. nov.)•Aeromonas popoffii (Huys et al. 1997, sp. nov.)
Flujograma de la técnica de Aeromonas sp.
Muestra de agua
Hisopo de Moore Filtración por membrana
Agua peptonada alcalina
6-8h,18-24h/35-37°CAgar BBGS según Nishikawa o agar ADA
Agar MacConkey
18-24h/37°C
Agar Kligler
18-24h/37°CCultivos con imagen presuntiva
Pruebas bioquímicas
31
Género Plesiomonas
•Bacterias en forma de bacilos Gram negativos, no esporulados, de
0.8-1.0 µµµµm de ancho y 2.0-3.04 µµµµm de largo.
•Aerobios y anaerobios facultativos.
•Móviles por flagelo polar.
•La mayoría de las especies son oxidasa y catalasa positiva y
fermentan la glucosa con producción de ácido (sin gas)
•Tienen requerimientos nutricionales simples.
•Su hábitat natural es en ambiente dulceacuícola.
Patógenos bacterianos más frecuentes determinados en aguas.
Taxonomía.
Plesiomonas shigelloides corrig. (Bader 1954) Habs y Schubert 1962
Anteriormente perteneciente a la familia Vibrionaceae, propuesta actualmente dentro de la familia Enterobacteriaceae como un miembro del género Proteus o como un género solo con una única especie (Plesiomonas shigelloides).
Conocida también como:
Pseudomonas shigelloidesAeromonas shigelloidesFergusonia shigelloides
32
Algunas pruebas de diferenciación de los géneros Vibrio , Aeromonas y Plesiomonas .
--NT+dddd6% de NaCl
++NT+++++3% de NaCl
++---dddCrecimiento en:
0% de NaCl
dR&NTSSSSSO/129 150µµµµg � disco
+------dOrnitina decarboxilasa
+d---d-+Lisina decarboxilasa
++---++-Arginina dihidrolasa
++--+-++Nitrato
++-++-++Oxidasa
87654321PRUEBAS
GRUPOS
Simbolos : + todas las cepas son positivas,- todas las cepas son negativas, d diferentes características de cepa a cepa, S sensible, R resistente, NT no probada.Grupo 1 : V. cholerae , V. mimicus , V. parahaemolyticus , V. alginolyticus , V. harveyi , V. campbellii , V. fischeri y V. marinus .Grupo 2: V. fluvialis, V. furnissii, V. anguillarum, V. diazotrophicus, V. splendidus biovar 1, V. tubiashii, V. costicola, V. nereis, V. damsela, V. proteolyticus, V.orientalis y V. aestuarianus.Grupo 3 : V. metschnikovii .Grupo 4 : V. hollisae , V. natriegens , V. splendidus biovar II, V. nigripulchritudo y V. logei.Grupo 5 : V. ordalii .Grupo 6 : V. gazogenes .Grupo 7 : A. hydrophila , A. caviae , A. sobria y A. salmonicida .Grupo 8 : P. shigelloides .& algunas cepas de A. salmonicida son sensibles.Nota: Todas las cepas de Aeromonas fermentan la glucosa.Fuente : Lee JV, DonovanTJ. Vibrio , Aeromonas and Plesiomonas . En: Isolation and Identification of Microorganisms of Medical and Veterinary Importance. United Kingdom: Society for Applied Bacteriology, 1985:13-33.
Género Legionella
•Bacterias en forma de bacilos.
•Su hábitat natural es en ambiente dulceacuícola.
•Se multiplica entre 20-45°C y se destruye a 70 °C.
•Comprende 40 especies, siendo Legionella pneumophila la
mas común asociada a enfermedad.
•Posee una característica biológica importante que es la de
crecer intracelularmente en protozoos y en macrófagos
humanos.
33
Características de la enfermedad de los Legionarios y la fiebre de Pontiac.
