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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
IX Semana de Biologia da UFPB
Laboratório de Genética de Microrganismos - DBM
Biossegurança e Rotina LaboratorialBiossegurança e Rotina Laboratorial
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Técnicas MicrobiológicasTécnicas Microbiológicas
BiossegurançaBiossegurança
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BiossegurançaBiossegurança
Conjunto de procedimentos, ações, técnicas, metodologias, equipamentos e dispositivos capazes de eliminar ou minimizar riscos inerentes às atividades de pesquisa, produção, desenvolvimento, tecnológico, ensino e prestação de serviços, que podem comprometer a saúde do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos.
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
HistóricoHistórico
Conclusão:“A manipulação de culturas, espécies ou inalação de poeira contendo a bactéria Brucella é eminentemente perigosa para os trabalhadores de um laboratório.”
1941 – Meyer e Eddie – 74 casos de brucelose associados a laboratórios
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
222 infecções, sendo 21 fatais – 12% por acidentes relatados
1949 – Sulkin e Pike – Pesquisa sobre infecções associadas a laboratórios
HistóricoHistórico
1342 casos de infecções, sendo 72% das infecções por brucelose, tuberculose, tifo e infecção estreptocócica
1951 - Sulkin e Pike – Nova pesquisa
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HistóricoHistórico
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HistóricoHistórico
1974 – Classificação de Risco dos Agentes Etiológicos
1980 – Precauções universais na manipulação de fluídos corpóreos
1984 – Primeiro Workshop Brasileiro de Biossegurança - Fiocruz
1995 – Lei Brasileira de Biossegurança – Lei 897/95
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
1999 – Fundação da Associação Nacional de Biossegurança (ANBio)
1999 – Primeiro Congresso Brasileiro de Biossegurança
2000 – Biossegurança como discíplina científica universitária
2001 – Indução de ações em biossegurança pelo CNPq
HistóricoHistórico
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Tipos de RiscosTipos de Riscos
Físicos
Químicos
Biológicos
Acidentes e Ergonômicos
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Tipos de RiscosTipos de Riscos
Físicos
Químicos
Biológicos
Acidentes e Ergonômicos
-Provocados por algum tipo de energia;
- A caracterização depende do equipamento;
- Principais:* Equipamentos que geram calor ou chamas;
* Equipamentos de baixa temperatura;
* Material radioativo
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Tipos de RiscosTipos de Riscos
-Conhecimento das substâncias químicas;
- Cuidados adequados para o manuseio.
Físicos
Químicos
Biológicos
Acidentes e Ergonômicos
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Tipos de RiscosTipos de Riscos
- Decorrentes da exposição à produtos de animais, vegetais e microrganismos;
- Agentes microbiológicos:* Grau de patogenicidade* Poder de invasão* Resistência a esterilização* Virulência* Capacidade mutagênica
- Vias de contaminação.
Físicos
Químicos
Biológicos
Acidentes e Ergonômicos
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Tipos de RiscosTipos de Riscos
- Fatores que gerem situações de risco para a integridade física e moral;
- Fatores que possam interferir nas características psicofisiológicas.
Físicos
Químicos
Biológicos
Acidentes e Ergonômicos
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Classificação dos MicroorganismosClassificação dos Microorganismos
Classe 2:
Risco individual moderado e baixo risco para a comunidade.
Nível de Segurança 2
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Uso de BarreirasUso de Barreiras
Equipamentos de Proteção Individual (EPI):
Proteção contra o contato com agentes infecciosos, tóxicos ou corrosivos, calor excessivo, fogo dentre outros.
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Uso de BarreirasUso de Barreiras
Equipamentos de Proteção Coletiva:
Proteção dos pesquisadores, do ambiente e da pesquisa desenvolvida.
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
BiossegurançaBiossegurança
Manuseio de produtos biológicos envolve:
Limpeza
Desinfecção
Esterilização
Descontaminação
Anti-sepsia
Assepsia
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilização
Calor
Radiação
Filtração
Processos Físicos:
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilização
Calor
Radiação
Filtração
- Calor úmido (vapor sob pressão) – Autoclave, maior poder de penetração e redução do número de microrganismos.
