Diversität und Spaltung - Digitale Medien in der Gesellschaft
Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und...
-
Upload
reginar-herrmann -
Category
Documents
-
view
218 -
download
2
Transcript of Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und...
![Page 1: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/1.jpg)
Mechanismus der V(D)J Rekombination
Signale auf DNA Ebene: RSS
Rekombinasekomplex
Spaltung und Verknüpfung der Segmente
![Page 2: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/2.jpg)
V(D)J Rekombination
Deletion undInversion
![Page 3: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/3.jpg)
Erkennungssequenzen auf DNA EbeneRSS: „recognition signal sequences“
1-turn Signal: Heptamer-12-Nonamer
2-turn Signal: Heptamer-23-Nonamer
Rekombination nur zwischen 1-turn Signalund einem 2-turn Signal möglich
![Page 4: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/4.jpg)
weiss: 1-turnschwarz: 2-turn
Anordnung der RSS für einen Lokus identisch,bei verschiedenen Loci unterschiedlich
![Page 5: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/5.jpg)
Verknüpfung der Signalenden: präziseVerknüpfung der kodierenden Segmente: „unpräzise“
![Page 6: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/6.jpg)
Einzelschritte der V(D)J Rekombination:
Zusammenführungder Signale
Spaltung und Bildung der Haarnadelschleife
Öffnen der Haarnadelschleifeund Endbearbeitung
Reparatur undLigation
![Page 7: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/7.jpg)
Synapsis:
kombiniertes Schneiden,Zusammenführen der Enden
in Komplex, der alle 4 Enden bindet
![Page 8: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/8.jpg)
V(D)J Rekombinase:RAG1 und RAG2 (recombination activation genes)
einzige lymphoid-spezifische Faktoren für Rekombinationandere Faktoren in allen Zellen vorhanden
k.o. Mäuse: keine reifen T und B Zellen, keine anderen Defekte
RAG1 + RAG2 binden RSS und spalten DNA zwischenHeptamer und kodierendem Segment
2 Stufen:Nick am 5´-Ende des HeptamersHairpin Bildung
Mg2+HMG1 und 2 erhöhen Effizienz der Spaltung am 2-turn RSSund bevorzugte 1-turn + 2-turn Paarung
![Page 9: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/10.jpg)
Spätere Stadien der Rekombination:Spalten des Hairpin und Verknüpfung der Enden
DNA Doppelstrangbruch-Reparaturenzyme:
DNA-PKArtemisKu ProteineDNA Ligase IVXRCC4Histon H2AXMre11/Rad50/Nbs1 Komplex
![Page 11: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/11.jpg)
Öffnen des Hairpin:
DNA-PK phosphoryliert und aktiviert Artemis,Endonuklease, welche Hairpin spaltet
![Page 12: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/12.jpg)
„Junctional Diversity“
![Page 13: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/13.jpg)
„Coding joints“
Nukleotide gehen verloren, kommen neu dazu (ohne Template)
P-Nukleotide: „hairpin“
N-Nukleotide: TdT (terminal deoxynucleotidyl transferase) bis zu 15 N
Exonuklease
![Page 14: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/14.jpg)
Artemis: bei Defekt humane SCID FormDNA-PK bindet und aktiviert Artemis durch Phosphorylierung,Artemis bekommt dadurch Endonuklease-Aktivität für Hairpin und5´- und 3´-überhängende Einzelstrang-DNA
DNA-PKbesteht aus Katalyt. DNA-PKs Untereinheit und Ku Protein-Heterodimer (Ku70 und Ku80)Ku bindet DNA, überbrückt Enden
DNA Ligase IV / XRCC4 Komplexauch wichtig, da defekte Zellen bestrahlungssensitiv sind, und keine signal- oder coding joints machen können
weiters vermutlich beteiligt:Histon H2AX
Mre11/Rad50/Nbs1 Komplex: DNA repair in Hefefördert Verknüpfung von DNA an Mikrohomologien ?
![Page 15: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/15.jpg)
Nonhomologous DNA end-joining proteins
![Page 16: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/17.jpg)
Regulation der Zugänglichkeit eines Lokus
Hypothesen:Germ line TranskriptionDNA DemethylierungHiston Acetylierung
![Page 18: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/18.jpg)
Rekombination und transkriptionelle Aktivität
![Page 19: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/19.jpg)
Non T cells
Early thymocytes
E deleted
![Page 20: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/20.jpg)
Stadien der B Zellreifung
![Page 21: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/21.jpg)
Stadien der T Zellreifung
![Page 22: Mechanismus der V(D)J Rekombination Signale auf DNA Ebene: RSS Rekombinasekomplex Spaltung und Verknüpfung der Segmente.](https://reader034.fdocument.pub/reader034/viewer/2022042721/570491c21a28ab14218d9095/html5/thumbnails/22.jpg)
M