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ライフテクノロジーズ月刊情報誌

No.6

2011

7月号CONTENTS

New　新製品情報

リアルタイムPCRシステムによるProtein Thermal Shift™ アッセイ革新的なタンパク質解析システム P8

シグナル伝達関連抗体、28種が新発売！ P11

教えてライフテクノロジーズ

PCR実験のコツ （2） P9

TECHNICAL REVIEW　テクニカルレビュー

パラフィン包埋サンプルから回収したRNAサンプルの特徴とPCR反応時のTips P14

INFORMATION　インフォメーション

カスタマーサービス電話番号 変更のお知らせ P16 学会展示会・セミナー P16セミナー・ワークショップ P16クイズ P16

PRODUCT REVIEW　プロダクトレビュー

驚くほど簡便・迅速に蛍光細胞分析を測定Tali™ イメージベース サイトメーター P2

製品ラインナップを充実！Primary Cell Culture Products P3

フローサイトメーターの限界を超える新世代サイトメーター

Attune® Acoustic Focusing Cytometer P4お好みの色が選べるフローサイトメトリー用生死判定試薬 SYTOX®シリーズ

SYTOX® dead cell stain sampler kit P5Violetレーザー励起フローサイトメトリー用CD抗体にトライアルサイズが登場 !!フローサイトメトリー用CD抗体 - トライアルサイズ P5

2つの次世代シーケンサを徹底比較Ion PGM™ シーケンサ /5500シリーズ SOLiD™ シーケンサ P6室温で1年間保存できます

NuPAGE®タンパク質電気泳動ゲル P10細胞や組織サンプルからのRNA抽出

mirVana™ PARIS™ Kit P12多サンプルからのトータルRNA抽出

MagMAX™-96 Total RNA Isolation Kit P12世界に誇るGIBCOブランドの細胞培養製品

TrypLE™ Express & TrypLE™ Select P13

PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

製品名 サイズ 製品番号 価格

Tali™ Image Cytomater (include Beads, 50 slides） 1 unit T10796 ￥1,480,000

Tali™ Cellular Analysis Slides *50 slides* 50 slides T10794 ￥20,000

Tali™ Cellular Analysis Slides *500 slides* 500 slides T10795 ￥170,000

Tali™ Apoptosis Kit - Annexin V Alexa Fluor® 488 and Propidum Iodide 100 assays A10788 ￥32,000

Tali™ Viability Kit - Dead Cell Green 100 assays A10787 ￥7,000

Tali™ Viability Kit - Dead Cell Red 100 assays A10786 ￥7,000

Tali™ Calibration Beads 1kit T10790 ￥5,600

Tali™ Apoptosis Kit –

Annexin V Alexa Fluor® 488 and Propidium Iodide

Tali ディスプレイはコンセントレーション、細胞数、生死細胞、アポトーシス細胞を表示。取得画像では、無蛍光の生細胞、赤蛍光の死細胞と緑蛍光のアポトーシス細胞が完全に識別できる。

Tali™ Apoptosis Kit – Annexin V Alexa Fluor® 488 and Propidium Iodide：（A10788）100 assaysAnnexin V Alexa Fluor® 488 ,Tali™ Propidium Iodide （PI）Annexin V Alexa Fluor® 488：Ex/Em ＝488/499 nm；Propidium iodide：Ex/Em ＝535/617 nm,

驚くほど簡便・迅速に蛍光細胞分析を測定

Tali™ イメージベース サイトメーター

特長

Tali™ Viability Kit – Dead Cell Red

Taliディスプレイはコンセントレーション、生死細胞数を表示。赤色細胞は死細胞、蛍光で検出されない細胞は生細胞を示す。

Tali™ Viability Kit – Dead Cell Red ：（A10786）100 assaysTali™ Dead Cell Red （Propidium iodide）Propidium iodide：Ex/Em 535/617 nm

簡便 専用スライドを挿入し、タッチパネルをワンタッチするだけで3チャンネル、明視野、緑蛍光、赤蛍光の画像取得、細胞分析ができます。

迅速 1サンプルあたり約30秒～1分で、細胞数、細胞サイズ、輝度の測定が可能です。

正確・高性能 アポト―シス、細胞生存率（Tali™専用試薬もあります。）、GFP発現評価、 統計的に有意な細胞分析データを提供します。

アプリケーション・ アポトーシス、細胞生存率、GFP発現、フローサイトメトリーサンプルのコンセントレーションのチェック。

データ

2

PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

製品ラインナップを充実！

Primary Cell Culture Products

より現実的な細胞培養は、より現実的な細胞から始まりますライフテクノロジーズジャパンでは、Cascade（カスケード） Biologicsブランド全製品（ヒト正常初代細胞、培地、サプリメント等）の取り扱いを開始いたしました。Cascade Biologicsブランドは、ヒト初代細胞とその初代細胞に適応した細胞培養製品のブランドで、革新的な細胞培養製品とサービスを世界に提供しています。培養された初代細胞は、不死化細胞よりも生体内での生理学的な特性を有します。広範囲の研究、毒物学およびアプリケーションのスクリーニングに最適です。

Neonatal Keratinocytes

取り扱い製品分野>> ケラチノサイト関連製品>> 線維芽細胞関連製品>> メラノサイト関連製品

>> 角膜上皮細胞関連製品>> 乳腺上皮細胞関連製品>> 血管内皮細胞

>> 微小血管内皮細胞関連製品>> 平滑筋細胞関連製品>> 骨格筋芽細胞関連製品

>> 神経系細胞関連製品>> ラット神経系細胞関連製品>> 凍結保存培地

http://www.invitrogen.jp/gibco/cascade.shtml製品の詳細は、弊社ホームページをご覧ください。

ご注意： これまでクラボウ バイオメディカル部様からご購入いただいておりましたCascade Biologicsブランド製品につきましては、弊社ホームページの対応表をご参照ください。なお、クラボウ バイオメディカル部様のオリジナル製品はお取り扱いしておりません。何卒ご了承ください。

