Laboratorio de Inmunohistoquímica2015

8/15/2019 Laboratorio de Inmunohistoquímica2015

1/378

Laboratorio de Inmunohistoquímica:

Creado recientemente en lasinstalaciones de la cátedra, estalaboratorio está equipado para larealización de técnicas básicasde Inmunohisto-química, lascuales se desarrollan en elmarco de proyectos deinvestigación elaborados tanto por los estudiantes de pregradocomo por los profesores de launidad académica

!e presta asesoría técnica aotras dependencias de launiversidad

Importancia de la Inmunohistoquímica

Como técnica de laboratorio la Inmunohistoquímica es de vital importancia para el marca"eselectivo de proteínas y otros elementos que pueden estar presentes, tanto en las membranascelulares, citoplasma, y demás compartimientos citoplásmicos, así como también en lamatriz e#tracelular

$s de gran utilidad en la identificación de las estirpes celulares de los te"idos básicos, dereceptores de membranas, proteínas citosólicas, y de cualquier otra estructura para la cualse halla desarrollado un anticuerpo específico !u aplicación es de indiscutible valor enanatomía patológica en el diagnóstico de lesiones tumorales y su pronóstico y en lainvestigavión en general, sobre todo en la definición del inmunofenotipo de las células delos te"idos

$s un proceso de numerosos pasos que requiere de un entrenamiento especializado sobretodo en el procesamiento de los te"idos, la selección de todos y cada uno de los reactivosnecesarios apropiados, y lo más importante% la interpretación de los inmunomarca"es en las preparaciones histológicas


2/378

Fundamento:

&a técnica de Inmunohistoquímica se fundamenta en la reacción 'ntígeno - 'nticuerpo

$l anticuerpo es el reactivo fundamental y la disponibilidad de antisueros, fracciones deinmunoglobulinas y anticuerpos monoclonales que permiten marcar antígenos celulares ytisulares es cada vez mayor

&os anticuerpos pertenecen a un grupo de proteínas denominadas Inmunoglobulinas, presentes en cinco clases y sintetizadas por células conocidas como (lasmocitos, que noson mas que un )ltimo grado de diferenciación de los linfocitos *

&oa anticuerpos monoclonales son producidos por un clon indiccidual de plasmocitos,mientras que los anticuerpos policlonales son producidos por diferentes plasmocitos y enconsecuencia pueden reaccionar con varios fragmentos del antígeno para el que fueroncreados $l animal más utilizado para la producción de anticuerpos policlonales es elcone"o, seguido por la cabra, ove"a, caballo, entre otros (ara los anticuerpos monoclonales,el animal de elección es el ratón, tal vez por motivos económicos

&a reacción antígeno - anticuerpo en la técnica inmunohistoquímica es incolora y parahacerla evidente, se utilizan algunos métodos como la fluorescencia, las reacciones enzima-sustrato que convierte al cromógenosin color en un compuesto coloreado que permiteidentificar el lugar donde se depositaron los anticuerpos utilizados

Ficha técnica del inmunomarcaje indirecto con amplificación peroxidasa-dab

(+ C & ('+' &' .C/IC' 0$ I/12/ ($+ 3I0'!'(ara te"idos incluidos en parafina

0$!('+'4I/'+%5 3ilol% 6 # 78 c9u

:I0+' 'CI;/%5 'lcohol % 6 # 78 c9u5 'lcohol ?7 >% < # 785 'lcohol @= >% < # 78

5 &avado en agua de chorro%


3/378

5 $bullición en tampón citrato%


4/378

Inmunomarcaje:

Anticuerpo Primario: Antieurofilamentos

!ontracoloración: "ematoxilina+esultados%Células FneuronasH%-!oma y prolongaciones F a#onesH en color pardo oscuro de variada intensidad, enrelación a la cantidad de neurofilamentos presentes

- /)cleos% azul

Corteza cerebelosa de rata, ob"etivo J=3

#$ %l interferón-&amma :


5/378

6H reconocen antígenos en el conte#to de moléculas del comple"o principal dehistocompatibilidadBH son linfocitos granulares grandesJH poseen receptores antigénicos similares a los de los linfocitos 7H no producen interferón gamma

$ Los linfocitos ) citotóxicos reconocen :


6/378

JH aumentar la secreción de heparina por parte de los mastocitos7H inducir la e#presión de moléculas 1:C de clase II sobre células histicas#'$ )odas las células presentadoras de antí&eno; se caracteri6an por :


7/378


8/378

6H C


9/378

6H la afinidad es mayor en las respuestas primarias que en las secundariasBH la afinidad aumenta con la estimulación antigénicaJH un linfocito * que e#presa la cadena Lappa pasa a e#presar la lambda7H cuando se estimula un linfocito *, puede e#presar el segunda alelo parental del gen delas inmunoglobulinas, que estaba mudo

(+$ Con capaces de ejercer acti*idad citotóxica dependiente de Ac 2A/!!3 los:


10/378

JH proliferación7H fagocitosis+#$ ?!u9l de estos mitó&enos estimula la producción de linfocitos B : B acti*ados :


11/378

CeDalelo$ B difieren en ciertas formas de su acti*ación > ser9 @til conocer losmarcadores de superficie que reflejan las distintas formas por las que puedencomunicar con los medios extracelulares$ La diferencia m9s clara se establece conreacti*os que reconocen receptores anti&énicos:


12/378

6H interleuquina 6BH factor de reacción dérmicaJH linfoto#ina7H interferón gamma

+$ %l cambio de I&H a I& durante una respuesta de anticuerpos supone que:


13/378

BH C07JH +c para componentes del complemento7H +c para el fragmento 4c de la IgA tipo II FC0B6H.7$ Eespecto a los L L es falso que:


14/378


15/378


16/378

7H regiones variables($ Los receptores para el antí&eno de los linfocitos ) > B comparten la propiedad deque :


17/378

6H su afinidadBH el tipo de cadena pesadaJH su valencia7H su composición alotípica##$ La afinidad de un anticuerpo es :


18/378

7H sólo se e#presan en células presentadoras de antígenos#0$ La I&H humana :


19/378

BH reconocimientos idiotipo-antiidiotipoJH reactividades cruzadas entre histotopos7H reconocimiento de antígenos de histocompatibilidad alterados'.$ La I&A humana :


20/378

JH no incluyen en su estructura puentes disulfuro7H se unen a sus antígenos correspondientes por las zonas amino terminal de sus cadenas(($ %l linfocito ) reconoce al antí&eno para el que es específico a tra*és de unamolécula de membrana denominada :


21/378

+7$ %l control del catabolismo de la I& humana se lle*a a cabo a tra*és de la re&ión :


22/378

7H dos fragmentos 4ab8 y un fragmento p4c+0$ ?!u9l de las características si&uientes puede asi&narse al H"! :


23/378

6H si son poliméricas o monoméricasBH la movilidad electroforéticaJH la estructura primaria de las cadenas :7H la estructura primaria de las cadenas : y &

.$ %n un indi*iduo todas las I& ' poseen :


24/378

7H cadenas pesadas de IgA, Ig1 e Ig0.($ La especifidad por los antí&enos en la molécula de anticuerpo reside en : / 2di*ersidad3 de las inmuno&lobulinascodifican: que se aDaden a los bloques NM oN/M por acción del en6ima:or cantidad por las mucosas es:


25/378

17$ ?Gué clase o isotipo de I&s se encuentra en el plasma habitualmente en formapentamérica


26/378


27/378

JH @7H


28/378

JH inmunocomple"os con equivalencia 'g-'c7H inmunocomple"os con e#ceso moderado de antígeno5#$ Los antí&enos 2A&3 "LA de clase I se expresan en:


29/378

asociación con la cadena de beta-6 micro-globulinaBH la respuesta en cultivo mi#to linfocitario es mediada principalmente por los 'g :&'-IIJH aunque la mayoría de los monocitos e#presan el :&'-II 0+ y 0(, las e#presión de 0es muy ba"a en estás células7H el fenomeno de restricción 1:C implica que el 'g es reconocido por el +c de la célula

)nicamente cuando éste es presentado por un haplotipo :&' similar al del propio su"eto50$ %n la presentación de antí&eno asociado a moléculas de H"!-II:


30/378


31/378

7H no incluye interacciones hidrofóbicas##'$ Las si&uientes clases de inmuno&lobulinas inclu>en en su estructura= cuandoest9n en forma multimérica= una cadena M no inmuno&lobulínica:


32/378


33/378

6H incremento de permeabilidad vascularBH supresión de la respuesta de anticuerposJH quimiota#is de neutrófilos7H todas son asignables#'1$ %l receptor !E' reconoce preferentemente:


34/378

JH +c para 4c de IgA7H +c de C


35/378

JH *7H C7#+#$ !ite la afirmación FALCA respecto a la cascada del complemento:


36/378

7 S B 7 7 B B B B J### ##' ##( ##+ ## ##. ##1 ##0 ##5 #'76 6 < < B J 6 < J J#'# #'' #'( #'+ #' #'. #'1 #'0 #'5 #(77 J 7 B B 7 7 B < J

#(# #(' #(( #(+ #( #(. #(1 #(0 #(5 #+76 < 6 6 B B J B J 7#+# #+' #+( #++ #+ #+. #+1 #+0 #+5 # 77 B J

ara que un linfocito reconozca un antígeno a través de su C+ hace falta

SProcesamiento del antí&eno% es la degradación del antígeno proteico hasta péptidos

SPresentación del antí&eno procesado% es la asociación de algunos de esos péptidos conmoléculas codificadas por genes del comple"o principal de histocompatibilidad F1:CH

