Ketrampilan Dasar Laboratorium · PDF fileAda molekul/unsur yang ... Puncak serapan pada...
Transcript of Ketrampilan Dasar Laboratorium · PDF fileAda molekul/unsur yang ... Puncak serapan pada...
Ketrampilan Dasar LaboratoriumKetrampilan Dasar Laboratorium
Program Program StudiStudi IlmuIlmu Biomedik 20Biomedik 201111
Kuliah 4: Oktober 5, 2010
Pengenceran “revisited”
OpenWetWare…file names
Spektrofotometri
Praktikum Metabolisme
PengenceranPengenceran::
The ratio a:b is generally defined as the quotient (a/b) and is described as a in b.2–4 However, it may also be expressed as a to b.5,6 [meaning]…the sum a+b.
a:ba:b Fishel, L.A. 2010. Dilution Confusion: Conventions for Defining a Dilution Journal of Chemical Education 87:183-1185.
2. Kaplan LA, Pesce AJ, eds. Clinical Chemistry: Theory, Analysis, Correlation. 5th ed. St Louis, Mo.: Mosby Elsevier; 2010:32. 3. Troy DB, ed. Remington—The Science and Practice of Pharmacy. 21st ed. Philadelphia, Pa.: Lippincott Williams & Wilkins; 2006:119. 4. Burtis CA, Ashwood ER, Bruns DE, eds. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4th ed. St. Louis, Mo.: Elsevier Saunders; 2006:27.
5. Darton M, Clark J. The Macmillan Dictionary of Measurement. New York, NY: Macmillan Publishing Co.; 1994:378. 6. The Random House Dictionary of the English Language. 2nd ed., unabridged. New York, NY: Random House; 1987: 1602.
PengenceranPengenceran::
Untuk mata kuliah Ketrampilan Dasar Laboratorium, a:b selalu diartikan a/a+b
a:ba:b
1:1 pengenceran 50% atau 1/2 dari awalnya
1:3 pengenceran 25% atau 1/4 dari awalnya
2:3 pengenceran 40% atau 2/5 dari awalnya
1:9 pengenceran 10% atau 1/10 dari awalnya
1:10 pengenceran <10% atau 1/11 dari awalnya
Filenames in Filenames in OpenWetWareOpenWetWare
Praktikum 4: Metabolisme I dan Spektrofotometri
Bahan Praktikum Metabolisme I dan
Spektrofotometri
Artikel Dasar Kegiatan Praktikum Metabolisme di sini
Tugas Mahasiswa (laporan) Praktikum 4
Tolonglah nama file Anda termasuk nama Anda/kelompok
Anda sendiri
Contoh: "Abdi dan Mustafa laporan praktikum
metabolisme dan spektrofotometri.pdf“
??Apakah email sudah sampai??
SpectrophotometrySpectrophotometry Basic Ideas:
i) If a molecule absorbs a
photon of electromagnetic
radiation, its energy level
will riserise EXCITED
STATE
ii) a molecule may vibrate in
many ways, so there are
many vibrational vibrational levelslevels
iii)Absorption (and emission)
of energy is quantal (yaitu
set values)
Energy Level Diagram
Basic ideas.....Basic ideas.....
iv) Electromagnetic Spectrum: relationship between
energy and wavelength
E = hc/ (h Planck’s constant=4.13566733×10−15 eVs)
UV and visible spectrum (~200-800nm) berguna
bagi penelitian molekul-molekul electronic
transitions
X-ray or -ray energy tinggi molekul
dihancurkan/kanker
IR energi agak rendah mendapat keterangan
tentang struktur molekul (rotational or
vibrational transitions)
UV and visible spectrum (~200-800nm)
λ semakin kecil
energi semakin besar
** skala logarithmik**
Ada molekul/unsur yang dapat menyerap cahaya langsung pada
200nm < λ > 800nm misalnya: DNA atau protein
Absorption Spectra of DNA and proteinAbsorption Spectra of DNA and protein
DNA and protein absorb energy in the UV region
(DNA pada =260nm; protein pada =280nm)
HasilHasil SpektrofotometriSpektrofotometri DNADNA
SpektraSpektra absorpsiabsorpsi glukosaglukosa dandan kolesterolkolesterol
diambil dari: https://fscimage.fishersci.com/images/D10972~.pdf Enzymatic Colorimetric Methods for the Analysis of Human Serum by UV-Visible Spectroscopy, Keppy et.al., Thermo Fisher Scientific
standar standar
sempel
sempel
λ (nm) λ (nm)
sera
pan
sera
pan
glukosa kolesterol dasarnya: H2O2 bereaksi dengan fenol, 4-amino-antipirin serta
peroksidase derivatif kuinonimin yang berwarna merah.