製品名 サイズ 製品番号 価格

Human Epidermal Keratinocytes, neonatal (HEKn) EACH C-001-5C ¥57,000Human Epidermal Keratinocytes, adult (HEKa) EACH C-005-5C ¥57,000Human Epidermal Keratinocytes, neonatal, Animal Product-Free (HEKn-APF) EACH C-020-5C ¥64,000Human Epidermal Keratinocytes, adult, Animal Product-Free (HEKa-APF) EACH C-021-5C ¥64,000Human Epidermal Keratinocytes, pooled　HEKp 1 vial each A13401 ¥45,000Medium 154 Medium 154 500ml M-154-500 ¥9,200Medium 154CF, Kit COMBINATION M-154CF-500 ¥11,200Medium 154CF⁄PRF, Kit COMBINATION M154CFPRF500 ¥11,200EpiLife® Medium with 60 µM Calcium EACH M-EPI-500-CA ¥10,200EPILIFE CF, Kit COMBINATION M-EPICF-500 ¥10,400EPILIFE CF ⁄PRF, Kit EACH M-EPICFPRF-500 ¥10,400Defined Keratinocyte-SFM (1X), liquid COMBINATION 10744-019 ¥19,570Keratinocyte-SFM (1X), liquid COMBINATION 17005-042 ¥19,400Keratinocyte AOF Growth Kit EA ＝ KIT A1051501 ¥23,500Human Keratinocyte Growth Supplement (HKGS) 5ml S-001-5 ¥7,000Human Keratinocyte Growth Supplement Kit (HKGS Kit) EACH S-001-K ¥8,900EpiLife® Defined Growth Supplement (EDGS) 5ml S-012-5 ¥7,000Supplement S7 EACH S-017-5 ¥10,100Trypsin ⁄EDTA Solution 100ml R-001-100 ¥4,200Trypsin Neutralizer Solution 100ml R-002-100 ¥4,200Defined Trypsin Inhibitor 100ml R-007-100 ¥5,400Coating Matrix Kit EACH R-011-K ¥9,500Gentamicin ⁄Amphotericin Solution, 10 vials ⁄pkg EACH R-015-10 ¥10,700

製品名 サイズ 製品番号 価格

Human Aortic Smooth Muscle Cells (HASMC) EACH C-007-5C ¥89,000Human Pulmonary Artery Smooth Muscle Cells (HPASMC) EACH C-009-5C ¥89,000Human Coronary Artery Smooth Muscle Cells (HCASMC) EACH C-017-5C ¥98,000Medium 231 EACH M-231-500 ¥9,200Trypsin ⁄EDTA Solution 100ml R-001-100 ¥4,200Trypsin Neutralizer Solution 100ml R-002-100 ¥4,200Gentamicin ⁄Amphotericin Solution, 10 vials ⁄pkg EACH R-015-10 ¥10,700Smooth Muscle Growth Supplement (SMGS) 25ml S-007-25 ¥14,000Smooth Muscle Differentiation Supplement (SMDS) 5ml S-008-5 ¥7,000

ケラチノサイト

平滑筋細胞

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PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

フローサイトメーターの限界を超える新世代サイトメーター

Attune® Acoustic Focusing Cytometer

微生物の数、生存率の解析にフローサイトメーターを使用することでサンプル解析や品質管理情報を迅速に得ることができます。今回、Attune® Acoustic Focusing Cytometerを用いた大腸菌およびミネラルウォーター中の微生物の生死判定例をご紹介いたします。Attune® Acoustic Focusing Cytometerは、細胞や微生物などの粒子を、音波の力を利用して流路系の中心軸に1列に整列させることができる、アコースティックフォーカシング方式を採用した新世代のフローサイトメーターです。アコースティックフォーカシング方式では、微生物のような微小サンプルでも効率的にフォーカシングが可能なため、より高精度の検出・測定が行えます。また、トランジットタイム（サンプルがレーザー曝露される時間）を調節することで、標準および高感度モードの感度設定が可能なため、微弱なシグナルを感度良く検出することもできます。

大腸菌をLIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability and Counting Kit （SYTO® 9 & Propidium iodide）で染色し解析したデータ

SYTO® 9のみで染まっている集団：生菌SYTO® 9, PIの両方で染まっている集団：死菌

（緑）

（赤）

蛍光を発しているポピュレーションをゲート

倍

（ ）

倍 倍 Attune® Cytometerでは計数用ビーズを用いることなく、サンプル濃度（events/uL） を算出可能左図は段階希釈した大腸菌溶液の測定結果

（緑）

（赤）

蛍光を発しているポピュレーションをゲート

市販のミネラルウォーターを直接LIVE/DEAD® BacLight ™ Bacterial Viability and Counting Kit で染色し解析したデータ

Ordering Information製品名 サイズ 製品番号 価格

Attune® Acoustic Focusing Cytometer 1式 4445315 お問合せ

LIVE/DEAD® BacLight™ Bacterial Viability and Counting Kit 100 assays L34856 ¥85,000

Attune® Cytometerによる大腸菌生死判定

Attune® Cytometerによるミネラルウォーター中の微生物生死判定

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PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

お好みの色が選べるフローサイトメトリー用生死判定試薬 SYTOX®シリーズ

SYTOX® dead cell stain sampler kit

SYTOX® dead cell stain sampler kitは、5色のフローサイトメトリー用生死判定試薬 “SYTOX®” シリーズがセットになった製品で、目的に応じて最適なチャネルを選択して生死判定を行うことができます。SYTOX®シリーズは高親和性の核酸標識試薬で、それぞれの励起波長 /蛍光波長および適合するレーザーは下記の通りとなり、それぞれの製品は個別にご購入いただくこともできます。

SYTOX 蛍光 励起レーザーと蛍光波長 励起レーザー 蛍光波長SYTOX® Blue： 405 nmレーザー 444/480 nmSYTOX® Green： 488 nmレーザー 504/523 nm SYTOX® Orange： 488/532 nmレーザー 547/570 nmSYTOX® AADvanced： 488/532 nmレーザー 546/647 nmSYTOX® Red： 633/635 nmレーザー 640/658 nm

Ordering Information製品名 サイズ 製品番号 価格

SYTOX® dead cell stain sampler kit 50 tests each S34862 ¥18,000

SYTOX® Blue dead cell stain, for flow cytometry 1,000 tests S34857 ¥48,000

SYTOX® Green dead cell stain, for flow cytometry 1,000 tests S34860 ¥48,000

SYTOX® Orange dead cell stain, for flow cytometry 1,000 tests S34861 ¥48,000

SYTOX® AADvanced™ Dead Cell Stain Kit 500 assays S10274 ¥54,000

SYTOX® Red dead cell stain, for 633/635nm excitation 1ml S34859 ¥57,000

Violetレーザー励起フローサイトメトリー用CD抗体にトライアルサイズが登場 !!