&a respuesta se inicia con la activación de los & C0JN que reconocen 'g presentados porlas C(', que e#presan 1:C-II $stos & C0JN serán, mediante citocinas específicas y lae#presión de nuevos +c, los responsables de continuar y mantener la respuesta de los &*,de los & C0JN, de los & C0KN y la activación de los macrófagos

&a presencia de 'g e#traEos en el interior de la célula la detectan los & , por medio del c+ que reconoce péptidos antigénicos unidos al 1:C Fpresentación del 'gH en la superficie dela célula%

S%l H"!-I presenta 'g virales sobre cualquier célula nucleada infectada &os 'g son

reconocidos por losL) !/04$ S%l H"!-II sobre C(' está especializado en la presentación de 'g e#ógenos captados delmedio e#tracelular por endocitosis o fagocitosis, y que son sometidos a procesamientoendocítico &os 'g son reconocidos por losL) !/+4$

$l reconocimiento del 'g sobre el 1:C, por el c+, es específico de péptido y alelo de1:C FrestricciónH (ara la completa activación celular son necesarios segundas seEalesesenciales entre & y C('

#7$#$ !OL8LAC PE%C% )A/ EAC /% A ) % 2!OL8LAC A!!%C EIAC3$

&as C(' pueden ser tanto células nucleadas enfermas que presenten péptidos de parásitosintracelulares Fo de proteínas tumoralesH a linfocitos c via 1:C-I como las célulasPprofesionalesQ presentadoras de antígenos e#ógenos a los linfocitos : vía 1:C-II !inembargo, a efectos de nomenclatura, a las primeras se les suele designar como célulasdiana, para no confundirlas con las células presentadoras PprofesionalesQ FC(' en sentidoestrictoH%


37/378

Grupo Fagocitosis Tipo de célula Localización MHC-II FA !I)2monocito procesar proteínas del medio e#tracelular bH%xpresión de H"!-II= al que se asocia el péptido antigénico, para que sea reconocido por el c+

cH%xpresión de moléculas de adhesión para aumentar el contacto celular y la ba"aafinidad de la unión c+-1:C9péptido


38/378

Molécula del CPA Molécula del Linfocito T IC'1-< &4'-<1:C-II c+ y C0J&4'-B C06 F&4'-6H

dH $#presión de moléculas co-estimuladoras en la superficie celular F*@ < y *@ 6H osecretadas FI&


39/378

C0KN FTH bazo,mucosas

LinfocitosB

1édulaósea

Constitutiva,I&-J

C0JN h6 Aanglioslinfáticos

Célula Captación de g Capacidad de procesa!iento

Moléculascoesti!ulatorias

Molécula dead"esión

Modulacióncapacidad presentadora

Hacrófa&o 4agocitosis,internalizaciónvía +c

1uy alta !í aumenta trasactivación

!í I4/-gamma,

I&-


40/378

#7$'$#$'$ H LO!8LAC /% !LAC% II

Constan dedos cadenas 2alfa > beta3 que forman un heterodímero &as cadenas sesintetizan en el +$+, donde se asocian a una terceracadena in*ariante 2Ii3, formando untrímero &a cadena invariante%

S%stabili6a la molécula de 1:C-II,

SBloquea la ca*idad de unión al péptido dentro del +$ y evita que los péptidosderivados de procesamiento citosólico puedan unirse al 1:C-II

S !ontiene una secuencia seDal que dirige al trímero hacia los endosomas, vía aparato deAolgi &a molécula 1:C-II pueda via"ar desde el +$r a un compartimento endosómico de p: ba"o donde se encontrará con péptidos derivados de endocitosis9fagocitosis

#7$'$'$ N AC /% PE !%CAHI% ) -PE%C% )A!IR /% A ) % C$

:ay dos *ías principales de procesamiento > presentación anti&énica, dando lugar a unaespecialización de las moléculas de 1:C%

S 1:C-I% presenta antígenos endógenos

S 1:C-II% presenta antígenos e#ógenos

#7$'$'$#$ LA N A % /R % A: PE%C% )A!IR P E H"!-I$

&os estadios del procesamiento de 'g intracelular son los siguientes%

aHCíntesis del A& tras la infección $l 'g tiene que estar localizado en el citosol y debe ser sintetizado de novo

bHProteolisis de proteínas en el citosol para producir los péptidos anti&énicos &as proteasas que degradan los 'g situados en el citoplasma, están codificados en el 1:C-II


41/378

F&1(H y se encuentran en un orgánulos llamadoPE )% C HA$ &os proteosomas estánformados por subunidades polipeptídicas unidas no covalentemente, de proteinasasFendopeptidasasH multicatalíticos que se e#presan ubicuamente y se hallan en todo el reinoanimal $ste comple"o es ' (-dependiente y no lisosómico

cH)ransporte de los péptidos al lumen del E% mediado por las proteínas )AP, queestán ancladas en la membrana del +$ y Aolgi $s un transporte activo dependiente de ' (,selectivo de tamaEo F


42/378

&os estadios del procesamiento de 'g e#tracelular son los siguientes%

aH!aptación de A& por las !PA sigue un mecanismo deendocitosis mediada por Ec F+cde 4c, CBb, de lectinas o Ig de superficieH

b3 Internali6ación del A& en *esículas intracelulares de bajo p"$ $l tratamiento de lasC(' con agentes lisosomotrópicos Fcloroquina o cloruro amónicoH, alcaliniza las vesículasendocíticas y bloquea la presentación

cHProcesamiento del A&= que incluyedesnaturali6ación de la proteína > proteolisisparcial que genera péptidos inmunogénicosLos péptidos &enerados se unen a lasmoléculas de H"!-II en *esículas de bajo p" 2endosomas3$

dH (or otro lado, los comple"os Ii%1:C-II via"an por vesículas hasta un tipo decompartimento ácido, donde permanecen unas 6-J horas 0urante este tiempo la cadena Iies rota ordenadamente por proteasas Fcomo la catepsina &H en varios sitios, de modo que la1:C-II queda unida a un fragmento Fllamado!LIP H que sigue cubriendo su surco $nalg)n momento de este proceso la vesícula PascendenteQ que contiene C&I(%1:C-II sefusiona con una vesícula PdescendenteQ que contiene péptidos procedentes deendocitosis9fagocitosis de antígenos e#ógenos

eH (osteriormente ocurre el desplazamiento de C&I(, debido a que ahora 1:C-II se asociacon la molécula"LA-/H Fse trata de una forma especial de 1:C-II dedicada a esta tarea,y sin capacidad de unir péptidosH $sta misma :&'-01 cataliza ahora la entrada de

péptidos al surco de la 1:C-II, con lo que éste queda estabilizado &a 2nión de los péptidos a moléculas de 1:C-II para formar el comple"o 1:C-II9péptido específico dealelo &a unión es independiente de las proteínas '(


43/378

fH)ransporte del complejo a la superficie celular 4inalmente el 1:C-II unido al péptido termina de hacer su via"e PascendenteQ% la vesícula membranosa se fusiona con lamembrana celular, quedando e#puesto al e#terior el comple"o 1:C-II unido fuertemente al péptido Fel p: neutro del e#terior estabiliza a)n más la uniónH

#7$'$'$($ C%PAEA!IR /% LA N A %Q % A$

Como es lógico, las células presentadoras de antígeno F'(CH e#presan simultáneamente1:C-II Fpor ser '(C profesionalesH y 1:C-I Fpor ser células nucleadas somáticasHUCómo evitan estas células que las 1:C-II se unan al mismo tipo de péptidos endógenosque deben unirse en el +$+ a las moléculas de 1:C-IT &a e#plicación reside precisamenteen el hecho de que el comple"o 1:C-II es PcubiertoQ a nivel de su surco por la cadenainvariante FIiH, lo que evita que péptidos endógenos procedentes de la ruta citosólica ocupendicho surco

Los péptidos se unen fuertemente a las moléculas de clase I &a hendidura de unión esmuy pequeEa y sólo acoge a péptidos cortos 20-#7 amino9cidos3 y les impide unirse a proteínas intactas &a hendidura de unión de las moléculas de clase II tiene unaconfiguración abierta que permite la unión de proteínas intactas o péptidos largos $sta permisividad da lugar a un espectro más amplio de péptidos capaces de unirse a clase II

$l lugar de unión de la molécula de clase II está, hasta llegar a los endosomas, ocupado porun segmento específico de la cadena in*ariante 2Ii3= la re&ión !LIP, que impide sureconocimiento por parte de otras proteínas o péptidos residentes o transportados al +$Ladisociación por proteolisis del complejo H"!-II


44/378

#7$'$($ !AEA!)%E C)I!AC /% L C POP)I/ C AC !IA/ C A H LO!8LAC /% H"!$

aH &os ligandos naturales de las moléculas de 1:C-I tienen las características siguientes%

S !on secuencias lineales de0-#7 amino9cidos

S !on específicos de alelos y los péptidos que se unen a cada alelo tienen característicasestructurales homólogas

S &os motivos estructurales alelo-específicos se basan en lahomo&eneidad de losextremos - > !-terminal$

bH &os ligandos naturales de las moléculas de 1:C-II tienen las características siguientes%

S !on más largos que los asociados a 1:C-I F#7-' amino9cidosH

S o muestran una homo&eneidad específica de alelo tan clara

S &os motivos estructurales alelo-específicos de los péptidos se basan en la homo&eneidadde la re&ión central del péptido anti&énico$

