KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi...
Transcript of KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi...
![Page 1: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/1.jpg)
KROMATOGRAFI
![Page 2: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/2.jpg)
PENDAHULUAN
• Analisis komponen penyusun bahan pangan penting, tidak hanya mencakup makronutrien
• Analisis konvensional: lama, tenaga beasar, sering tidak akurat, tidak dapat mendeteksi pada kadar rendah seperti ppm
• Teknik kromatografi: terus berkembang dengan akurasi tinggi
![Page 3: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/3.jpg)
SEJARAH
• Pertama kali digunakan untuk
memisahkan zat warna (chroma)
tanaman
![Page 4: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/4.jpg)
DEFINISI
• Teknik pemisahan yang dilakukandengan memanipulasi sifat fisik darizat-zat penyusun suatu campuran
• Tidak ada dua zat yang mempunyaisifat fisik yang sama sehinggapemisahan untuk zat yang serupamasih mungkin untuk dilakukan
![Page 5: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/5.jpg)
SIFAT FISIK YANG
DIMANIPULASI
• Kecenderungan zat untuk larut dalam
suatu cairan
• Kecenderungan zat untuk teradsorpsi
pada butir zat padat yang halus dengan
permukaan luas (adsorben)
• Kecenderungan zat untuk menguap
![Page 6: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/6.jpg)
ISTILAH PENTING
1. Polaritas
2. Partisi
3. Adsorpsi
4. Jenis fase: fase stasioner dan
fase mobil
![Page 7: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/7.jpg)
1. POLARITAS
• Penting untuk kromatografi
• Menunjukkan adanya pemisahan kutub muatan
positif dan negatif dari suatu molekul sebagai
akibat terbentuk konfigurasi tertentu dari atom-
atom penyusunnya
• Molekul tersebut dapat tertarik oleh molekul lain
yang mempunyai polaritas
• Tingkat pemisahan dari molekul-molekul
tersebut menentukan polaritas dan daya
tariknya
![Page 8: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/8.jpg)
dalam kromatografi
Polaritas digunakan sebagai petunjuk sifat:
• Pelarut/solven
• Adsorben
• Zat yang dipisahkan/solut
PRINSIP LIKE DISSOLVES LIKE
• Pelarut polar cenderung melarutkan solut polar
• Adsorben polar cenderung mengadsorbsi solut
polar
![Page 9: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/9.jpg)
POLARITAS RELATIF BERBAGAI JENIS PELARUT
KONSTANTA DIELEKTRIK JENIS PELARUT
1,89 Petroleum ringan (petroleum eter,
heksana, heptana)
2,023 Sikloheksana
2,238 Karbon tetraklorida, trikloroetilen, toluena
2,284 Benzena, diklorometana
4,34 Etil eter
4,806 Kloroform
6,02 Etil asetat
20,70 Aseton, n-propanol
24,30 Etanol
33,62 Metanol
80,37 Air
![Page 10: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/10.jpg)
Polaritas pelarut
• Sebanding dengan konstanta dielektrik zat
pelarut
![Page 11: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/11.jpg)
2/3. PARTISI DAN ADSORBSI
• Pemisahan dengan proses partisi dan
adsorbsi dipengaruhi oleh perbedaan
polaritas solut yang dipisahkan
• Polaritas merupakan faktor yang
menentukan daya larut (kemampuan
partisi) dan adsorbsi solut
![Page 12: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/12.jpg)
PARTISI
• Proses partisi tergantung dari daya larut
solut dalam dua macam cairan
• Peka terhadap perbedaan BM solut
• Zat yang terdiri dari satu seri deret
homolog paling baik dipisahkan dengan
kromatografi partisi
• Misal: pemisahan berbagai jenis asam
amino, asam lemak, gula
![Page 13: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/13.jpg)
ADSORBSI
• Peka terhadap bentuk stereometri dari solutyang dipisahkan
• Banyaknya solut yang dapat diadsorbsi padapermukaan adosrben tergantung dari konfigurasisolut
• Kemampuan untuk diadsorbsi menentukankemudahan solut untuk dipisahkan dengankromatografi adsorbsi
• Cocok untuk memisahkan campuran solut yangserupa tetapi mempunyai perbedaan bentuksterometrik