No se conocen factores de riesgo
Factores de riesgo: fumadores, cáncer, enfermedades renales, diabetes mellitus
Período de incubación de aprox. 36 h
Período de incubación de 2-10 días
Similar a una influenza (no neumónica)
Neumonía progresiva, algunas veces fatal
Fiebre de PontiacEnfermedad de los Legionarios
Mayor reservorio de Legionella sp.: AGUA
Medio de transmisión primario:
Inhalación de bioaerosoles (en forma de gotas que d eben ser de una medida entre 1-5 µµµµm)
Fuentes conocidas para la transmisión de Legionella sp. por bioaerosoles.
Condensadores de torres de evaporación y enfriamiento, piscinas de recreación y de hidroterapia, saunas, spasOrnamentales de agua ornamentales, humedificadores
No potable(incluidas las aguas mineromedicinales)
Duchas, grifos, equipos de terapia respiratoria
Potable
Medios de transmisiónTipo de agua
34
Ejemplos de pruebas bioquímicas y serológicas.
Caldo para la fermentación de azúcares(sacarosa, L-arabinosa y D-manosa; manitol e inositol)
Caldo de tolerancia a sales
Prueba serológica con antisueroPrueba de la cuerda
Método de concentración por hisopo de Moore
35
Método de concentración por filtración por membrana
XAgar Chromocult enterococos (Merck)
XAgar Chromocult coliformes ES (Merck)
XAgar Chromocult coliformes (Merck)
XCaldo Fluorocult Lauril Sulfato (Merck)
XCaldo LMX según Manafi y Ossmer(Merck)
XCaldo READYCULT enterococos (Merck)
XCaldo READYCULT coliformes (Merck)
XCaldo Enterolert (IDEXX)
XCaldo Colilert (IDEXX)
Estreptococos fecales/ enterococos
Coliformes totales/ Escherichia coli
Medio de cultivo (Compañía)
Medios de cultivo cromogénicos y fluorogénicos útiles para la evaluación de la calidad microbiológica del agua en situaciones de emergencias y desastres
36
Métodos moleculares para la detección e identificación.
Biología molecular: disciplina bioquímica que estudia las moléculas de ácidos nucleicos: ácido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico (ARN)
�Hibridación del ADN.
�Endonucleasas de restricción.
�Amplificación de ácidos nucleicos (ADN o ARN).
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR), la más empleada en la detección de bacterias y sus productos (ej. Escherichia coli, Vibrio cholerae, Legionellapneumophila) y protozoos.�Clonación molecular(fragmento de restricción insertado en un vector ej fago)
�Secuenciación nucleotídica del ADN.
�Fluorescencia por hibridización in situ (FISH) para detección de bacterias y protozoos.
Fuente:www.udc.es Fuente:www.tododrogas.net Fuente:www.ciencia-hoy.retina.ar
Células viables y no cultivables de Vibrio cholerae por microscopía de epifluorescencia.
37
Métodos novedosos para la detección e identificación.
�Análisis por láser escáner con sustratos fluorogénicos.
(ej. Detección de coliformes y E. coli por ChemScan®, Chemunex®, Colifast®)
�Biosensores.
(ej. poseen tres componentes primarios: ópticos, técnicas de inmunoensayo y pruebas químicas para la detección de patógenos específicos).
�Microchip de DNA.
(ej. para la detección de indicadores y patógenos con la detección de DNA por GeneChip®).
Fuente:www.acg.no Fuente: sid.gsi.co.jp Fuente:www.consumaseguridad.com Fuente:privatewww.essex.ac.uk
Colifast ChemScan Biosensores Genechip
Microbiológicas (coliformes totales y fecales)InglaterraDELAgua
Microbiológicas (coliformes totales y fecales)Francia,Estados Unidos
Millipore Intertech
Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad, turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)
InglaterraHach Company
Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad, turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)Microbiológicas (coliformes totales y fecales)
InglaterraPotopak Limited
Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Fosfato, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, conductividad, turbiedad, oxígeno disuelto, etc.)Microbiológicas (coliformes totales y fecales)
InglaterraELE Internacional LTD
Físico - Químicas (Aluminio, Amonio, Calcio, Hierro, Manganeso, Nitrito, Nitrato, pH, etc.)