#7$($ !OL8LAC IHPLI!A/AC % %L PE !%C /% PE%C% )A!IR /%LA ) % % L C E A C LI F I/%C$

#rea CP g PersistenciaCeno subcapsular 1acrófagos de la zonamarginal

(olisacáridos, 4icoll,flagelina

NNNN

!orte6a 2folículos >9reas B3

Células dendríticasfoliculares

Inmunocomple"osfi"adores decomplemento

NNN

Hédula 1acrófagos clásicos 1ayoría de 'g N


45/378

Paracorte6a 29rea)3

Células dendríticasinterdigitadas

'g sensibilizadores de la piel

NN

&os 'g procedentes de la periferia se desplazan por los vasos linfáticos Flibremente o sobrelas C('H, hasta que llegan a los ganglios linfáticos, donde se mueven selectivamente haciaáreas específicas y estimulan a los linfocitos 'lgunos 'gs permanecen durante muchotiempo en los ganglios linfáticos, proporcionando una fuente de estimulación antigénicaconstante, mientras que otros se degradan con rapidez o se pierden por los linfáticoseferentes

&as células dendríticas interdigitadas FI0CH son%

S &as más efectivas en la activación de & C0JN quiescentes, aunque también pueden seractivadas por &* y macrófagos

S &as I0C captan el 'g por pinocitosis o lo procesan en la superficie celular

S &as I0C son más eficaces en promover la proliferación de & C0JNLas I/! son lasprincipales !PA en la respuesta primaria$

S &os &* ienen Ig de superficie que unen 'g, después es endocitado, y presentadoasociado en :&'-II Con las !PA m9s efecti*as cuando la concentración de A& es baja> en la respuesta secundaria

V

Artículos relacionados:

• 'ntígenos del 1:C

• est% (reguntas tipo test de la sección de inmunología humoral y celular

• est% (reguntas de la sección de moléculas que participan en el reconocimientoantigénico

• est% (reguntas tipo test de la sección de organización del sistema inmune

http://epidemiologiamolecular.com/antigenos-mhc/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-seccion-inmunologia-humoral-celular/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-moleculas-reconocimiento-antigenico/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-moleculas-reconocimiento-antigenico/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-seccion-organizacion-sistema-inmune/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-seccion-inmunologia-humoral-celular/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-moleculas-reconocimiento-antigenico/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-moleculas-reconocimiento-antigenico/http://epidemiologiamolecular.com/test-preguntas-seccion-organizacion-sistema-inmune/http://epidemiologiamolecular.com/antigenos-mhc/


46/378

• Aenética del 1:C

=


47/378

o !." %ondas

• " &plicaciones

• ' (entajas ) desventajas

• * Northern blot inverso

• + eferencias

• - ( ase tambi n

Procedimiento$l procedimiento general comienza con la e#tracción del'+/ total de una muestra dete"ido homogeneizado $l '+/m se puede aislar mediante cromatografía para retenersolamente los '+/ con colas de poliF'H &as muestras de '+/ se separan entonces

medianteelectroforesis en gel 0ada la fragilidad de los geles y la dificultad para que lassondas penetren en la matriz, las muestras de '+/, separadas por tamaEo tras laelectroforesis, se transfieren a una membrana de nailon, bien por capilaridad o empleandoun sistema de vacío

/os sistemas de capilaridad iónica se utilizan pra transferir el & N desde un 0elde electroforesis a una membrana de northern blot .

2na membrana denailon cargada positivamente es el soporte más eficaz para realizar lahibridación en el northern blot ya que losácidos nucleicos, que están cargadosnegativamente, tienen una alta afinidad por estas membranas $l tampón de transferenciaque se usa en el ensayo suele contener formamida, dado que esta reduce la temperatura deinteracción de las muestras, lo que evita la utilización de altas temperaturas que podríandegradar las moléculas de '+/ 2na vez que el '+/ se ha transferido a la membrana, seinmoviliza medianteenlaces covalentes formados con la membrana, lo cual se consigue por

medio deluz ultravioleta o calor 0espués del marca"e de lasonda, ésta se hibrida con el'+/ en la membrana &as condiciones e#perimentales que pueden afectar la eficiencia yespecificidad de la hibridación están determinadas por las condiciones iónicas, deviscosidad, la presencia de '+/ bicatenario, bases desempare"adas y composición de lasmismas 4inalmente, la membrana debe lavarse para asegurar que la sonda se ha unido deforma específica y para evitar ruido de fondo en las seEales emitidas por la misma $stasseEales pueden cuantificarse mediante densitometría (ara crear controles y poder

https://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Sondashttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Aplicacioneshttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Ventajas_y_desventajashttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Northern_blot_inversohttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Northern_blot_inversohttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Northern_blot_inversohttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Referenciashttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#V.C3.A9ase_tambi.C3.A9nhttps://es.wikipedia.org/wiki/ARNhttps://es.wikipedia.org/wiki/ARNhttps://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Cola_poli(A)&action=edit&redlink=1https://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis_en_gelhttps://es.wikipedia.org/wiki/Nailonhttps://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cidos_nucleicoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Formamidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Formamidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Formamidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Enlaces_covalenteshttps://es.wikipedia.org/wiki/Enlaces_covalenteshttps://es.wikipedia.org/wiki/Luz_ultravioletahttps://es.wikipedia.org/wiki/Calorhttps://es.wikipedia.org/wiki/Sonda_molecularhttps://es.wikipedia.org/wiki/Bases_nitrogenadashttps://es.wikipedia.org/wiki/Densitometr%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/wiki/Densitometr%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Sondashttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Aplicacioneshttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Ventajas_y_desventajashttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Northern_blot_inversohttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#Referenciashttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#V.C3.A9ase_tambi.C3.A9nhttps://es.wikipedia.org/wiki/ARNhttps://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADahttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Cola_poli(A)&action=edit&redlink=1https://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis_en_gelhttps://es.wikipedia.org/wiki/Nailonhttps://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cidos_nucleicoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Formamidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Enlaces_covalenteshttps://es.wikipedia.org/wiki/Luz_ultravioletahttps://es.wikipedia.org/wiki/Calorhttps://es.wikipedia.org/wiki/Sonda_molecularhttps://es.wikipedia.org/wiki/Bases_nitrogenadashttps://es.wikipedia.org/wiki/Densitometr%C3%ADa


48/378

asegurarnos de que no se están mostrando genes que no nos interesen se puede realizar posteriormente la determinación empleandochips de '0/ o + -(C+

$eles

El N& puede correr en un 0el de a0arosa para mostrar las subunidadesribosomales "1s 2banda superior3 ) !1s 2banda inferior3.

&as muestras de '+/ se separan habitualmente en geles deagarosa que contienenformaldehído como agente desnaturalizante del '+/ &os geles pueden teEirse con bromuro de etidio u otro agente intercalante y se visualizan generalmente ba"o luzultravioleta ambién pueden usarse geles de poliacrilamida con urea, aunque esto suelelimitarse a fragmentos de '+/ o mi'+/ , ya que poseen un tamaEo de poro más pequeEo, por lo que el '+/ que suele utilizarse no podría desplazarse por el gel !uele utilizarseademás un patrón de '+/ con muestras de tamaEo conocido para poder estimar el tamaEode las muestras en estudio

%ondas

&as sondas para el ensayo northern están compuestas por ácidos nucleicos con unasecuencia complementaria a todo o parte del +/' que nos interesa (ueden ser de 0/',

+/' o oligonucleótidos, con un mínimo de 67 bases complementarias para nuestrasecuencia diana &as sondas de +/' oribosondas que se transcribenin vitro ayudan a prevenir el ruido de fondo /ormalmente, el 0/' complementario se sintetiza concebadores para la secuencia +/' de interés para actuar como sonda en el /orthern blot&as sondas requieren ser marcadas bien con isótopos radiactivos FB6(H o conquimioluminiscencia, ya sea confosfatasa alcalina o con pero#idasa de rábano, las cuáles,tras la adición de su sustrato específico producen una emisión de luz detectable $l marca"e

https://es.wikipedia.org/wiki/Chip_de_ADNhttps://es.wikipedia.org/wiki/Chip_de_ADNhttps://es.wikipedia.org/wiki/RT-PCRhttps://es.wikipedia.org/wiki/RT-PCRhttps://es.wikipedia.org/wiki/Agarosahttps://es.wikipedia.org/wiki/Formaldeh%C3%ADdohttps://es.wikipedia.org/wiki/Bromuro_de_etidiohttps://es.wikipedia.org/wiki/Luz_ultravioletahttps://es.wikipedia.org/wiki/Luz_ultravioletahttps://es.wikipedia.org/wiki/Luz_ultravioletahttps://es.wikipedia.org/wiki/Poliacrilamidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Poliacrilamidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ureahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ureahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ureahttps://es.wikipedia.org/wiki/Micro_ARNhttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Ribosondas&action=edit&redlink=1https://es.wikipedia.org/wiki/Is%C3%B3topos_radiactivoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Is%C3%B3topos_radiactivoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Is%C3%B3topos_radiactivoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Quimioluminiscenciahttps://es.wikipedia.org/wiki/Fosfatasa_alcalinahttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Peroxidasa_de_r%C3%A1bano&action=edit&redlink=1https://es.wikipedia.org/wiki/Chip_de_ADNhttps://es.wikipedia.org/wiki/RT-PCRhttps://es.wikipedia.org/wiki/Agarosahttps://es.wikipedia.org/wiki/Formaldeh%C3%ADdohttps://es.wikipedia.org/wiki/Bromuro_de_etidiohttps://es.wikipedia.org/wiki/Luz_ultravioletahttps://es.wikipedia.org/wiki/Luz_ultravioletahttps://es.wikipedia.org/wiki/Poliacrilamidahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ureahttps://es.wikipedia.org/wiki/Micro_ARNhttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Ribosondas&action=edit&redlink=1https://es.wikipedia.org/wiki/Is%C3%B3topos_radiactivoshttps://es.wikipedia.org/wiki/Quimioluminiscenciahttps://es.wikipedia.org/wiki/Fosfatasa_alcalinahttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Peroxidasa_de_r%C3%A1bano&action=edit&redlink=1


