Kel i _sterilisasi

8/19/2019 Kel i _sterilisasi

1/21

LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI UMUM

STERILISASI DAN TEKNIK ASEPTIS

SERTA MEDIA PERTUMBUHAN MIKROBA

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

KELOMPOK 2 :

CICILIA A

CHRISTY

EMHA

ELYA BAYU

EKA FITRI

AKFAR PUTRA INDONESIA MALANG

OFFERING B 2012


2/21

BAB I

PENDAHULUAN

1.1 Latar Belaa!"

Salah satu bagian yang penting dalam mikrobiologi adalah pengetahuan tentang cara-cara

mematikan, menyingkirkan, dan menghambat pertumbuhan mikroorganisme (Block, 2002).

Cara yang digunakan untuk menghancurkan, menghambat pertumbuhan mikroorganisme dan

menyingkirkan mikroorganisme berbeda-beda tergantung spesies yang dihadapi. Selain itu

lingkungan dan tempat mikroba ini pun berbeda-beda misalnya dalam darah, makanan, air,

sampah, roil, dan tanah. Hal tersebut uga dapat diadikan sebagai bahan pertimbangan untuk

menentukan cara untuk menghancurkan mikroorganisme yang digunakan tergantung pada

pengetahuan, keterampilan dan tuuan dari yang melaksanakannya, sebab tiap situasi yangdihadapi merupakan kenyataan-kenyataan dasar yang dapat menuntun pada cara atau

prosedur yang harus dilakukan (!e"ine, 2000).

#indakan untuk membebaskan alat atau media dari mikroba adalah dengan sterilisasi.

Secara umum, sterilisasi dapat dilakukan dengan cara mekanik, $isik dan kimia. #eknik

aseptis dibutuhkan untuk mencegah ataupun mengurangi kontaminasi yang tidak diinginkan.

%ikroba memiliki karakteristik serta ciri yang berbeda dalam persyaratan pertumbuhannya.

&arakteristik persyaratan pertumbuhan mikroba inilah yang menyebabkan bermacam-

macamnya media penunang pertumbuhan mikroba. 'alam melakukan kegiatan tersebut

diperlukan keahlian dan keterampilan khusus. Hal inilah yang melatar belakangi

dilaksanakannya praktikum ini.

1.2 T#$#a!

#uuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui berbagai cara sterilisasi ruang kera

atau laboratorium dan peralatan serta cara pembuatan media pertumbuhan mikroorganisme

serta mengetahui enis-enis media serta cara pembuatan dan sterilisasinya.

1.% Ma!&aat

Setelah melakukan praktikum ini mahasisa akan mempunyai keterampilan dalam

mensterilkan peralatan, baik dalam kehidupan sehari-hari maupun dalam dunia kera

khususnya dalam laboratorium mikrobiologi.


3/21

BAB II

TIN'AUAN PUSTAKA

Sterilisasi dalam mikrobiologi berarti membebaskan tiap benda atau substansi dari semua

kehidupan dalam bentuk apapun. ntuk tuuan mikrobiologi dalam usaha mendapatkan keadaan

steril, mikroorganisme dapat dimatikan setempat oleh panas (kalor), gas-gas seperti

$ormaldehide, etilenoksida atau betapriolakton oleh bermacam-macam larutan kimia* oleh sinar

lembayung ultra atau sinar gamma. %ikroorganisme uga dapat disingkirkan secara mekanik

oleh sentri$ugasi kecepatan tinggi atau oleh $iltrasi (Curtis, +).

Ma(a)*)a(a) +ter,l,+a+, -Ma()#/ 200:

ada prinsipnya sterilisasi dapat dilakukan dengan cara yaitu secara mekanik, $isik dan

kimiai.+. Sterilisai secara mekanik ($iltrasi) menggunakan suatu saringan yang berpori sangat kecil

(0.22 mikron atau 0./ mikron) sehingga mikroba tertahan pada saringan tersebut. roses ini

dituukan untuk sterilisasi bahan yang peka panas, misal nya larutan en1im dan antibiotik.

2. Sterilisasi secara $isik dapat dilakukan dengan pemanasan penyinaran.

- Pemanasan

a. emiaran (dengan api langsung)3 membakar alat pada api secara langsung, contoh alat 3

arum inokulum, pinset, batang !, dll.

b. anas kering3 sterilisasi dengan o"en kira-kira 40-+500C. Sterilisasi panas kering cocok

untuk alat yang terbuat dari kaca misalnya erlenmeyer, tabung reaksi dll.

c. ap air panas3 konsep ini mirip dengan mengukus. Bahan yang mengandung air lebih

tepat menggungakan metode ini supaya tidak teradi dehidrasi.

d. ap air panas bertekanan 3 menggunalkan autokla$

- Penyinaran dengan UV

Sinar ltra 6iolet uga dapat digunakan untuk proses sterilisasi, misalnya untuk membunuh

mikroba yang menempel pada permukaan interior Sa$ety Cabinet dengan disinari lampu 6.

. Sterilisaisi secara kimiai biasanya menggunakan senyaa desin$ektan antara lain alkohol.

7ambar 2.+ 'esin$eksi mea kera

(%achmud, 2005)


4/21

Sterilisasi dengan panas adalah unit operasi dimana bahan dipanaskan dengan suhu yang

cukup tinggi dan aktu yang cukup lama untuk merusak mikrobia dan akti"itas en1im. Sebagai

hasilnya, bahan yang disterilkan akan memiliki daya simpan lebih dari enam bulan pada suhu

ruang. Contoh proses sterilisasi adalah produk olahan dalam kaleng seperti kornet, sarden dan

sebagainya. erkembangan teknologi prosesing yang memiliki tuuan mengurangi kerusakan

nutrien dan konponen sensoris dan uga mengurangi aktu prosesing menadikan teknik

serilisasi terus dikembangkan. !amanya aktu sterilisasi yang dibutuhkan bahan dipengaruhi

oleh3 resistensi mikroorganisme dan en1im terhadap panas, kondisi pemanasan, pH bahan,

ukuran adah atau kemasan yang disterilkan, keadaan $isik bahan (%achmud, 2005).