フローサイトメトリー用CD抗体 - トライアルサイズPacific Blue™またはPacific Orange™蛍光標識フローサイトメトリー用CD抗体のラインナップに、25テスト分のトライアルサイズが、お求めやすい価格で追加になりました。Pacific Blue™はVioletレーザー励起450 nm検出の蛍光色素で、Pacific Orange™はVioletレーザー励起550 nm検出の蛍光色素となっております。条件検討等にご利用ください。

Ordering Information

製品名 ClonePacific Blue™標識 Pacific Orange™標識

価格製品番号 製品番号

抗ヒトCD抗体

CD3, Mouse Anti-Human, Monoclonal S4.1 MHCD0328TR - ¥18,000

CD3, Mouse Anti-Human, Monoclonal OCHTI - CD0330TR ¥23,000

CD4, Mouse Anti-Human, Monoclonal S3.5 MHCD0428TR - ¥18,000

CD4, Mouse Anti-Human, Monoclonal S3.5 - MHCD0430TR ¥23,000

CD8, Mouse Anti-Human, Monoclonal 3B5 MHCD0828TR MHCD0830TR ¥23,000

CD14, Mouse Anti-Human, Monoclonal TuK4 MHCD1428TR - ¥18,000

CD14, Mouse Anti-Human, Monoclonal TuK4 - MHCD1430TR ¥23,000

CD15, Mouse Anti-Human, Monoclonal VIMC6 - MHCD1530TR ¥23,000

CD45, Mouse Anti-Human, Monoclonal HI30 MHCD4528TR MHCD4530TR ¥23,000

CD95, Mouse Anti-Human, Monoclonal DX2 MHCD9528TR - ¥18,000

抗マウスCD抗体

CD4, Rat Anti-Mouse, Monoclonal RM4-5 MCD0428TR - ¥23,000

CD8a, Rat Anti-Mouse, Monoclonal 5H10 - MCD0830TR ¥23,000

CD45R, Rat Anti-Mouse, Monoclonal B220 - RM2630TR ¥23,000

R-PE fluorescence

SYTO

X® R

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0 102 103 104 105

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PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

Ion PGM™ シーケンサでどのような分析ができますか？Ion PGM™ シーケンサは、半導体チップ型のマイクロチップ上でDNAをわずか3時間程度でシーケンスすることができる新しいタイプの次世代シーケンサです。目的に合ったマイクロチップを選択することで、さまざまなゲノムサイズの生物種のDNA配列を迅速に解読することができます。Ion 314チップではゲノムの特定領域をPCRで増幅してシーケンスするアンプリコンシーケンスに適しています。今後チップのスループットを向上しRNA-SeqやChIP-Seqなどの幅広いアプリケーションに対応していきます。

どのようにシーケンスするのですか？回収したビーズを半導体チップ型のマイクロチップにピペットでビーズを流し込み準備は完了です。Ion PGM™ シーケンサは、dNTPをT→C→A→G→・・・と順に送液し、ポリメラーゼによってDNAが伸長する際に放出される水素イオン濃度を、半導体チップ上で検出することで、塩基配列に変換することができます。他の方式と比べホモポリマーに強く、最適なチップを選択することにより、シーケンスのスループットを向上させることができます。

どのようにサンプルを調製するのですか？組織や細胞から抽出したDNAを超音波破砕装置もしくは酵素法により200bp程度に断片化し、DNA断片の両端にシーケンスするためのアダプターを結合させます。AB Library Builder™システムを利用することで、ライブラリー作製を自動化できます。続いて、1ビーズ1DNA断片が取り込まれる条件でエマルジョンPCRを行うことにより、同じ配列のDNA断片をビーズ上に増幅します。Ion OneTouch™システムを利用することで、わずか4時間程度でビーズ調製が完了します。

Ion 314 チップスループット：10Mbリード長：100bp

Ion 316 チップスループット：100Mbリード長：100bp（2011年7月販売開始予定）

Ion 318 チップスループット：1Gbリード長：200bp（2011年後半販売開始予定）

どのようにデータを解析するのですか？Ion PGM™ シーケンサで産出されたデータは、シーケンスと並行して専用のTorrentサーバーに転送されます。SFFまたはFASTQ形式のシーケンスデータは、目的に合った解析パイプラインを提供する各種解析ソフトウェア上で解析し可視化することができます。

ビーズ

Ion OneTouch™システム

Ion PGM™シーケンサ

Torrentサーバー

ライブラ

シーケ

データ

Ionフラグメントライブラリ試薬キット

2つの次世代シーケンサを徹底比較

Ion PGM™ シーケンサ

製品名 サイズ 製品番号 価格

Ion PGM™ システム 一式 PGM-100 ¥9,980,000

Ion OneTouch™システム 一式 4467889 ¥1,250,000

V

わずか3時間でシーケンス完了。ホモポリマーにも強いマイクロチップ次世代シーケンサ

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PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

5500シリーズ SOLiD™ シーケンサでどのような分析ができますか？5500シリーズSOLiD™シーケンサはフローチップ採用で15Gb/1レーンから180Gb/6レーンまでのアプリケーションに対応し、精度99.99％までの高精度なデータを産出します。1フローチップでヒトゲノム1サンプル（30カバレッジ）、ヒトエクソーム6サンプル（50+5bp、100カバレッジ）、トランスクリプトーム6サンプル（50+35bp、100Mタグ）の解析が可能です。また、ChIP-Seq、SAGE、small RNAなどの専用アプリケーションキットが用意され、サンプル調製のための試薬から解析まで、すべてのツールが提供されています。

どのようにサンプルを調製するのですか？組織や細胞から抽出したDNAをCovaris™ システムなどの超音波破砕装置により200bp程度に断片化します。AB Library Builder™システムを利用することで、シーケンスのためのライブラリ作製を自動化できます。DNA断片の両端にシーケンスするためのアダプターを結合してライブラリとし、1ビーズに1DNA断片が取り込まれる条件でエマルジョンPCRを行うことにより、ライブラリをビーズ上に増幅します。EZ Bead™ システムを利用することで、2日間でビーズ調製が完了します。

どのようにシーケンスするのですか？精製したビーズをピペットでフローチップにビーズを流し込み準備は完了です。5500シリーズ SOLiD™ シーケンサは、1つの塩基配列を2回重複してシーケンスする2ベースエンコーディングプローブを繰り返しライゲーションすることにより、塩基配列をカラー配列として出力します。さらに、ECC（Exact Call Chemistry）モジュールと呼ばれる3ベースエンコーディングプローブを利用することで、精度99.99％までの高精度なシーケンスと塩基配列の出力が可能になります。

どのようにデータを解析するのですか？5500シリーズ SOLiD™ シーケンサで産出されたデータは、レーン毎に専用ワークステーションに転送されます。xsq形式のシーケンスデータは、目的に合った解析パイプラインを提供する解析用ソフトウェアLifeScope™を利用し、解析用サーバー上で解析することができます。