49/378

por quimioluminiscencia puede hacerse de dos formas% (or un lado, la sonda puede estarunida a la enzima o bien unida a un ligando Fp e", biotinaH para la cual hay un anticuerpoFavidina o estreptavidina en este casoH está unido a la enzima que revelará el marca"e &os+ayos 3 pueden detectar tanto las seEales radioactivas como las quimioluminiscentes,siendo preferida por muchos investigadores la segunda, dada su mayor rapidez, sensibilidady reducción de los riesgos para la salud que conlleva traba"ar con compuestos radioactivos

Aplicaciones$l ensayo northern permite observar un patrón particular de e#presión genética entrete"idos, órganos, estadios del desarrollo, niveles de estrés ambiental, infecciones causadas por patógenos y durante el curso del tratamiento de las mismas $sta técnica se ha utilizado para mostrar la sobree#presión de oncogenes y la desregulación degenes oncosupresores encélulas cancerosas cuando son comparadas con te"idos normales

&os patrones de e#presión obtenidos nos ayudan a conocer las funciones de los genes0esde que el +/' se separó por su tamaEo, las sondas contra el mismo pueden darnos unaidea de su tamaEo, sugerirayuste alternativo, o motivos repetidos en la secuencia &avariación en el tamaEo del producto de un gen puede además indicarnos deleciones oerrores en el proceso de transcripción 'lterando la sonda podemos conocer la secuencia eincluso determinar que región del +/' ha sido delecionada

Ventajas des!entajas$l análisis de la e#presión génica puede realizarse por diversos métodos, como + -(C+,ensayos de protección de +/asa,chips de '0/, análisis seriado de e#presión génica así

como el ensayonorthern &oschips de '0/ son los más utilizados y son generalmenteconsistentes con los datos obtenidos por el ensayonorthern /o obstante, en ocasiones éstees capaz de detectar pequeEos cambios en la e#presión de genes que loschips de '0/ no pueden identificar

Denta"as adicionales de usar el ensayonorthern incluyen la capacidad de definir el tamaEode la cadena de '+/, la capacidad de observar los productos del empalme alternativo, la posibilidad de usar sondas con homología parcial, la habilidad de medir el tamaEo y lacalidad del '+/ antes de realizar la inmovilización en la membrana y finalmente la opciónde guardar la membrana para ser analizada en repetidas ocasiones en el futuro6

2n problema com)n del ensayonorthern es la degradación de la muestra por ribonucleasasFendógenas de la muestra o a través de contaminación ambientalH, que puede evitarse conuna apropiada esterilización de los materiales así como el uso de inhibidores de +/asascomo eldietilpirocarbonato

https://es.wikipedia.org/wiki/Biotinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Avidinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Estreptavidinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Estreptavidinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Gen_supresor_tumoralhttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulas_cancerosashttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulas_cancerosashttps://es.wikipedia.org/wiki/Ayustehttps://es.wikipedia.org/wiki/Ayustehttps://es.wikipedia.org/wiki/Delecionhttps://es.wikipedia.org/wiki/Delecionhttps://es.wikipedia.org/wiki/Delecionhttps://es.wikipedia.org/wiki/Empalme_alternativohttps://es.wikipedia.org/wiki/Empalme_alternativohttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#cite_note-streit-2https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Dietilpirocarbonato&action=edit&redlink=1https://es.wikipedia.org/wiki/Biotinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Avidinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Estreptavidinahttps://es.wikipedia.org/wiki/Gen_supresor_tumoralhttps://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A9lulas_cancerosashttps://es.wikipedia.org/wiki/Ayustehttps://es.wikipedia.org/wiki/Delecionhttps://es.wikipedia.org/wiki/Empalme_alternativohttps://es.wikipedia.org/wiki/Northern_blot#cite_note-streit-2https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Dietilpirocarbonato&action=edit&redlink=1


50/378

Northern blot in!erso$n esta versión alternativa del método el ácido nucleico que act)a como sustrato Ffi"o en lamembranaH está formado por fragmentos aislados de '0/, mientras que la sonda estáformada por '+/ obtenido de los te"idos y etiquetada con material radioactivo

$sta variante es más compatible con el uso de unchip de '0/ , que se ha convertido en practica com)n en la parte final de la década de


51/378

• Editar

• (er ;istorial

• Portada

• Portal de la comunidad

• &ctualidad

• Cambios recientes

• PD0inas nuevas

• PD0ina aleatoria

• &)uda

• 5onaciones

• Noti car un error

=mprimir eFportar

• Crear un libro

• 5escar0ar como P5:

• (ersión para imprimir

@erramientas

• /o que enlaza aquí

• Cambios en enlazadas

• %ubir arc;ivo

• PD0inas especiales

• Enlace permanente

• =nformación de la pD0ina

• Elemento de Wikidata

• Citar esta pD0ina

https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&action=edithttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&action=historyhttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portadahttps://es.wikipedia.org/wiki/Portal:Comunidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Portal:Actualidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:CambiosRecienteshttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:P%C3%A1ginasNuevashttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:Aleatoriahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ayuda:Contenidoshttps://donate.wikimedia.org/wiki/Special:FundraiserRedirector?utm_source=donate&utm_medium=sidebar&utm_campaign=C13_es.wikipedia.org&uselang=eshttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Informes_de_errorhttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Libro&bookcmd=book_creator&referer=Northern+blothttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Libro&bookcmd=render_article&arttitle=Northern+blot&oldid=77708786&writer=rdf2latexhttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&printable=yeshttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:LoQueEnlazaAqu%C3%AD/Northern_blothttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:CambiosEnEnlazadas/Northern_blothttps://commons.wikimedia.org/wiki/Special:UploadWizard?uselang=eshttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:P%C3%A1ginasEspecialeshttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&oldid=77708786https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&action=infohttps://www.wikidata.org/wiki/Q48520https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Citar&page=Northern_blot&id=77708786https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&action=edithttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&action=historyhttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Portadahttps://es.wikipedia.org/wiki/Portal:Comunidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Portal:Actualidadhttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:CambiosRecienteshttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:P%C3%A1ginasNuevashttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:Aleatoriahttps://es.wikipedia.org/wiki/Ayuda:Contenidoshttps://donate.wikimedia.org/wiki/Special:FundraiserRedirector?utm_source=donate&utm_medium=sidebar&utm_campaign=C13_es.wikipedia.org&uselang=eshttps://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Informes_de_errorhttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Libro&bookcmd=book_creator&referer=Northern+blothttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Libro&bookcmd=render_article&arttitle=Northern+blot&oldid=77708786&writer=rdf2latexhttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&printable=yeshttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:LoQueEnlazaAqu%C3%AD/Northern_blothttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:CambiosEnEnlazadas/Northern_blothttps://commons.wikimedia.org/wiki/Special:UploadWizard?uselang=eshttps://es.wikipedia.org/wiki/Especial:P%C3%A1ginasEspecialeshttps://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&oldid=77708786https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Northern_blot&action=infohttps://www.wikidata.org/wiki/Q48520https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Especial:Citar&page=Northern_blot&id=77708786


52/378

En otros idiomas

• CatalG

• 5eutsc;

• En0lis;

• Esperanto

• Eesti

• :ranHais

• $ale0o

• ר ב ע

• 9a0)ar

• =taliano

•

•

• Norsk bokmIl

• Polski• Portu0uJs

• KLMM O

• %venska

• 8QrkHe

•

Editar enlaces

• Esta pD0ina fue modi cada por Rltima vez el "' oct "#!* a las !#


53/378

WikipediaS es una marca re0istrada de la :undación Wikimedia, =nc. ,una or0anización sin Dnimo de lucro.

• Contacto

• 9ono0rafías

• Nuevas

• Publicar

• 7lo0s

• :oros

7usqueda avanzada

9ono0ra as.com T 7iolo0ia

• (escargar

• =mprimir

• Comentar

• (er trabajos relacionados

%$todos aplicaciones de la )iología %olecular en)iomedicinaEn!iado por !ladimirrui*

!.

". "esumen

'.

*. Principios de clonaci'n molecular

https://www.wikimediafoundation.org/https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Contactohttp://www.monografias.com/http://www.monografias.com/Newhttp://www.monografias.com/participar.shtmlhttp://blogs.monografias.com/http://foros.monografias.com/http://www.monografias.com/cgi-bin/search.cgihttp://www.monografias.com/index.shtmlhttp://www.monografias.com/Biologia/index.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.ziphttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#Comentarioshttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#Relacionadoshttp://www.monografias.com/usuario/perfiles/vladimirruizhttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#resumhttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#principhttps://www.wikimediafoundation.org/https://es.wikipedia.org/wiki/Wikipedia:Contactohttp://www.monografias.com/http://www.monografias.com/Newhttp://www.monografias.com/participar.shtmlhttp://blogs.monografias.com/http://foros.monografias.com/http://www.monografias.com/cgi-bin/search.cgihttp://www.monografias.com/index.shtmlhttp://www.monografias.com/Biologia/index.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.ziphttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#Comentarioshttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#Relacionadoshttp://www.monografias.com/usuario/perfiles/vladimirruizhttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#resumhttp://www.monografias.com/trabajos20/biologia-molecular/biologia-molecular.shtml#princip


