Показатели общего анализа крови

Различия в выполнении анализа традиционным методом и на гематологическом анализаторе

Традиционно при исследовании ОАК часть параметров определяется, а некоторая часть рассчитывается. Рекомендованные для использования в КДЛ методики в 70–80 гг прошлого века были унифицированы для лабораторий республик, входивших в СССР и получили название унифицированных методов исследования.

В последующие десятилетия были ознаменованы широким распространением гематологических анализатором, существенно облегчивших и стандартизировавших работу КДЛ. На сегодняшний день в КДЛ могут использоваться как традиционные методы оценки показателей ОАК так и применение гематологических анализаторов.

Показатель Традиционный метод Гематологический анализаторКонцентрация гемоглобина гемоглобинцианидный метод гемихромный метод

Подсчет эритроцитов

в камере Горяева световая микроскопия кондуктометрический метод

Подсчет лейкоцитов в камере Горяева световая микроскопия кондуктометрический метод

Подсчет тромбоцитов

в камере Горяева световая микроскопия; в мазке крови по Фонио

кондуктометрический метод

Гематокрит гематокритная центрифугарасчёт по формуле с использованием среднего объема клетки (MCV) и числа клеток

Средний объем эритроцита расчёт по формуле определение кондуктометрическим

методомДругие эритроцитарные индексы

расчёт по формулам расчет по формулам

Устройство камеры Горяева

Камера Горяева на 2 препарата (слева) и на 4 препарата (справа)

Камера Горяева — представляет собой устройство, предназначенное для подсчета клеток под микроскопом. Наиболее надежными зарекомендовали камеры выточенные из одного куска стекла, «склеенные» камеры, состоящие из нескольких фрагментов, продемонстрировали меньшую надежность при интенсивной эксплуатации.

Сетка камеры Горяева (А — внешний вид, Б — квадраты для подсчета эритроцитов, B — квадраты для подсчета лейкоцитов, Г — квадраты для подсчета тромбоцитов)

Однако, несмотря на доступность камерных методов подсчета количества форменных элементов крови, в настоящее время они постепенно вытесняются методами подсчета клеток на гематологических анализаторах, преимуществом аппаратного подсчёта являются: большая производительность, возможность одновременного подсчета всех форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов), определения дополнительных показателей, характеризующих форменные элементы (эритроцитарные индексы, группы лейкоцитов, тромбоцитарные индексы и другие).

В современных гематологических анализаторах реализуются различные принципы для определения показателей ОАК. Для получения результатов используется комбинация из нескольких методов измерения:

Импедансометрический метод (метод Культера) используется для определения количества клеток и распределение объема лейкоцитов (WBC), эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT).

Фотометрическое измерение поглощения света используется для определения концентрации гемоглобина (HGB).

Оптическое измерение светорассеивания и преломления используется для определения параметров дифференциации пяти популяции лейкоцитов (LYM%, MON%, NEU%, EOS%, BAS%).

Импедансометрический метод

Импедансометрический метод (также известный как метод Культера) определяет концентрацию и распределение объема клеток в зависимости от изменения электрического сопротивления, когда частица в проводящей жидкости проходит через маленькую апертуру. Метод также называется «волюметрическим», так как небольшой известный объем крови разбавляется раствором дилюента и проходит через апертуру по установленной норме.

Метод импеданса

Постоянный ток протекает между двумя электродами с обеих сторон апертуры. Каждая клетка при прохождении через апертуру вызывает изменение импеданса проводящей суспензии клеток крови. Эти изменения регистрируются анализатром как увеличение напряжения между электродами. Количество импульсов определяет количество клеток. Амплитуда импульса пропорциональна объему клетки.

Электронное распознавание позволяет отделить эритроциты (RBC) и тромбоциты (PLT). Литическая реакция лизирует эритроциты для точного измерения лейкоцитов (WBC).

Измерения эритроцитов (RBC) и тромбоцитов (PLT), основанные на методе импеданса, представлены на гистограммах. На данных диаграммах отображено количество клеток (на оси Y) и размер клеток (на оси Х).

Маленькие клетки отображены на левой части гистограммы, большие — на правой. Высота гистограммы заданного размера представляет количество клеток с данным размером. Чем больше высота гистограммы, тем больше клеток.

Экран с результатами гистограммы

Дискриминаторы (предел) отмечены красным цветом. Тромбоциты (RBC) расположены в крайней левой части гистограммы RBC и слева от красного дискриминатора. Гистограмма PLT – это увеличенная область данной области.

Фотометрическое измерение поглощения света

Лизированный раствор пробы можно подвергнуть анализу на гемоглобин (HGB) на основе устойчивого содержания хромогена. Реагент лизирует клетки крови, высвобождающие гемоглобин.

Впоследствии концентрация гемоглобина измеряется фотометрическим путем через камеру WBC. Фактический гемоглобин пробы рассчитывается как разность бланка и измерения крови с/без освещения, чтобы сократить эффект преломления жидкости и светового возмущения.

