Lampiran 1. Surat keterangan Hasil Determinasi Tanaman ... · e. Pembuatan seri konsentrasi dari...
Transcript of Lampiran 1. Surat keterangan Hasil Determinasi Tanaman ... · e. Pembuatan seri konsentrasi dari...
52
Lampiran 1. Surat keterangan Hasil Determinasi Tanaman Jeruk Bali Putih
(Citrus grandis)
53
Lampiran 1. Lanjutan...
54
Lampiran 1. Lanjutan...
55
Lampiran 2. Surat keterangan telah melakukan Penelitian di Laboratorium
Biologi Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
56
Lampiran 3. Surat keterangan telah melakukan Penelitian di Laboratorium Kimia
Farmasi Universitas Wahid Hasyim Semarang
57
Lampiran 4. Perhitungan Susut Pengeringan dan Randemen Ekstrak
a. Perhitungan susut pengeringan = Bobot awal- Bobot akhir X 100%
Bobot awal
Susut Pengeringan = 14000 gram – 2680 gram X 100%
14000 gram
Susut Pengeringan = 11320 gram X 100%
14000 gram
Susut Pengeringan = 80,86%
b. Perhitungan Rendemen Ekstrak
Rendemen Ekstrak = Bobot Ekstrak Kental X 100%
Bobot Simplisia Kering
Rendemen Ekstrak = 105 gram X 100%
300 gram
Rendemen Ekstrak = 35%
58
Lampiran 5. Perhitungan Larutan Stok dan Seri Konsentrasi
a. Data penimbangan DPPH
Keterangan Hasil Penimbangan
Berat botol timbang 15020,1 mg
Berat botol timbang + DPPH 15030,9 mg
Berat botol timbang + sisa 15021,1,1 mg
Berat DPPH 9,8 mg
b. Pembuatan larutan stok DPPH 0,1 mM sebanyak 250 mL (Mr DPPH =
394,32 g/mol)
Konsentrasi = Berat DPPH X 1000
Mr Vol. Pembuatan
Konsentrasi = 9,8 X 1000
394,32 250
Konsentrasi = 0,02485 X 4
Konsentrasi = 0,0994 mM ~ 0,1 mM
Sebanyak 9,8 mg DPPH dilarutkan dalam etanol p.a ad 250 mL dalam
labu takar
c. Pembuatan larutan stok kuersetin 200 ppm sebanyak 50 mL
Kuersetin 200 ppm = 0,2 gram / 1000 mL
= 0,02 gram/ 100 mL
= 20 mg/ 100 mL
= 10 mg/50 mL
Kuersetin sebanyak 10mg dilarutkan dalam etanol p.a ad 50 mL dalam
labu takar.
59
Lampiran 5. Lanjutan...
d. Penimbangan larutan stok kuersetin
Keterangan Hail Penimbangan
Berat kertas 336,1 mg
Berat kertas + kuersetin 346,3 mg
Berat kertas + sisa 336,2 mg
Berat kuersetin 10,1 mg
e. Pembuatan seri konsentrasi dari larutan stok kuersetin 200 ppm
1. Membuat larutan stok kuersetin 2 ppm sebanyak 10 mL
2 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 x 200 ppm = 10 ml x 2 ppm
= V1 = 0,1 ml ~ 100 µl
Sebanyak 0,1 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam
etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.
2. Membuat larutan stok kuersetin 4 ppm sebanyak 10 mL
4 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 x 200 ppm = 10 ml x 4 ppm
= V1 = 0,2 ml ~ 200 µl
Sebanyak 0,2 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam
etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.
60
Lampiran 5. Lanjutan...