54/378

+. %$todos de an+lisis de +cidos nucleicos

-. %apas de restricci'n

U. "eacci'n en cadena de la polimerasa

1. ,ecuenciaci'n nucleotídica del A(N

A. Pro ecto del -enoma .umano

!#. /ampos de aplicaci'n de la tecnología del A(N recombinante

!!. /onclusiones

!". "e erencias bibliogr+fcas

E%C8H%

!e ofrecen elementos conceptuales sobre algunos de losmétodos de biología molecular demás amplio uso en biomedicina &as principales aplicaciones de estastécnicas son en eldiagnóstico deenfermedades hereditarias, infecciosas y neoplásicas así como en estudios deregulación de la e#presión génica y en la terapia con proteínas recombinantes $l(royecto del Aenoma :umano tomó como base para su e"ecución muchas de estas técnicas, altiempo que ha permitido eldesarrollo de nuevas metodologías y el perfeccionamiento delas ya e#istentes Con la aplicación de las técnicas de biología molecular enmedicina, se haabierto también la posibilidad de llevar a cabo la terapia génica en humanos

Palabras cla*e% ácido deso#irribonucleico F'0/ H,enzimasde restricción, reacción encadena de la polimerasa, hibridación, secuenciación del '0/, genoma, terapia génica

I )E /8!!IR

&aestructura que conocemos hoy como '0/ Fácido deso#irribonucleicoH fue descrita por\atson y CricL en el aEo


55/378

'l igual que en las proteínas, el '0/ y el '+/ están compuestos por repeticiones de pequeEos bloques, pero con la diferencia de que en lugar de aminoácidos, se trata demoléculas más comple"as conocidas como nucleótidos &os nucleótidos, en el '+/, estándispuestos en una sola cadena resultante de la copia del '0/ en forma complementaria] encambio, en el '0/, los nucleótidos se sit)an formando dos cadenas orientadas endirecciones opuestas y enrolladas alrededor de un e"e imaginario formando una doble héliceF1oreno,


56/378

bacterias que surge de una célula o molécula ancestral y son idénticas a esta] y clonación esel proceso que le da origen FAranner,


57/378

encuentran el lambda Fl H y sus derivados FCerezo,


58/378

d3 Hétodos de transformación o transfección celular: 2na vez obtenido el '0/recombinante, el pró#imo paso es introducirlo dentro de una célula huésped que le ofrezcala maquinaria necesaria para su autorreplicación Como no esob"etivode estetraba"o e#plicar en detalles cada uno de los métodos que e#isten para estos fines, nos limitaremossólo a mencionar algunos de los más empleados que son% electroporación, transfecciónmediada por calcio-fósforo o 0$'$-de#trán, empleo de polibreno, fusión de protoplastos,empleo de liposomas, microinyección directa al n)cleo, uso de virus FCerezo ^ 1adrid,


59/378

Couthern blot: $s una técnica empleada para detectar secuencias específicas de '0/ (arallevar a cabo hibridaciones de este tipo, se aísla el '0/ de un te"ido o línea celular, luegose purifica, y se digiere con enzimas de restricción específicas &os fragmentos generadosse separan mediante electroforesis y después son transferidos a la membrana que sirve desoporte Fgel de agarosaH $ste proceso se lleva a cabo colocando el gel de agarosa sobre papel filtro previamente remo"ado en una solución llamada de transferencia Fsolución salinaconcentradaH ' continuación se sit)a la membrana sobre el gel y encima de esta una pila de papel filtro seca, y por capilaridad la solución de transferencia es atraída a la pila de papelfiltro, arrastrando consigo al '0/ hacia la membrana, donde queda inmovilizadoconservando la misma posición relativa que ocupaba en el gel &uego, el '0/ puede serhibridado en la membrana con una sonda marcada FCerezo ^ 1adrid,


60/378


61/378


62/378


63/378


64/378

v


65/378


66/378


67/378


68/378


69/378


70/378


71/378


72/378


73/378

;ttps< prezi.com v!fsfVc'a1bU turbidimetria>nefelometria

En esta pD0ina

•

U ué son los marcadores de tumoresT

•

UCómo se utilizan los marcadores de tumores en el tratamiento del cáncerT


74/378

•

UCómo se miden los marcadores de tumoresT

•

U frece el Instituto /acional del Cáncer pautas para el uso de los marcadorestumoralesT

•

UCuáles marcadores de tumores se usan actualmente y para qué tipos de cánceresT

•

U(ueden los marcadores de tumores usarse como e#ámenes selectivos de detecciónde cáncerT

•

U ué clase de investigación se está haciendo para formular marcadores de tumoresmás precisosT

?Gué son los marcadores de tumores&os marcadores de tumores son sustancias producidas por las células cancerosas o por otrascélulas del cuerpo como respuesta al cáncer o a ciertas afecciones benignas Fno cancerosasH&a mayoría de los marcadores de tumores son producidos tanto por las células normalescomo por las células cancerosas] sin embargo, se producen en concentraciones más altas enenfermedades cancerosas $stas sustancias pueden encontrarse en la sangre, en la orina, enla materia fecal, en te"ido de tumores o en otros te"idos o líquidos del cuerpo de algunos

https://prezi.com/v1fsfwc3a8b7/turbidimetria-nefelometria/http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q2https://prezi.com/v1fsfwc3a8b7/turbidimetria-nefelometria/http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q1http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q2


75/378

pacientes con cáncer &a mayoría de los marcadores de tumores son proteínas !in embargomás recientemente, los patrones de e#presión de los genes y los cambios de '0/ hanempezado a usarse como marcadores de tumores &os marcadores del segundo tipo seeval)an específicamente en el te"ido tumoral

:asta ahora, se han caracterizado y se usan en la clínica médica más de 6= diferentesmarcadores de tumores 'lgunos están asociados con un solo tipo de cáncer, mientras queotros están asociados con dos o más tipos de cáncer /o e#iste un marcador de tumores_universal_ que pueda detectar cualquier tipo de cáncer

:ay alg unas limitaciones para el uso de marcadores de tumores 'lgunas veces, situaciones benignas pueden causar que aumenten las concentraciones de algunos marcadores detumores 'demás, no todas las personas que tienen un tipo particular de cáncer tendrán unaconcentración elevada de un marcador de tumores asociado con ese cáncer `, a)n más, nose han identificado los marcadores de tumores para cada tipo de cáncer

?!ómo se utili6an los marcadores de tumores en eltratamiento del c9ncer&os marcadores de tumores se usan para ayudar a detectar, a diagnosticar y a controlaralgunos tipos de cáncer 'unque una concentración elevada de un marcador de tumores puede sugerir la pr esencia de cáncer, este hecho solo no es suficiente para diagnosticarcáncer (or lo tanto, las mediciones de los marcadores tumorales se combinan en generalcon otras pruebas, como con biopsias, para diagnosticar el cáncer

!e pueden medir las concentraciones de los marcadores tumorales antes del tratamiento para que los médicos puedan planificar una terapia adecuada $n algunos tipos de cáncer, laconcentración de unmarcador de tumores refle"a el estadio Fe#tensiónH de la enfermedad yel pronóstico del paciente Fresultado probable o curso de una enfermedadH 1ásinformación sobre estadificación está disponible en la ho"a informativa stadificaci!n delc"ncer

&os marcadores de tumores pueden también medirse periódicamente durante la terapia para

cáncer 2n descenso de la concentración de un marcador de tumores o el regreso a laconcentración normal del marcador puede indicar que el cáncer está reaccionando altratamiento, mientras que si no hay cambio o hay un aumento puede indicar que el cáncerno está reaccionando

&os marcadores de tumores pueden también medirse después de que haya terminado eltratamiento para revisar la recurrencia Fel regreso del cáncerH

http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q3http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q4http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q6http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q6http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q7http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q3http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q4http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q4http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q5http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q6http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q6http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q7http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/diagnostico/hoja-informativa-marcadores-de-tumores#q7


76/378

?!ómo se miden los marcadores de tumores2n doctor toma una muestra de te"ido del tumor o de líquido del cuerpo y lo envía a unlaboratorio, en donde se usan varios métodos para medir la concentración del marcador de

tumores!i el marcador de tumores se usa para determinar si el tratamiento está funcionando o si hayuna recurrencia, la concentración se medirá en muchas muestras tomadas en un período detiempo $n general, estas mediciones _en serie_, que indican que la concentración de unmarcador está en aumento, que está igual, o que está disminuyendo, son más importantesque una sola medición

? frece el Instituto acional del !9ncer pautas para el

uso de los marcadores tumorales /o, el /CI no tiene pautas o directrices de ese tipo !in embargo, algunas organizacionesnacionales e internacionales sí tienen pautas para el uso de marcadores de tumores enalgunos tipos de cáncer%

• /a &sociación Estadounidense de Xncolo0ía Clínica 2&%CX3 ;a publicadopautas para la prDctica clínica sobre una variedad de temas, inclusosobre marcadores de tumores para cDncer de seno, para cDnceres0astrointestinales, para cDncer de testículo ) tumores eFtra0onadales dec lulas 0erminativas en ;ombres. Estas pautas, llamadas What to Know:

ASCO's Gui elines Noti!caci"n e sali a , estDn disponibles en el sitio Vebde &%CX.

• /a &cademia Nacional de 7ioquímica Clínica publica pautas de prDcticam dica de laboratorio, incluso #se of $u%or Mar&ers in Clinical Practice:

uality (e)uire%ents Noti!caci"n e sali a , la cual se enfoca en el usoapropiado de los marcadores de tumores para cDnceres especí cos.

