Metode PrepariranJA insekata
-
Upload
duongnguyet -
Category
Documents
-
view
352 -
download
12
Transcript of Metode PrepariranJA insekata
Za detaljnije proučavanje insekata
neophodno je poznavati
terminologiju kojom se opisuje
morfologija njihovog tela u
adekvatnoj literaturi.
A – H bodenje i sisanje
(A cikada, B stenica, C
buva, D - H komaraci i drugi
dvokrilci)
I lizanje (muva)
obad muva
leptir
1 = scape; scapus [1/4/5]; 1st basal segment [2];
1st segment [3]
2 = pedicel; pedicellus (pl. pedicelli) [1/4/5]; 2nd
basal segment [2]; 2nd segment [3]
3 = postpedicel [1/4/5]; 3rd segment [2/3]; 1st
flagellomere
4 = 1st segment of style; stylus (pl. styli) [1]; 1st
apical part [2]; 1st microsegment [3];
flagellomere [4]
5 = 2nd segment of style [1]; 2nd apical part [2];
2nd microsegment [3]
6 = sensory element (probably a remnant of the
terminal segment of stylus) [6]; 3rd segment of
stylus [1]; sensillum [2]; terminal spine or bristle
[3]; aristomere [4]
3-6 = flagellum (recommended for use in Nematocera
only) [1]; compound 3rd segment [2/4]
4-6 = style [1]; style or arista (in Asilinae &
Leptogastrinae) [2/5]; flagellar style
7 = hair
8 = bristle; seta (pl. setae) [2]
9 = pit [3]
10 = sensory element [6]
a. čekinjasta b. končasta
c. perlasta d. testerasta
e. češljasta f.
g. glavičasta, buzdovanasta h. kolenasta
i. lamelarna j. perasta
mesoscutum
propodeum
Odonata
Lepidoptera
cerci
Hymenoptera: Braconidae
Diptera: Limoniidae
Megarhyssa sp.
Hymenoptera:
Ichneumonidae
3 para valvi
• binokular
• fina entomološka pinceta
• nekoliko entomoloških igala i kukica
različitih debljina
• kadice za disekciju
• grejač za vodu
• sušara
• predmetna stakla sa i bez komore
• pokrovna stakla
• hemikalije: medijum za lepljenje
disekovanih delova, koh,
toluol/ksilol, alkohol, dest. voda
• Krupni insekti se posle
razapinjanja (leptiri, vilini konjici,
skakavci...) direktno probadaju
entomološkim iglama
odgovarajuće debljine i dužine
• Stiniji insekti (muve, neki
opnokrilci...) probadaju se veoma
tankim iglama (minucijama) koje
se nabadaju na komadić stiropora
ili plastozoida koji se naknadno
probode ent. iglom za čuvanje u
zbirci
• Insekti veličine 1-3 mm
obično se lepe na kartone
koji se probadaju ent.
iglama
• Mogu se lepiti pojedinačno
ili u seriji
• Lepak mora biti vodotopiv u
slučaju demontiranja
• Shellac gel, Hoyerov
medium...
• Mikroskopski preparati (slajdovi) insekata ili drugih artropodnih grupa
podrazumavaju cele jedinke ili odabrane delove tela koji su montirani na
predmetna stakla zbog detaljnijeg proučavanja:
• Merenje dužine/ širine delova tela
• Brojanje određenih struktura na izabranom karakteru
• FAZE PREPARIRANJA
1. disekcija
2. čišćenje hitinskih struktura
3. dehidratacija
4. montiranje
5. pokrivanje preparata
• Često je neophodno proučavati insekte detaljnije
• Potrebno je napraviti njihovu disekciju
• Može biti disekovan celi insekt ili pojedini njegovi delovi
(glava, usni aparat, krila, genitalije...)