Sterilisasi/dengan udara kering alat yang umum dikenal adalah o"en. 8lat ini dipakai

untuk mensterilkan alat-alat gelas seperti erlenmeyer, petridish, tabunng reaksi dan alat gelas

lainnya. bahan-bahan seperti kapas, kain dan kertas dapat disterilkan dengan alat ini. padaumunhya suhu yang digunakan pada sterilisasi secara kering adalah +90 - +50 C selama palinng

sedikit 2 am. !ama isterilisasi tergantung pada alat dan umlahnya (%achmud, 2005).

Sterilisasi dengan uap air panas bahan yang mengandung cairan tidak dapat didterilkan

dengan o"en sehingga digunakan alat ini. alat ini disebut 8rnold steam sterili1er dengan suhu

+000Cdalam keadaan lembab. Secara sederhana dapat pula digunakan dandang. %ula-mula

bahan disterilkan pada suhu +000C selama 0 menit untuk membunuh sel-sel "egetati$ mikrobia.

kemudian disimpan pada suhu kamr 2/ am untuk memberi kesempatan spora tumbuh menadi

sel "egetati$, lalu dipanaskan lagi +000C 0 menit. dan diinkubasi lagi 2/ am dan disterilkan

lagi, adi ada kali sterilisasi. Banyak bakteri berspora belum mati dengan cara ini sehingga

dikembangkan cara berikutnya yaitu uap air bertekanan (%achmud, 2005).

Sterilisasi dengan uap air panas bertekanan, alat ini disebut autokla$ (autocla"e) untuk

steriliasasi ini alat dilengkapi dengan katup pengaman. 8lat diisi dengan air kemudian bahan

dimasukkan. anaskan sampai mendidih dan dari katup pengaman kelaur uap air dengan lancara

lalu ditutup. Suhu akan naik sampai +2+0C dan biarkan selama + menit (untuk industri

pengalengan ada perhitungan tersendiri), lalu biarkan dingin sampai tekanan normal dan klep

pengaman dibuka, cara ini akan mematikan spora dengan cara penetrasi panas ke dalam sel atau

spora sehingga lebih cepat. Cara mana yang dipilih tergantung bahan, biaya dan ketersediaan

alat, untuk bahan yang tidak tahan panas, maka cara diatas tidak dapat dipakai (%achmud,

2005).

Sterilisasi yang umum dilakukan dapat berupa3

a. Sterilisasi secara $isik (pemanasan, penggunaan sinar gelombang pendek yang dapat

dilakukan selama senyaa kimia yang akan disterilkan tidak akan berubah atau terurai

akibat temperatur atau tekanan tinggi). 'engan udara panas, dipergunakan alat


5/21

:beana;ruang panas< (o"en dengan temperatur +90o = +50oC dan aktu yang digunakan

adalah 2 am yang umumnya untuk peralatan gelas).

b. Sterilisasi secara kimia (misalnya dengan penggunaan disin$ektan, larutan alkohol, larutan

$ormalin).

c. Sterilisasi secara mekanik, digunakan untuk beberapa bahan yang akibat pemanasan tinggi

atau tekanan tinggi akan mengalami perubahan, misalnya adalah dengan saringan;$ilter.

Sistem kera $ilter, seperti pada saringan lain adalah melakukan seleksi terhadap partikel-

partikel yang leat (dalam hal ini adalah mikroba) (Suriairia, 200).

Sara!*+ara! er$a a+e3t,+ :

+. Sebelum membuka ruangan atau bagian steril di dalam tabung;caan;erlenmeyer sebaiknya

bagian mulut (bagian yang memungkinkan kontaminan masuk) dibakar;dileatkan api

terlebih dahulu.

2. inset, batang !, dll dapat disemprot dengan alkohol terlebih dahulu lalu dibakar.

. ung arum inokulum yang sudah dipiarkan harus ditunggu dingin dahulu atau dapat

ditempelkan tutup caan bagian dalam untuk mempercepat trans$er panas yang teradi.

/. sahakan bagian alat yang diharapkan dalam kondisi steril didekatkan ke bagian api.

. >ika kera di Safety Cabinet tidak perlu memakai pembakar bunsen tetapi ika di luar Sa$ety

Cabinet maka semakin banyak sumber api maka semakin teramin kondisi aseptisnya

%edia pertumbuhan mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran 1at-

1at makanan (nutrisi) yang diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. %ikroorganisme

meman$aatkan nutrisi media berupa molekul-molekul kecil yang dirakit untuk menyusun

komponen sel. 'engan media pertumbuhan dapat dilakukan isolat mikroorganisme menadi

kultur murni dan uga memanipulasi komposisi media pertumbuhannya (%achmud, 2005).

Bahan-bahan media pertumbuhan

+. Bahan dasar (%achmud, 2005)3

- 8ir (H2?) sebagai pelarut

- 8gar (dari rumput laut) yang ber$ungsi untuk pemadat media. 8gar sulit didegradasi oleh

mikroorganisme pada umumnya dan mencair pada suhu / oC.

- 7elatin uga memiliki $ungsi yang sama seperti agar. 7elatin adalah polimer asam amino

yang diproduksi dari kolagen. &ekurangannnya adalah lebih banyak enis mikroba yang

mampu menguraikannya dibanding agar (%achmud, 2005).

- Silica gel , yaitu bahan yang mengandung natrium silikat. @ungsinya uga sebagai pemadat

media. Silica gel khusus digunakan untuk memadatkan media bagi mikroorganismeautotro$ obligat.


6/21

2. Autrisi atau 1at makanan (%achmud, 2005)3

%edia harus mengandung unsur-unsur yang diperlukan untuk metabolisme sel yaitu

berupa unsur makro seperti C, H, ?, A, * unsur mikro seperti @e, %g dan unsur pelikan; trace

element.

Sumber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senyaa organik atau anorganik

esuai dengan si$at mikrobanya. >asad heterotro$ memerlukan sumber karbon organik antara lain

dari karbohidrat, lemak, protein dan asam organic.