InglaterraBDH Lab Supplies
DeterminacionesPaísCompañía
Algunos equipo portátiles para el monitoreo de la calidad del agua muy útiles en situaciones de emergencia y desastres
38
Qué es una norma?�Es un documento establecido por consenso y aprobado por un organismo reconocido que establece, para usos comunes y repetidos, reglas, criterios o características para las actividades o sus resultados, que procura la obtención de un nivel óptimo de ordenamiento en un
contexto determinado.
�Surge como resultado de la actividad de normalización y es un documento que establece las condiciones
mínimas que debe reunir un producto o servicio para que sirva al uso al que está destinado.
Fuente:www.crid.or.cr
Características de la norma:
�Es un documento público, pueden ser referenciadas, consultadas y
utilizadas.
�Su aplicación es voluntaria pero en la mayoría de los casos, las
autoridades pueden dictar leyes o reglamentos obligatorios que
exigen dichas normas.
�Ayudan a mejorar la calidad, la seguridad y la competencia.
�Una norma técnica o estándar es un especificación que reglamenta
los procesos y productos para garantizar la interoperabilidad.
�Una norma de calidad es una regla o directriz para las actividades,
diseñada con el fin de conseguir el grado óptimo de orden en el
contexto de calidad.
�Las normas están en constante revisión y este proceso se comienza
cada vez que existan observaciones sólidas a incorporar.
39
Organismos internacionales que más frecuentemente se emplean sus guías y normativas para la calidad del agua y los métodos de ensayo
Siglas empleadas:
ISO: International Standardization Organization (Suiza)
APHA: American Public Health Association (Estados Unidos)
SCA: Standing Committee of Analyst of Environment Agency (Rei no Unido)
EPA: Environment Protection Agency (USA)
WHO: World Health Organization (Suiza)
CEE: Comisión Económica Europea
Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación de la calidad microbiológica del agua.
ISO 7899-1 (1984) Water quality-Detection and enumeration offaecal streptococci-Part 1: Method by enrichment in liquidmedium.ISO 7899-2 (1984) Water quality-Detection and enumeration offaecal streptococci-Part 2: Method by membrane filtration.
Estreptococos fecales
Estreptococos fecales
ISO 7899-2 (2000) Water quality-Detection and enumeration of intestinal enterococci -Part 2: Membrane filtration method.
Enterococos fecales
ISO 7899-1(1998) Water quality-Detection and enumeration of intestinal enterococci in surface and waste water-Part 1: Miniaturized method (Most Probable Number) by inoculation in liquid medium.
Enterococos fecales
ISO 9308-2 (1990) Water quality-Detection and enumeration of coliforms organisms, thermotolerant coliforms organisms and presumptive Escherichia coli-Part 2: Multiple tube (most probable number) method.
Bacterias coliformes, termotolerantes y Escherichia coli
ISO 9308-1 (2000) Water quality-Detection and enumeration of Escherichia coli and coliform bacteria-Part 1: Membrane filtration method.
Bacterias coliformes, termotolerantes y Escherichia coli
NormaMicroorganismos
40
Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación de la calidad microbiológica del agua (cont..)
ISO 8360-2 (1998) Water quality-Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa-Part 2: Membrane filtration method.
Pseudomonasaeruginosa
ISO 8360-1 (1998) Water quality-Detection and enumeration of Pseudomonas aeruginosa-Part 1: Method by enrichment in liquid medium.
Pseudomonasaeruginosa
ISO 6461-1 (1986) Water quality-Detection and enumeration of the spores of sulfite-reducing anaerobes (clostridia)-Part 1: Method by enrichment in liquid medium.
