Manipulación, Identificación, y Transporte de Animales de ...€¦ · Región Dorsal del cuello o...
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Manipulación, Identificación,y Transporte de Animales de
Laboratorio
Conocimiento previo de la especie.
Entrenamiento, capacitación y actualización del personal.
Formar parte del espacio social del animal.
Interactuar físicamente con el animal.
Realizar movimientos predecibles, lentos y suaves.
Programa de entrenamiento y habituación de los animales.
Algunos factores a tener en cuenta:
TECNICAS DE MANIPULACIONCOMUNMENTE UTILIZADAS
Todas las técnicas de manipulación están orientadas a disminuir elriesgo que representan en cada especie sus correspondientes
PUNTOS CRITICOS
Siempre tenga en cuenta el peligro que representan dientes ygarras… ENTRENESE y MANIPULE CORRECTAMENTE
A LOS ANIMALES
TECNICAS UTILIZADAS
EN LA RATÓN
TECNICAS UTILIZADAS EN EL RATON
Para retirarlo de la jaula
Sujete al ratón desde elextremo proximal de la
cola
Nunca sujete al ratón desde el extremodistal de la cola. La cola está
sumamente vascularizada e inervada.Es muy doloroso
NO
TECNICAS UTILIZADAS EN EL RATON
Para retirarlo de la jaula
Puede sujetar al ratón utilizandouna mano, conteniéndolo sobre
la palma de la misma
Puede sujetar al ratón utilizando susdos manos, asegurando la cola con
sus dedos
Para sujetarlo e inmovilizarlo
Paso a paso, técnica destinada a inmovilizar al ratón utilizando unasola mano. Note que la otra mano queda completamente libre
Paso a paso, técnica destinada a inmovilizar al ratón utilizando alcomienzo ambas manos. Note que luego la otra mano quedacompletamente libre
Para sujetarlo e inmovilizarlo.
TECNICAS UTILIZADAS
EN LA RATA
TECNICAS UTILIZADAS EN LA RATA
Para retirarla de la jaula
Sujete a la rata desde elextremo proximal de la
cola
Nunca sujete a la rata desde el extremodistal de la cola. La cola está sumamente
vascularizada e inervada. Es muy doloroso.Note el permanente movimiento de la
rata
NO
TECNICAS UTILIZADAS EN LA RATA
Para retirarla de la jaula
Puede sujetar a la rata utilizandouna mano, e inmediatamente
tomar el tren posterior con laotra
Puede sujetar a la rata utilizando lasdos manos, brindando adecuada
contención
TECNICAS UTILIZADAS EN LA RATA
Para sujetarla e inmovilizarla
Brinde a la rata una adecuadasuperficie de apoyo para que el animal
pueda traccionar. Evite colocarlasobre superficies lisas en donde no
pueda afirmarse. Esto la altera mucho.Tome especiales precauciones cuando
trabaje con ratas de más de 200gramos
TECNICAS UTILIZADAS EN LA RATA
Para sujetarla e inmovilizarla
Distintas técnicas para sujetar e inmovilizar a la ratautilizando una o dos manos. Es sumamente importantebrindar sustento al tren posterior para evitar que el
animal pueda traccionar y lesionar al operador con susgarras
NO
TECNICAS UTILIZADAS EN EL COBAYO
Para retirarlo de la jaula
Distintas técnicas para retiraral cobayo de su jaula
brindando sustento conambas manos
NO
TECNICAS UTILIZADAS EN EL COBAYO
Para sujetarlo e inmovilizarlo
Técnicas destinadas a sujetar e inmovilizar al cobayo utilizando ambas manos. Es muyimportante brindar adecuado sustento con la mano que no sujeta al animal por la
región anterior
TECNICAS UTILIZADAS EN EL COBAYO
Para sujetarlo e inmovilizarlo
Técnicas para sujetar al animal retrayendolos miembros toráxicos por detrás de la
cabeza y sujetando el pliegue de piel de laregión dorsal
TECNICAS UTILIZADAS EN EL CONEJO
Para retirarlo de la jaula
Técnicas destinadas asujetar e inmovilizar alconejo para retirarlo de
la jaula. Observe lasdistintas alternativaspara sujetar el tren
posterior
TECNICAS UTILIZADAS EN EL CONEJO
Para sujetarlo e inmovilizarlo
Técnica para sujetar e inmovilizar alconejo para transportarlo cortas
distancias
TECNICAS UTILIZADAS EN EL CONEJO
Para sujetarlo e inmovilizarlo
Técnica para sujetar einmovilizar al conejo para
transportarlo largasdistancias
NUNCA UTILICE ESTAS TECNICAS PARAMANIPULAR AL CONEJO…
TECNICAS DE SEXADO
Consideraciones generales
– Distancia ano-geital (Aprox. el doble en el machoque en la hembra)
– Bolsa escrotal en los machos.
