markerov u NSCLC...VENTANA PD-L1 (SP263) Roche u nás zatiaľ nepoužívame Pracovné dni Roche...

Testovanie prediktívnych

markerov u NSCLCAko to robíme v UNLP Košice

RNDr. Lucia Fröhlichová, PhD.

RNDr. Katarína Fiedlerová

Oddelenie patológie, UNLP Košice

Pracovné dni Roche Tissue Diagnostics, Kurdějov, 29-30.11.2018

Táto prezentácia/prednáška bola podporená spoločnosťou Roche Slovensko, s.r.o.

Spoločnosť Roche Slovensko, s.r.o. však nijako neovplyvňovala obsah, rozsah a ani

formulácie textu tejto prezentácie


Karcinóm pľúc

nádory pľúc – sú celosvetovo jednou z najčastejšie diagnostikových

malignít

len 10-15% pacientov je vyliečených

80-90% sú fajčiari (aktívni i pasívni)

rýchlo progredujúce ochorenie

trend - individualizácia terapie na základe molekulového profilu

ochorenia

v popredí záujmu stoja hlavne NSCLC


Klasifikácia

Aktuálne podľa WHO 2015

Adenokarcinómy

Skvamocelulárne karcinómy NSCLC

Adenoskvamózne karcinómy

Neuroendokrinné karcinómy

Veľkobunkové karcinómy

Iné – menej časté

Stage, grade ochorenia, postihnutie LU


Materiál a metodiky

Prioritne histologické rezy z FFPE nádorového tkaniva – pre IHC, mutačnú

analýzu, FISH (BS, core-cut, tenkoihlové bi, resekáty)

V prípade nedostupnosti – cytologický materiál (punktát, brushing, laváže..)

Voľba materiálu a metodiky - vždy podľa odporúčaní (FDA, výrobcu

diagnostického kitu, medzinárodných a národných smerníc.....)-IHC, ISH, PCR

Potreba externej medzinárodnej kontroly kvality


Diagnostika NSCLC Diagnostické markery – histomorfológia, imunohistochémia – TTF1, Napsin A, p63, CK 5/6


CK 5/6 p63 Napsin A TTF1

Skvamocelulárny karcinóm Adenokarcinóm

Molekulová patológia NSCLC

Prognostické a prediktívne markery pre voľbu liečby NSCLC

Aktuálne – EGFR mutačný status (Idylla, výsledok do 3 hodín)

Prestavba génov ALK a ROS1

Expresia PD-L1 proteínu

Zatiaľ bez významu pre voľbu liečby – KRAS mutačný status, BRAF mutácie,

HER2 amplifikácia, stav génov RET, MET, PIK3CA, IGF1R, FGFR1,2, NTRK1


L. Cheng et al, Molecular pathology of lung cancer: key to personalized medicine,

Modern Pathology (2012) 25, 347–369


A. Chan, G.M. Hughes, Targeted therapy for non-small cell lung cancer: current standards and the promise of the future, TLCR, Vol 4, No 1, 2015

http://tlcr.amegroups.com/issue/view/125

Algoritmus vyšetrení prediktívnych

markerov na Oddelení patológie UNLP


NSCLC

Adenokarcinóm, N.O.S.

Adenoskvamóznykarcinóm

Skvamocelulárnykarcinóm

EGFR mut. analýza

ALK IHC

Mutácia EGFR

Bez mutácie

EGFR (WT)

ALK IHC pozit.

FISH ALK, ROS1

ALK, ROS1 FISH pozit.

ALK, ROS1 FISH negat.