3. Membuat larutan stok kuersetin 6 ppm sebanyak 10 mL
6 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 x 200 ppm = 10 ml x 6 ppm
= V1 = 0,3 ml ~ 300 µl
Sebanyak 0,3 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam
etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar
4. Membuat larutan stok kuersetin 8 ppm sebanyak 10 mL
8 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 x 200 ppm = 10 ml x 6 ppm
= V1 = 0,4 ml ~ 400 µl
Sebanyak 0,4 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam
etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar
5. Membuat larutan stok kuersetin 6 ppm sebanyak 10 mL
10 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 X 200 ppm = 10 ml x 10 ppm
= V1 = 0,5 ml ~ 500 µl
Sebanyak 0,5 mL larutan stok kuersetin 200 ppm diencerkan dalam
etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.
61
Lampiran 5. Lanjutan...
f. Pembuatan larutan uji fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih
Keterangan Hasil Penimbangan
Berat kaca arloji kosong 8237,9 mg
Berat kaca arloji + zat 8437,9 mg
Berat kaca arloji + sisa 8237,9 mg
Berat zat 200 mg
g. Pembuatan larutan stok Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Bali
Putih (FEAEEKJBP)
1. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 12,5 ppm sebanyak 10
mL
12,5 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 12,5 ppm
= V1 = 0,016 ml ~ 16 µl
Sebanyak 0,016 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm
diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.
2. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 25 ppm sebanyak 10
mL
25 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 25 ppm
= V1 = 0,031 ml ~ 31 µl
Sebanyak 0,031 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm
diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.
62
Lampiran 5. Lanjutan...
3. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 50 ppm sebanyak 10
mL
50 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 50 ppm
= V1 = 0,063 ml ~ 63 µl
Sebanyak 0,063 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm
diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.
4. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 100 ppm sebanyak 10
mL
100 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 100 ppm
= V1 = 0,125 ml ~ 125 µl
Sebanyak 0,125 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm
diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar
5. Membuat larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 200 ppm sebanyak 10
mL
200 ppm = V1 x C1 = V2 x C2
= V1 X 8000 ppm = 10 ml x 200 ppm
= V1 = 0,25 ml ~ 250 µl
Sebanyak 0,25 mL larutan stok larutan uji FEAEEKJBP 8000 ppm
diencerkan dalam etanol p.a ad 10 mL dalam labu takar.
63
Lampiran 6. Data Perhitungan Aktivitas Antioksidan
1. Perhitungan Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit
Jeruk Bali Putih (FEAEEKJBP) Replikasi 1
% Aktivitas Antioksidan = Abs kontrol – Abs perlakuan x 100%
Abs kontrol
Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878
Sampel Seri Konsentrasi
(µg/mL)
Absorbansi
sampel
(nm)
Aktivitas
Antioksidan (%)
Kuersetin
Replikasi 1
2 0,612 30,296
4 0,571 41,116
6 0,431 50,911
8 0,322 63,326
10 0,231 73,690
FEAEEKJBP
Replikasi 1
12,5 0,755 14,009
25 0,713 18,793
50 0,551 37,244
100 0,380 56,719
200 0,221 74,829
64
Lampiran 6. Lanjutan...
2. Perhitungan Nilai IC50 Replikasi 1
Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linier Y = bx + a antara seri
konsentrasi larutan uji dengan presentase aktivitas antioksidan.
Sampel Seri Konsentrasi
(µg/mL)
Aktivitas
Antioksidan
(%)
Nilai IC50
(µg/mL)
Kuersetin
Replikasi 1
2 30,296
5,658 4 41,116
6 50,911
8 63,326
10 73,690
FEAEEKJBP
Replikasi 1
12,5 14,009
107,591
25 18,793
50 37,244
100 56,719
200 74,829
Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878
a. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Kuersetin Replikasi 1
Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi kuersetin
(X) dengan presentase aktivitas antioksidan kuersetin (Y) diperoleh
nilai a = 19,168 b = 5,449 dan r = 0,999
Y = bx + a
50 = 5,449 x + 19,168
50 – 19,168 = 5,449x
X = 5,658 µg/mL
65
Lampiran 6. Lanjutan...
b. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit Jeruk
Bali Putih Replikasi 1
Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi fraksi etil asetat
ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (x) dengan presentase aktivitas
antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (y)
diperoleh nilai a= 15,248 b = 0,323, dan r = 0,963
Y = bx + a
50 = 0,323 x + 15,248
50 – 15,248 = 0,323 x
X = 107,591 µg/mL
3. Perhitungan Aktivitas Antioksidan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit
jeruk bali putih (FEAEEKJBP) Replikasi 2
% Aktivitas Antioksidan = Abs kontrol – Abs perlakuan x 100%
Abs kontrol
66
Lampiran 6. Lanjutan...
Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878
4. Perhitungan Nilai IC50 Replikasi 2
Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linier Y = bx + a antara seri
konsentrasi larutan uji dengan presentase aktivitas antioksidan.
Sampel Seri
Konsentrasi
(µg/mL)
Aktivitas
Antioksidan
(%)
Nilai IC50
(µg/mL)
Kuersetin
Replikasi 2
2 22,893
5,928 4 38,724
6 50,569
8 63,212
10 76,993
FEAEEKJBP
Replikasi 2
12,5 13,212
106,695
25 18,907
50 39,522
100 57,175
200 74,487
Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878
Sampel Seri Konsentrasi
(µg/mL)
Absorbansi
sampel (nm)
Aktivitas
Antioksidan (%)
Kuersetin
Replikasi 2
2 0,677 22,893
4 0,538 38,724
6 0,434 50,569
8 0,323 63,212
10 0,202 76,993
FEAEEKJBP
Replikasi 2
12,5 0,762 13,212
25 0,712 18,907
50 0,531 39,522
100 0,376 57,175
200 0,224 74,487
67
Lampiran 6. Lanjutan...
a. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Kuersetin 2
Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi kuersetin
(X) dengan presentase aktivitas antioksidan kuersetin (Y) diperoleh
nilai a = 10,672 b = 6,634 dan r = 0,998
Y = bx + a
50 = 6,634 x + 10,672
50 – 10,672 = 6,634 x
X = 5,928 µg/mL
b. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk
bali putih (FEAEEKJBP) Replikasi 2
Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi Fraksi etil asetat
ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (x) dengan presentase aktivitas
antioksidan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (y)
diperoleh nilai a= 15,751, b = 0,321, dan r = 0,953
Y = bx + a
50 = 0,321 x + 15,751
50 – 15,751 = 0,321 x
X = 106,695 µg/mL
5. Perhitungan Aktivitas Antioksidan Fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit
jeruk bali putih (FEAEEKJBP) Replikasi 3
% Aktivitas Antioksidan = Abs kontrol – Abs perlakuan x 100%
Abs kontrol
68
Lampiran 6. Lanjutan...
Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878
6. Perhitungan Nilai IC50 Replikasi 3
Nilai IC50 diperoleh dari persamaan regresi linier Y = bx + a antara seri
konsentrasi larutan uji dengan presentase aktivitas antioksidan.
Sampel Seri Konsentrasi
(µg/mL)
Absorbansi
sampel (nm)
Aktivitas
Antioksidan (%)
Kuersetin
Replikasi 3
2 0,698 20,501
4 0,586 33,257
6 0,448 48,975
8 0,382 56,492
10 0,242 72,437
FEAEEKJBP
Replikasi 3
12,5 0,770 12,301
25 0,727 17,198
50 0,542 38,269
100 0,349 60,251
200 0,220 74,943
69
Lampiran 6. Lanjutan...