Protein dapat diukur dgn reagensia Biuret
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0.4
480 500 520 540 560 580 600 620
panjang gelombang (nm)
se
rapa
n
Puncak serapan pada
≈520 nm
Serapan cahaya dibanding dengan panjang gelombang cahaya
pada reaski reagensia Biuret dengan protein
data yg diperoleh pada praktikum BM506 2009
Alat Spektrofotometer :
A = dc
% transmission = 100 x (Io/I)
hubungan antara transmisi cahaya (I/ Io) dgn konsentrasi sempel
d
Io I
Io= intensitas cahaya yang masuk
I = intensitas cahaya yang keluar
d = jarak larutan yang dilalui cahaya (cm)
c = konsentrasi larutan (mole/litre atau M)
= molar absorption coefficient (M-1cm-1)
log10(Io/I) = -dc
tapi lebih praktis untuk mengunakan konsep serapan
(absorbance) dimana , A = -log10(Io/I)
d
Io I Io= intensitas cahaya yang masuk I = intensitas cahaya yang
keluar
A = -log10(Io/I)
Kalau 0% cahaya diserap sempel??
Io= I A = -log10(1) A = 0
Kalau 50% cahaya diserap sempel??
Io> I A = -log10(2) A = 0,3
Kalau 99,9% cahaya diserap sempel??
Io>> I A = -log10(1000) A = 3
Kalau nilai A yang diperoleh > 1,5 Kalau nilai A yang diperoleh > 1,5
sebaiknyasebaiknya sseempel diencerkanmpel diencerkan dulu agar dulu agar
hasilnya lebih akurat/ dapat dipercayahasilnya lebih akurat/ dapat dipercaya
2
Hukum Beer-Lambert
A = dc
Hukum Beer-Lambert benar pada konsentrasi yang berbanding lurus
dengan A
Basic operation:
i) pakai sempel blanko dan sempel yg lain
ii) sempel blanko dimasukkan dulu untuk dinulkan sinyal pada
yg sedang digunakan
iii) sempel yg lain diperiksa pada yg sama.
iv)serapannya dibaca
spektrofotometerspektrofotometer
Mode
(transmittance or absorption)
Wavelength adjustment Cuvette holder
100%T (0 absorbance)
adjustment On/Off
kuvet
PraktikumPraktikum 44
MetabolismeMetabolisme I (I (glukosaglukosa, ,
trigliseridatrigliserida, urea) , urea) dandan
TeknikTeknik SpektrofotometriSpektrofotometri
Kelompok praktikum
Bagian praktikum
Pengenceran
Grafik-grafik
Laporan/Proposal Metabolisme II
KelompokKelompok PraktikumPraktikum
18
KelompokKelompok 1 (1 (masukmasuk pkpk 08:00):08:00):
Dedy Ernawati
Mara Imam Fera Roy Taufik
Martina Lily Dorra Anwar
KelompokKelompok 2 (2 (masukmasuk pkpk 12:00):12:00):
Taya Elsa Leo Yeni Dita
Musthari Ningrum Donny Siti
Sukaisi
Grup praktikum ditentukan setiap hari praktikum
Cara Cara kerjakerja........
1. Pengenceran - doubling dilution dan decimal dilution dari larutan stok glukosa dan urea (meja 1,3,5 mengerjakan pengenceran larutan stok urea dan meja 2,4 mengerjakan pengenceran larutan stok glukosa)
2. Sempel darah diambil (boleh semua mhs, paling sedikit seorang dari grup meja Anda). 1ml darah cukup.
3. Darah disentrifugasi biar serum dapat diambil
4. Kerjakan pemeriksaan glukosa, trigliserida serta urea pada sempel serum sesuai dengan prosedurnya
Cara Cara kerjakerja........