?!u9les marcadores de tumores se usan actualmente >para qué tipos de c9nceresDarios marcadores de tumores se usan actualmente para una amplia gama de tipos decáncer 'unque es posible hacer el análisis de la mayoría de esos marcadores enlaboratorios que satisfacen las normas establecidas porClinical Laboratory #mprovement

Amendments , algunos no pueden analizarse y, por lo tanto, tal vez se considerene#perimentales &a lista de aba"o contiene los marcadores de tumores que se usanordinariamente en la actualidad

http://www.cancer.gov/espanol/recursos/hojas-informativas/deteccion-diagnostico/estadificacionhttp://www.cancer.gov/espanol/recursos/hojas-informativas/deteccion-diagnostico/estadificacionhttp://www.cancer.gov/espanol/recursos/hojas-informativas/deteccion-diagnostico/estadificacion


77/378

'ctivador del plasminógeno urocinasa Fu('H e inhibidor del activador del plasminógenoF('I-


78/378

'ntígeno prostático específico F(!'H

• 8ipo de cDncer< CDncer de próstata

• 8ejido analizado< %an0re

• Cómo se usó< Para a)udar en el dia0nóstico, evaluar la reacción altratamiento ) buscar la recurrencia 2recidiva3

C'


79/378

• 8ipo de cDncer< /infoma no @od0kin


• Cómo se usó< Para determinar si el tratamiento con una terapia diri0idaes el adecuado

Cromogranina ' FCg'H

• 8ipo de cDncer< 8umores neuroendocrinos


• Cómo se usó< Para a)udar en el dia0nóstico, en la evaluación de lareacción al tratamiento ) en la evaluación de la recidiva

Cromosomas B, @,


80/378

• Cómo se usó< Para con rmar el dia0nóstico ) vi0ilar el estado de laenfermedad

Aonadotropina coriónica humana F*eta-hCAH

•

8ipos de cDncer< Coriocarcinoma ) cDncer de testículo• 8ejido analizado< Xrina o san0re

• Cómo se usó< Para evaluar el estadio, el pronóstico ) la reacción altratamiento

:$J

• 8ipo de cDncer< CDncer de ovarios


• Cómo se usó< Para evaluar el avance de la enfermedad ) vi0ilar larecurrencia 2recidiva3

:$+69neu

• 8ipos de cDncer< CDncer de seno, cDncer de estóma0o ) cDncer deesófa0o

• 8ejido analizado< 8umor

• Cómo se usó< Para determinar si el tratamiento con trastuzumab es eladecuado

Inmunoglobulinas

• 8ipos de cDncer< 9ieloma mRltiple ) macro0lobulinemia de WaldenstrZm

• 8ejido analizado< %an0re ) orina

• Cómo se usó< Para a)udar a dia0nosticar la enfermedad, evaluar lareacción al tratamiento ) buscar si ;a ;abido recurrencia 2recidiva3

GI

• 8ipos de cDncer< 8umor del estroma 0astrointestinal ) melanoma mucoso


• Cómo se usó< Para a)udar en el dia0nóstico ) determinar el tratamiento


81/378

&actato deshidrogenasa

• 8ipo de cDncer< 8umores de c lulas 0erminativas


• Cómo se usó< Para evaluar el estadio, el pronóstico ) la reacción altratamiento

1icroglobulina -6 F*61H

• 8ipos de cDncer< 9ieloma mRltiple, leucemia linfocítica crónica ) al0unoslinfomas

• 8ejido analizado< %an0re, orina o líquido cefalorraquídeo

• Cómo se usó< Para determinar el pronóstico ) vi0ilar la reacción altratamiento

1utación *+'4 FDM==$H

• 8ipos de cDncer< 9elanoma cutDneo ) cDncer colorrectal


• Cómo se usó< Para pronosticar la reacción a terapias diri0idas

(roteína de matriz nuclear 66 F/1(66H

• 8ipo de cDncer< CDncer de veji0a

• 8ejido analizado< Xrina

• Cómo se usó< Para vi0ilar la reacción al tratamiento

+eceptor de estrógeno F$+H y receptor de progesterona F(+H

• 8ipo de cDncer< CDncer de seno


• Cómo se usó< Para determinar si el tratamiento con terapia ;ormonal2como con tamoFifeno3 es adecuado

+eordenación de genes '&G


82/378

• 8ipos de cDncer< CDncer de pulmón de c lulas no pequeYas ) linfomaanaplDsico de c lulas 0randes


• Cómo se usó< Para a)udar a determinar el tratamiento ) el pronóstico

!ello de 7 proteínas F va


83/378

`a que los marcadores de tumores pueden usarse para evaluar la reacción de un tumor altratamiento y para el pronóstico, los investigadores han esperado que los marcadores podrían ser )tiles también como e#ámenes de detección que tengan la finalidad de detectarel cáncer inicial, antes de que haya síntomas (ara que un e#amen de detección sea )til,deberá tener una sensibilidad muy alta Fcapacidad para identificar correctamente a la genteque tiene la enfermedadH y especificidad Fcapacidad para identificar correctamente a lagente queno tiene la enfermedadH !i un e#amen es altamente sensible, identificará a lamayoría de la gente que tiene la enfermedad] es decir, tendrá muy pocos resultadosnegativos falsos !i un e#amen es altamente específico, solo un n)mero pequeEo de gentetendrá un resultado positivo pero que no tiene la enfermedad] en otras palabras, tendrá muy pocos resultados positivos falsos

'unque los marcadores de tumores son )tiles en e#tremo para determinar si un tumor estáreaccionando al tratamiento o para evaluar si el cáncer ha regresado, ning)n marcador detumores que ha sido identificado hasta ahora es suficientemente sensible o específico parausarse por sí mismo como e#amen de detección de cáncer

(or e"emplo, el análisis del antígeno prostático específico F(!'H, el cual mide laconcentración de (!' en la sangre, se usa con frecuencia para e#aminar a hombres para buscar cáncer de próstata !in embargo, una concentración mayor de (!' puede sercausada por afecciones benignas de próstata así como por cáncer de próstata, y la mayoríade los hombres que tienen una concentración elevada de (!' no tienen cáncer de próstata&os resultados iniciales de dos estudios grandes aleatorizados, controlados, el $studio de$#ámenes de 0etección de Cáncer de (róstata, de (ulmón, Colorrectal y de varios,

(&C , y el $studio $uropeo 'leatorizado de $#ámenes de 0etección de Cáncer de (róstataindicaron que las pruebas de (!' a lo más llevaron a solo una reducción pequeEa deln)mero de muertes por cáncer de próstata 'demás, no está claro si los beneficios dele#amen de detección con (!' superan los per"uicios de las pruebas de diagnóstico y de lostratamientos resultantes por cánceres que en muchos casos nunca habrían de poner en peligro la vida de un hombre

$n forma seme"ante, los resultados del estudio (&C indicaron que el C'-


84/378

?Gué clase de in*esti&ación se est9 haciendo paraformular marcadores de tumores m9s precisos&os investigadores de oncología acuden a la proteinómica Fel estudio de la estructura,función y patrones de e#presión de las proteínasH con la esperanza de formular nuevos biomarcadores que puedan usarse para identificar enfermedades en sus estadios iniciales, para predecir la posibilidad de recurrencia del cáncer después de que haya terminado eltratamiento

&os científicos están evaluando también los patrones de e#presión génica en su capacidad para ayudar a determinar el pronóstico de un paciente o su reacción a la terapia (ore"emplo, el estudio'I& +# patrocinado por el /CI asignó a mu"eres con cáncer de senocon receptor de hormonas y ganglios linfáticos negativos que se han sometido a cirugía para tratamientos diferentes basándose en su puntuación de recidiva de la prueba$ncotype %&' 2no de los ob"etivos del estudio es determinar si las mu"eres cuya puntuación indicaque tienen un riesgo intermedio de recurrencia FrecidivaH se beneficiarán al aEadirsequimioterapia a la terapia hormonal o si tales mu"eres pueden evitar la quimioterapia sin peligro $l estudio ha reclutado el n)mero requerido de participantes que serán observadasdurante varios aEos antes de que se disponga de resultados

&a +ed de Investigación de 0etección (recoz está formulando y probando algunos biomarcadores con base en la genómica y la proteinómica

$l (rograma para la $valuación de (ruebas Clínicas de Cáncer F('CC H, una iniciativa del(rograma de 0iagnóstico del Cáncer de la 0ivisión de 0iagnóstico y ratamiento delCáncer del /CI, ha sido concebido para asegurar que la formulación de las pruebas delaboratorio futuras es eficiente y eficaz $l grupo estratégico de ('CC , el cual incluye acientíficos de universidades, de la industria y del /CI, está concibiendo los criterios paraevaluar los marcadores que están listos para una formulación ulterior $l ob"etivo de('CC es también me"orar el acceso a especímenes humanos, hacer reactivos estándar ycontrolar los materiales, así como apoyar los estudios de validación 2n nuevo programa, el(rograma de 4ormulación de Daloración Clínica, permite que el /CI ayude en la creaciónde valoraciones prometedoras que puedan predecir cuál tratamiento pueda ser me"or o que

ayude a indicar la malignidad de un cáncer en particular7iblio0rafía selecta

!. 7i0bee W, @erberman 7. 8umor markers and immunodia0nosis. =n< 7astC 4r., ?ufe 5W, Pollock E, et al., editors. Cancer Me icine . - t; ed.

@amilton, Xntario, Canada< 7C 5ecker =nc., "##'.


85/378

". &ndriole $, CraVford E, $rubb , et al. 9ortalit) results from arandomized prostate>cancer screenin0 trial. New *nglan +ournal ofMe icine "##A6 '-#2!'3

'. %c;rZder :@, @u0osson 4, oobol 94, et al. %creenin0 and prostate>cancermortalit) in a randomized European stud). New *nglan +ournal ofMe icine "##A6 '-#2!'3

ecursos relacionados

• &nDlisis del antí0eno prostDtico especí co 2P%&3

• Estadi cación del cDncer

• esultados de pruebas de laborat orio

• "e!isi'n: U de diciembre de "#!!

ste te(to puede copiarse o usarse con toda libertad' Sin embar)o, a)radeceremos que sedé reconocimiento al #nstituto *acional del C"ncer como creador de esta informaci!n' lmaterial )r"fico puede ser propiedad del artista o del editor por lo que tal ve+ seanecesaria su autori+aci!n para poder usarlo'

U0esea usar este contenido en su sitio Yeb o en otra plataforma digitalT $n nuestra página

de sindicación de contenidos le decimos cómo hacerlo=nstituto Nacional del CDncerde los =nstitutos Nacionales de la %alud de EE. __.