Sumber nitrogen mencakup asam amino, protein atau senyaa bernitrogen lain. Seumlah

mikroba dapat menggunakan sumber A anorganik seperti urea.

. Bahan tambahan

Bahan-bahan tambahan yaitu bahan yang ditambahkan ke medium dengan tuuan

tertentu, misalnya phenol red (indikator asam basa) ditambahkan untuk indikator perubahan pHakibat produksi asam organik hasil metabolisme. 8ntibiotik ditambahkan untuk menghambat

pertumbuhan mikroba non-target;kontaminan (%achmud, 2005).

/. Bahan yang sering digunakan dalam pembuatan media (%achmud, 2005)3

8gar, agar dapat diperoleh dalam bentuk batangan, granula atau bubuk dan terbuat dari

beberapa enis rumput laut. &egunaannya adalah sebagai pemadat ( gelling ) yang pertama kali

digunakan oleh @ra alther Hesse untuk membuat media. >ika dicampur dengan air dingin,

agar tidak akan larut. ntuk melarutkannya harus diasuk dan dipanasi, pencairan dan pemadatan

berkali-kali atau sterilisasi yang terlalu lama dapat menurunkan kekuatan agar, terutama pada pH

yang asam.

Peptone, peptone adalah produk hidrolisis protein heani atau nabati seperti otot, li"er,

darah, susu, casein, lactalbumin, gelatin dan kedelai. &omposisinya tergantung pada bahan

asalnya dan bagaimana cara memperolehnya.

Meat extract . Meat extract mengandung basa organik terbuat dari otak, limpa, plasenta

dan daging sapi.

Yeast extract . Yeast extract terbuat dari ragi pengembang roti atau pembuat alcohol. east

eDtract mengandung asam amino yang lengkap "itamin (B complex).

&arbohidrat. &arbohidrat ditambahkan untuk memperkaya pembentukan asam amino dan

gas dari karbohidrat. >enis karbohidrat yang umumnya digunkan dalam amilum, glukosa,

$ruktosa, galaktosa, sukrosa, manitol, dll. &onsentrasi yang ditambahkan untuk analisis

$ermentasi adalah 0,-+E.


7/21

%acam-%acam %edia ertumbuhan (%achmud, 2005)3

+. %edium berdasarkan si$at $isik

%edium padat yaitu media yang mengandung agar +E sehingga setelah dingin media

menadi padat

%edium setengah padat yaitu media yang mengandung agar 0,-0,/E sehingga menadi

sedikit kenyal, tidak padat, tidak begitu cair. %edia semi solid dibuat dengan tuuan supaya

pertumbuhan mikroba dapat menyebar ke seluruh media tetapi tidak mengalami percampuran

sempurna ika tergoyang. %isalnya bakteri yang tumbuh pada media A$B ( Nitrogen free

Bromthymol Ble) semisolid akan membentuk cincin hiau kebiruan di baah permukaan media,

ika media ini cair maka cincin ini dapat dengan mudah hancur. Semisolid uga bertuuan untuk

mencegah;menekan di$usi oksigen, misalnya pada media Nitrate Broth, kondisi anaerob atau

sedikit oksigen meningkatkan metabolisme nitrat tetapi bakteri ini uga diharuskan tumbuhmerata diseluruh media (%achmud, 2005).

%edium cair yaitu media yang tidak mengandung agar, contohnya adalah AB ( Ntrient

Broth), !B ( !actose Broth) (%achmud, 2005).

2. %edium berdasarkan komposisi

%edium sintesis yaitu media yang komposisi 1at kimianya diketahui enis dan takarannya

secara pasti, misalnya "lcose #gar$ Mac Con%ey #gar (%achmud, 2005).

%edium semi sintesis yaitu media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti,

misanya '8 ( Potato &extrose #gar ) yang mengandung agar, dekstrosa dan ekstrak kentang.

ntuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara detail tentang komposisi

senyaa penyusunnya (%achmud, 2005).

%edium non sintesis yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapat

diketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya 'omato

(ice #gar$ Brain Heart Fn$usion 8gar, Pancreatic )xtract (%achmud, 2005).

. %edium berdasarkan tuuan

- %edia untuk isolasi

%edia ini mengandung semua senyaa esensial untuk pertumbuhan mikroba, misalnya

Ntrient Broth$ Blood #gar (%achmud, 2005).

- %edia selekti$;penghambat

%edia yang selain mengandung nutrisi uga ditambah suatu 1at tertentu sehingga media

tersebut dapat menekan pertumbuhan mikroba lain dan merangsang pertumbuhan mikroba

yang diinginkan. Contohnya adalah !uria Bertani medium yang ditambah 8mphisilin untuk

merangsang G.coli resisten antibotik dan menghambat kontaminan yang peka, #mpiciline.


8/21

Salt broth yang ditambah AaCl /E untuk membunuh Streptococcs agalactiae yang toleran

terhadap garam (%achmud, 2005).

- %edia diperkaya (enrichment )

%edia diperkaya adalah media yang mengandung komponen dasar untuk pertumbuhan

mikroba dan ditambah komponen kompleks seperti darah, serum, kuning telur. %edia

diperkaya uga bersi$at selekti$ untuk mikroba tertentu. Bakteri yang ditumbuhkan dalam

media ini tidak hanya membutuhkan nutrisi sederhana untuk berkembang biak, tetapi

membutuhkan komponen kompleks, misalnya Blood 'ellrite #gar$ Bile #gar$ Serm #gar ,

dll (%achmud, 2005).

- %edia untuk peremaaan kultur

%edia umum atau spesi$ik yang digunakan untuk peremaaan kultur (%achmud, 2005).

- %edia untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesi$ik.%edia ini digunakan unutk mendiagnosis atau menganalisis metabolisme suatu mikroba.

Contohnya adalah *oser+s Citrate medim$ yang digunakan untuk mengui kemampuan

menggunakan asam sitrat sebagai sumber karbon (%achmud, 2005).

- %edia untuk karakterisasi bakteri

%edia yang digunakan untuk mengetahui kemempuan spesi$ik suatu mikroba. &adang-

kadang indikator ditambahkan untuk menunukkan adanya perubahan kimia. Contohnya

adalah Nitrate Broth$ !actose Broth$ #rginine #gar (%adigan, 200).

