50:26 Diciembre 2010Actualidad

Especial MICROBIOLOGA DE LAS AGUAS

Microbiota de moluscosJess Lpez Romalde

Departamento de Microbiologa y Parasitologa. CIBUSFacultad de Biologa,Universidad de Santiago de Compostela

El cultivo de moluscos bivalvos en Galicia tiene gran importancia econmica, ya que es una de las actividades deproduccin primaria esenciales en la regin y presenta unmercado consolidado. Durante mucho tiempo la semillanecesaria proceda de la captacin natural, pero en los ltimos aos el cultivo de ostra y almeja se enfrenta a una importante disminucin de los bancos naturales, achacable a lasobreexplotacin y a la entrada de moluscos de importacin,tanto en fase larvaria como incluso de ejemplares adultos.Por otro lado, la produccin de semilla en criaderos no est

garantizada debido a mortalidades fulminantes que puedenacabar con la produccin en pocos das. Adems, la introduccin de importaciones, difciles de controlar, aumentael riesgo de entrada de nuevas enfermedades. De hecho, enlas poblaciones en cultivo son tambin frecuentes los episodios de mortalidad, afectando principalmente a la almejafina, ms susceptible que otras especies de bivalvos.

Aunque se han realizado estudios sobre el estado sanitario de las poblaciones de moluscos bivalvos, la mayora deestos trabajos se han centrado en enfermedades parasita

Diciembre 2010 50:27Actualidad

Algunos de los miembrosdel Grupo (de izquierda aderecha: Ana L. Diguez(investigadora contratada),Alejandra Doce (BecariaMaria Barbeito [Xunta deGalicia]), Jess L. Romalde(Catedrtico), Sabela Bal-boa (Becaria FPI).

rias. En el caso de las enfermedades bacterianas, los trabajosson escasos consistiendo, muchas veces, en la bsquedaespecfica de la enfermedad del anillo marrn mediante laobservacin macroscpica de los bivalvos. Cabe destacar laausencia de estudios sobre la presencia de otras bacteriaspotencialmente patgenas en las poblaciones de bivalvos,en cultivo o naturales, en las diferentes zonas productorasde nuestro pas, a excepcin de unos estudios preliminaresllevados a cabo en Andaluca en cultivos de almeja fina porel grupo del Dr. Borrego y la Dra. Castro.

En la naturaleza no existen moluscos libres de bacterias,pero la distincin entre especies o cepas no patgenas y lasverdaderamente patgenas no suele ser fcil, as como nolo es el anlisis de los factores determinantes de la capacidadde virulencia de una especie o cepa determinada. En algunoscasos hay evidencias de que pueda ser ms un aspecto cuantitativo, ya que concentraciones altas de una cepa puedenprovocar la muerte de los moluscos, mientras que concentraciones bajas son toleradas sin producir la muerte ni sntomas de enfermedad. El estrs parece ser otro factor importante en el control de la susceptibilidad de bivalvos ainfecciones bacterianas.

El equipo de la Universidad de Santiago comenz sus trabajos de patologa de moluscos en la dcada de los 80, conel anlisis de vibrios patgenos para ostra. A partir de losaos 90 comienza su colaboracin con el equipo de la Universidad de Mlaga para el anlisis gentico de V. tapetis,agente causal de la enfermedad del anillo marrn en la almeja. Durante los ltimos aos, con el apoyo de diferentescofradas gallegas, y gracias a la obtencin de diferentes proyectos del Plan Nacional, nos hemos centrado en el estudiode la microbiota de bivalvos, tanto de bancos naturales comoen cultivo, incluyendo fases larvarias, juveniles y adultas.Para ello hemos aplicado aproximaciones polifsicas quecorrelacionen fenotipo y genotipo de patgenos potenciales,as como la evaluacin de factores de virulencia. Estos estudios nos estn permitiendo conocer el estado sanitarioactual, desde el punto de vista bacteriolgico, de estas pobla

ciones, lo que redundar en el desarrollo de mtodos dedeteccin de los principales patgenos y el establecimientode medidas preventivas de mortalidad. En este sentido, estamos estudiando de forma paralela la capacidad probiticade bacterias asociadas a dichos cultivos.