– Presencia del canal inguinal en los machos (dificultala observación de los testículos)
– Presencia de las líneas mamarias en las hembras
– Presencia de una fina línea depilada en lan hembra
Observe la distancia ano-genital en la hembra y en elmacho
Tanto el pene comola vulva pueden serexpuestos mediantesuave presión en laregión genital.Observe la distanciaano-genital en lahembra y en elmacho
Cobayos
Conejos
Tanto el pene como la vulvapueden ser expuestosmediante suave presión en laregión genital. Observe latécnica utilizada para sujetar einmovilizar al conejo
INMOVILIZACIONMediante el uso de cepos podemos limitar casi totalmente losmovimientos del animal con el propósito de realizar diferentesmaniobras experimentales.
Pueden ser inmovilizados durante…
- Períodos cortos
- Períodos prolongados
La implementación de un programa de entrenamiento previo esfundamental para disminuir el estrés durante la práctica delprocedimiento experimental
TIPOS DE CEPOS
Figuras Nº 1 a 6: Distintos tipos de cepos yartefactos comúnmente utilizados para
inmovilizar diferentes especies
METODOS DE IDENTIFICACION• Métodos temporarios
– Marcadores indelebles– Acido pícrico– Depilación, rasurado y afeitado
• Métodos permanentes– Marcado de orejas– Caravanas plásticas o metálicas– Tatuado– Microchips (para ratones y ratas de más de 21 días
de edad)– INACEPTABLE - Amputación de falanges
METODOS TEMPORARIOS• Marcadores indelebles
• Depilación, rasurado y afeitado
METODOS PERMANENTES
• Marcado de orejas
• Colocación de caravanas plásticas o metálicas
METODOS PERMANENTES
• Tatuado
• Implante subcutáneo de microchips
CONTENEDORES PARATRANSPORTE
• Contenedores y cajas de transporte
Figura Nº 1: Caja detransporte convencional
de PVC con materialfiltrante
Figura Nº 2: Caja de cartóncorrugado de alta densidadrecubierta en su interior con
materiales impermeables.También tiene material
filtrante
Figura Nº 3: Caja plásticacon gel hidratante
CONTENEDORES PARATRANSPORTE
• Otros modelos de contenedores y cajas para transporte
Figura Nº 4: “Doble” caja detransporte para roedores
inmunodeficientes o libres degérmenes con gel hidratante estéril
Figura Nº 5: Caja de transporte pararoedores que deben viajar por separado pero
en el mismo contenedor (Ej.: Diferentecalidad sanitaria)
ADMINISTRACIÓN DE SUSTANCIASDESCRIPCIÓN DE LAS TÉCNICAS MÁS
UTILIZADAS
Vía de Administración
La elección de la vía está determinada por:
• Propósito experimental
• Especie animal seleccionada
• Posibles efectos adversos de la técnica deadministración sobre los animales
• Frecuencia de dosificación
• Interacciones con los objetivos del experimento(menos estresante)
Características de las sustancias a administrar
• Propiedades físico-químicas
• Característica de los solventes y preparado desoluciones
• Tasa de absorción
• Factores externos
Recomendaciones Generales
• Utilice siempre antisépticos en cada uno de los procedimientos
• Utilice agujas adecuadas para las diferentes vías
• Cuando sea posible use anestésicos locales (de aplicación tópica)
• No recicle el material
• Busque alternativas
• Es esencial conocer la anatomía de los animales con los quetrabaja para refinar los procedimientos
• Introduzca la aguja/sonda firme pero suavemente
• Introduzca la aguja con el bisel hacia arriba
• Asegúrese de haber ingresado en la vía seleccionada
• Cuidado con el volumen
Volúmenes de Administración de Sustancias
IV(ml)
IP(ml)
IM(ml/sitio)
SC(ml/sitio)
ORAL(ml/Kg)
ID(μ/Kg)
RATON 0.2 2-3 0.05 0.5 * 20 100
RATA 1 5-10 0.1 1-2 * 10 100COBAYO 0.5 10-15 0.3 1-2 ** 5 100
CONEJO 1-10 0.5-1 1-5 ** 5 100
*máximo en 2-4 sitios diferentes**máximo en 2 sitios diferentes
Sitios de Inoculación RecomendadosTamaño de las Agujas
EV IP IM SCRATON Venas
Marginales de27 – 28 G
Abdomen25 – 27 G
Cara Posterior delCuádriceps27 G
Región Dorsal delCuello21 – 25 G
RATA VenasMarginales dela cola25-27G
Abdomen23 – 25 G
Cara Posterior delCuádriceps27 G
Región Dorsal delcuello o flancos21 – 25 G
COBAYO Vena safena25-27G
Abdomen21 – 25 G
Cara Posterior delCuádriceps27 G
Región Dorsal delcuello o flancos23 G
CONEJO VenasMarginales dela oreja23-25G
Cara Posterior delCuádriceps, músculosLumbares 23 – 25 G
Región Dorsal delcuello o flancos21 G
Utilizada habitualmente para la administración parenteral.Proporciona una lenta liberación, evitando el metabolismo delprimer paso
Características de la técnica:En región escapular, flancos o grupaSe debe tomar un pliegue de piel entre los dedos índice ypulgarIntroducir la totalidad de la aguja en el lugar de inoculaciónRotar la aguja (bisel hacia abajo)Retraiga el émbolo antes de inyectar
Refinamiento de la administración de sustancias
Subcutánea
Refinamiento de la administración de sustancias
Subcutánea
Utilizada en estudios de liberación lenta en los que seutilizan implantes o fórmulas oleosas (absorción gradual).Valoración de vacunas.
