Universidad Nacional autónoma de México

Facultad de estudios superiores Cuautitlán

Departamento de Ciencias Biológicas

Sección de Bioquímica y Farmacología Humanas

Asignatura Anatomía e Histología Humanas

Grupo 1302

Bioquímica Diagnostica

Microscopia Óptica, sus técnicas y la aplicación en Anatomía e Histología

Humana

Integrantes Celaya Díaz Andrea

Flores Pérez Luis Ángel

Rodríguez Gómez Lucía

Equipo No 1

Profesoras:

M en C, Tais Nopal Guerrero

María Verónica Vázquez Cianca

12 / febrero / 2014

19 / febrero / 2014

Objetivos

Conocer y poner en práctica los fundamentos de la microscopia óptica mediante la observación de laminillas histológicas previamente preparadas.

Aprender el manejo y cuidado adecuado del microscopio como parte importante de nuestro trabajo en laboratorio.

Introducción

El estudio detallado de los componentes de células y tejidos animales o vegetales, por el tamaño que poseen, requiere el uso de instrumentos que permitan ampliar muchas veces más la imagen de las estructuras que los constituyen.

El instrumento que fue empleado por los primeros biólogos para estudiar la célula y los tejidos, es el microscopio. El nombre deriva etimológicamente de dos raíces griegas: mikrós, que significa pequeño y skopéoo, que significa observar. Es decir el microscopio es un instrumento que sirve para observar objetos o estructuras pequeñas. (Montalvo Arenas, 2010)

El microscopio es el instrumento más utilizado en el estudio de células y tejidos. Se fue perfeccionando, tanto en su parte óptica como en su parte mecánica, gracias a los adelantos tecnológicos aplicados a los componentes antes mencionados. Se denominan compuestos porque la imagen se forma mediante la utilización de tres sistemas de lentes, cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y divergentes. Los sistemas de lentes son el condensador, los objetivos y los oculares. En la actualidad, el microscopio fotónico (óptico) es un instrumento de uso cotidiano en los laboratorios de investigación y de diagnóstico así como en las aulas de enseñanza de Biología, Embriología, Histología, Microbiología y Patología. (Montalvo Arenas, 2010)

El microscopio óptico está conformado por tres sistemas:

El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes que permiten el movimiento para el enfoque.

El sistema óptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas

El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y

regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio. (VIZCARRA MARTINEZ, 2008)

Existen varios tipos de Microscopios como.

Los microscopios simples: Son lentes de aumento de 8 a 20 aumentos, como las lupas que es un instrumento óptico cuya parte principal es una lente cóncava que se emplea para ampliar la visión de un objeto. Los microscopios compuestos: Llamados también ópticos o fotónico, porque se utiliza una fuente de luz que atraviesa la muestra, entre éstos tenemos los microscopios que utilizamos en nuestro laboratorio de biología, Utilizan uno o mas lentes para aumentar los objetos se utilizan para observar células vivas y organismos pequeños, estos microscopios pueden agrandar la imagen hasta 1500 veces. El microscopio Electrónico: Utiliza una fuente de electrones para observar la muestra y se clasifican en dos: 1) De Transmisión lineal porque los electrones atraviesan la muestra y la reflejan en una pantalla fluorescente, aumentando la imagen a unas 200,000 veces más que el ojo humano. 2) De Barrido Superficial porque los electrones no atraviesan la muestra, solamente recorren la superficie como si la barrieran, proyectándola en una pantalla de televisión, aumentando la imagen hasta 1,000,000 de veces.

Microscopio de fluorescencia: El microscopio de fluorescencia se utiliza para observar sustancia fluorescentes denominadas fluoròforos. Una molécula fluorescente es aquella que es capaz de captar radiación electromagnética con una longitud de onda determinada y emitir otra radiación electromagnética con otra longitud de onda diferente, normalmente dentro del espectro de la luz visible. Microscopio de contraste de fases: Realiza modificaciones en la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación. (VIZCARRA MARTINEZ, 2008)

Observaciones y resultados

ORGANO: Bazo TINCION: Hematoxilina-Eosina AUMENTO: 10x 10X AUMENTO TOTAL: 100X DESCRIPCION: Podemos observar una vista panorámica de los nódulos conectivos, arterias, senos venosos que conforman la estructura del Bazo.

ORGANO: Bazo TINCION: Hematoxilina-Eosina AUMENTO: 10x 40X AUMENTO TOTAL: 400X DESCRIPCION: Aquí se puede observar la imagen de un nódulo (en color morado y lila) mucho mas detallado y con alguna otras células presentes.

Análisis de resultados

Los métodos para la obtención de preparaciones histológicas ocupadas en los estudios de microscopia óptica, se engloban en la Técnica Histológica. La Técnica Histológica abarca varios procedimientos a los que se somete un tejido para proporcionar los cortes como se conocen, montados bajo un cubre objeto con imágenes de estructuras contrastadas, para su estudio bajo microscopia óptica o electrónica.

