LC/MS 2- Analysis of 2AB-labeled …...TSK-GEL TECHNICAL INFORMATION No.123 LC/MS...
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TSK-GEL TECHNICAL INFORMATION No.123
LC/MS による 2-アミノ安息香酸誘導体化糖鎖の分析
Analysis of 2AB-labeled isomaltooligosaccharides by LC/MS ポストゲノム研究の中心的課題の1つに糖鎖構造・機能の解明があり近年目覚しい進展を遂げて
います。糖鎖構造の解析は糖鎖を誘導体化した後、逆相HPLC、或いは順相HPLC (HILIC)、若し
くは逆相-順相の 2 次元 LC が用いられてきました。近年は MS の進化とともに LC/MS(/MS)やMALDI-TOF-MSによる解析が幅広く行われるようになってきました。 本資料では 2-アミノ安息香酸で誘導体化した糖鎖を HILIC/MS で分析した例を紹介します。分
離カラムにTSKgel Amide-80 3µmを用い条件を最適化することにより糖鎖が3量体から26量体
まで良好に分離・同定されました。 *本データは近畿大学薬学部 木下充弘先生のご厚意によります。
図1. TSKgel Amide-80 3µm を用いた LC/MS による2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の測定
カラム: TSKgel Amide-80 3µm (2.0 mmI.D. x 15 cm)
溶離液: A) 15mmol/L CH3COONH4/CH3CN=10/90
B) 15mmol/L CH3COONH4/CH3CN=195/5
グラジエント: 30% B (0min) → 30% B (2min) → 90% B (32min)
流速: 0.25mL/min
検出: MS
イオン化 ESI、CDL temp.: 190 ℃、Detector voltage: 1.7 kV、Neuburising gas: 1.5 L/min
温度: 40℃
注入量: 2µL
試料:2 アミノ安息香酸誘導体化イソマルトオリゴ糖
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Positive ion moded.p3
d.p4
d.p5
d.p6
d.p7 d.
p8d.
p9d.
p10
d.p1
5
d.p2
0
d.p3
d.p4
d.p5
d.p6
d.p7
Negative ion mode
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32
Positive ion moded.p3
d.p4
d.p5
d.p6
d.p7 d.
p8d.
p9d.
p10
d.p1
5
d.p2
0
d.p3
d.p4
d.p5
d.p6
d.p7
Negative ion mode
min
min
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 1+ =626
[M+H] 1+ =788
[M+H] 1+ =950
[M+H] 1+ =1112
[M+H] 1+ =1274
[M+H] 1+ =1436
[M+2H] 2+ =718
dp:3
dp:4
dp:5
dp:6
dp:7
dp:8
m/z
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 1+ =626
[M+H] 1+ =788
[M+H] 1+ =950
[M+H] 1+ =1112
[M+H] 1+ =1274
[M+H] 1+ =1436
[M+2H] 2+ =718
dp:3
dp:4
dp:5
dp:6
dp:7
dp:8
m/z
図2-1. 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル(ポジティブモード)
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =889
[M+H] 2+ =970
[M+H] 1+ =1598
[M+H] 2+ =809
[M+H] 2+ =1132
[M+H] 2+ =1214
[M+H] 2+ =1052
dp:9
dp:10
dp:11
dp:12
dp:13
dp:14
m/z
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =889
[M+H] 2+ =970
[M+H] 1+ =1598
[M+H] 2+ =809
[M+H] 2+ =1132
[M+H] 2+ =1214
[M+H] 2+ =1052
dp:9
dp:10
dp:11
dp:12
dp:13
dp:14
m/z
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =889
[M+H] 2+ =970
[M+H] 1+ =1598
[M+H] 2+ =809
[M+H] 2+ =1132
[M+H] 2+ =1214
[M+H] 2+ =1052
dp:9
dp:10
dp:11
dp:12
dp:13
dp:14
m/z
図2-2. 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル(ポジティブモード)
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =1376
[M+H] 2+ =1457
[M+H] 2+ =1295
[M+H] 2+ =1619
[M+H] 2+ =1700
[M+H] 2+ =12538
[M+H] 3+ =1140
[M+H] 3+ =1086
dp:15
dp:16
dp:17
dp:18
dp:19
dp:20
m/z
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =1376
[M+H] 2+ =1457
[M+H] 2+ =1295
[M+H] 2+ =1619
[M+H] 2+ =1700
[M+H] 2+ =12538
[M+H] 3+ =1140
[M+H] 3+ =1086
dp:15
dp:16
dp:17
dp:18
dp:19
dp:20
m/z
図2-3. 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル(ポジティブモード)
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =1782
[M+H] 3+ =1194
[M+H] 3+ =1248
[M+H] 3+ =1302
[M+H] 3+ =1357
[M+H] 3+ =1411
[M+H] 3+ =1465
[M+H] 2+ =1863.
dp:21
dp:22
dp:23
dp:24
dp:25
dp:26
m/z
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =1782
[M+H] 3+ =1194
[M+H] 3+ =1248
[M+H] 3+ =1302
[M+H] 3+ =1357
[M+H] 3+ =1411
[M+H] 3+ =1465
[M+H] 2+ =1863.
dp:21
dp:22
dp:23
dp:24
dp:25
dp:26
m/z
600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
[M+H] 2+ =1782
[M+H] 3+ =1194
[M+H] 3+ =1248
[M+H] 3+ =1302
[M+H] 3+ =1357
[M+H] 3+ =1411
[M+H] 3+ =1465
[M+H] 2+ =1863.
dp:21
dp:22
dp:23
dp:24
dp:25
dp:26
m/z
図2-4. 2AA 誘導体化イソマルトオリゴ糖の ESI-MS スペクトル(ポジティブモード)