![Page 14: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/14.jpg)
JENIS-JENIS
KROMATOGRAFI
• Berdasarkan prinsip kerja: partisi dan
adsorpsi
JENIS
• Kromatografi lapis tipis (TLC)
• Kromatografi kolom: HPLC, GLC,
penukar ion, gel filtrasi
![Page 15: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/15.jpg)
PEMILIHAN JENIS
KROMATOGRAFI
• Kemudahan pelaksanaan
• Tujuan pemisahan: preparatif atau analitik
• Bentuk senyawa yang dipisahkan:
volatilitas, bentuk stereometri, derivatisasi,
dll
![Page 16: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/16.jpg)
I. KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS
• Merupakan kromatografi adsorpsi
• Fase stasioner: adsorben
• Fase mobil: pelarut
• Biasanya untuk analisis kualitatif
![Page 17: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/17.jpg)
PLAT TLC
![Page 18: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/18.jpg)
PENGEMBANGAN
![Page 19: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/19.jpg)
VISUALISASI DENGAN CHARING
![Page 20: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/20.jpg)
IDENTIFIKASI
• Membandingkan dengan standar
KUANTIFIKASI• Dengan mengukur kepekatan warna
spot
• Alat yang digunakan TLC Scanner
![Page 21: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/21.jpg)
II. KROMATOGRAFI GAS
![Page 22: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/22.jpg)
• Prinsip pemisahan: partisi
• Fase stasioner: cairan yang dilapiskan
pada zat penyangga padatan
• Fase mobil: gas seperti He, N2, H2
![Page 23: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/23.jpg)
KOMPONEN GC
• Tabung gas
• Pengatur aliran gas
• Oven + kolom
• Detektor
• Rekorder
![Page 24: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/24.jpg)
OVEN KROMATOGRAFI GAS
![Page 25: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/25.jpg)
KOLOM GC
• 2 JENIS
Kolom isian
Kolom pipa terbuka
• SUHU KOLOM DIATUR
![Page 26: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/26.jpg)
DETEKTOR
• Mendeteksi komponen-komponen yang
ada dalam sampel
• Digambarkan dalam bentuk
kromatogram
![Page 27: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/27.jpg)
Contoh Kromatogram
![Page 28: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/28.jpg)
IDENTIFIKASI
• Dengan membandingkan dengan
senyawa standar
• Kondisi kromatografi harus sama
dengan sampel
• Diidentifikasi berdasarkan waktu
retensi
![Page 29: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/29.jpg)
KUANTIFIKASI
• Integrator: persentase luas area puncak sampel terhadap seluruh luas are puncak-puncak yang ada pada kromatogram
Cara perhitungan:
• Standarisasi internal
• Standarisasi eksternal
• Normalisasi internal
![Page 30: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/30.jpg)
III. KROMATOGRAFI CAIRAN
KINERJA TINGGI (HPLC)
![Page 31: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/31.jpg)
• Kromatografi partisi cairan-cairan
• Fase stasioner: cairan yang dilapiskan
pada zat padat penyangga
• Fase mobil: pelarut/cairan
![Page 32: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/32.jpg)
SUSUNAN ALAT
![Page 33: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/33.jpg)
KOLOM HPLC
![Page 34: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/34.jpg)
CONTOH KROMATOGRAM HPLC
![Page 35: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/35.jpg)
IDENTIFIKASI dan
KUANTIFIKASI
• Identifikasi dengan membandingkan
waktu retensi sampel dengan standar
• Kondisi HPLC sampel harus sama
dengan standar
• Kuantifikasi: seperti GC
![Page 36: KROMATOGRAFI - · PDF fileDEFINISI •Teknik pemisahan yang dilakukan dengan memanipulasi sifat fisik dari zat-zat penyusun suatu campuran •Tidak ada dua zat yang mempunyai](https://reader031.fdocument.pub/reader031/viewer/2022012305/5a9996967f8b9aba4a8d50d9/html5/thumbnails/36.jpg)
Thank You