EZ Bead™ Amplifier

調製

AB Library Builder システム

5500xl SOLiD™シーケンサ SOLiDフローチップ

LifeScopeクラスター

リ作製

ンス

解析

こと両端に1Dブラ間で

EZ Bead™ EmulsifierEZ Bead™ Enricher

5500シリーズ SOLiD™ シーケンサ

製品名 サイズ 製品番号 価格

5500xl SOLiD™ システム 一式 5500xl-13 ¥95,000,000

5500 SOLiD™ システム 一式 5500-13 ¥63,000,000

AB Library Builder システム 一式 4463794 ¥5,800,000

S

システム精度99.99%を達成塩基出力に対応したハイスループット次世代シーケンサ

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NEW 新製品情報

リアルタイムPCRシステムによるProtein Thermal Shift™ アッセイ

革新的なタンパク質解析システムドラッグスクリーニングやX線結晶回折解析の際には、各タンパク質の特性に合わせた条件などのプレスクリーニング的な実験が不可欠になります。解析対象のタンパク質が安定するバッファー条件や、結晶化効率の高い条件、精製や保存に適した各ターゲットタンパク質の条件等を検討にする際に、微量サンプルで多検体処理ができ、迅速かつコスト効率の高いスクリーニング法が、この「リアルタイムベースのプロテイン サーマルシフト アッセイ」法です。また、このアッセイ法を用いて、安価にタンパク質- リガンドの結合試験を行うことができ、0.5-2時間で最大96または384サンプルを同時に解析できます。

The Complete Protein Thermal Shift™ Solution Workflow takes 0.5-2 hours

Prepare Assays： Protein, Dye, Buffer/Ligand

Run Melt Rxn on real-time PCR system（StepOne™ / StepOnePlus™, 7500, 7500 Fast, ViiA™ 7）

Transfer data file and analyze data on PTS Software

簡単スタート ：プロテイン・バッファー・リガンドとPTS Dyeを混合し、弊社リアルタイムPCRシステム*でスタート*対応機種：StepOnePlus™、StepOne™、7500、7500 Fast、ViiA™ 7

反応 ：リアルタイムPCRシステムで分析対象たんぱく質の構造が変化し、疎水性領域にPTS蛍光色素が結合

検出・解析 ：専用ソフトウェアにより融解曲線から Tm値（融解温度）の変化を検出し、たんぱく質の構造変化やリガンドバインディングの有無などの解析結果を得ることが可能

PTSアッセイによる融解曲線例

Ordering Information製品名 サイズ 製品番号 価格

Protein Thermal ShiftTM Software version 1.0, 10 Licenses 1 お問合せ お問合せ

Protein Thermal Shift™ Software - Additional License 1 （追加ライセンス） お問合せ お問合せ

Protein Thermal ShiftTM Studies User Documention Set 1 お問合せ お問合せ

Protein Thermal ShiftTM Starter Kit 2,000反応 ＋ 100コントロール お問合せ お問合せ

Protein Thermal ShiftTM Dye Kit 2,000反応 お問合せ お問合せ

プロテインサーマルシフトアッセイのフロー

Fluo

resc

ence

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教えてライフテクノロジーズ

ライフテクノロジーズのウェブサイトでは、お客様の研究・実験をサポートするQ&Aサイトをご用意しています。幅広い製品やアプリケーション、トラブル時の対処法など、豊富なコンテンツを提供しておりますので、ぜひご利用ください。

トップページのSupportプルダウンメニューから

FAQ（テクニカル）を選択

http://www.invitrogen.jpインビトロジェンサイト

トップページのサポートプルダウンメニューから

製品Q&Aを選択

http://www.appliedbiosystems.jpアプライドバイオシステムズサイト

PCR実験のコツ （2）ライフテクノロジーズの製品について、よくある質問や知っていると便利な情報をご紹介します。

先月号ではPCRにおける収量、特異性、フィデリティと酵素の関係についてご紹介しました。今月号では、それらの特長をふまえてPCRの最適化について記します。

PCRがうまく増幅しないとき、必要ない産物が増えてしまったとき、または全く何も増えないとき、 このようなときに、どのような作業を行えばよいのでしょうか？

① 塩濃度の重要性まず、酵素は2価の陽イオンを要求します。PCR溶液にマグネシウム溶液が入っていることからも分かると思います。では、マグネシウム濃度が高くなるとどうなるかというと、酵素の活性は当然高くなり、収量も増えます。しかし過剰な活性は特異性を失うだけでなく、不要なPCR産物も増幅することになります。また、高い酵素活性は、フィデリティの低下にもつながります。つまり必要ない産物が増えてしまったときは、マグネシウム濃度を低く設定すると、目的の産物のみが残るように最適化をすることが可能です。逆に、収量が少ない場合は、増やす方向での調整が必要になります。一般的な至適最終濃度は1.5～2.5mMとは言われていますが、PCR産物の鎖長が長くなればなるほど、その至適塩濃度範囲は狭くなります。

② 温度プロファイルの工夫1 　2点？それとも3点PCR？PCRの基礎では3つの温度（Denature-Annealing-Extension）を設定することからはじまります。しかし特殊な条件でなければ、この3つの温度を設定するのは過剰であると言えます。つまり、プライマーをアニーリングさせるステップでも酵素の活性（50℃で1～2Kb/min）は十分にあるということです。この活性をみれば、アニーリングで30秒程度温度保持を行うだけで、数100bpの伸長反応は行われているということです。その後にエクステンションステップとして、さらに72℃で数10秒行うことは、一般的な500bp程度のPCRにおいては過剰であると言わざるを得ません。また、各ステップ間での移動、たとえばアニーリングからエクステンションへ、移行する時間も伸長反応は行われます。そのため温度移行速度の異なる機種間では、温度プロファイルが同じでも結果が異なるのは、こういったことが原因であることが多くあります。したがって、これから一般的なPCRをはじめようという方は、アニーリングとエクステンションを一緒にした Denature-Annealing/Extensionの2点PCRを採用することをお勧めします。

③ 温度プロファイルの工夫2 　アニーリング温度の設定PCRの温度設定を行う場合、2点でも3点でもディネーチャの温度はほぼ95℃前後となります。また3点PCRでのエクステンションは72℃とします。したがって、設定する必要があるのは、アニーリング温度のみです。一般にプライマーのTm値から2～3℃程度低い温度とされていますが、まずはTm値に関して簡単に解説します。Tm値は融解温度と訳され、プライマーがターゲット配列と50％の割合で2本鎖を形成する温度です。そのため温度が低い方が2本鎖を形成している比率が高くなると言えます。またTm値よりも高い温度であったとしても、2本鎖の割合がすくなくなるだけで、アニーリングはおこっています。さて、アニーリング温度の設定ですが、PCRプライマーは2本使用しますので、2つのTm値がPCR条件には存在することになります。そのため、それら温度の中点に設定するところからスタートしてください。その理由としては、2種類のプライマーのアニーリング頻度を近似させることです。そして非特異的なPCR産物が出るようでしたら、Tm値以上でも構いませんので、設定温度を上げてください。これによりプライマーのアニーリング効率は下がりますが、温度上昇にしたがって酵素も活性が上がります。特異的PCR増幅が行われるアニーリング温度が設定できた後に、さらなる収量が必要であれば、塩濃度を上げて調整すればよいかと思われます。