Ak je pacient mladý, nefajčiar s limitovanou

vzorkou, zvážiť vyšetrenie mut. EGFR,

ALK príp. ROS1

PD-L1 IHC

PD-L1 IHC

TPS ≥ 1%TPS ≥50%TPS ˂50%

Molekulová genetika NSCLC

„Driver“ mutácie – aktivujúce – selekčne zvýhodňujú nádorové bunky

Mutácie v géne EGFR (del 19 exóne, L858R v 21exóne)

EGFR rezistenčné mutácie – získané sekundárne mutácie (T790M, D761Y, inzercie v exóne 20) – rezistencia na TKI

Prestavby génov ALK, ROS1 vedúce ku konštitutívnej aktivácii tyrozín- kináz

Expresia proteínov (ligandov) PD-L1 na nádorových bunkách – vymanenie sa spod imunitného dozoru



NSCLC




EGFR mut. analýza

ALK IHC

Mutácia EGFR

Bez mutácie

EGFR (WT)

ALK IHC pozit.

FISH ALK, ROS1





ALK príp. ROS1

PD-L1 IHC

PD-L1 IHC

TPS ≥ 1%TPS ≥50%TPS ˂50%

EGFR EGFR gén – 7p11.2, kóduje transmembránový proteín s tyrozín kinázovou

doménou

„Driver“ (aktivujúce) mutácie v EGFR géne v exónoch 18,19,21 vedú ku

konštitutívnej – od ligandu nezávislej – aktivácii vnútrobunkových signálnych

dráh

Exkluzivita EGFR aktivujúcich mutácií s ostatnými – ALK, ROS1, KRAS, BRAF...

Nositelia týchto mutácií v EGFR géne – profitujú z liečby tyrozín-kinázovými

inhibítormi (erlotinib, gefitinib, afatinib...)

Menej časté – rezistenčné mutácie – hlavne v exóne 20 (T790M) –

rezistencia na štandardnú terapiu TKI

U nás reflexné testovanie hneď po primárnej diagnostike (RT-PCR) a IHC ALK



NSCLC




EGFR mut. analýza

ALK IHC

Mutácia EGFR

Bez mutácie

EGFR (WT)

ALK IHC pozit.

FISH ALK, ROS1





ALK príp. ROS1

PD-L1 IHC

PD-L1 IHC

TPS ≥ 1%TPS ≥50%TPS ˂50%

ALK

ALK gén – 2p23, kóduje ALK tyrozín-kinázový receptor, CD246

Prestavba génu ALK – najčastejším fúznym partnerom je gén EML4 – fúzny

proteín, ktorý vedie k aktivácii vnútrobunkových signálnych dráh

Menej častí fúzni partneri - TFG a KIF5B


S. Gandhi et al, First-line treatment of advanced ALK-positive non-small-cell lung cancer,

Lung Cancer: Targets and Therapy, 2015

H. Mano, Cancer Sci., 2008;99:2349–2355., 2008.

Reproduced with permission of Blackwell Publishing Ltd.

https://www.dovepress.com/lung-cancer-targets--therapy-journal

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19032370

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19032370

ALK

Prevalencia 3-7% u NSCLC, mladší pacienti, light alebo non-smokers,

adenokarcinómy

Pacienti profitujú z liečby ALK inhibítormi – crizotinib, ceritinib, alectinib....

Vznik sekundárnej rezistencie vplyvom mutácií ALK génu – L1196M, F1174L,

C1156Y

Metódy detekcie ALK:

•IHC detekcia fúzneho proteínu ALK-EML4 – skríningová metóda,

certifikovaný IHC kit

•FISH (Fluorescenčná In Situ Hybridizácia) detekcia prestavby ALK génu –zlatý štandard pre potvrdenie pozitivity ALK - liečba


ALK testovanie v UNLP Patológia

Testovanie ALK prestavby FISH metódou od konca r. 2012

Testovanie ALK proteínu IHC metódou od začiatku r. 2017

VENTANA ALK (D5F3) Assay (OptiView DAB IHC Detection a Amplification kit)

Assay je CE IVD, FDA schválená

Reflexné testovanie IHC hneď po stanovení dg a klasifikácii tumoru (pred EGFR mut.)

FISH testujeme aj ALK IHC pozit. aj ALK IHC negat.