- %edia di$erensial

%edia ini bertuuan untuk mengidenti$ikasi mikroba dari campurannya berdasar karakter

spesi$ik yang ditunukkan pada media di$erensial, misalnya #SF8 ('riple Sgar ,ron #gar )

yang mampu memilih Gnterobacteria berdasarkan bentuk, arna, ukuran koloni dan

perubahan arna media di sekeliling koloni (%achmud, 2005).

Salah satu teknik dasar dalam analisa mikrobiologi adalah teknik trans$er aseptis (suatu

metode atau teknik di dalam memindahkan atau mentrans$er kultur bakteria dari satu tempat ke

tempat lain secara aseptis agar tidak teradi kontaminasi oleh mikroba lain ke dalam kultur).

#eknik ini sangat esensial dan kunci keberhasilan prosedur mikrobial yang harus diketahui oleh

seorang yang hendak melakukan analisis mikrobiologi. engambilan sampel harus dilakukan

secara statistik agar tidak bias, adi secara acak (random sampling ). Selain itu, digunakan teknik

aseptis selama pengambilan sampel agar tidak teradi pencemaran. 8lat-alat yang digunakan

harus steril. Bahan makanan cair diambil dengan pipet steril, makanan padat menggunakan

pisau, garpu, sendok atau penepit yang steril (achdie, 2004).


9/21

#eknik trans$er aseptis adalah suatu metode atau teknik di dalam memindahkan atau

mentrans$er kultur bakteria dari satu tempat ke tempat lain secara aseptis agar tidak teradi

kontaminasi oleh mikroba lain ke dalam kultur. #eknik trans$er aseptis ini sangat esensial dan

kunci keberhasilan prosedur mikrobial yang harus diketahui oleh seorang yang hendak

melakukan analisis mikrobiologi (elc1ar, %. >., Chan, 2009).

8da beberapa aturan yang harus diketahui dan dipenuhi di dalam teknik trans$er aseptis ini,

sebagaimana terangkum dalam tabel di baah (achdie, 2004) 3

Ta4el 1: 8turan #eknik #rans$er 8septis

Se4el#) Pela+a!aa! :

- Singkirkan semua barang yang tidak diperlukan dari mea dan ruang kera

- &enakan pakaian atau as laboratorium yang bersih dan higinis sebelum masuk ke

dalam laboratorium- 'ianurkan untuk mengenakan masker yang bersih dan higinis

- &enakan penutup rambut yang bersih dan higinis

- >angan sekali-kali meletakkan tabung dan peralatan laboratorium lainnya di luar

laboratorium

Se4el#) /a! Setela Pela+a!aa! :

- Cuci tangan anda dengan bersih dan gunakan antiseptis

- Sanitasi dan desin$eksi ruang kera (laboratorium dan sekitarnya) dengan

desin$ektan yang memadai, termasuk !aminar 8ir @lo dan Fnkubator

- Sterilisasi semua alat dan bahan sebelum digunakan

Ket,a Pela+a!aa! K#lt#r :

- >angan berbicara

- Bekeralah di dekat api (pembakar bunsen) dan di dalam !aminar 8ir @lo

- Bukalah tabung atau caan di atas api dan auhkan dari hidung dan mulut anda

- sahakan angan meletakkan tutup (kapas penutup) tabung reaksi di atas lantai;alas

mea atau laminar

- %iringkan tutup caan petri yang akan dibuka sebagai penghalang antara kultur

dengan mulut dan hidung anda

- >angan buka tutup caan petri terlalu lebar dan terlalu lama

- Bekeralah dengan cepat

Setela Pela+a!aa! :

- Segera tutup semua tabung atau caan yang masih terbuka

- Singkirkan segera semua peralatan atau bahan sisa yang sudah tidak digunakan lagi

- Bersihkan dan keringkan segera tumpahan-tumpahan media yang ada


10/21

- Sanitasi dan desin$eksi ulang ruang kera (laboratorium anda)

- !epas pakaian kera dan as laboratorium anda sebelum meninggalkan ruang kera

anda

'i dalam teknik trans$er aseptis ada beberapa teknik yang perlu di$ahami, yaitu 3

+) ,noclating (inokulasi) dengan arum ose2) Pipetting (mentrans$er dengan pipet)

) #lcohol lamming (mentrans$er dengan $orsep yang dibakar dengan alkohol)

+) ,noclating dengan arum ose

a) Bakar arum ose dari bagian pangkal dalam terus hingga ke bagian lup (uung)

sampai berpiar merah.

b) Biarkan selama beberapa detik sampai piar menghilang, kemudian segera ambil

tabung reaksi yang berisi kultur bakteri, buka penutupnya dengan ketiga ari tengah,

manis dan kelingking sedangkan ari telunuk dan ibu ari memegang arum ose.

c) Bakar bibir tabung reaksi dengan cara memutar tabung sehingga semua bagian bibir

tabung terkena api.

d) Segera masukkan arum ose ke dalam tabung reaksi, lalu segera keluarkan.

sahakan ketika memasukkan arum ose angan sampai menyentuh dinding tabung

dan lakukan di dekat pembakar bunsen.

e) Bakar kembali bibir tabung reaksi dan segera tutup. Fngat, arum ose angan dibakar

kembali karena akan membunuh bakteri yang akan diinokulasikan.

$) 8mbil tabung reaksi lainnya yang akan diinokulasi, buka tutupnya dengan cara

yang sama dengan cara (b) dan bakar bibirnya dengan cara yang sama dengan

caraI

g) Segera masukkan arum ose ke dalam tabung tadi sebagaimana cara (d).

h) Bakar bibir tabung reaksi dan tutup sebagaimana caraI.

i) Bakar kembali arum ose sebagaimana cara (a).

) !akukan kembali dengan cara yang sama apabila diperlukan dilusi atau pengenceran.