④ 時間の設定各ステップでの保持時間ですが、まずDenatureステップです。ここでは30秒程度で十分です。長鎖のゲノムDNAでさえ、20秒程度で1本鎖に解離すると言われています。また、PCRでの本当のテンプレートになるのは、前サイクルで増幅したPCR産物そのもので、その鎖長はゲノムDNAに比べればはるかに短く、簡単に解離します。アニーリングにおいて、プライマーの分子数はテンプレートになるDNAよりはるかに多く常に会合-解離を繰り返していますので、30秒もあれば2本鎖を形成し、少しの伸長までおきます。2点PCRにおいては、ここで伸長反応も行いますので、概ねですが40秒 /kbとして設定してください。計算上30秒以下になる場合は30秒として設定をすることをお勧めします。

⑤ それでもうまく増幅ができない。これはおそらく、プライマー自身の問題です。これは次回号で記すことにします。

次回号はプライマーの設計について記そうと思います。次回号へ続く

▲

まずは、それらに関わるパラメータを理解すると、よりスムーズに最適化ができると思います。

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PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

NuPAGE ミニゲル専用泳動槽“スマイリング”の無い、きれいな泳動像が得られます

NuPAGE タンパク質電気泳動システムNuPAGE® ビス-トリス ミニゲル

製品名 製品番号 サイズ 価格NuPAGE® 10％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 10 well NP0301BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 10％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 12 well NP0302BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 10％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 15 well NP0303BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 10 well NP0341BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 12 well NP0342BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 15 well NP0343BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 17 well NP0349BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 4-12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 10 well NP0321BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 4-12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 12 well NP0322BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 4-12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 15 well NP0323BOX 10枚 ¥21,500NuPAGE® 4-12％ ビス- トリス ゲル , 1.0 mm, 17 well NP0329BOX 10枚 ¥21,500

・ 上記以外の仕様ゲル（ゲル濃度、ウェル数、ゲルの厚さなど）もございます。詳細は弊社ウェブサイトまたは販売店までお問い合わせください。

・ “ミディゲル”や“高分子タンパク用（＞150KDa）”もあります。

XCell Surelock™電気泳動装置製品名 製品番号 サイズ 価格エクセルシュアロック ミニセル（ミニゲル2枚掛け） EI0001 1セット ¥68,400

NuPAGE® バッファーキット2 種類のバッファー（MES： 低～中分子量用、MOPS：中～高分子量用）が用意されており、1種類のゲルに対して2つの泳動パターンが得られます。　解析目的に適した方をご利用ください。（右図：“バッファータイプによる分離パターン例”参照）

製品名 製品番号 サイズ 価格NuPAGE® MOPS SDSバッファーキット※1 NP0050 1キット ¥13,400NuPAGE® MES SDSバッファーキット※2 NP0060 1キット ¥13,400

※1 〈構成内容〉NuPAGE® MOPS SDSランニングバッファー、NuPAGE® サンプル還元試薬、NuPAGE® アンチオキシダント、NuPAGE® LDSサンプルバッファー※2 〈構成内容〉NuPAGE® MES SDSランニングバッファー、NuPAGE® サンプル還元試薬、NuPAGE® アンチオキシダント、NuPAGE® LDSサンプルバッファー

XCell SureLock Mini-Cell

バッファータイプによる分離パターン例

10%

MESバッファータイプ

泳動パターン

% o

f len

gth

of g

el

ゲル濃度

MOPS

4-12%

MES MOPS

200 kDa

200 kDa

200 kDa

200 kDa

116 kDa 116 kDa

116 kDa

97 kDa

97 kDa

97 kDa66 kDa

66 kDa

66 kDa

36 kDa

36 kDa

36 kDa

36 kDa

31 kDa

31 kDa31 kDa

31 kDa21 kDa

21 kDa21 kDa

21 kDa14 kDa

14 kDa

14 kDa

6 kDa 6 kDa

3.5 kDa 3.5 kDa

2.5 kDa 2.5 kDa

55 kDa

55 kDa

55 kDa

55 kDa

10

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50

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14 kDa

116 kDa97 kDa

12%

MES MOPS

200 kDa200 kDa

116 kDa

116 kDa

97 kDa

97 kDa

66 kDa

66 kDa

36 kDa

36 kDa

31 kDa

31 kDa

21 kDa

21 kDa

14 kDa

6 kDa

3.5 kDa

2.5 kDa

55 kDa

55 kDa

14 kDa

6 kDa

66 kDa

NuPAGE® ゲルと従来のトリス-グリシン ゲルのタンパク質分離の比較（A）はNuPAGE® 4-12％ Bis-Tris ゲル、（B）は4-20％ トリス-グリシン ゲル（他社製）で泳動。Lanes1, 6, 7, 10 ： Mark12™ Unstained Protein Standard ； Lane2 ： High Protein Load（4 proteins-6 μg /protein）；Lane3 ： Broad Range Standard ； Lanes 4,5： E. coli extract ； Lane 8 ： SeeBlueR Pre-Stained Protein Standard；Lane 9： MultiMarkR Multi-colored Protein Standard

（A） NuPAGE® ゲル （B） トリス-グリシン ゲル

• ミニゲル2枚を同時泳動• 液漏れ防止構造• ブロットモジュールと組み合わせるとタンク式転写装置としても使用可能

初めてでもカンタン！ゲルを差しこんだらレバーを倒すだけでしっかりロック（＝SureLock！）

室温で1年間保存できます

NuPAGE®プレキャストゲルは、特長的な“中性ゲル”を採用したSDS-PAGE用ゲルです。

Nニューページ

uPAGE®タンパク質電気泳動ゲル

• 高い分離能できれいな泳動像 シャープで良好な分離バンドが得られ、バンドの歪曲（スマイリング）も起こりません。 従来のトリス・グリシンゲルの難点であった高アルカリ条件下でのサンプルやゲルの劣化を克服しました。

• 安定性高く、長期保存可能 室温で12カ月保存可能です。劣化の進んだゲルによる泳動不良や、期限切れゲルを廃棄するリスクが無くなります。 もう冷蔵庫のスペースをゲルが占領することはありません。

• 幅広いラインナップ ゲルタイプ（単一ゲル、グラジエントゲル）、ゲルサイズ（ミニゲル、ミディゲル）、ゲル濃度、ゲルの厚さ、ウェル数の異なる様々な仕様のゲルをご用意しています。

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LTJ_NEXT_7月_0617-3.indd 10 11.6.17 7:32:16 PM

NEW 新製品情報

シグナル伝達関連抗体、28種が新発売！特長

高品質、高性能

リン酸化部位が特異的

優れた感度

製品番号 製品名 遺伝子名や別名

アプリケーション 反応生物種 カテゴリー クローン

番号アイソタイプ

P21933 ABCA4 （Rim Protein）, Mouse Monoclonal Antibody ABCA4, Rim WB, IHCbovine, human, mouse,Xenopus