2016-2018 – 4% ALK pozitívnych pacientov

2017-2018 100% ? zhoda medzi IHC ALK (D5F3) a FISH ALK – až do minulého týždňa


College of American Pathologists (CAP) 2017


IHC detekcia ALK fúzneho proteínu, Ventana anti-ALK(D5F3), Roche, NSCLC

FISH pozitívny nález na prestavbu génu ALK, ALK dual color break apart, Zytovision, NSCLC

Náš diskrepantný prípad: muž, 58 rokov, metastazujúci mikropapilárny aca

ALK IHC +++ ALK FISH opakovane NEGATÍVNY nález..... ???????


ROS1

ROS1 gén – 6q22, kóduje receptor z rodiny inzulínových receptorov s tyrozín-

kinázovou aktivitou

Fúziou ROS1 s génmi CD74, SDC4 alebo SLC34A2 – vznik fúznych proteínov s

konštitutívnou kinázovou aktivitou

prevalencia – 1-2% z adeno NSCLC, u nás testujeme od konca r. 2016

Pacienti s prestavbou ROS1 génu profitujú z liečby ALK inhibítormi

Metódy detekcie ROS1:

•FISH (Fluorescenčná In Situ Hybridizácia) detekcia prestavby ROS1 génu – zlatý štandard pre potvrdenie pozitivity ROS1 – liečba

•IHC detekcia fúzneho proteínu môže byť použitá ako skríningová

metóda



NSCLC




EGFR mut. analýza

ALK IHC

Mutácia EGFR

Bez mutácie

EGFR (WT)

ALK IHC pozit.

FISH ALK, ROS1





ALK príp. ROS1

PD-L1 IHC

PD-L1 IHC

TPS ≥ 1%TPS ≥50%TPS ˂50%

PD-L1 a „check-point“ inhibítory

Nádorová bunka – schopná vymaniť sa spod kontroly imunitného

systému expresiou PD-L1, PD-L2 proteínov na svojom povrchu

Koncept liečby inhibíciou kontrolných bodov imunity (check-point

inhibitor)- blokáda receptoru PD-1 (programovaná smrť-1 –

programmed death-1)

Karcinóm pľúc (NSCLC)- schválená liečba od r. 2015

Pembrolizumab – vyžaduje detekciu PD-L1 na nádorových bunkách

pre indikáciu liečby (certifikovaný IHC kit, schválený FDA)

1. a 2. línia liečby pre skvamózny aj neskvamózny NSCLC

VENTANA PD-L1 (SP263) Roche u nás zatiaľ nepoužívame


ZÁVER

Na Oddelení Patológie UNLP vyšetrených za 2016-2018 cca 900 karcinómov pľúc

75% tvorili NSCLC – 33% Adeno ca + mix a N.O.S

42% Skvamocelulárne ca

20% malobunkové ca

5% iné

ALK pozitívni pacienti – 4%, 2017-2018 testovaní aj IHC aj FISH

Podľa národných smerníc IHC skríningová metóda, def. potvrdenie FISH

4 pacienti pre nedostatok bioptického materiálu vyšetrení z cytologickej vzorky

85% tvoria bronchoskopické vzorky

Dôležitý správny algoritmus pre všetky vyšetrenia relevantných prediktívnych

markerov (hlavne keď sú dostupné len malé vzorky BS)

Reflexné kompletné testovanie – u nás 5-7 prac. dní


NSCLC




EGFR mut. analýza

ALK IHC

Mutácia EGFR

Bez mutácie

EGFR (WT)

ALK IHC pozit.

FISH ALK, ROS1





ALK príp. ROS1

PD-L1 IHC

PD-L1 IHC

TPS ≥ 1%TPS ≥50%TPS ˂50%

ĎAKUJEM ZA POZORNOSŤ


[email protected]

markerov u NSCLC...VENTANA PD-L1 (SP263) Roche u nás zatiaľ nepoužívame Pracovné dni Roche...

Documents

Transcript of markerov u NSCLC...VENTANA PD-L1 (SP263) Roche u nás zatiaľ nepoužívame Pracovné dni Roche...