Mediation of TCDD Toxicity

PCDD,PCDF และ PCB ถู�กวัดการแสดงฤทธิ์��ของพิ�ษ โดย ARH pathway โดยเปร�ยบเท�ยบสตวั�เล� ยงล�กด!วัยนมท�$ม� ARH 1 pathway กบ zebrafish ท�$ม� AHR 2 pathway

AHR 1 ของ zebrafish น นจะม�กล&'มล(าดบเบสท�$คล!ายกบ AHR ของสตวั�เล� ยงล�กด!วัยนม ในขณะท�$ AHR 2 ม�ล(าดบเบสท�$เหม-อนกน แต'การท(างานต'างกนท�$ type 1 receptor

ARNT,ARNT 1 และ ARNT 2 ถู�กใช้!วั�น�จฉัยพิ�ษในสตวั�เล� ยงล�กด!วัยนม ส'วันการเพิ�$มข0 นเป1น 2 เท'า ของ ARNT,zfARNT2b และ zfARNT1 ถู�กใช้!วั�น�จฉัยพิ�ษใน zebrafish

COS-7 cells เคยถู�กใช้!ในการตรวัจย�นของ zebrafish ผ่'าน transactivation assays โดย ใช้!การเร-องแสง เช้'น

เทคน�คในการหา AHR/ARNT heteromer ซึ่0$งเก�$ยวัข!องกบการเก�ดพิ�ษของ TCDD โดย zfAHR1 จะจบกบ zfARNTs แต' zfAHR2 ม� affinity ส�งมากในการจบกบ TCDD

ISH แสดงให!เห4นวั'า zfAHR2 mRNA ม�มากกวั'า zfARH1 ในระยะแรก ๆ ของการพิฒนา และจะท(างานร'วัมกบ zfARNT2a,b และ c ในเน- อเย-$อช้น�ดเด�ยวักนกบ zfCYP1a

และ Detoxification gene ถู�กเหน�$ยวัน(าผ่'านทาง AHR pathway

เน-$องจาก zfAHR2 เป1นส'วันหน0$งของ AHR ซึ่0$งเป1นส-$อกลางในการพิฒนาพิ�ษของ TCDD ใน zebrafish นอกจากน� แม!วั'า zfARNT2b อาจจะเก�$ยวัข!องกบพิ�ษของ TCDD , zfARNT1

เป1น factor ส(าคญในกระบวันการ transcription ข!อสร&ปน� ถู�กสนบสน&นโดย การฉั�ด MO ซึ่0$งต'อต!าน zfAHR2 โดยการป8องกนการเปล�$ยนแปลงของ TCDD ใน embryo ท�$ได!รบ TCDD เช้'นเด�ยวักบ zfARNZT1 อาจจะเป1น dimerization partner ของ zfAHR2 เพิราะ MO target จะไปต'อต!าน zfARNZT1 ซึ่0$งจะช้'วัย embryo จากการได!รบพิ�ษของ TCDD ในขณะท�$ MO target ท�$ต'อต!าน zfARNT2 ไม'สามารถูป8องกนพิ�ษได! ดงน นการกลายพินธิ์&�ของ ARNT2 ใน zebrafish จะยงคงแสดงผ่ลกระทบอย�'เม-$อได!รบ TCDD

AHR/ARNT heterodimer เป1นสาเหต&ให!ม�การเปล�$ยนแปลงการแสดงออกของย�น โดยการจบกบ XREs ของย�นเป8าหมาย เช้'น CYP1a

CYP1a antibodies ถู�กใช้!อย'างแพิร'หลายในการเหน�$ยวัน(าเน- อเย-$อต'าง ๆ และโดยเฉัพิาะท�$เส!นเล-อดของ zabrafish embryo

เม-$อเร4วั ๆ น� การ Knockdown CYP1a โดย MO ไม'สามารถูป8องกนการเก�ดพิ�ษของ TCDD ใน zebrafish ได! รวัมท งยงลด blood flow,pericardial edema,impaired jaw development

และท(าลาย erythropoiesis โดยผ่ลข!างต!นถู�กประเม�น 3 staged ค-อ 72,96 และ 144 hpf

ดงน น CYP1a สามารถูใช้!เป1น marker ของ AHR pathway induction ได! ซึ่0$ง CYP1a ไม'ได!เก�$ยวัข!องกบการเป1นส-$อกลาง ในการเก�ดพิ�ษของ TCDD ของ zebrafish embryo ได! ซึ่0$งตรงข!ามกบรายงานก'อนหน!าน� ท�$คาดวั'า CYP1a เป1นส-$อกลางของ TCDD ในการเหน�$ยวัน(าให!เก�ดพิ�ษ ใน zebrafish

ในการศึ0กษาก'อนหน!าน� inhibitor ของ CYP1a และ CYPs ท$วัไป ช้'วัยเพิ�$ม blood flow

ใน dorsal midbrain ใน TCDD-treated zebrafish ท�$ 50 hpf และ knockdown ของ CYP1a กบ MO ยงช้'วัยไม'ให!เก�ด pericardial edema ท�$ถู�กเหน�$ยวัน(าโดย TCDD ท�$ 72 hpf