Metoda e difusionit të diqeve-testimi i sensibilitetit të bakterjeve ndaj agjentëve antimikrobial

Materiali i nevojshëm

HBI 2 ml në tub(epruvetë) Pipeta Pincë/bombol me vrimë nxjerrëse Flakëdhënesi Pllakat e pjetrit me terren ushqyes Mac conkey agar/Muller- Hinto ιι agar Shtame bakteriologjike(enterobacteriaceae) Disku me agjentet antimikriobial/antibiotiët Ѵortex Ѵizore/kallper

Procedura-përgatitja e terrenit ushqyes(Mac Conkey Agar)

Është medium selektiv dhe diferencial.Mac conkey agar është i dizajnuar që në mënyr selektive t΄i izoloj bakteriet gram negative dhe bacilet enterike dhe t′i diferencoi ato që fermentojnë laktozën nga ato që nuk fermentojnë.Substancë ushqyese na nevoitet për katër pllaka pjetri,që një pllakë e pjetrit merë tretësirë 15-30ml,andaj ne po e kalkulojmë për 30ml pra është më mirë të kalkulohet gjithmonë më shumë.Në kutinë (fig.1.),ndodhet substancë ushqyese 500g, të cilën duhetë tretur në 1l ose 1oooml, andaj neve kjo sasi nuk na nevoitet atëherë do ta kalkulojmë për 120ml se qfarë sasie na nevoitet për ta peshuar atëherë e gjejmë sipas këtij proporcioni:

500g → 1000ml

X → 120ml

X =500g x120ml1000ml =60g

Fig.1. Subëstanca ushqyese

1

Kështu merren dhe peshohen 60g subëstancë ushqyese, dhe hidhen në ni erlenmajer ku më parë janë shti 120ml ujë(H2O).

Mbulohet erlenmajeri me foli dhe vendoset në ni pajisje të quajturë resho (fig.2.),dhe lihetë deri në vlimë të vrullëshum.

Fig.2. Ngrohja e subëstancës ushqyese në resho

Pasi të jëtë ngrohur erlenmajerin e kalojmë në ni aparatë i quajturë autoklav(fig.3.)

Fig.3.Autoklavë

Autoklavizimi realizohet përmes avujve të nxehtë të ujitë nën presion, në temperaturë 121°C,presion 1.1 atmosfer dhe lihet rreth 15 minuta.

2

Në vazhdim erlenmajerin e vendosim në banjo ujore dhe lihetë 15 minuta,porë me qëllim të ftohjes më shpejtë, atëherë muretë e erlenmajerit pas një kohe të qëndrimit në banjo ujore, lagen me ujë të ftohtë të çezmës.

Pas kësaj në kabinën e sigurisë,subëstancën ushqyese e vendosim nëpër enët e pjetrit (Fig.4.)mbyllen enët dhe lihenë rreth 5 minuta që të ngurtësohet .

Fig.4. Subëstanca ushqyese në pllakën resistente

Patajë mediumi i përgatitur vendosët në pajisjen e quajturë termostatë (fig.5.),dhe lihetë rreth 24 orë në temperaturë 37°C.

Fig.5.Termostatë

3

Procedura e dytë

Mirën 2 ml bujonë nga epruveta e parë me pipetë dhe shtihenë në epruvetën e dyt.

Epruveta 1 Epruveta 2 Pipeta për marrjen e mostrës

Me shkopë steril/strisho mirën rreth 5 koloni individuale (enterobacteriaceae),dhe transferohen në epruvetën e dytë me 2 ml HBI dhe përzihet.

Marria e bakterieve me strisho

4

Pastajë mirën 0.1 ml nga epruveta e dytë dhe shtihën në mediumin(Mac conkey agar),dhe me shkopë steril shpërndahet në mënyrë uniforme.

Shtrirja e mostrës në mediumë me shkopë metalik

Lihetë kapaku i pllakës së pjetërit paksa hapurë për rreth 5 minuta (jo më shumë se 15 minuta), për të lejuarë ndonjë lagështi të tepërt që të apsorbohetë para se mu apliku disqet.

Në vazhdimë mirët pinca dhe sterilizohetë në flakë dhe lihetë paksa të ftohetë.

Sterilizimi i pincës në flakë

5

Në vazhdimë me pincë meret disku nga antbiotiku(Penicillin,Ampicillinë,Polymixinë),dhe vendoset ne mediumë(Mac conkey agar),dhe vendosja e tyre bëhetë me kujdesë dhe në momentinë e vendosjesë shtypenë paksa me pincë .

Vendosja e disqeve me pincë LLoi disku

Vendosja e disqeve mundë të bëhetë edhe me Bombol me vrimë nxjerrëse të diskut.

Bombol me vrimë nxjerrëse të diskutë

Pastajë mediuminë e vendosimë në termostatë për 24 orë në temperaturë 37°C.

6

Procedura e tretë → interpretipi i rezultateve

Pasë 24orëve,me anë të vizorës metrike matetë diametri i zonës së inhibimit të rritjesë së bakterieve për secilinë antibiotikë që është përdorurë.

Matja e zonës së inhibimitë

Kjo zonë e kthjellët është e njohurë si zona e inkibicionitë.

Interpretimi i rezultateve bëhetë sipasë udhëzimitë NCCLS.

Zona e diametrit(mm),interpretimi i tabelës

Antibiotic Resistent Intermediate NdjeshëmTetracyclline 14 15-18 19Ciprofloxacine 15 16-20 21Enoxacin 14 15-17 18Penicillin-Staphyloccoci 28 29Tombromycine 12 13-14 15Ceftriaxone 13 14-20 21Kanomycin 13 14-17 18Cilindomycin 14 15-20 21Piperacillin-Gram neg. 17 18-20 21Ampicillin Gram-entericis 13 14-16 17Saphylococci 28 29Polymixyna 12Ampicillina Penicilina

Mentori :Dr.sc.Prof .Afrim Hamidi

7

Ass. Fatbardha Kurti E punoi: Mirsim Tovërlani

8