2) Pipetting

a) 8mbil pipet yang telah steril, buka pembungkusnya dan pasang katup karetnya.

b) Bakar uungnya dibakar atas bunsen selama beberapa detik. >angan terlalu lama

karena dapat merusak uung pipet.

c) 8mbil tabung reaksi yang berisi kultur bakteri, buka penutupnya dengan kedua ari

manis dan kelingking sedangkan ari telunuk, ari tengah dan ibu ari memegang

pipet.

d) Segera masukkan pipet ke dalam tabung reaksi, tekan katup karet penghisap tombol


11/21

JSK (lihat gambar di baah) lalu segera keluarkan. sahakan ketika memasukkan

pipe t angan sampai menyentuh dinding tabung dan lakukan di dekat pembakar

bunsen.

e) Bakar kembali bibir tabung reaksi dan segera tutup.

$) 8mbil tabung reaksi lainnya yang akan diinokulasi, buka tutupnya dengan cara

yang sama dengan cara (b) dan bakar bibirnya dengan cara yang sama dengan

caraI.

g) Segera masukkan pipet ke dalam tabung tadi, kemudian keluarkan cairan yang telah

diinokulasi dari pipet dengan menekan tombol JGK.

h) Bakar bibir tabung reaksi dan tutup sebagaimana caraI.

i) indahkan pipet dan ganti dengan pipet baru apabila akan melakukan pipetting

kembali.

) !akukan kembali dengan cara yang sama apabila diperlukan dilusi atau pengenceran.

) #lcohol lamming

Biasanya digna%an nt% meleta%%an %ertas ca%ram ata instrmen lain %e dalam

caan petri yang berisi media.

a) 8mbil $orsep, celupkan uungnya ke dalam alkohol, lalu segera bakar uungnya di

atas bunsen selama beberapa detik secara mendatar. Fngat, angan miring

sebagaimana gambar di baah.

b) 8mbil kertas cakram steril atau instrumen lainnya dengan $orsep tadi.

c) 8mbil tabung reaksi yang berisi 1at antimikrobial, celupkan kertas cakram tadi ke

dalam cairan di dalam tabung reaksi.

d) 8mbil caan petri yang telah berisi biakan bakteri di dalam agar, buka penutupnya

dengan cara memiringkan beberapa deraat hingga hanya pada satu sisi bagian saa

yang terbuka. Fngat angan terlalu lebar membukanya atau me mbuka seluruh

tutupnya dari caan.

e) Segera masukkan kertas cakram steril atau instrumen lainnya dengan $orsep secara

hati-hati agar tidak merusak permukaan agar. !akukan di dekat pembakar bunsen.

$) Segera tutup dan bakar kembali bibir caan.

g) !akukan kembali dengan cara yang sama apabila diperlukan. (achdie., 2004)

#eknik aseptik sangat diperlukan untuk menghindarkan mikroorganisme dari kontaminan

yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba. #eknik aseptis digunakan sepanang kegiatan

berlangsung baik alat, bahan, lingkungan sekitar maupun praktikannya, untuk alat dan bahan

praktikum dapat diterapkan metode sterilitas. enguasaan teknik aseptic ini sangat diperlukan


12/21

dalam keberhasilan laboratorium mikrobiologi dan hal tersebut merupakan salah satu metode

permulaan yang dipelaari oleh ahli mikrobiologi (?ram, 200+).

Sementara itu menurut elc1ar Chan (2009) teknik aseptis sangat penting dalam

pengeraan mikrobiologi yang memerlukan ketelitian dan keakuratan disamping kesterilan yang

harus selalu diaga agar terbebas dari kontaminan yang dapat mencemari. opulasi mikroba di

alam sekitar kita sangat besar dan komplek. Beratus-ratus spesies berbagai mikroba biasanya

menghuni bermacam-macam bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit.

Sekali bersin terdapat beribu-ribu mikroorganisme sehingga diperlukan teknik yang dapat

meminimalisirnya seperti pengisolasian.

BAB III

METODOLOGI

%.1 5at# /a! Te)3at

raktikum mikrobiologi umum dengan udul :Sterilisasi dan #eknik 8septis serta

%edium ertumbuhan %ikroba< dilaksanakan pada hari &amis, tanggal 2 %aret 20+0, pukul


13/21

+.00-+4. FB dan bertempat di !aboratorium %ikrobiologi, >urusan Biologi @akultas

%atematika dan Flmu engetahuan 8lam, ni"ersitas Braiaya, %alang.

%.2 Cara Ker$a

%.2.1 Ster,l,+a+, /e!"a! Pe)4aara!

!ampu Bunsen dinyalakan dan nyala apinya diatur hingga maksimal. >arum ose diambil

dan dilakukan pembakaran dengan api bunsen mulai dari bagian pangkal hingga bagian uung

kaat arum ose. embakaran dilakukan hingga arum merah membara. >arum ose yang dibakar

dibiarkan beberapa saat hingga dingin. >arum ose siap digunakan untuk menginokulasi mikroba.

%.2.2 Ster,l,+a+, /e!"a! Pa!a+ Ker,!"

Caan petri ditangkupkan bagian baah dan tutupnya. &emudian caan dibungkus

dengan kertas bungkus dan disusun sebanyak -+0 buah, serta ditali menggunakan benang kasur.

#abung reaksi yang telah ditutup kapas diambil, kemudian -+0 tabung diikat menadi satu, dan

dibungkus dengan kertas, serta diikat kembali. ipet ukur bagian atasnya disumbat dengan kapas

(agak longgar), kemudian dibungkus dengan kertas, dan diikat dengan benang kasur. Semua alat

tersebut dimasukkan dalam o"en. ?"en dinyalakan pada suhu +9LC dan semua alat disterilisasi

selama 2 am. Selanutnya peralatan didinginkan dan siap digunakan.

%.2.% Ster,l,+a+, /e!"a! Pa!a+ Ba+a Bertea!a! T,!"", -A#t6la&

#abung eaksi berisi '8 atau A8 ditutup dengan kapas, diikat beberapa tabung

menadi satu, dan bagian tutupnya dibungkus dengan kertas payung. #abung disisakan satu buah

untuk tidak disterilkan. 8utokla$ diisi dengan aMuades sampai batas permukaan air di baah

angsang. 8utokla$ disambungkan pada sumber tegangan dan dinyalakan. dimasukkan ke dalam

angsang autokla$. 8utokla$ ditutup dan penutupnya dikencangkan. Suhu, tekanan, dan aktu

pada autokla$ diatur sesuai dengan keperluan sterilisasi (pada umumnya +2+LC, + atm, + menit).