Фотометрическое измерение поглощения света

Оптическое измерение светорассеивания и преломления

Оптическое измерение светорассеивания и преломления используется для определения параметров дифференциации пяти популяции лейкоцитов (LYM%, MON%, NEU%, EOS%, BAS%). В оптической измерительной головке находится сфокусированный лазер, направляемый на поток лейкоцитов. Изменения интенсивности рассеянного лазерного излучения, проходящего через клетки, определяется объемом и структурой клеток. Изменения фиксируются системой детектора как рост напряжения.

Количество импульсов пропорционально количеству частиц. Интенсивность каждого импульса пропорциональна объему и гранулярности клеток крови. Дифференциация пяти популяций WBC строится на двухмерной диаграмме объема и распределения гранулярности.

Диаграмма оптической измерительной головки Abacus 5

Клетки большего размера, объема или гранулярности обычно рассеивают больше света. Интенсивность рассеянного света улавливается системой обработки оптических сигналов.

Клеточное светорассеяние

Внешняя структура (и размер клетки) вызывают рассеяние на малые углы. Внутренняя структура вызывает рассеяние на большие углы. Разные углы света улавливаются оптическими датчиками. Таким образом, система получает информацию по двум независимым параметрам об одной клетке, передающей луч света.

Система обработки оптических сигналов

Полученные данные заносятся в плоскую систему координат. Схожие клетки несут схожие характеристики, благодаря чему аналитическое программное обеспечение может дифференцировать клетки и представить диаграммы рассеяния 4-диф. и базофилов.

Диаграмма рассеяния базофилов

Во избежание появления артефактов необходимо проводить регулярное техническое обслуживание, а также требуется постоянно выполнять измерение гематологических контролей для гарантирования эффективного функционирования анализатора. Данная процедура более подробно описана в инструкции пользователя на анализатор Abacus 5.

Процесс измерения

Анализатор измеряет количество эритроцитов, тромбоцитов и лейкоцитов при помощи различных растворов и методов.

В растворе WBC эритроциты лизируются при помощи специального реагента. Весь процесс проиллюстрирован ниже.

Ограничения

Несмотря на то, что гематалогические анализаторы являются высококачественным прибором в своей категории, а также очень полезным инструментом для проведения автоматического гематологического исследования в лабораториях малого и среднего размера, пользователи должны иметь ввиду, что прибор, тем не менее, имеет некоторые ограничения, которые следует учитывать при эксплуатации. Однако для преодоления данных ограничений в прибор встроен специальный алгоритм флажков, которые указывают на возможные технические ошибки или на наличие незрелых клеток или идиобластов, которые анализатор может неточно распознать. Засчет своей

устойчивости к лизирующей процедуре, ядросодержащие эритроциты (NRBC) могут быть приняты за лейкоциты. Это может увеличить общее количество WBC. Схожий размер и структура могут препятствовать подсчету лимфоцитов.

Более того, вследствие их особой реакции на лизирующий эффект, например, нестандартные клетки, бласты, незрелые клетки и активированные лимфоциты могут ошибочно увеличить количество базофилов и/или моноцитов. Активированные лимфоциты (изменчивая форма) и моноциты могут образовать сплошное скопление и в результате количество моноцитов может быть ошибочно завышено, в то время как присутствует активация лимфоцитов (например, в случае вирусных инфекций, таких как мононуклеоз) количество лимфоцитов может быть ошибочно занижено. Пожалуйста, имейте ввиду, что анализатор не выдает интерпретирующих флажков, если параметр измерения вышел за пределы линейности, но рядом с численным значением параметра появляется линейный флажок «*». Если количество определенной популяции клеток ниже или выше верхнего предела диапазона линейности анализатора, прибор может не выдать численный результат. Однако клетки будут отчетливо видны на диаграмме рассеяния и гистограмме, и появится флажок, указывающий на исправление ошибки.

В случае, если количество выше предела диапазона линейности существует высокая вероятность совмещения (т.е. через детектор проходит одновременно несколько клеток). В данном случае для обеспечения точных результатов необходимо выполнить ручное разведение образца физ.раствором и провести повторное измерение. Крайне высокое количество WBC может ошибочно повысить MCV эритроцитов.

Такое высокое количество WBC может повлиять на количество RBC, которое в действительности может быть несколько ниже. Высокое количество клеток или измененные лейкограммы с аномальными клетками характерны для злокачественных гематологических опухолей, и точная интерпретация результатов всегда имеет значение. В общем, необходимо провести визуальный анализ мазка крови аномальных образцов.

Нормальный диапазон значений

Нормальный диапазон значений может варьироваться и зависеть от применяемых технологий. Для установления нормальных значений, которые будут применимы для местного населения, рекомендуется провести ваше собственное исследование.

Системные флажки

Анализатор Abacus 5 имеет несколько видов предупреждающих флажков: диапазона