細胞外マトリックス 3F4 IgG

P21934 Norepinephrine Transporter, Mouse Monoclonal AntibodySLC6A2, NET, NAT

WB mouse, rat 神経生物学 IgG

P21935 Peripherin, Mouse Monoclonal Antibody PRPH WB, IHC many mammalian 神経生物学 7C5 IgG1

P21936 Prox1, Mouse Monoclonal AntibodyPROX1,Prospero-relatedhomeobox 1

IHCchicken, human, mouse, rat

転写因子 5G10 IgG

P21937Retinoic Acid Receptor, ß-Isotype ,Mouse Monoclonal Antibody

RARB WBhuman （canine, guinea pig,mouse and rat ）

核内受容体 336 IgG1

P21938Retinoid X Receptor, b-Isotype ,Mouse Monoclonal Antibody

RXRB WB rat （mouse） 核内受容体 147 IgG1

P21939Retinoid X Receptor, g-Isotype ,Mouse Monoclonal Antibody

RXRG WBhuman （bovine, mouse,non-human primate and rat）

核内受容体 1373 IgG1

P21940 Rhodopsin, Mouse Monoclonal Antibody RHO WB, IHC most mammals 神経生物学 1D4 IgG1

P21941 Synaptobrevin （VAMP）, Mouse Monoclonal Antibody VAMP1/2 WB, IHCbovine, human, mouse, pig,rat, rabbit, hamster

神経生物学 SP10 IgM

P21942 Synaptojanin 1, Mouse Monoclonal Antibody SYNJ1 WB, IHC rat 神経生物学 5H1P21943 Syntaxin, Mouse Monoclonal Antibody STX1A WB, IHC human, rat, pig, hamster 神経生物学 SP8 IgG1

P21944Thyroid Hormone Receptor, a1/a2-Isotype , Mouse Monoclonal Antibody

THRA WBhuman （canine, mouse and rat）

核内受容体 2103 IgG1

P21945CNP （2,3-cyclic nucleotide-3-phosphodiesterase）, Rabbit Polyclonal Antibody

CNP WB, IHCmouse, human, rabbit,rat and sheep

神経生物学

P21946 Fractin, Rabbit Polyclonal Antibody fragment of Actin WB, IHC Human, rat アポトーシス

P21947 GABAA Receptor, γ2 ［pS327］, Rabbit Polyclonal Antibody GABRG2 WB rat 核内受容体

P21948 GABA Transporter （GAT） 1, Rabbit Polyclonal Antibody SLC6A1 WB, IHC rat （mouse） 核内受容体

P21949 GluR2-subunit ［pS880］, Rabbit Polyclonal Antibody GRIA2 WBrat （human, mouse,non-human primate andZebrafish）

神経生物学

P21952 MARCKS, Rabbit Polyclonal Antibody MARCKS WB, IF rat キナーゼ

P21953 MeCP2 ［pS80］, Rabbit Polyclonal AntibodyMECP2,Methyl-CpGBinding Protein 2

WB, IHC human, mouse, rat 転写因子

P21954 Olig2, Rabbit Polyclonal Antibody OLIG2WB, IHC, IP

human, mouse, rat 転写因子

P21955 Periostin C-terminal, Rabbit Polyclonal Antibody POSTN WB, IHCchicken, human,mouse （most mammalian）

細胞外マトリックス

P21956 Synaptotagmin ［pT202］, Rabbit Polyclonal Antibody SYT1 WB, IHCrat （bovine, canine, chicken,human, mouse, non-humanprimate and zebra fish）

神経生物学

P21957 Synaptotagmin ［pS309］, Rabbit Polyclonal Antibody SYT1 WB, IHCrat （bovine, canine, chicken,human, mouse, non-humanprimate and zebra fish）

神経生物学

P21958 TDP43, Rabbit Polyclonal Antibody TARDBP WB, IHC human, rat 転写因子

P21959 Testicular Receptor 2 （TR2）, Rabbit Polyclonal Antibody NR2C1 WB human, mouse, rat 核内受容体

P21960 Testicular Receptor 4 （TR4）, Rabbit Polyclonal Antibody NR2C2 WB human, mouse, rat 核内受容体

P21961 Tryptophan Hydroxylase ［pS19］, Rabbit Polyclonal Antibody TPH2 WBrat （bovine, mouse andzebra fish）

神経生物学

P21962 Tyrosine Hydroxylase, Rabbit Polyclonal Antibody THWB, IF, IHC

all mammalian 神経生物学

アプリケーションの略号：IF＝ Immunofluorescence, IP＝ Immunoprecipitation, IHC＝ Immunohistochemistry, WB＝Western Blotting

マウス網膜切片の免疫組織染色。Rhodopsin Mouse Monoclonal Antibody P21940 を使用。Mary Raven, University of California, Santa Barbara, CA.【各種サイズ100μl　価格：41,000円】

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PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

細胞や組織サンプルからのRNA抽出

mirVana™ PARIS™ Kit同一サンプルからのsmall RNA、トータルRNA、タンパクの分離

同じサンプルからsmall RNAを含むトータルRNAと未変性タンパク質を分離可能 タンパク質と、mRNA、miRNA、siRNAの相関を調べる実験に理想的なキット 102 ～107個の培養細胞、最大100mgの哺乳動物組織から分離可能 200塩基以下のsmall RNAを濃縮でき、ダウンストリーム実験での感度を上げる 30分で完了するシンプルなプロトコール 血液やパラフィン包埋サンプルを除く、ほぼ全ての細胞や組織サンプルからの RNA抽出に適合

※膵臓や脾臓などの高レベルのリボヌクレアーゼを含む組織には向いていません。

mirVana PARIS Kitは、用途の広い独特な精製方法により、同じサンプルから未変性タンパク質と、miRNA、siRNA、snRNA、snoRNAなどのsmall RNAを含む、全てのRNAを回収できるキットです。このキットは200塩基以下の長さのRNAを濃縮することも可能で、ノーザン解析や、mirVana™ miRNA Detection Kitを用いた液体同士のハイブリなど、ダウンストリーム実験の感度を向上させます。同じサンプルからsmall RNA、トータルRNA、タンパク質を分離できるので、mRNA、miRNA、siRNAとタンパク質の発現レベルの相関を調べる実験が大幅に簡素化されます。ほとんどのタンパク質が変性しないよう専門開発された細胞破砕バッファーで、サンプルをホモジナイズすることから始めるため、タンパク質はインタクトな状態で得られ、ライセートの一部をウェスタンブロッティング、二次元電気泳動、その他の様々な酵素アッセイ実験など、一般的なタンパク質解析に直接使用できます。

製品名 サイズ 製品番号 価格

mirVana™ PARIS™ Kit 40反応 AM1556M ¥54,000

多サンプルからのトータルRNA抽出

25～2×106の哺乳動物細胞および最大10mgの動物組織からのRNAを分離可能 グラスファイバー法に比べ、目詰まりせず高収量のRNAを分離可能 lysis/binding能力が向上し、わずか20～50μlでRNAを溶出可能 TURBO DNase™ 処理の改良により、DNAのコンタミを最小限に抑える プロトコールの改善により、植物組織のRNAも分離可能 96wellフォーマットで、ミディアムスループットにも対応