GLUKOSA TRIGLISERIDA UREA
volume
reagensia kit
1000l
reagensia
glukosa
1000l
reagensia R2
1000l
reagensia A,
kemudian
1000l
reagensia B
volume
sampel 10l 10l 10l
konsentrasi
standard kit 100mg/dl 200mg/dl 40mg/dl
periode dan
temperatur
inkubasi
10 min @
37C 5 min @ 37C
5 min @ 25C
** 2X**
periksa pada λ 500nm 530nm 600nm
HasilnyaHasilnya........ Tabel 1a s/d 2b
faktor konsentrasi grup meja__ grup meja__
1
2
4
8
16
32
64
128
blanko
konsentrasi
se
rap
an
Hitung garis regresi (linear regression) pada data yg diperoleh. Rumus yang dihasilkan berbentuk
y= mx + b dimana y = serapan; x = konsentrasi dan “m” merupakan slope
HasilnyaHasilnya........ Tabel 3
GLUKOSA UREA
mhs: ______
mhs: ______
mhs: ______
mhs: ______
Serapan sempel
dari grafik 1a/2a
dari grafik 1b/2b
dari rumus kit
maksudnya dari rumus garis regresi y= mx + b
} contoh urea:
Asempel/Astandar x 40mg/dl
HasilnyaHasilnya........ Tabel 4 Hasil pemeriksaan glukosa, trigliserida dan urea plasma mahasiswa
data kelas
se
rap
an
detil2 mhs (berapa lama sejak makan; rata-rata apa yg dimakan; jenis kelaminan; umur)
GLUKOSA TRIGLISERIDA UREA
A kadar A kadar A kadar 1.
2.
3.
LaporanLaporan dandan proposal proposal MetabolismeMetabolisme IIII
Laporan * satu laporan per grup meja 1-2 halaman selain Tabel 3 dan 5 grafik
kata-kata sendiri
perubahan yang ada dicatat
3 kesimpulan dari setiap grafik (5 grafik yang berdasar Tabel 1a, 1b, 2a, 2b serta Table 4)
komentar atas kebuktian (atau tidak) Hukum Beer-Lambert
komentar atas hasil pada Tabel 3.
saran
LaporanLaporan dandan proposal proposal MetabolismeMetabolisme IIII Proposal untuk Praktikum Metabolisme II (dibuat masing-masing)
Dari data dan pengalaman Anda pada praktikum ini, pikirkan suatu hipotesis dan mendesain suatu percobaan yang bisa membuktikan hipotesis Anda itu benar atau tidak dan yang bisa diuji dalam konteks praktikum (ingatlah keterbatasan waktu dan alat!!)
Siapkan cara kerja/proposal yang lengkap dan jelas
proposal akan dikumpulkan (secara hardcopy) pada UTS (tgl 10 Nopember)
akan dikomentar dikembalikan kepada Anda sebelum akhir bulan Nopember.
Anda boleh bergabung dengan seorang mhs lain (terserah Anda) sebagai grup meja untuk praktikum Metabolisme II dan boleh memilih satu proposal di antara kalian berdua untuk mengerjakan bersama-sama pada jam praktikum pada tgl 15 Desember 2011.
UTS Praktek Ketrampilan Praktikum UTS Praktek Ketrampilan Praktikum
Akan dilaksanakan pada
Hari Kamis tgl 10 November
pk 08:30 s/d selesai
Bentuknya: per orang 45 menit
15 menit sempat membaca soal-soal
15 menit kegiatan praktek laboratorium
15 menit kegiatan praktek data analisis
Bahan ujian: semua bahan kuliah & praktikum
*diperbolehkan Anda bawa bahan praktikum
atau catatan lain. Jangan lupa pengaris,
pensil, penghapus, balpoin (pasti bertugas
buat grafik! – kertas grafik disediakan kami)
ReferencesReferences::
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K. & Walter, P. 2008. Molecular Biology of the Cell (5th ed), Garland Science, Taylor & Francis Group, New York.
Southeastern Universities Research Association (www.sura.org)
Dunn, S.M.J. 1990. PMCOL 306 Course Notes, University of Alberta Pharmacology Department
Holme, D. J. & Peck, H. 1998. Analytical Biochemistry (3rd ed), Addison Wesley Longman Inc., New York.