• Características de la técnica Se recomienda 2 personas para realizarla Realizarla en una masa muscular grande, lejos de vasos y
nerviosGluteus maximus, Semitendinoso, Bíceps femoris, Área del cuadriceps
Se debe sujetar el miembro firmemente Retraiga el émbolo antes de inyectar Inyecte la solución lentamente, retire la aguja y de masajes
en la zona
Refinamiento de la administración de sustancias
Intramuscular
Refinamiento de la administración de sustancias
Intramuscular
De:http://www.procedureswithcare.org.uk
Semitendinoso
Cuadriceps
Bicepsfemoris
Se utiliza con frecuencia en experimentos farmacológicos ytoxicológicos de biodisponibilidad inmediata
•Características de la técnicaRealice la tricotomía de la zonaRealice una correcta vasodilataciónIngrese casi paralelo al vasoRetraiga el émbolo antes de inocular la sustanciaRetira la aguja y realice una correcta hemostasia
Refinamiento de la administración de sustancias
Endovenosa
Problemas potenciales y refinamiento de la técnica
No administre sustancias irritantes
Verifique que en la sustancia no haya presencia deprecipitados Formación de émbolos
Endovenosa
Refinamiento de la administración de sustancias
Refinamiento de la administración de sustancias
Endovenosa
Staszyk, C. Laboratory Animal 2003
Se utiliza para administrar volúmenes grandes. Muy común enpequeños roedores y peces.
Características de la técnica
Se debe tener cuidado con la profundidad de penetración dela aguja
Introduzca la aguja con un ángulo de 30 – 45º para incidir enel plano subcutáneo, progresar unos mm por el plano y luegoincline la aguja a 90º para incidir en peritoneo visceral
Refinamiento de la administración de sustancias
Intraperitoneal
Problemas potenciales y refinamiento de la técnica
Algunas sustancias irritantes pueden resultar fatales
Pueden dañarse grandes vasos sanguíneos (aortaabdominal, vena cava)
Pueden dañarse órganos digestivos
Refinamiento de la administración de sustancias
Intraperitoneal
Refinamiento de la administración de sustancias
Intraperitoneal
Usada comúnmente para la administración decompuestos irritantes, grandes volúmenes o imposiblesde ser administrados por otra vía.