磁気ビーズ法 MagMAX™-96 Total RNA Isolation Kit

磁気ビーズには細胞からのRNAや無細胞サンプルからのウイルスRNAの分離において多くの利点があります。このキットを使用する利点の一つは、サンプル由来の微粒子によるフィルターの目詰まりが無いという点です。AmbionブランドのMagMAX™テクノロジーは、グラスファイバー法に比べて目詰まりなく、サンプルのロスを最小限に抑えます。また、希釈されたサンプルからのRNA濃縮においても、MagMAX™テクノロジーは、優れた結果をもたらします。高性能の lysis/binding磁気ビーズを採用し、微量でも高効率にRNAを捉えるため、結合したRNAはわずか20～50μlのnuclease free waterで溶出できます。さらに、RNAの収量は実験間やサンプル量に違いがある場合でも、定量PCRの結果では優れた直線性が得られています。哺乳動物細胞、動物組織、植物組織から高品質で分解の無いトータルRNAが分離できます。植物組織にはAmbion Plant RNA Isolation Aid（AM9690）と組み合わせてご使用ください。

製品名 サイズ 製品番号 価格

MagMAX™-96 Total RNA Isolation Kit 96反応 AM1830 ¥57,700

Magnetic Stand-96 1個 AM10027 ¥59,800

96 well Magnetic-Ring Stand 1個 AM10050 ¥124,000

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PRODUCT REVIEW プロダクトレビュー

世界に誇るGIBCOブランドの細胞培養製品

TrypLE™ Express & TrypLE™ Select

動物由来およびヒト由来の原料を未使用（non-animal）、組換え型 間葉系幹細胞などの培養にもお奨め トリプシン-EDTAよりも優れた安定性 24ヶ月間室温で安定、室温保存可能（冷蔵保存も可能） トリプシンインヒビター不要 血清添加培養でも無血清培養でも使用可能 さまざまなタイプの接着細胞株で使用可能 フェノールレッド不含 A549細胞で検査済み

動物成分不含細胞に優しい解離剤

User’s Voice ユーザーズボイス

Rouzbe R.Taghizadeh博士科学主任AuxoCell Laboratories, Inc.マサチューセッツ州エームズベリー

TrypLE™ Expressを使用することによってどのようなメリットがありましたか？間葉系幹細胞の継代において懸念されることの一つに、細胞の正常な核型と高い生存能力を維持することがあります。ある朝、私はウォートンゼリー由来の間葉幹細胞の研究をしていて、6種類のフラスコの継代を行う準備をしていました。HBSSで洗い、6つのフラスコのうち最後のフラスコに1mlのGIBCO® TrypLE™ Expressを加えた時、突然建物の火災警報器が鳴り出しました。なぜ火災警報器が鳴ったのか分からなかったので、まずはTrypLE™をHBSSで薄め、フラスコを培養器に入れて細胞を保管することに決めました。しかし、消防士にすぐに細胞培養室から避難するように言われたため、HBSSで希釈する時間もなく、フラスコを培養器に入れるのが精一杯でした。そのため培養器の中で細胞を1mlのTrypLEに浸しておくしかありませんでした。火災警報器が鳴った原因は、一晩中降り続いた大雨で発電室が浸水したことでした。午後2：30になって、再び建物に入ることができました。最悪の事態を覚悟しながら、培養室に戻って培養器からフラスコを取り出し、通常通り作業を始めました。大幅な細胞溶解と低レベルの生存能力を予測しつつ、顕微鏡で細胞を見ると、驚いたことに細胞は損傷を受けておらず（TrypLE™にけん濁したまま）、さらには、確認できる限り正常な状態が維持されていました（98％程度）。そして特に問題もなく、細胞の継代培養を続けることができました。幸運なことに、細胞は4時間も長くTrypLE™に浸されていたにも関わらず、細胞解離にTrypLE™を使用したことで（トリプシン-EDTAは不使用）、細胞を守ることができたのです。もし、トリプシン-EDTAを使用していたら、まちがいなく細胞は20分以内に溶解してしまい、1ヶ月もかけた実験をまた初めからやり直さなければなりませんでした。

TrypLE™ Express

TrypLE™ Expressは、トリプシンの代替品として、お手頃価格で高性能を発揮します。細胞を傷つけることなく、効率的に細胞解離を実現するTrypLE™ Expressを是非体感してください。

製品名 サイズ 製品番号 価格TrypLE™ Express 100ml 12604013 ¥2,500TrypLE™ Express 500ml 12604021 ¥7,400TrypLE™ Express（フェノールレッド含有） 100ml 12605010 ¥2,500TrypLE™ Express（フェノールレッド含有） 500ml 12605028 ¥7,300TrypLE™ Select 100ml 12563011 ¥3,300TrypLE™ Select 500ml 12563029 ¥13,000TrypLE™ Select（10X） 100ml A1217701 ¥30,000TrypLE™ Select（10X） 500ml A1217702 ¥118,200

トリプシンに代わる優れものTrypLE™ は利便性の高い細胞解離を実現します。現在のプロトコールで使用されているトリプシンを直接置き換えて使用できます。

細胞に優しいTrypLE™ は動物またはヒト由来成分が含まれていないため、極めて純度が高く、細胞に穏やかに作用します。トリプシンインヒビターによる不活性化は必要ありません。TrypLE™ は、血清含有または無血清の条件下でも様々な接着タイプの哺乳類細胞株の解離に適しています。

室温で安定TrypLE™細胞解離剤は24ヶ月間室温で安定しているため、実験でのご使用や保管に大変便利です。

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パラフィン包埋サンプルから回収したRNAサ

パラフィン包埋サンプルからDNA/RNAを回収するのはどうすればよいの？→ Ambion RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation

Kitを使うと簡単です。

ホルムアルデヒドあるいはパラホルムアルデヒドで固定したパラフィン包埋（FFPE）組織から全ての種類の核酸（miRNAを含むRNAとDNA）を抽出できるようにデザインされているキットです。

RNAは約2時間、DNAは1日で抽出することができます。

Ambion RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kitを用いて高純度の total RNAを回収することができます

マウス肝臓パラフィン包埋切片10 μ m x 5枚から total RNAを回収し、NanoDrop®により濃度および純度を確認しました。

その結果全体で3 μ g、1枚あたり600ngのRNAが回収できました。またA260/A280は2.04となり、タンパク質の混入が少ない非常に綺麗なRNAであることも確認されました。

USの資料では未固定サンプルから精製した場合と比較して、50％以上のtotal RNA回収が見込めるとのデータが示されています。

左図は6年が経過したFFPEサンプルから total RNAを異なるプロトコールで回収した結果です。RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation KitはRNAの収量が他のプロトコールと比較して高いことが確認されました。