,Í-AN0, EN

• :acebook

http://www.cancer.gov/clinicaltrials/noteworthy-trials/tailorxhttp://edrn.nci.nih.gov/http://edrn.nci.nih.gov/http://www.cancer.gov/clinicaltrials/noteworthy-trials/tailorxhttp://edrn.nci.nih.gov/http://cdp.cancer.gov/scientificPrograms/pacct.htm


86/378

• 8Vitter

• =nsta0ram

• òu8ube

• %%

• $oo0le

• /inked=n

1n ormaci'n de contacto

• Comuníquese con nosotros

%2, 1N30"%A/14N• &cerca de este sitio Veb

• Cancer.0ov in En0lis;

• 9ultimedia

• Publicaciones

• 9apa del sitio

P05Í61/A,

• &ccesibilidad

• EFoneración

• :X=& 2/e) de libre acceso a la información3

• Política de con dencialidad ) se0uridad

•

5epartamento de %alud ) %ervicios @umanos de EE. __.• =nstitutos Nacionales de la %alud

• =nstituto Nacional del CDncer

• $obierno_%&.0ov

N=@ ... 8ransformación de 5escubrimientos en %alud S

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21642681http://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/estadificacion/hoja-informativa-estadificacionhttp://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/hoja-informativa-pruebas-laboratoriohttp://www.cancer.gov/espanol/sindicacionhttp://www.cancer.gov/espanol/sindicacionhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19297565http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19297566http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21642681http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21372036http://www.cancer.gov/espanol/tipos/prostata/hoja-informativa-psahttp://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/estadificacion/hoja-informativa-estadificacionhttp://www.cancer.gov/espanol/cancer/diagnostico-estadificacion/hoja-informativa-pruebas-laboratoriohttp://www.cancer.gov/espanol/global/politicas/derechos-de-autorhttp://www.cancer.gov/espanol/sindicacionhttp://www.cancer.gov/espanol/sindicacionhttps://www.facebook.com/cancer.govEspanol


87/378

!#." 8 cnicas 5e @ibridación

8;e %out;ern blot es un m todopara sondear la presencia de una secuencia especí ca de &5N en una muestrade &5 N. 9uestras de &5N antes o d espu s de la di0estión de la enzima derestricción se separan por electroforesis en 0el ) lue0o transferidas a unamemb rana por 7lot a tra v s de la acción capilar. /a membrana entonces estDeFpuesta a una sonda de &5N etiquetada que tiene una secuencia base decomplemento a la secuencia de &5N de inter s. Protocolos mDs ori0inales

http://www.cancer.gov/espanolhttp://www.usa.gov/gobiernousa/index.shtmlhttps://twitter.com/@nciespanolhttp://instagram.com/ncivisualsonlinehttps://www.youtube.com/playlist?list=PLYKy4VbxNln7Cy6K2hZvwHLIZAElio5aihttp://www.cancer.gov/espanol/sindicacion/rsshttp://www.cancer.gov/social-media#google+http://www.cancer.gov/social-media#linkedInhttp://www.cancer.gov/espanol/contactenoshttp://www.cancer.gov/espanol/acerca-sitiohttp://www.cancer.gov/http://www.cancer.gov/espanol/multimediahttp://www.cancer.gov/espanol/publicaciones/educacion-para-pacienteshttp://www.cancer.gov/espanol/acerca-sitio/mapa-sitiohttp://www.cancer.gov/espanol/politicas/accesibilidadhttp://www.cancer.gov/espanol/politicas/exoneracionhttp://www.cancer.gov/espanol/politicas/foiahttp://www.cancer.gov/espanol/politicas/confidencialidad-seguridadhttp://www.hhs.gov/http://www.nih.gov/http://www.cancer.gov/espanolhttp://www.usa.gov/gobiernousa/index.shtml


88/378

utilizan etiquetas radiactivas, a;ora eFisten alternativas sin embar0o noradiactivas. %out;ern 7lot es menos utilizada en Ciencias de laboratorio de bidoa la capacidad de otras t cnicas, tales como PC , para detectar secuencia sespecí cas de &5N de muestras de &5N. Estas manc;as se si0uen utilizan dopara al0unas aplicaciones, sin embar0o, como el nRmero de copia de tran s0en

en ratones trans0 nicos, o en la in0eniería de líneas de c lulas madreembrionarias de 0ene knockout de medición.

Western 7lot

&nticuerpos contra la ma)oría de las proteínas se puede crear in)ectandopequeYas cantidades de la proteína en un animal como un ratón, conejos, ovejas o burro 2anticuerpos policlonales3 o producido en cultivos celulares2anticuerpos monoclonales3. Estos anticuerpos pueden utilizarse para unavariedad de t cnicas analíticas ) preparativas.

En Vestern 7lot, proteínas enprimer lu0ar se separan por tamaYo en un 0el no entre dos placas de vidrioen una t cnica conocida como %5%>P&$E 2electroforesis en 0el depoliacrilamida sodio 5odecil sulfato3. /as proteínas en el 0el lue0o sontransferidas a un P(5:, nitrocelulosa, n)lon o otra membrana de soporte. Estamembrana, a continuación, puede ser sondeada con soluciones de anticuerpos.

/os anticuerpos que se unen especí camente a la proteína de inter s, acontinuación, pueden visualizarse por una variedad de t cnicas, inclu)endoproductos coloreados, quimioluminiscencia o autorradio0rafía.

Nort;ern 7lot

http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.html


89/378

8;e nort;ern blot se utiliza para estudiar los patrones de eFpresión de un tipoespecí co de la mol cula de & N como comparación relativa entre un conjuntode diferentes muestras de & N. Es esencialmente una combinación dedesnaturalización electroforesis en 0el N& ) una manc;a. En este proceso de& N estD separado basado en tamaYo ) es transferido a una membrana quelue0o es sondeada con un etiquetado como complemento de una secuencia deinter s. /os resultados pueden visualizarse a trav s de una variedad de formasdependiendo de la etiqueta utilizada6 %in embar0o, la ma)oría como resultadola revelación de bandas que representa el tamaYo del & N detectado en lamuestra. /a intensidad de estas bandas estD relacionada con la cantidad delobjetivo del N& en las muestras analizadas. El procedimiento es utilizadocomRnmente para estudiar cuDndo ) cuDnto eFpresión 0 nica ocurre midiendocuDnto de ese & N estD presente en diferentes muestras. Es una de las;erramientas mDs bDsicas para determinar en qu momento ) bajo qucondiciones, al0unos 0enes se eFpresan en tejidos vivos.

Publicado por carlos $onzalez en !U


90/378

herramienta muy ú til ya que se dispone de varios mecanismos de separaci ó n. La modificaci ó n de lasdiferentes fases estacionarias ya existentes, as í como el desarrollo de nuevas es la base principalpara la obtenci ó n de las condiciones necesarias para la r á pida y eficiente separaci ó n debiomol é culas.

Cromato0rafía de penetrabilidad. Elcomponente bDsico es una columna empaquetada con una matriz en 0elespecial, que son partículas de un polímero or0Dnico de estructuratridimensional, que ori0inan una red de poros ;idrofílicos equilibrados con un

tampón acuoso. /a t cnica consiste en que las mol culas de 0ran tamaYo nopenetran por los poros del polímero, por lo que mi0ran muc;o mDsrDpidamente que las de menor tamaYo que sí son capaces de penetrar por losporos de la matriz.

https://www.blogger.com/profile/01099691091800474182http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.html#comment-formhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=8059522564345627136&target=emailhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=8059522564345627136&target=bloghttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=8059522564345627136&target=twitterhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=8059522564345627136&target=facebookhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=8059522564345627136&target=facebookhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=8059522564345627136&target=pinteresthttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/101-metodos-de-purificacion.html


91/378

Cromato0rafía de intercambio iónico . Es el m todo mDs utilizado para laseparación de Dcidos nucleico. El mecanismo bDsico es el intercambioreversible de los iones en solución con los 0rupos funcionales unidoscovalentemente a una fase estacionaria insoluble llamada resina. Por ejemplo,un Dcido nucleico con car0a ne0ativa a p@ U,# se unirD a un intercambiadoriónico con 0rupos car0ados positivamente, pero eluirD de la columna alcambiar al p@ del tampón 2tampón de elución3 )a que los iones del tampón deelución interaccionan con los 0rupos car0ados del Dcido nucleico o delintercambiador iónico, respectivamente6 primero eluirDn de la columna lasmol culas car0adas positivamente que no se unen a la fase estacionaria )posteriormente, al aYadir el tampón de elución, eluirDn las mol culas con pocacar0a ne0ativa neta ) lue0o las de ma)or car0a ne0ativa neta.



92/378

=N%8=8_8X 8ECNX/ $=CX 5E C=_5&5 &/8&9= &NX

_N=5&5 !# 8 CN=C&% 5E /& 7=X/X$ & 9X/EC_/&

Nombre del &lumno< $onzalez &0uirre Carlos &lberto

NRmero de Control< #AA'##*#

Carrera< /ic. 7iolo0ía

Ciudad &ltamirano, $ro. 9 Fico. 4_N=X del "#!"