El ojo humano tiene una capacidad de resolución de 0,2 mm, lo que significa que no podemos diferenciar como separados y diferentes dos puntos que estén separados menos de 200μm. Para poder que podamos ver a un nivel más allá del de la simple vista deberemos utilizar instrumentos que tengan mayor resolución como son los microscopios.

ORGANO: BazoTINCION: Hematoxilina-eosinaAUMENTO: 10x 100x (aceite de inmersión) AUMENTOTOTAL: 1000XDESCRIPCION: En esta imagen se observan algunas células que creemos son sinusoides y cordones de Billroht.

MUESTRA: Corazón de Pollo OBSERVACIONES: La muestra se observo en un microscopio estereoscópico, el cual hace que la imagen se observe tridimensional. El color es café claro y en algunas partes rojo este color debido a la sangre que aun contenía.

En esta práctica y a lo largo del semestre utilizaremos el microscopio óptico y el estereoscópico.

Para poder observar la muestra a través del microscopio óptico está debe de ser preparada mediante un proceso específico. Todos estos pasos se conocen como procesamiento de la muestra. Los cuatro primeros corresponden a la inclusión, el quinto a la sección, los números 6-9 a la "deshidratación y tinción y el resto al montaje de la preparación.

El microscopio óptico posee un sistema de lentes (condensador, objetivos y oculares) a través de los cuales se amplifica y dirige la imagen de los objetos. La calidad de imagen que proporciona depende del límite de resolución. Su valor depende, fundamentalmente, de la longitud de onda de la luz y de la apertura numérica del objetivo. En los microscopios ópticos actuales, el límite de resolución es de 0.2 μm cuando se utiliza luz blanca.

La mayoría de los tejidos son incoloros, lo que dificulta su observación al microscopio. Por ello se introdujeron métodos para la coloración, que se efectúa usando mezclas de sustancias llamadas colorantes. Los colorantes son compuestos químicos naturales o artificiales que se caracterizan por tener uno o más grupos atómicos generadores de color, así como uno o más grupos con afinidad química hacia sustratos coloreables.

Ambos son colorantes denominados panópticos: aquellos que tiñen de forma general, y no específica, todos los componentes celulares. La más popular de estas tinciones es la tinción doble de hematoxilina-eosina, siendo la más popular debido a su capacidad de teñir un enorme número de diferentes estructuras tisulares, a su simplicidad y a su aplicabilidad a diferentes tejidos de procedencias diferentes.

La hematoxilina es un contraste básico y por lo tanto se unirá a las estructuras ácidas. La eosina es un colorante ácido y se unirá a las estructuras básicas. Aquellas estructuras con un pH intermedio se teñirán con ambos colorantes. Esencialmente la hematoxilina tiñe los núcleos de color azul negro, con buen detalle intracelular, mientras que la eosina tiñe el citoplasma celular y la mayoría de las fibras del tejido conectivo con distintas tonalidades de rosa.

En esta práctica observamos la laminilla del bazo con la tinción ya mencionada, el objetivo era aprender a usar correctamente el microscopio óptico con distintos objetivos.

También observamos un corazón de pollo con un corte transversal en un microscopio estereoscópico el cual se utiliza para ofrecer una imagen

estereoscópica o tridimensional de una muestra. Para ello, y como ocurre en la visión binocular convencional, es necesario que los dos ojos observen la imagen con ángulos ligeramente distintos. Obviamente todos los microscopios estereoscópicos, por definición, deben ser binoculares, por lo que a veces se confunden ambos términos. El microscopio estereoscópico es apropiado para observar objetos de tamaños relativamente grandes, por lo que no es necesario modificar los objetos a ver, (laminar) ni tampoco lo es que la luz pase a través de la muestra.

- Conclusiones -

Mediante el de uso practico del Microscopio se identifico cada una de los sistemas en que esta compuesto como lo es el sistema Óptico, Luminoso y Mecánico. Así como también se comprendió cada una de las funciones en que esta especializado cada sistema. Se Manipulo al microscopio con las precauciones debidas para dicho material ya que no se tubo ninguna ninguna falla o dificultad técnica. Al Enfocar la muestra se llevo a cabo cada uno de los pasos debidos para tener una la Iluminación óptima de Kohler ya que nuestra imagen en todos los casos fue muy clara y detallada. AL utilizar el microscopio Estereoscópico fue notable la diferencia de imagen que nos brinda en comparación con el microscopio óptico ya que la imagen es tridimensional esto se debe a que es un microscopio compuesto doble (binocular) es aquí donde las imágenes conservan su relieve que pueden observarse con los dos ojos.

Bibliografía

- Sobbota, Hammersen (1988) Histología, atlas en color de anatomía microscópica. 3ª edición México. Editorial Salvat.

- Williams, P., Warwick R. y Gray. (1985). Anatomía. Tomo I. España. Salvat Editores.

-Tortora, G.J. Introducción al cuerpo humano: fundamentos de anatomía y fisiología. 7ª ed. Méjico: Editorial Médica Panamericana; 2008.