• Disekovani delovi se obično čuvaju kao trajni, ređe
privremeni, mikroskopski preparati
• Ponekad se krupniji disekovani delovi
(genitalije, zadnja krila tfvrdokrilaca ili
stenica) mogu lepiti na kartone, koji
se probadaju istom iglom na kojoj je
preparirani insekt
Materijal čuvan u alkoholu
• Rehidratacija u dest. vodi
• Sitnije jedinke, 1- 2mm nije neophodno omekšavati
• Krupnije primerke omekšavati kuvanjem u 10% KOH na 95°C
oko 10min. Ukoliko se radi o krilatim insektima, pre kuvanja
obavezno isčupati i sačuvati krila!
• Prebaciti u posudu za disekciju (keramičku ili plastičnu)
• Disekovati pomoću finih pinceta i entomoloških igala
• Odstraniti mišiće i meka tkiva sa hitinskih struktura
• INSEKTE NIKADA NE KONZERVISATI U FORMALDEHIDU!
Suv materijal
• Obavezno kvašenje i hidratacija u dest. vodi
• Za brzo razmekšavanje materijal kuvati na 95°C oko 10
min. Ukoliko se radi o krilatim insektima (membranozna
krila), pre kuvanja obavezno ih isčupati i sačuvati, da ne bi
došlo do njihovog oštećenja!
• Prebaciti u posudu za disekciju
• Medijum za disekciju je voda
• Disekovati pomoću finih pinceta i entomoloških igala
• Odstraniti mišiće i meka tkiva sa hitinskih struktura
• Odstranjivanje mišića i mekih tkiva sa hitinskih struktura
sprovodi zbog nesmetanog postavljanja i posmatranja
disekovanih delova na predmetnom staklu
• Čišćenje može biti hemijsko i mehaničko
• Hemijski se meka tkiva odstranjuju kuvanjem u 10%
KOH
• Mehanički: pomoću igala ili finih pinceta pod
binokularnom lupom
• Ukoliko je potrebno deblje hitinske strukture prosvetliti
toluolom
• Sprovodi se progresivnom serijom alkohola u konc: 50%,
80%, 95% i 100%
• Alternativa je dva ispiranja u konc. sirćetnoj kiselini
(naročito pogodno za biljne vaši)
• Prosvetljavanje hitinskih struktura (ukoliko je neophodno)
sprovesti držanjem disekovanih delova insekta u ksilolu
ili toluolu oko 10 min
• KSILOL I TOLUOL SU VRLO OTROVNI! Raditi u kapeli!
• Ovako napravljeni preparati se mogu čuvati večno
Pri montiranju u Canada balsam-u
Pri montiranju u gum-hloralnim rastvorima
• Prethodno nije neophodno sprovoditi seriju alkohola
• Ovakvi rastvori su vodotopivi!
• Takođe, ovi rastvori se mešaju i sa etil-alkoholom!
• Ukoliko je potrebno, prosvetljavanje debljih hitinskih
struktura sprovesti držanjem disekovanih delova insekta
u ksilolu oko 10 min
• Posle ovakvog tretmana neophodno je sprovesti ispiranje
u dest, vodi i dehidrataciju u CH3CH2OH
• Ovako napravljeni preparati nisu trajni (vek do 10
godina). Podaci iz literature: mogu trajati i do 40 god.
Adialytus sp.
Fam. Braconidae
Hymenoptera
• Staviti adekvatnu količinu lepljive
supstance: kanada balzam, Berlezov,
Švanov, Hojerov ili drugi lepljivi rastvor
na predmetno staklo
• Premestiti disekovane objekte iz
posude za disekciju na predmetno
staklo
• Rasporediti i orijentisati delove tela
što je moguće preciznije
• Pokriti pokrovnim staklom
• Sušiti preparate: u kanada balzamu
6 nedelja, u berlezovov ili švanovom
rastvoru 2 nedelje
• Veoma sitni i providni insekti mogu se montirati na
predmetna stakla bez prethodnog tretmana
• Takođe, krila mnogih insekata ne moraju se prethodno
tretirati metodama za odmašćivanje, prosvetljivanje...