Durante varios aos se han realizado muestreos mensuales de almejas procedentes de cuatro cofradas gallegas,caracterizndose los principales grupos bacterianos detectados. Los muestreos han dado lugar a una coleccin de msde 3.000 cepas bacterianas. En la caracterizacin de las cepasfermentativas se observ una gran prevalencia de diferentesespecies del gnero Vibrio. As, del total de cepas fermentativas, el 77,67 % pertenecan al gnero Vibrio, el 17,35 % algnero Aeromonas y el 4,98 % fueron aislados fermentativosan no identificados. La caracterizacin polifsica, incluyendo mtodos fenotpicos, genticomoleculares (AFLP,secuenciacin, hibridacin DNADNA) y quimiotaxonmicosmostr una gran diversidad entre los aislados estudiados.La mayora de las cepas se identificaron como pertenecientesa especies conocidas dentro de la familia Vibrionaceae, comoV. alginolyticus, V. cyclitrophicus, V. diabolicus, V. kanaloae,V. pacinii, V. splendidus, V. tapetis y Aliivibrio (Vibrio) fischeri.Vibrio splendidus form un grupo muy heterogneo, agrupndose algunos de nuestros aislados en varios clusters diferenciados que constituyeron nuevas especies. As, hemosdescrito cinco nuevas especies dentro del gnero Vibrio: V.breoganii, V. gallaecicus, V. artabrorum, V. atlanticus y V. celticus, esta ltima con potencial patognico para almeja, yuna nueva especie dentro del gnero Aliivibrio: A. finisterrensis, algunas de ellas en colaboracin con el equipo delDr. De Vos de la BCCM/LMG. Por otro lado, hemos descritoV. ostreicida como agente responsable de mortalidad en larvas de ostra en criadero.

Con respecto a los aislados con metabolismo respiratorio,la identificacin de los grupos obtenidos en una caracterizacin preliminar en base a pruebas fenotpicas fue bastantecomplicada debido a la carencia en la literatura de clavesapropiadas, hecho posiblemente relacionado con la elevada

50:28 Diciembre 2010Actualidad

Especial MICROBIOLOGA DE LAS AGUAS

Fotografas electrnicasde transmisin (A) y debarrido (B) de la cepatipo de Aliivibrio finiste-rrensis CMJ 11.1T.

Fotografas electrnicasde transmisin (A) y debarrido (B) de la cepatipo de Aliivibrio finiste-rrensis CMJ 11.1T.

diversidad de estas bacterias, incluso dentro de un mismognero o especie. Se someti a los aislados de los distintosgrupos a experimentos de secuenciacin del gen del RNAribosmico 16S, con el fin de determinar correctamente laadscripcin de los mismos a especies bacterianas concretas.Los resultados obtenidos, indican que los gneros predominantes son Pseudoalteromonas (55 %) y Alteromonas (15 %).De los aislados asignados al gnero Pseudoalteromonas sloun 36 % pudieron ser asignados a una especie concreta, comoP. haloplanktis, P. espejiana, P. issachenkonii o P. citrea, quedando el resto de aislados identificados como Pseudoalteromonas sp. En el caso del gnero Alteromonas, ninguna delas secuencias obtenidas se relacion con especies ya conocidas del gnero.

Otros gneros detectados en menor proporcin sonTenacibaculum (T. mesophilum, Tenacibaculum sp.), Psychrobacter (Ps. aquimaris, Ps. nivimaris), Shewanella (S. colwelliana, S. fidelia, S. halifaxensis), Polaribacter, Luteimonas, Kopriimonas, Lacitrinux, Marinomonas, o Cobetia. Asimismo se handetectado algunos aislados pertenecientes a gneros debacterias Gram positivas como Arthrobacter o Nesterenkonia.