Sampel Seri
Konsentrasi
(µg/mL)
Aktivitas
Antioksidan
(%)
Nilai IC50
(µg/mL)
Kuersetin
Replikasi 3
2 20,501
6,577 4 33,257
6 48,975
8 56,492
10 72,437
FEAEEKJBP
Replikasi 3
12,5 12,301
105,507
25 17,198
50 38,269
100 60,251
200 74,943
Absorbansi kontrol (Larutan DPPH 0,1 mM) = 0,878
a. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Kuersetin Replikasi 3
Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi kuersetin
(X) dengan presentase aktivitas antioksidan kuersetin (Y) diperoleh
nilai a = 8,200 b = 6,355 dan r = 0,995
Y = bx + a
50 = 6,355x + 8,200
50 – 8,200 = x + 6,355
X = 6,577 µg/mL
b. Hasil Perhitungan Nilai IC50 Fraksi Etil Asetat Ekstrak Etanol Kulit Jeruk
Bali Putih Replikasi 3
Persamaan regresi linier Y= bx + a antara seri konsentrasi fraksi etil asetat
ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (x) dengan presentase aktivitas
70
Lampiran 6. Lanjutan...
antioksidan fraksi etil asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih (y)
diperoleh nilai a= 14,655, b = 0335, dan r = 0,944
Y = bx + a
50 = 0,335 x + 14,655
50 – 14,655 = 0,335 x
X = 105,507 µg/mL
b. Hasil rerata dan standar deviasi uji aktivitas antioksidan fraksi etil
asetat ekstrak etanol kulit jeruk bali putih
Sampel Replikasi Persamaan Regresi
Linier
IC50
(µg/mL)
IC50 (µg/mL) ±
SD
Fraksi Etil Asetat
Ekstrak Etanol
Kulit Jeruk Bali
Putih
1
y = bx + a
50 = 0,323 x + 15,248
r2
= 0,927 r = 0,963
107,591
106,597 ± 1,045 2
y = bx + a
50 = 0,321 x + 15,751
r2
= 0,908 r = 0,953
106,695
3
y = bx + a
50 = 0,335 x + 14,655
r2
= 0,891 r = 0,944
105,507
Kuersetin
1
y = bx + a
50 = 5,449 x + 19,168
r2 = 0,998 r = 0,999
5,658
6,054 ± 0,472
2
y = bx + a
50 = 6,634 x + 10,672
r2 = 0,996 r = 0,998
5,928
3
y = bx + a
y= 6,355 x + 8,200
r2 = 0,990 r = 0,995
6,577
71
Lampiran 6. Lanjutan...
c. Hasil Perhitungan Penetapan Kadar Flavonoid Total Fraksi Etil Asetat
Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Bali Putih
Replikasi Absorbansi Flavonoid Total
(mgEQ/gram) ekstrak
Replikasi I 0,420 60,20
Replikasi II 0,415 59,22
Replikasi III 0,404 57,06
Rata- rata kadar
flavonoid total
58,83
72
Lampiran 7. Panjang Gelombang DPPH
73
Lampiran 8. Penentuan Panjang Gelombang Kuersetin
74
Lampiran 9. Penentuan Operating Time Kuersetin
75
Lampiran 10. Penentuan Operating Time DPPH
76
Lampiran 11. Penentuan Persentase Aktivitas Antioksidan Kuersetin
a. Replikasi 1
77
Lampiran 11. Lanjutan…
b. Replikasi 2
78
Lampiran 11. Lanjutan…
c. Replikasi 3
79
Lampiran 12. Penentuan Persentase Aktivitas Antioksidan Fraksi Etil Asetat
Ekstrak Etanol Kulit Jeruk Bali Putih
80
Lampiran 13. Penentuan Kurva Baku Kuersetin
a. Replikasi 1
81
Lampiran 13. Lanjutan…
b. Replikasi 2
82
Lampiran 13. Lanjutan…
c. Replikasi 3
83
Lampiran 14. Penetapan Kadar Flavonoid Total
84
Lampiran 15. Dokumentasi Penelitian
Penimbangan Kulit Jeruk Bali Putih Pengovenan Kulit Jeruk Bali
Putih pada suhu 500C
Pengecekan Kadar Air Perkolasi
Fraksinasi Larutan Stok Kuersetin
85
Lampiran 15. Lanjutan…
Larutan Uji Fraksi Etil Asetat Larutan DPPH dan Kuersetin
Ekstrak Etanol Kulit Jeruk
Bali Putih dan DPPH