- Calor seco - Incineração, flambagem ar quente (estufa)
Processos Físicos:
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilizaçãoAUTOCLAVE - Dispositivo selado que permite a entrada de vapor sob pressão.
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
ESTUFA - Calor secoAção: desnaturação das proteínas microbiana
EsterilizaçãoEsterilização
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilização
Calor
Radiação
Filtração
- Flambagem
Esterilização de alças e agulhas.
Processos Físicos:
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilização
Calor
Radiação
Filtração
- Radiação eletromagnética Exemplos:• microondas• radiação ultravioleta• raios X• raios γ• elétrons
Processos Físicos:
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Radiação ultravioleta – Capela de Fluxo Laminar
EsterilizaçãoEsterilização
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilização
Calor
Radiação
Filtração
- Remoção dos microrganismos de líquidos e gases sensíveis ao calor:
* Glicose
* Antibióticos
* Reagentes químicos
Processos Físicos:
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilização
Tipos de filtros:
A) Filtro de profundidadeB) Membrana filtranteC) Filtro de trilhas de nuleação
A) B) C)
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilizaçãoFiltração:
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilizaçãoFiltro de trilhas de nucleação - microscopia eletrônica de varredura
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EsterilizaçãoEsterilizaçãoProdutos Químicos – Desinfetantes e Esterilizantes
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Atividades no laboratório:
Planejamento das tarefas
Condições adequadas
Material necessário
Maior segurança
Menor desperdício
BiossegurançaBiossegurança
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Técnicas MicrobiológicasTécnicas Microbiológicas
Rotina LaboratorialRotina Laboratorial
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Cultivo e ManutençãoCultivo e Manutenção
Meios de Cultura:
Mistura de nutrientes requeridos para a sobrevivência e crescimento dos microorganismos em um sistema artificial.
Podem ser em caldo (líquido) ou ágar (sólido).
Meios líquidos - úteis para a obtenção de grande biomassa de microrganismos
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Cultivo e ManutençãoCultivo e Manutenção
Meios quimicamente definidos:(Meios com finalidades especiais)
Meios seletivos
Meios diferenciais
Meios de enriquecimento
Meios para anaeróbios
Meios para o cultivo de bactérias (Geral-BHI)
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Métodos de CultivoMétodos de Cultivo
Inoculação:
• Técnica de esgotamento por estrias
• Técnica da semeadura em superfície
• Inundação
• Diluição por extinção(Obtenção de cultura pura, originada à partir de uma
única célula (UFC) – A suspensão original da amostra é diluída seriadamente e semeiam-se amostras de cada diluição))
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Medida do CrescimentoMedida do Crescimento
Método Quantitativo:• Avaliação do número de células - UFC/mL – Unidades Formadoras de Colônias por mL
ex.: Contagem celular microscópica ou eletrônica, contagem em placa ou através de membrana filtrante..
Método Qualitativo: Avaliação do peso celular ou estimativa de unidades de absorbância da massa de células
em caldo ou suspensões (turbidez)..
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Identificação dos MicroorganismosIdentificação dos Microorganismos
Características Culturais
Morfologia Colonial
Características Morfológicas
Coloração simples
Coloração diferencial
Coloração de Gram
Microscopia Óptica
Características Metabólicas
Características Fisiológicas
Características Antigênicas
Características patogênicas
Características genéticas
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
EstocagemEstocagem
Conservação de Culturas Puras:
• Conservação por um curto período (dias a meses):
Armazenagem à temperatura de refrigeradores (4°C a 10°C) - Repiques freqüentes
• Conservação por longos períodos:Nitrogênio líquido a -196°CFreezers a -70°C/ -120°CLiofilização – congelamento a seco - viabilidade das
culturas por muitos anos - coleção de microrganismos como referência.
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Material: Material: Tubos Tubos de Cultura e Placas de Petri de Cultura e Placas de Petri
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Material Material Instrumentos Instrumentos para Transferência de Culturas para Transferência de Culturas
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Microbiologia de Bactérias Gram-positivas: Uma Abordagem Etnofarmacológica
Obrigada!!!!!Obrigada!!!!!