=ntroducción.

https://www.blogger.com/profile/01099691091800474182http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/101-metodos-de-purificacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/101-metodos-de-purificacion.html#comment-formhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=7557666440414745592&target=emailhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=7557666440414745592&target=bloghttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=7557666440414745592&target=twitterhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=7557666440414745592&target=facebookhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=7557666440414745592&target=facebookhttps://www.blogger.com/share-post.g?blogID=3595087958053545001&postID=7557666440414745592&target=pinteresthttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/unidad-10.html


93/378

En principio se denomina así a todas las t cnicas de laboratorioque se usan para aislar &5N o eFtraerlo en alta pureza,visualizarlo para ver su estado, cortarlo ) pe0arlo 2nacimiento dela =n0eniería 0en tica3, ampli car una re0ión en una enorme

cantidad de mol culas 2clonación de fra0mentos en bacterias uotros vectores como virus ) PC 3, corte de una determinadare0ión con enzimas de restricción para ver si por una mutaciónse 0ana o se pierde un sitio de restricción 2anDlisis demutaciones por :/P o estriction fra0ment len0tpol)morp;ism3, que si0ini ca< diferencias en los tamaYos de losfra0mentos de restricción debido a polimor smos en el &5Nentre otras.

8odas estas t cnicas tiene diversas aplicaciones 0eneralmenteen el dia0nóstico de enfermedades ;ereditarias, bRsqueda dealelos mDs o menos frecuentes asociados a una característicaque nos interesa seleccionar, dia0nóstico de contaminaciónbacteriana en alimentos 2detección de Esc;eric;i coli #"+U,cepas difrenctes de %almonellas, 9)cobacterium sp3 dia0nósticoviral o de infección viral 2@=(, @patitis C, P=:, otros3, selección demarcadores moleculares para asistir en el mejoramiento

0en tico de una especie, test de paternidad, di0anóstico deidentidad forense, etc.

Objetivo

Conocer y aplicar las bases moleculares del ADN para su manipulaci ó n y en el mejoramiento

gen é tico de especies de inter é s alimenticio, m é dico y ecol ó gico.



94/378

/&% 7&C8E =&% 5E 5=:E EN8E% E%PEC=E% P_E5EN CX9P& 8= P/ %9=5X%

/as bacterias de diferentes especies %= pueden compartir plDsmidos, por losestudios realizados por cientí cos de %uecia.

Cientí cos de %uecia ;an descubierto que la parte de Dcido desoFirribonucleico2&5N3 bacteriano que normalmente porta la resistencia a antibióticos posee lacapacidad de transmitirse entre distintos tipos de bacteria ) adaptarse aespecies bacterianas mu) distintas. /os descubrimientos, presentados en larevista Nature Communications, arrojan luz sobre cómo los plDsmidos =ncP>!pueden aumentar la posibilidad de que se produzca una propa0ación de 0enes.

/os avances m dicos proporcionan mDs ) mejores tratamientos para aquellosque los necesitan, pero cada vez mDs bacterias presentan resistencia a losantibióticos mDs comunes.

Nuestros resultados muestran que los plDsmidos del 0rupo =ncP>! ;an eFistido) se ;an adaptado a bacterias mu) distintas, eFplica Peter Norber0 del =nstitutode 7iomedicina de la _niversidad de $otembur0o, autor principal del estudio.

8ambi n se ;an recombinado, lo que implica que un Rnico plDsmido puedeconsiderarse como un intrincado rompecabezas de 0enes, de tal modo quecada uno se ;a adaptado a distintas especies de bacterias.

Cita 7iblio0ra ca<

http://cordis.europa.eu/fetch?CALLER=ES_NE S!AC"#$N=%!SESS#$N=!RCN=&&&'(

Publicado por carlos $onzalez en !-


95/378

Concluimos en esta unidad A que, la transducción, que es un proceso por elcual las bacterias trans eren 5N& a otro bacteria receptora, utilizando fa0os./a conju0ación, es el proceso por el cual bacterias intercambian plDsmidos :, atrav s de estructuras llamadas pilis. ` por ultimo la transformación es elmecanismo por el cual una bacteria puede tomar 5N& del medio. Estos son los

procesos por el cual las bacterias pueden recombinan sus 0enes ) se vuelvenmDs adaptables al medio.

Publicado por carlos $onzalez en !*


96/378

8iteratura Citada9

;ttp< books.0oo0le.com.mF booksgidhz0A5d ! !=oC p0hP&'+ dqhcontrol 0enetico del 0en 7 C& ;lhes sah eihf(/N8*v Euq "&W(*X%P&0 vedh#C50 -&EV&& vhonepa0e qhc

ontrol "#0enetico "#del "#0en "#7 C& fhfalsePublicado por carlos $onzalez en !*


97/378

/os vectores sint ticos son de producción sencilla, altamente estables, ) sepueden conse0uir 0randes construcciones.

%$todo del os ato c+lcico . 7asado en la obtención de un precipitado entreel cloruro de calcio ) el 5N& en una solución salina de fosfatos. En estasituación co>precipitan formando unos a0re0ados que sonendocitados fa0ocitados por las c lulas. &parentemente el a0re0ado con calcioprote0e al 5N& de la de0radación por las nucleasas celulares. El tamaYo ) lacalidad del precipitado es crítico para el Fito del proceso, que se ve afectadopor factores tales como pequeYos cambios en el p@ de la solución, etc...

%$todo del (EAE de3 por ser

estructura polar tiene m uc;as di culta des para cruzar l a membranaplasmDtica. &demDs el 5N& cod i cante para ! 0en es aproFimadamente de !#kb, esto representa la lon0itu d aproFimada de una c lula, en el caso deencontrar el 5N& sin nin0un tipo de compactatción.

%$todo P$ptidos usiog$nicos /os p ptidos fusio0 nicos sur0en en unalinea de trabajo que nos permita paliar aquellas características del 5N&

desnudo que nos impiden la entrada.

Publicado por carlos $onzalez en !-


98/378

Entradas anti0uas PD0ina principal

%uscribirse a


99/378

• PD0ina principal

• E%_9EN > :X 9&C=XN ` X =EN8&C=XN /&7X &/ 2:X/3

• E%_9EN > @E9&8X/X$ & ` C=8X/X$ & 2dedicado a 9ire...

• esumen > &nDlisis 7=X _ 9=CX 2fundamentos ) t cni...

• 9=C X7=X/X$=& > 7act eriolo0ia, 9edios de cultivo )...

• &P_N8E% > 9_E%8 &% 7=X/X$=C&%

esumen > &nDlisis 7=X _ 9=CX 2fundamentos ) t cnicas3 hT dedicado a=sabel 9 Cruces

6ema ; > %edi da de los analitos porotometría espectro otometría

!. Espectro electromagn$t ico: distribución ener0 tica del conjunto de laradiación electroma0n tica .

http://lestrangebiologist.blogspot.com/search?updated-max=2012-06-04T16:04:00-07:00&max-results=7http://lestrangebiologist.blogspot.com/search?updated-max=2012-06-04T16:04:00-07:00&max-results=7http://lestrangebiologist.blogspot.com/http://lestrangebiologist.blogspot.com/feeds/posts/defaulthttp://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/search?updated-min=2012-01-01T00:00:00-08:00&updated-max=2013-01-01T00:00:00-08:00&max-results=50http://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012_06_01_archive.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/unidad-10.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/tarea-unidad-8.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/tarea-unidad-8.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/tarea-unidad-8.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/search?updated-max=2012-06-04T16:04:00-07:00&max-results=7http://lestrangebiologist.blogspot.com/http://lestrangebiologist.blogspot.com/feeds/posts/defaulthttps://www.blogger.com/profile/01099691091800474182https://www.blogger.com/profile/01099691091800474182https://www.blogger.com/profile/01099691091800474182https://www.blogger.com/profile/01099691091800474182http://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/search?updated-min=2012-01-01T00:00:00-08:00&updated-max=2013-01-01T00:00:00-08:00&max-results=50http://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012_06_01_archive.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/102-tecnicas-de-hibridacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/101-metodos-de-purificacion.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/unidad-10.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/tarea-unidad-9.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/conclusion-unidad-9.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/tarea-unidad-8.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/922-quimicos.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/92-mecanismos-de-transferencia.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/91-mecanismos-de-transferencia-natural.htmlhttp://lestrangebiologist.blogspot.com/2012/06/sep-dgest-instituto-tecnologico-de.htmlhttp://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012_05_01_archive.htmlhttp://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012_04_01_archive.htmlhttp://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012_03_01_archive.htmlhttp://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012_02_01_archive.htmlhttp://void%280%29/http://lestrangebiologist.blogspot.com/2012_01_01_archive.htmlhttp://elblogdeadepi.blogspot.com/


100/378

". 1nteracci'n de la energía radiante con la materia/a ener0ía radiante 2radiación electroma0n tica3 puede manifestarse comomovimiento ondulatorio 2radiación electroma0n tica3 o como si estuvieseinte0rada por un ujo de partículas discretas o paquetes ondulatorios ener0 ticosdenominados fotones , es decir presentando propiedades electroma0n ticas )ener0 ticas. &mbos modelos son complementarios.

9=;= Par+metros ondulatorios <

• Amplitud?A@: lon0itud del vector el ctrico mDFimo en la onda.

• 5ongitud de onda ? @: distancia entre dos puntos que se encuentranen el mismo punto de vibración.

• Período ?6@: tiempo en se0undos 2s3 que tarda una partícula en realizaruna vibración completa.

• 3recuencia ?!@: nRmero de oscilaciones completas que una partícularealiz

Laboratorio de Inmunohistoquímica2015

Documents

Transcript of Laboratorio de Inmunohistoquímica2015