• Ljušture Ostracoda, Crustacea montiraju se na crne
kartone zbog postizanja kontrasta
• Podrazumeva pokrivanje napravljenog mikroskopskog
preparata staklenom ljuspicom
• Preporuka: pokriti preparat 1 dan po postavljanju
disekovanih delova tela insekata. Na taj način se ne
remeti orijentacija disekovanih delova, odnosno ne dolazi
do njihove rotacije pri pokrivanja
• Vreme sušenja preparata
varira. Za gum-hloralne
preparate potrebno je oko 10
dana na 45 - 50°C
• Za preparate u Canada-
balzamu oko 45 – 60 dana na
45 - 50°C
• Nakon perioda sušenja preparati se mogu smestiti u za
to predviđene kutije
• Neophodno je da preparati
budu obeleženi: lokalitet,
datum i legator sa leve
strane slajda i podaci o
vrsti, delu tela koji je na
slajdu, determinatora ili neki
drgi koristni podatak
• Ponekad je neophodno
preparirati genitalije insekata da
bi se uspešno izvršila
determinacija na specijskom
nivou
• Insekte držati u vlažnoj sredini
3 dana
• To je obično dobro zatvorena
posuda u kojoj je vlažan pesak
preko koga se stavi papir, a na
papir pripremljeni insekti
Aedeagus Coleoptera: Curculionidae
• Raskvašenim insektima je onda lako manipulisati jer ne
dolazi do loma ekstremiteta i krila
• Krupnije insekte držati u ruci i pod binokularom
• Pomoću savijene entomološke igle (kukica) pažljivo
izvući genitalije iz abdomena
• Sitnije insekte disekovati u kadici u koju je sipana voda
(da ne bi došlo do gubljenja jedinke)
• Pridržavati finom pincetom, kukicom izvlačiti genitalije
• Jednom raskvašeni insekti se ne mogu kasnije
upotrebljavati za DNK analize!
aedeagus Hymenoptera: Vespidae
• Krupne genitalne aparate (2 i više mm) lepiti na karton
(trougao) i postaviti ispod disekovanog insekta
• Sitnije genitalije ili ukoliko je potrebno rasčlanjivanje
edeagusa na delove, stavljaju se na predmetna stakla
i prave se mikroskopski preparati
• Procedura pravljenja je kao što je prethodno opisano
• Na slici je prikazan
preparirani insekt i
disekovani i slikani polni
organi mužjaka i ženke na
osnovu kojih se može jasno
identifikovati teško
raspoznatljiva vrsta
• Izvlačenje polnih organa insekata koji su prethodno
zalepljeni na kartone bez odlepljivanja:
• Za sitnije insekte ili insekte koji su pozajmljeni i postoji
mogućnost oštećenja
• pripremiti sud u kome će ključati voda
• Finom četkicom kvasiti vrh abdomena desetak min.
• Pokušati izvlačenje spoljašnjih genitalija pod binokularom
• Ponoviti postupak, ukoliko 10 min. nije bilo dovoljno
• Pomešati vodu, konc. sirćetnu kiselinu i
glukozni sirup (može trajati sedmicu!)
• Dodati gumu arabiku i mešati do potpunog
rastvaranja
• Na kraju dodati hloral hidrat (zaštita od gljiva)
• koristiti tek kad nestanu mehurići
• 10 ml dest. voda
• 3 ml konc. sirćetna kiselina
• 8 g Gum Arabic
• 5 ml dekstroza/glukoza
• 75 g hloral hidrat
• Prvo rastvoriti gumu arabiku u dest. vodi i staviti da se meša 24h.
• Onda dodati kristale hloral – hidrata i mešati dok sve lepo ne
rastvori.
• Na kraju dodati glicerin
• Procedura može trajati nekoliko dana
• Ukoliko je potrebno medijum profiltrirati kroz (markizet) sačekati
nekoliko dana da se ostatak nerastvorenih čestica staloži i pretočiti
u drugi sud.
• 25 ml dest. vode
• 15 gm Gum Arabic
• 10 ml glicerin
• 100 gm hloral hidrat