Bacterias esporuladasreductoras de sulfito (Clostridios)
ISO 6461-2 (1986) Water quality-Detection and enumeration of the spores of sulfite-reducing anaerobes (clostridia)-Part 2: Method by membrane filtration method.
Bacterias esporuladasreductoras de sulfito (Clostridios)
NormaMicroorganismos
Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación de la calidad microbiológica del agua (cont..)
ISO 6340 (1995) Water quality-Detection and enumeration of Salmonella.
Salmonella sp.
ISO 6222 (1999) Water quality-Enumeration of culturablemicroorganisms-Colony count by inoculation in a nutrient agar culture medium.
Microorganismoscultivables
ISO/DIS 11731-2 Water quality-Detection and enumeration of Legionella-Part 2: Direct membrane filtration for waters with low bacterial counts.
Legionella sp.
ISO 11731 (1998) Water quality-Detection and enumeration of Legionella Legionella.
Legionella sp.
NormaMicroorganismos
41
Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación de la calidad microbiológica del agua (cont..)
ISO 10705-4 Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages- Part 4: Enumeration of bacteriophages infecting Bacteroides fragilis.
Fagos de Bacteroides fragilis
ISO/DIS 10705-3 Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages- Part 3: Validation of methods for concentration of bacteriophages from water.
Concentración de bacteriófagos
ISO 10705-2 (2000) Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages-Part 2: Enumeration of somatic coliphages.
Colifagos somáticos
ISO 10705-1 (1995) Water quality-Detection and enumeration of bacteriophages- Part 1: Enumeration of F-specific RNA bacteriophages.
Fagos F-RNA
NormaMicroorganismos
Normas de métodos de ensayo asociados a la evaluación de la calidad microbiológica del agua (cont..)
ISO/CD 17994 Water quality-Criteria for the establishment of equivalence between microbiological methods.
Pruebas de equivalencia de métodos de cultivo microbiológicos
ISO 9998 (1991) Water quality-Practice for evaluating and controlling microbiological colony count media used in water in water quality tests.
Evaluación de conteo de colonias
ISO TR 13843 (2000) Water quality-Guidance on validation of microbiological methods.
Validación de métodos de cultivo microbiológicos
ISO 7704 (1985) Water quality-Evaluation of membrane filters used microbiological analyses.
Evaluación de filtros de membrana
CEN/TC 230 CEN/TC230/WG3/TGç. Enterovirus (Nr.12), Working Document, Draft Method, March 2000.
Enterovirus
NormaMicroorganismos
42
Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de coliformes, coliformes termotolerantes y Escherichia coli (NMP).
XAgar nutriente
XAgar MacConkey
XCaldo manitol lauril triptosa
XMedio de glutamatomodificado con minerales
XXMedio A1
XXXXCaldo lactosa bilis verde brillante
XXXMedio EC
XMedio de lactosa glutamato
XCaldo lactosado lauriltriptosa
XCaldo MacConkey
XXCaldo lactosado
NCEPASCAAPHAISO 9308-2
Medios de cultivo
Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de coliformes, coliformes termotolerantes y Escherichia coli (FM).
XAgar nutriente
XCaldo de lauril sulfato para membrana
XXXAgua de triptona
XAgar nutriente con MUG
XAgar MI
XAgar mEndo
XAgar mTEC
XAgar lauril sulfato
XXAgar m-EndoLES
XXMedio mFC con 1% de ácido rosólico
XCaldo Teepol con enriquecimiento de membrana
XAgar lactosa con Tergitol 7 o Teepol
XAgar TTC con Tergitol 7 o Teepol
EPASCAAPHAISO 9308-1Medios de cultivo
43
Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de estreptococos fecales (enterococos)(FM).