なお、今回はマウス解剖後すぐに固定したサンプルを用いましたが、サンプル作成後固定までに時間を要した場合、その時点でRNAの分解が進んでいるため、切片あたりの収量が減少する危険性があります。

NanoDrop®による濃度測定

0

1

2

3

4

5

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7

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9

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Colon Lung Breast Kidney Bladder

Tota

l Am

ou

nt

of

RN

A (

μg

) Ambion® RecoverAll™ Kit

Competitor B

Competitor A

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ンプルの特徴とPCR反応時のTips回収されたRNAは100塩基前後のサイズに断片化していました。組織サンプルにFFPE処理を行なって保存すると、RNAは全長にわたって不規則な損傷を受け短く分断します。回収した total RNAをBioAnalyzerで解析した結果、RIN値が3となり、100塩基前後のサイズに多くのRNAが断片化していることが確認されました。USでのデータでは、1年経過後のFFPEサンプルの平均RNA鎖長は106塩基ですが、8年経過後のサンプルでは82塩基まで短くなるとの情報もあります。

BioAnalyzer 2000による解析結果

PCR反応時のPCR産物鎖長の影響同じターゲット遺伝子に対する異なる長さのプライマーセットを用いて増幅すると、200塩基対までのバンドははっきりと見えていますが、300塩基対を超えるとバンドが薄くなり、それ以上の長さになると全くバンドが見えなくなることが確認されました。

リアルタイムPCRで検出すると、100塩基対以下の長さであれば増幅プロットにほぼ差はありませんが、100塩基以上の長さになると少しずつ増幅開始サイクルが遅くなり、400塩基対以上では全く増幅しなくなることが確認されました。電気泳動では300bpまではっきりとしたバンドが見えているように見えますが、PCR産物鎖長が長いと1分子あたりの光度が強いことによるもので、実際にはアンプリコンサイズが長くなるとPCRの増幅効率は悪くなっていることを示しています。右図の増幅曲線を比較すると309bpのものは66bpより約12サイクル遅れていますが、これは212 ＝ 約4000倍のPCR産物量比があることを示しています。

まとめ

Ambion RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kitを用いると、高純度の核酸を回収することができます。ただし回収されたRNAはFFPE処理によってダメージを受け断片化しているため、PCR反応を行うときにはアンプリコンサイズをできる限り短く設計することが重要です。TaqMan® Gene Expression Assaysは、PCR増幅効率を配慮して、短いPCR産物鎖長でプライマー・プローブセットが設計されています（通常100bp以下）。このためFFPEから回収した total RNAからも良好なデータを得ることができます。ただし長期間保存されていたFFPEサンプルほどRNAの断片化が進行しているため、80bp以下のサイズのセットを設計及び選択することが望ましいと考えられます。

製品名 製品番号 価格Ambion® RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit AM1975 ¥52,000TaqMan Fast Advanced Master Mix, 5mL 4444557 ¥63,000TaqMan Gene Expression Assays, S-scale （250μL） 4331182 ¥29,800

私が実験しました !

テクニカルサポート　永野

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TECHNICAL REVIEW テクニカルレビュー

記載価格は2011年6月現在の価格です。消費税は含まれていません。価格は予告なしに変更する場合がありますのであらかじめご了承ください。＊本文中のオーダリングインフォメーションで 　 マークがついている製品はアプライドバイオシステムズブランド、　 マークはインビトロジェンブランドでお取り扱いしています。研究用にのみ使用できます。診断目的及びその手続上での使用は出来ません。 記載の社名および製品名は弊社または各社の商標または登録商標です。The trademarks mentioned herein are the property of Life Technologies Corporation or their respective owners. © 2011, Life Technologies Japan Ltd. All rights reserved. Printed in Japan.

http://www.lifetechnologies.co.jp

LFT009-A1106B

販売店

〒108-0023　東京都港区芝浦4-2-8　住友不動産三田ツインビル東館

ライフテクノロジーズジャパン株式会社

http://www.appliedbiosystems.jp

http://www.invitrogen.jp

ウェブサイト：

TEL.03（6832）9300　FAX. 03（6832）9580

学会展示会・セミナー

第9回国際ゲノム会議会　期：2011年7月12日（火）～14日（木）　　会　場：学術総合センター一橋記念講堂（東京）　　http://gt164.jpn.org/9agw/

学会展示会・セミナーの最新情報は http://www.appliedbiosystems.jp/website/jp/event/eventpage.jsp

ライフテクノロジーズについてライフテクノロジーズは、2008年に Invitrogen Corporation と Applied Biosystems Inc の統合により誕生しました。馴染みのある両社の社名を維持し、Invitrogenブランド からは高品質な試薬・消耗品を、 Applied Biosystemsブランド からはPCRやDNAシーケンシングの最新鋭機器を含むトータルソリューションを提供するなど、科学者の多彩なニーズにお応えしています。

カスタマーサービス電話番号 変更のお知らせ

カスタマーサービスがひとつに ! 全てのライフテクノロジーズ製品に関するお問合せはこちらへ弊社カスタマーサービス部へのお問合先が統一され、ひとつの電話番号で全てのライフテクノロジーズ製品についてお問合わせいただけるようになりました！今後も迅速かつ、的確な回答に努めてまいりますのでよろしくお願い申し上げます。

お客様窓口 TEL ： 03-6832-6980ご案内させていただく選択肢は、ガイダンスの途中でもご選択いただけます。

展示会 企業セミナー

企業セミナー会　期：2011年7月12日（火）（予定） 会　場：学術総合センター一橋記念講堂（東京）タイトル：「Ion Torrent PGM™ によるシーケンスデータの特性と全ゲノム解析」

セミナー・ワークショップ

ライフテクノロジーズジャパンでは最新技術のご紹介を始め、いろいろなテーマのセミナーや技術講習会を定期的に行っております。セミナー・ワークショップの最新情報・詳細・お申し込みは、弊社ウェブサイトをご覧ください。

セミナー・ワークショップの最新情報は http://www.lifetechnologies.co.jp/sem/index.html

QUIZQUIZ クイズに答えてLife Technologiesロゴ入りUSB携帯電話充電セットを当てよう！

以下のクイズに正解した方から抽選で10名様にLife Technologiesロゴ入りUSB携帯電話充電セットをプレゼントします。

Q 蛍光細胞分析を簡便、かつ迅速に測定できる製品の名前は？

A ○○○○イメージベースサイトメーター

http://www.lifetechnologies.co.jp/quiz.htm からご応募ください。

応募締め切り：

2011年7月22日（金）

6月号のクイズの正解は、3.3時間以内でした。

※ 当選者の発表は賞品の発送をもってかえさせていただきます。

INFORMATION