#anda digital pada autokla$ akan menyala saat sterilisasi dan akan menunukkan complete

apabila sterilisasi berakhir secara otomatis. #utup autokla$ dibuka apabila suhu telah turun

sekitar 40LC dan tekanan 0. %edia yang telah steril diambil, untuk media agar dengan

kemiringan 0L, sedangkan media dalam erlemeyer sebelum dituang didinginkan hingga /L

terlebih dahulu.

%.2.7 Pa+te#r,+a+,

Bahan yang tidak tahan panas dilakukan pasteurisasi pada suhu 90N-50NC selama +- 20

menit

#ata! Me/,a N#tr,e! Ca,r -NB


14/21

00g daging sapi tanpa lemak dicuci bersih dan dipotong kecil-kecil. 'imasak dalam

+000 ml akuades dan dibiarkan mendidih selama 2 menit. 'isaring kaldu yang diperoleh

dengan kapas atau kain kasa. 'ilarutkan pepton ke dalam air kaldu hingga rata dan diatur media

pada pH 9. 'imasukkan media yang telah siap ke dalam tabung reaksi atau Grlenmeyer sesuai

penggunaannya. 'isumbat dengan kapas tabung dan Grlenmeyer tersebut dan sumbat kapas

tidak boleh terlalu padat atau terlalu longgar. 'ibungkus bagian tutupnya dengan kertas dan

diikat dengan benang kasur. 'isterilisasi dalam 8utokla$ dengan suhu +2+LC, tekanan + atm,

selama + menit.

%.2.9 Pe)4#ata! Me/,a A"ar N#tr,e!t -NA K6!e!+,6!al

8ir &aldu +000 ml dicampur dengan pepton hingga homogen dan diatur pada pH 9.

'itambah agar dan dipanaskan hingga mendididh, serta diaduk terus menerus hingga semua agar

larut. 'imasukkan dalam tabung reaksi. 'ikondisikan tegak (+0ml) atau miring (/-4ml) dalam

tabung reaksi. 'isumbat kapas tabung reaksi, dan disterilisasi dalam 8utokla$ pada suhu +2+LC,

tekanan + atm, selama + menit. ada agar miring , tabung reaksi dimiringkan hingga agar beku,

dan kemiringan diatur dengan batas baah kemiringan media sekitar + cm dari dasar tabung dan

tidak melebihi O tinggi tabung reaksi ukuran + cm.

%.2.; Pe)4#ata! Me/,a A"ar N#tr,e!t -NA I!+ta!t

2g A8 serbuk dilarutkan dalam + liter akuades dan didihkan. &emudian, larutan tersebut

dituang dalam tabung reaksi. Selanutnya dilakukan sterilisasi menggunakan autokla$.

%.2. Pe)4#ata! Me/,a P6tat6 De


15/21

BAB I>

HASIL DAN PEMBAHASAN

7.1. A!al,+,+ Pr6+e/#r

7.1.1. Pe)4#ata! Me/,a

7.1.1.1. Me/,a A"ar N#tr,e!t - N#tr,e! A"ar ? NA

Autrien agar bubuk dilarutkan sebanyak 2 gram dalam +000 ml akuades, dipanaskan

dengan penangas air hingga mendidih, diaduk terus hingga semua larut. emanasan dengan


16/21

penangas air agar serbuk nutrient agar cepat larut dengan adanya panas yang dihasilkan dari

penangas dan pengadukan dilakukan agar larutnya serbuk agar merata dan tidak teradi

gumpalan ataupu larutan agar menadi hangus. &emudian media dalam keadaan cair dimasukkan

tabung reaksi, dibuat media tegak dan miring. emasukan agar pada tabung dalam keadaan cair

bertuuan agar larutan agar yang dimasukkan belum mulai mengenyal, dapat menempati adah

dan terbentuk agar yang baik. #abung disumbat dengan kapas, hal ini dilakukan agar media yang

di dalam tabung tidak terkontaminasi oleh mikroba. !alu, disterilkan dengan autokla$ pada suhu

+2+0 C, tekanan + atm selama + menit. ensterilan media agar ini dilakukan untuk membunuh

mikroba yang berpotensi untuk mengkontaminasi. 8gar miring, setelah disterilkan dimiringkan

hingga beku. &emiringan diatur dengan batas baah kemiringan media + cm dari dasar tabung

dan batas atas tidak lebih dari O tinggi tabung reaksi. &emiringan diatur untuk mempermudah

pengkulturan mikroba, tapi tidak boleh terlalu mendekati mulut tabung untuk meminimalisir kontaminasi mikroba yang tidak diinginkan. 8gar siap digunakan.

%etode di atas menggunakan serbuk agar. ntuk pembuatan agar nutrient dengan cara

kon"ensional adalah menambahkan komponen (agar +2g, pepton g, ekstrak daging 00 g)

ditambahkan pada + ! akuades, dicampur dengan diaduk dan dipanaskan. pembuatan agar ini

dilakukan dengan pH 9,0 P 0,2 pada 2 L C. Setelah larut, dimasukkan ke dalam tabung selama

cair, disterilkan dengan dimasukkan autokla$ selama + menit pada + psi dengan suhu +2+0C.

dituangkan pada caan petri yang steril.

7.1.1.2 Me/,a A"ar Ke!ta!" De+tr6+a - P6tat6 De


17/21

tabung untuk meminimalisir kontaminasi mikroba yang tidak diinginkan. 8gar siap digunakan.