XXXAgar bilis esculina
XXCaldo de infusión de cerebro-corazón
XXAgar de infusión de cerebro-corazón
XAgar bilis esculina azida
XXAgar hierro esculina
XAgar mEI
XAgar Kanamicina esculina azida
XXAgar m-Enterococcus
XXAgar m-E
XXAgar Slanetz-Bartley con 1% de TTC
XAgar KF con 1% de TTC
EPASCAAPHAISO 7899-2Medios de cultivo
44
Medios de cultivo normalizados más utilizados para la determinación de Pseudomonas aeruginosa (NMP).
XXXXCaldo asparagina
XAgar leche con cetrimida
XXAgar King-F
XXAgar King-P
XCaldo malaquita
XXXCaldo acetamida
XCaldo asparagina con etanol
NCEPASCAAPHAISO 8360-1
Medios de cultivo
Medios de cultivo normalizados más utilizados parala determinación de Pseudomonas aeruginosa (FM).
XAgar leche con cetyltrimetilamoniobromuro
XAgar Pseudomonas
XXXXAgar leche
XXXAgar m-PA
EPASCAAPHAISO 8360-2
Medios de cultivo
Medios de cultivo más recomendados para la determin ación de indicadores bacterianos con sustratos cromogénicos y fluorogénicos.
XAgar mTEC (Difco) (EPA)
XAgar Chromocult (Merck) (Oxoid) (ISO)
XAgar MI (EPA)
XAgar nutriente con MUG (EPA)
XCaldo LMX según Manafi y Ossmer(Merck)
XCaldo READYCULT enterococos (Merck)
XCaldo READYCULT coliformes (Merck)
XCaldo Colilert (P/A) (EPA)
Estreptococos/ enterococos
Coliformes/ Escherichia coli
Medios de cultivo
45
Medios de cultivo más utilizados en la determinació n de algunos patógenos bacterianos aislados en aguas. Salmonella sp y Salmo nella typhi.
XXCaldo tretationato
XXXAgar tres azúcares (TSI)
XXXCaldo urea
XAgar urea
XXXAgar hierro lisina
XAgar Kligler
XXXXAgar bismuto sulfito
XXAgar xilosa lisina desoxicolato(XLD)
XXXXAgar verde brillante con rojo fenol
XXXCaldo selenito cistina
XXCaldo Rappaport Vassiliadis
XXXXAgua de peptona bufferada
EPASCAAPHAISO-6340 Medios de cultivo
Medios de cultivo más utilizados en la determinació n de algunos patógenos bacterianos aislados en aguas. Vibrio cholerae.
XXAgar nutriente
XXCaldo de decarboxilación de aminoácidos según Moeller
XAgar Kligler
XXXAgar triptona soya
XAgar MacConkey
XXXAgar TCBS
XXXAgua de peptona
SCAAPHAOPSMedios de cultivo
46
Medios de cultivo más utilizados en la determinació n de algunos patógenos bacterianos aislados en aguas. Aeromonas sp.
XXAgar nutriente
XAgar MacConkey
XAgar tres azúcares
XMedio de Kaper
XAgar hierro lisina
XMedio de oxidación fermentación según Hugh & Leifson
XXXAgar ampicillin dextrina
XXXAgua de peptona bufferada
EPASCAAPHAMedios de cultivo
¨Dicen que el agua será imprescindiblemucho más necesaria que el petróleo, los imperios de siempre por lo tantonos robarán el agua a borbotones, los regalos de boda serán grifos,agua darán los lauros de poesía,el Nóbel brindará una cataratay en la bolsa cotizarán las lluvias,los jubilados cobrarán goteras,los millonarios dueños del diluviovenderán lagrimas al por mayor,un capital se medirá por litros,cada empresa tendrá su remolino,su laguna prohibida a los foráneos,su museo de lodos prestigiosos,sus postales de nieve y de rocíos,y nosotros los pálidos sedientoscon la lengua reseca brindaremoscon el agua on the rocks”
Neruda
47
Gracias