La falta de correlacin entre los grupos bioqumicos y losresultados de secuenciacin, nos indic la existencia de unnmero importante de posibles especies nuevas en estosgneros bacterianos. Debido a la imposibilidad de caracterizar en profundidad por mtodos moleculares la coleccincompleta de aislados, se hizo una seleccin de los mismospara el estudio de factores de virulencia que fue realizadoen colaboracin con el grupo de los Drs. Borrego y Castro

de la Universidad de Mlaga. Adems, llevamos a cabo conlas cepas seleccionadas diferentes ensayos de inoculacionesexperimentales en larvas de almeja. En estos experimentosse demostr el potencial patognico de 6 aislados, uno perteneciente a la especie Tenacibaculum mesophilum (descritahasta ahora como especie ambiental), un aislado relacionadoa las especies Pseudoalteromonas citrea/aurantia, otro comocercano a la especie Alteromonas genovensis y tres identificados slo a nivel de gnero como Pseudalteromonas spp.,que constituirn nuevas especies dentro del gnero en funcin de los resultados obtenidos.

Adems, dentro de las especies oxidativas caracterizadashemos detectado algunas con con potencial probitico(algunas especies de Pseudoalteromonas), cuya caracterizacin polifsica se esta abordando en la actualidad, gracias ala obtencin de financiacin para dos nuevos proyectos, unodel Plan Nacional (AGL201018438) y uno dentro del 7 Programa Marco europeo (REPROSEED).

LTIMAS PUBLICACIONES DEL GRUPOINVESTIGADOR

BeazHidalgo, R., I. Cleenwerck, S. Balboa, M. De Wachter, F.Thompson, J. Swings, P. De Vos & J.L. Romalde. 2008. Diversityof Vibrios associated with reared Galician clams. Systematicand Applied Microbiology 31: 215222.

BeazHidalgo, R., A. Doce, J. Pascual, A.E. Toranzo & J.L. Romalde.2009. Vibrio gallaecicus sp. nov. isolated from cultured clamsin Northwestern Spain. Systematic and Applied Microbiology32: 111117.

Diciembre 2010 50:29Actualidad

BeazHidalgo, R., I. Cleenwerck, S. Balboa, M. De Wachter, F.Thompson, J. Swings, P. De Vos & J.L. Romalde. 2008. Diversityof Vibrios associated with reared Galician clams. Systematicand Applied Microbiology 31: 215222.

BeazHidalgo, R., A. Doce, J. Pascual, A.E. Toranzo & J.L. Romalde.2009. Vibrio gallaecicus sp. nov. isolated from cultured clamsin Northwestern Spain. Systematic and Applied Microbiology32: 111117.

BeazHidalgo, R., A. Alperi, M.J. Figueras & J.L. Romalde. 2009.Aeromonas piscicola sp. nov., isolated from diseased fish. Systematic and Applied Microbiology 32: 471479.

Prado, S., J. Montes, J.L. Romalde & J.L. Barja. 2009. Marine bacteriafrom genus Phaeobacter with inhibitory activity against aquaculture pathogens. International Microbiology 12: 107114.

BeazHidalgo, R., A. Doce, S. Balboa, J.L. Barja & J.L. Romalde. 2010.Aliivibrio finisterrensis sp. nov. isolated from Manila clam, Ruditapes philippinarum and emended description of the genus Aliivibrio. International Journal of Systematic and EvolutionaryMicrobiology 60: 223228.

BeazHidalgo, R., S. Balboa, J.L. Romalde & M.J. Figueras. 2010.Diversity and pathogenicity of Vibrio species in cultured bivalvemolluscs. Environmental Microbiology Reports 2: 3443.

GmezGil, B., A. Roque, G. Rotllant, L. Peinado, J.L. Romalde, A.Doce, H. CabanillasBeltrn, L. Chimetto, & F.L. Thompson. 2010.Photobacterium swingsii sp. nov. isolated from marine organisms. International Journal of Systematic and EvolutionaryMicrobiology (En prensa).

BeazHidalgo, R., Diguez, A.L., I. Cleenwerck, S. Balboa, A Doce,P. de Vos & J.L. Romalde. 2010. Vibrio celticus sp nov., a newspecies within the Splendidus clade with pathogenic potentialfor clam. Systematic and Applied Microbiology doi: 10.1016/j.syapm.2010.06.007

Diguez A.L., R. BeazHidalgo, I. Cleenwerck, S. Balboa, P. de Vos& J.L. Romalde. 2010. Vibrio atlanticus sp. nov. and Vibrio artabrorum sp. nov. isolated from clams Ruditapes philippinarumand R. decussatus. International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (En prensa).