Características de la técnica¿Ayuno?Debe asegurarse en todo momento de no ingresar en la
vía respiratoria (reflejo gastroesofágico o deglutorio)Mida el tamaño de la sonda.Catéteres flexibles vs. rígidos.Lubrique la sonda (vaselina o parafina médica)
Refinamiento de la administración de sustancias
Vía Oral
Refinamiento de la administración de sustancias
Vía Oral
FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO y N.CARDILLO
Muy utilizada en estudios inflamatorios, de sensibilización,diagnóstico de flujo sanguíneo cutáneo y en inmunología.Características de la técnica:Se realizan en capas externas de la pielSe debe rasurar la piel en lo posible 1 hora antesDebe situarse la aguja casi en paralelo a la pielPérdida de resistencia = Inoculación subcutáneaRotar la aguja (bisel hacia abajo)Administración correcta = Formación de “Habón”
Refinamiento de la administración de sustancias
Intradérmica
Refinamiento de la administración de sustancias
IntradérmicaHabón
Toma de Muestras
Toma de muestra potencialmente estresante
Puede desencadenar:
Incremento en los niveles de algunas hormonas ensangre (Ej: Corticoesteroides).Alteración de importantes parámetros sanguíneos(Ej: hematocrito, recuento de glóbulos blancos)
Extracción de grandes volúmenes a intervalos detiempo inadecuados
Respuesta fisiológicas indeseables
VOLUMENES DE SANGRE A EXTRAER
Volemia: Volumen de sangre circulante
Animales obesos y/o de edad muyavanzada aprox. 15% menor
Aproximadamente el 7% del peso corporal
Si de la volemia extraemos:
El 10% del total, se inician mecanismoshomeostáticos colinérgicos
Entre el 15-20% del total, se incrementan el gastocardíaco y la presión sanguínea
Entre el 30-40% del total, se produce shockhipovolémico
El 50% o mas, puede causar la muerte
Signos de Shock Hipovolémico Pulso rápido y débil Mucosas secas y pálidas Descenso de la temperatura corporal Hiperventilación
Una alternativa valida para evitar el shockhipovolémico, es recurrir a una terapia de
reposición de fluidos inmediatamente despuésdel muestreo
Signos de anemia
La extracción de volúmenes seguros pero aintervalos de tiempo demasiado cortos, puede
provocar anemia
Palidez de las mucosas, orejas, almohadillasplantares, etc. Intolerancia al ejercicio, sedentarismoEn casos severos, ritmo respiratorio aumentado
durante el reposo
En animales sanos y bien nutridos, podemosextraer hasta el 10% de la volemia con efectosadversos mínimos
La extracción de este volumen puede repetirsecada 3-4 semanas
Para sangrar a intervalos más cortos (24hs.)podemos extraer hasta el 1% de la volemia
Descripción de Técnicas
PUNCIÓN VENOSA
Y
ARTERIAL
Preparación previa de la zonaPara lograr una buena muestra debemos
lograr una buena antisepsia
1. Tricotomía
•Tijeras y hojas de bisturí
•Rasuradoras
•Afeitadoras
•Cremas depilatorias
Método más aconsejable
Se sugiere usar el mayor calibre de aguja posible en relación aldiámetro del vaso.
1.Muy largas •Favorecen la coagulación•Difíciles de manejar
2. Poco calibre •Favorecen la coagulación•Favorecen la hemólisis
3. Mucho calibre •Formación de hematomas
¿Como elegimos el tamaño y calibre de la aguja?
Exhaustivo estudio de la anatomía del animal
Tricotomía
Vasodilatación
Para esto disponemos de diferentes métodos:
• Obstrucción del retorno venoso (ingurgitación)
• Calor
• Agentes químicos
¿Como localizamos la vena?
Aplicar presión continua en el lugar de punción durante 30-60segundos
Observar a los animales durante aproximadamente 30segundos más
Luego podemos devolver a los animales a su jaulacontrolándolos cada 10-15 minutos.
Hemostasia
ARTERIA CENTRALVENAS MARGINALES
Punción de la vena marginal del conejo
Punción de la arteria central del conejo
Lugar de punción
De: The University of New Mexico &The Office of Animal Care and
Compliance
Punción de la vena Submaxilar
FOTO: M. BRAHAMIAN, C.GATTO
Punción de la vena Safena
FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO
Janet Hoff Lab Animal Vol 29,Nº10, 2000
Sangrado retro orbital
De: The University of New Mexico & The Office of Animal Care andCompliance
FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO
Intracardíaca
•Bajo anestesia
•Técnica terminal
•Sangrado a blanco
Janet Hoff Lab Animal Vol 29,Nº10, 2000 FOTOS: M. BRAHAMIAN, C.GATTO
Hemopericardio Paro cardíaco
Hemotorax por obliteración de un vaso sanguíneo
Fibrilación ventricular con posterior paro cardiaco
Contaminación de la muestra con constituyentespulmonares
Efectos Adversos
Esta técnica, también debe llevarse a cabo SIEMPRE bajoanestesia general.
También, es recomendable usarla como técnica terminal.
Debemos confirmar el deceso del animal luego depracticada la técnica.
Debemos asegurarnos que el largo de la aguja seasuficiente para alcanzar el corazón.
Recuerde
Corte de cola en ratas y ratones
Corte de cola
•Obtención de volúmenes pequeños
•Repetición
•Posibles corte de vértebras
En ratas existe la posibilidad de cortar una vértebra coccígea
Formación de granulomas
Perdida de la capacidad natural del animal para regular sutemperatura corporal y el equilibrio
Esta técnica debe ser realizada comomáximo una o dos veces
Efectos Adversos
Muchas gracias!!!
Santiago VieytesTécnico en Gestion Integral para Bioterios FVet - UBA
Bioterio Central FCEyN [email protected]