Les nouveaux outils pour maitriser la mise en bouteille stérile.
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Les nouveaux outils pour maitriser la mise
en bouteille stérile
Risque de « relargage »
Pollution du matériel
Vin avec une forte population levurienne
Filtration = réduction proportionnelle
de la charge
La filtration de mise
si élimination de 99,9999% des levures par filtration de mise
levures/ml avant filtration
levures /ml levures / bouteille
100 0,0001 0,075
1000 0,001 0,75
10 000 0,01 7,5
100 000 0,1 75
1 000 000 =début de FA
1 750
Mise en bouteille stérile = levures/bouteille <10 (voir <1)
• Adaptation du traitement de mise
•Adaptation du type de filtration à la population levurienne
•Suivi microbiologique de la mise en bouteille
Risque de « relargage »
Pollution du matériel
Augmentation des risques de
contamination du matériel
Vin avec une forte population levurienne
• Analyses de la population levurienne par cytométrie de flux
•Analyse du SO2 moléculaire, libre et total
= Maîtrise des risques
= garantie de qualité de la mise en bouteille stérile
1 vin contaminé peu mettre en cause tout le
travail d’une journée
Filtration = réduction proportionnelle
de la charge
La cytométrie de flux
• Quoi ?
• Pourquoi ?
• Comment ?
Partec: l’innovation en marche depuis 40 ansPrincipes des appareils de Cytométrie en Flux Partec: l’innovation en marche depuis 40 ansPrincipes des appareils de Cytométrie en Flux
Pascal Brunou, David BastienPartec France
1968 2008 1968 2008
La cytométrie : quoi ?
Agrosciences:
• Recherche vétérinaire• Aquaculture• Biologie végétale• Sélection variétale
Applications Industrielles:
• Agroalimentaire (jus de fruit, bière…)• Produits cosmetiques• Pharmaceutique• Industrie du papier
Domaines d’applications (2)
Analogie entre microscopie et cytométrie de fluorescence
Echantillon liquide focalisé sous l’objectif et le trajet optique du cytomètre
Echantillon fixe sur lame au microscope
Cytométrie: = « mesure des cellules »
PMT 1
PMT 2
LASER
Système fluidique - Focalisation hydrodynamique
Cellule de mesure = cœur du système
Excitation par un laser des particules injectées
Side Scatter (SSC) + Fluorescence
Forward Scatter(FSC)
Laser
Source d’excitation lumineuse ultra-performante type laser
pour une excitation et analyse des signaux d’émission en quelques microsecondes
Différentes approches pour le marquage des cellules
Anticorps Anticorps
Sondes intra-cytoplasmiquesSondes intra-cytoplasmiques
Marqueurs de surface - organites cellulairesMarqueurs de surface - organites cellulaires
Sondes ADN Sondes ADN
Configuration simple ou multi-couleurs
Système Mono-paramétrique Système Multi-paramétrique
source d’excitation simple / sources multiples
Représentation des résultats en 3 dimensions :
* taille-structure (FSC) / activité fermentaire de la levure (Fluorescence)
* Densité de population = couleur
- taille-structure (FSC)
- population
- Activité levurienne (fluorescence)
- population
La cytométrie : quoi ?
10X
100X
1000X
Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total
30.040 317.610 136.780
300.400 3.176.100 1.367800 4.844.300
Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total
2.670 29.810 11.330
267.000 2.981.000 1.133.000 4.381.000
Zone 1 Zone 2 Zone 3 Total
330 4.580 1.620
330.000 4.580.000 1.620.000 6.530.000
Caractéristiques de la méthode
• Gamme de mesure : 100 à 500.000 levures/ml (sans dilution)
• Limite de détection : 100 à 1000 levures/ml
• Répétabilité : <10% de la mesure
• Bonne corrélation entre l’activité fermentaire de la levure et l’intensité de la fluorescence mesurée
La cytométrie de flux, un outil qui :
Permet un comptage rapide et précisPermet de connaître la viabilité et l’activité
fermentaireApporte une solution efficace pour la
maitrise des mises en bouteille stériles