%etode tersebut menggunakan serbuk agar. 'an untuk pembuatan agar kentang dekstrosa

dengan cara kon"ensional adalah menambahkan komponen (&entang in$usi /,0g (pemasukan

dari 200 g kentang), ' (Q) glukosa 20.0g, agar-agar +.0g) ditambahkan pada + ! akuades,

dicampur dengan diaduk dan dipanaskan. pembuatan agar ini dilakukan dengan pH .4 P 0,2

pada 2 L C. Setelah larut, dimasukkan ke dalam tabung selama cair, disterilkan dengan

dimasukkan autokla$ selama + menit pada + psi dengan suhu +2+0C. dituangkan pada caan

petri yang steril.

7.1.2 Ster,l,+a+,

7.1.2.1 Ster,l,+a+, De!"a! F,ltra+,

8lat $iltrasi dan botol $iltrasi disterilkan terlebih dahulu dan kemudian rangkai dengan

pompa "akum, agar alat dapat digunakan. Selanutnya membran $ilter diletakkan secara aseptis

dengan menggunakan pinset steril pada dasar penopang $ilter. Bahan yang di$iltrasi dituang,

kemudian pompa "akum dihidupkan. Selanutnya $ilter yang telah tertampung di dalam botol

penampung siap digunakan untuk perlakuan selanutnya. Sterilisai dengan $iltrasi menggunakan

suatu saringan yang berpori sangat kecil (0.22 mikron atau 0./ mikron) sehingga mikroba

tertahan pada saringan tersebut. roses ini dituukan untuk sterilisasi bahan yang peka panas,

misal nya larutan en1im dan antibiotic (Fndra, 2005).

7.1.2.2 Ster,l,+a+, De!"a! Pe)4aara!

!ampu Bunsen dinyalakan dan diatur nyala apinya secara maksimal, kemudian dilakukan

pembakaran pada arum ose dari bagian pangkal menuu uung kaat arum ose (pembakaran

dilakukan hingga kaat merah membara), agar panas pada uung arum ose teradi secara

kontinu. Selanutnya arum ose dibiarkan dingin dan siap digunakan untuk

mengambil;menginokulasi mikrobia, agar saat mengambil mikroba, mikroba tidak mati.

Sterilisasi dengan lampu bunsen merupakan pem,bakaran secara langsung menggunakan api

(Fndra, 2005).

7.1.2.% Ster,l,+a+, De!"a! Pa!a+ Ker,!"

Caan petri bagian baah dan tutupnya ditangkupkan, kemudian bungkus dengan kertas

bungkus dan susun caan petri (-+0 buah) dan ditali dengan benang kasur, agar saat pengaturan

lebih mudah. #abung reaksi diambil dan masing-masing ditutup dengan kapas, beberapa tabung

(-+0 buah) diikat menadi satu dan dibungkus kertas yang kemudian diikat dengan benang

kasur. Semua alat dimasukkan ke dalam o"en, o"en dinyalakan pada suhu +9LC (agar peralatan benar-benar menadi steril) dan setelah suhu tercapai, sterilisasi dilakukan selama 2 am. Setelah

sterilisasi selesai peralatan didinginkan dan pada hari berikutnya peralatan dapat digunakan.


18/21

Sterilisasi dengan o"en dilakukan kira-kira 40-+500C, sterilisasi panas kering ini digunakan

untuk alat yang terbuat dari kaca (Fndra, 2005).

7.1.2.7 Ster,l,+a+, De!"a! Pa!a+ Ba+a Bertea!a! T,!"", -a#t6la&

#utup tabung reaksi yang berisi media '8 atau A8 dengan kapas, beberapa tabung

diikat menadi satu dan bagian tutupnya dibungkus dengan kertas paying (agar mudah dalam

penataannya), sisakan satu tabung berisi media namun tidak disterilkan. 8utokla$ diisi dengan

akuades sampai permukaan air dibaah ansang;keranang autokla$ dan sambungkan autokla$

dengan sumber listrik dan nyalakan autokla$. #abung reaksi berisi media dimasukkan ke dalam

ansang;keranang autokla$, kemudian tutup autokla$ dan kencangkan penutupnya dengan kuat.

Suhu, tekanan dan aktu yang diperlukan untuk sterilisasi diatur, umumnya +29LC, + atm selama

+ menit. #anda digital pada autokla$ menunukkan proses selama sterilisasi berlangsung dan

akan berakhir secara otomatis. Saat akan membuka tutup autokla$, pastikan suhu telah turunsekitar 40LC dan tekanan sudah nol, agar saat pengambilan, peralatan telah benar-benar siap

untuk di ambil. #utup autokla$ dibuka dan ambil media yang telah disterilkan, untuk media agar

miring memerlukan serbet sebagai alasnya dan miringkan tabung hingga 0L dan untuk

Grlenmeyer, sebelum dituang, ditunggu hingga suhu menadi /LC. Sterilisasi dengan

menggunakan autokla$ merupakan sterilisasi menggunakan uap air panas bertekanan (Fndra,

2005).

7.1.2.8 Pa+te#r,+a+,

'ilakukan untuk bahan-bahan tidak tahan panas dan dapat mengalami kerusakan pada

suhu tinggi. asteurisasi dilakukan pada suhu 90-50LC selama +-20 menit. asteurisasi ini akan

berakibat buruk (rusak) untuk medium atau bahan yang tidak tahan panas (Fndra, 2005).

7.2 A!al,+,+ Ha+,l

Sterilisasi dan teknik aseptis sangat penting dalam pengeraan mikrobiologi yang

memerlukan ketelitian dan keakuratan disamping kesterilan yang harus selalu diaga agar

terbebas dari kontaminan yang dapat mencemari. opulasi mikroba di alam sekitar kita sangat

besar dan komplek. Beratus-ratus spesies berbagai mikroba biasanya menghuni bermacam-

macam bagian tubuh kita, termasuk mulut, saluran pencernaan, dan kulit. Sekali bersin terdapat

beribu-ribu mikroorganisme sehingga diperlukan teknik yang dapat meminimalisirnya seperti

pengisolasian (elc1ar, %. >., Chan, 2009).

&egunaan dari nutrient agar adalah untuk kulti"asi dan peraatan sebagian besar dari

mikroorganisme. &omposisi dari nutrient agar adalah agar sebanyak + gram, pepton sebanyak

gram, AaCl sebanyak gram, ekstrak yeast sebanyak 2 gram dan ekstrak kaldu sebanyak +

gram. otato deDtrose agar adalah untuk kulti"asi dan peraatan sebagian besar dari amur.


19/21

&omposisi dari potato deDtrose agar adalah kentang sebanyak 00 gram, glukosa sebanyak 20

gram dan agar sebanyak + gram. &egunaan dari east %alt GDtract 8gar (%G8) adalah untuk

kulti"asi dari amur, termasuk yeast dan mikroorganisme dari aciduric, seperti spesies

#ctinoplanes, spesies Streptomyces, spesies Strepto/erticillim dan spesies Nocardia. &omposisi

dari east %alt GDtract 8gar (%G8) adalah agar sebanyak 20 gram, glukosa sebanyak +0

gram, peptone sebanyak gram, ekstrak yeast sebanyak gram dan ekstrak malt sebanyak

gram. Sedangkan garam $isiologi digunakan untuk menaga $ungsi $isiologis dari media agar

bakteri yang ingin dibiakkan tidak rusak dan teraga kondisinya. embuatan garam $isiologi

dengan melarutkan AaCl ke aMuades dan diaduk merata tanpa direbus (8tlas, +/4).

Autrisi yang diperlukan oleh bakteri, kapang atau yeast adalah unsur-unsur berupa unsur

makro seperti C, H, ?, A, * unsur mikro seperti @e, %g, Ca, Aa, S, & dan unsur pelikan; trace

element. Sumber karbon dan energi yang dapat diperoleh berupa senyaa organik atau anorganik sesuai dengan si$at mikrobanya. >asad heterotro$ memerlukan sumber karbon organik antara lain

dari karbohidrat, lemak, protein, asam organik dan "itamin. Sumber nitrogen mencakup asam

amino, protein atau senyaa bernitrogen lain. Seumlah mikroba bahkan dapat menggunakan

sumber A anorganik seperti urea untuk metabolismenya (Fndra, 2005).

BAB >

PENUTUP

8.1 Ke+,)3#la!

Sterilisasi dengan penyaringan dilakukan untuk mensterilisasi cairan yagn mudah rusak

ika terkena panas atu mudah menguap (/olatile). #eknik aseptis pengeraan mikrobiologi yang

memerlukan ketelitian dan keakuratan disamping kesterilan yang harus selalu diaga agar

terbebas dari kontaminan yang dapat mencemari. Sedangkan, keduanya diperlukan untuk


20/21

ketelitian , keakuratan dan kesterilan dari kontaminan dari suatu perlakuan. %edia pertumbuhan

mikroorganisme adalah suatu bahan yang terdiri dari campuran 1at-1at makanan (nutrisi) yang

diperlukan mikroorganisme untuk pertumbuhannya. %acam-macam media berdasarkan si$at

$isik dibagi tiga, yaitu medium padat, setengah padat dan cair. %enurut komposisinya dibagi

menadi tiga, yaitu medium sintesis, semi sintesis dan non sintesis. %enurut tuuannya dibagi

menadi tuuh, yaitu media untuk isolasi, media penghambat, media diperkaya, media untuk

peremaaan kultur, media untuk menentukan kebutuhan nutrisi spesi$ik, media untuk

karakterisasi bakteri dan media di$erensial. Autrisi yang diperlukan oleh mikroorganisme adalah

unsur-unsur berupa unsur makro seperti C, H, ?, A, * unsur mikro seperti @e, %g, Ca, Aa, S, &

dan unsur pelikan;trace element. Sumber karbon berupa senyaa organik atau, lemak, protein,

asam organik dan "itamin.

8.2 Sara!

Hendaknya para praktikan sangat berhati-hati dalam melakukan sterilisasi, teknik aseptis

dan cara pembuatan media pertumbuhan mikroba agar tidak teradi kontaminasi. Sebaiknya para

praktikan memakai masker untuk meminimalisir teradinya kontaminasi.

DAFTAR PUSTAKA

8tlas,.%.+/4.Handbook ?$ %icrobiological %edia th Gdition.CC ress3 8merika

Curtis, Helena, Barnes, A. Sue. +. Biology th edition. orth ublisher Fnc. Ae ork

Fndra.2005. Media Pertmbhan. http3;;ekmonsaurus.com;data;media.'@. 'iakses pada tanggal

5 8pril 20+0

http://ekmonsaurus.com/data/media.PDFhttp://ekmonsaurus.com/data/media.PDF


21/21

%achmud, %. 2005. #eknik enyimpanan dan emeliharaan %ikroba. Balai enelitian

Bioteknologi #anaman angan, Bogor. http3;;anekaplanta.ordpress.com;2005 ;

0;02;teknik-penyimpanan-dan-pemeliharaan-mikroba;. 'iakses pada tanggal 5 8pril 20+0

%adigan, %.#.200.Brock Biology ?$ %icroorganism. earson Gducation, Fnc3 8merika

?ram, .@. S., aul. >. Hummer, >r.200+. Biology !i"ing System. 7lencoe 'i"ision %c %illan

Company. ater"ille.

elc1ar, %. >., Chan, G.C.S. 2009. Glements o$ %icrobiology. %c 7ra Hill Book Company.

Ae ork.

achdie. 2004. @aktor yang %empengaruhi ertumbuhan %ikroba. http3;;rachdie

.blogsome.com;2004;+0;+/;$aktor-yang-mempengaruhi-pertumbuhan-mikroba;. 'iakses

pada tanggal 5 8pril 20+0
http://anekaplanta.wordpress.com/2008%20/03/02/teknik-penyimpanan-dan-pemeliharaan-mikroba/http://anekaplanta.wordpress.com/2008%20/03/02/teknik-penyimpanan-dan-pemeliharaan-mikroba/http://anekaplanta.wordpress.com/2008%20/03/02/teknik-penyimpanan-dan-pemeliharaan-mikroba/http://anekaplanta.wordpress.com/2008%20/03/02/teknik-penyimpanan-dan-pemeliharaan-mikroba/

Kel i _sterilisasi

Documents

Transcript of Kel i _sterilisasi